Extrakt Herba Cistanche zlepšuje stav mitochondriálního glutathionu a dýchání v srdcích potkanů ​​s možnou indukcí rozpojení proteinů

Ada Hoi-Ling Siu a Kam Ming Ko

Citovat tento článek: Ada Hoi-Ling Siu & Kam Ming Ko (2010) Extrakt Herba Cistanche zlepšuje stav mitochondriálního glutathionu a dýchání v srdcích potkanů ​​s možnou indukcí uncoupling proteinů, Pharmaceutical Biology, 48:5, 512-517, DOI: 10.3109/13880200903190985

Odkaz na tento článek: https://doi.org/10.3109/13880200903190985

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Abstraktní

HerbaCistanche, čínská bylina získaná z celé rostlinyCistanchedeserticolaBylo prokázáno, že YC Ma (Orobanchaceae) zvyšuje mitochondriální tvorbu ATP a chrání před ischemickým/reperfuzním (I/R) poškozením myokardu ex vivo u potkanů. Abychom definovali roli mitochondrií v kardioprotektivním působení Herba Cistanche, zkoumali jsme účinek HerbaCistancheléčba na stav mitochondriálního glutathionu a funkční parametry v srdcích potkanů. Ošetření methanolovým extraktem HerbaCistanchezlepšený stav mitochondriálního glutathionu, snížený obsah mitochondriálního Ca2 plus a zvýšený potenciál mitochondriální membrány. Kromě toho bylo v mitochondriích izolovaných z Herba pozorováno zvýšení dýchání ve 4. stavu, svědčící o nespojeném dýchání.Cistanche-léčená krysí srdce. Zlepšení stavu mitochondriálního glutathionu a funkční schopnosti, stejně jako domnělá indukce uncoupling proteinů, může souviset s kardioprotekcí poskytovanou HerbouCistancheošetření chránící před poraněním I/R.

Cistanchemá mnoho zdravotních výhod

klíčová slova:HerbaCistanche; mitochondrie; glutathion; vápník; membránový potenciál; mitochondriální dýchání; odpojení

Úvod

Reperfuze dříve ischemického myokardu způsobuje řadu mitochondriálních změn, včetně zvýšené produkce reaktivních forem kyslíku (ROS), přetížení Ca2 plus a poklesu produkce adenosintrifosfátu (ATP), což vše může vést k nekróze a/nebo apoptóze. zprostředkovaná buněčná smrt (Redegeld a kol., 1992; Lemasters a kol., 1998). Protože mitochondrie hrají klíčovou roli při určování osudu kardiomyocytů po ischemické/reperfuzní (I/R) expozici, ochrana proti I/R poškození myokardu by proto měla být zaměřena na zachování mitochondriální strukturální a funkční integrity. Udržování mitochondriálního energetického metabolismu po I/R stimulaci je zvláště důležité, protože srdeční kontraktilní funkce je téměř zcela závislá na mitochondriích generovaném ATP. Kardiomyocyty, které jsou živé, ale nestahují se, jsou velmi málo použitelné.

Herba Cistanche, celá sušená rostlina Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), je parazitická rostlina rostoucí především v pouštních oblastech severní a severovýchodní Číny. Herba Cistanche, klasifikovaná v čínské medicíně jako bylina „posilující jang“, je předepisována pro nedostatek ledvin, ženskou sterilitu a zácpu vznikající v důsledku suchosti střev u senilních pacientů (Chen, 1998). Předchozí studie v naší laboratoři ukázaly, že methanolový extrakt z Herba Cistanche zvyšuje kapacitu myokardiální tvorby ATP (Leung & Ko, 2008) a chrání před I/R poškozením myokardu u potkanů ​​(Leung, 2006). Zatímco stimulace kapacity tvorby ATP byla souběžná se zvýšením mitochondriálního transportu elektronů (Leung & Ko, 2008), kardioprotekce proti poškození I/R poskytovaná léčbou Herba Cistanche byla spojena se snížením deplece myokardu ATP (Leung, 2006). V této studii, abychom definovali roli mitochondrií v kardioprotektivním působení Herba Cistanche, jsme zkoumali účinek léčby Herba Cistanche na stav mitochondriálního glutathionu, obsah Ca2 plus, membránový potenciál a rychlost dýchání v srdcích potkanů.

cistanchevýhody deserticoly

Materiály a metody

Rostlinný materiál

Herba Cistanche byla zakoupena od místního (hongkongského) prodejce bylinek (Lee Hoong Kee). Bylina byla ověřena dodavatelem a voucherový vzorek (HKUST00301) byl uložen na katedře biochemie Hong Kongské univerzity vědy a technologie (HKUST). Metanolová extrakce byliny byla provedena na základě předchozích studií, které naznačovaly, že takový extrakt zvýšil mitochondriální tvorbu ATP a chránil před poškozením I/R v srdcích potkanů ​​(Leung, 2006; Leung & Ko, 2008). Stručně řečeno, Herba Cistanche (400 g) byl nakrájen na malé kousky a extrahován zahříváním pod zpětným chladičem ve 300 ml methanolu při 60 stupních po dobu 2 hodin, jak bylo popsáno dříve (Leung & Ko, 2008). Postup byl opakován dvakrát. Spojený extrakt byl vysušen odpařením rozpouštědla za sníženého tlaku; výtěžek byl 42 procent (hmotn./hmotn.) vzhledem k množství surové byliny. Extrakt byl skladován při 4 stupních až do použití. Ačkoli se čínské bylinky pro orální konzumaci tradičně extrahují vodou, v naší dřívější studii byl pro usnadnění zpracování a skladování vzorků použit metanol (Yim & Ko, 2002) a zjistili jsme, že extrakce methanolem je ve všech ohledech uspokojivá.

Péče o zvířata a léčba drogami

Dospělé samice potkanů ​​Sprague-Dawley (8–10 týdnů staré; 2{{10}}0–230 g) byly umístěny v místnosti s řízenou vlhkostí, kde byla 12 hodin tma/světlo cyklu při přibližně 22 stupních a povolená potrava a voda ad libitum. Zvířata byla náhodně rozdělena do různých skupin, v každé skupině bylo pět zvířat. Potkani dostávali extrakt Herba Cistanche intragastricky (0,2 g/ml ve vodě) v dávce 0,5 g/kg nebo 1,0 g/kg po dobu 3 po sobě jdoucích dnů. Kontrolní (neléčená) zvířata dostávala pouze vodu. Dvacet čtyři hodin po poslední dávce byla od anestetizovaných zvířat získána srdeční komorová tkáň pro biochemickou analýzu. Všechny experimentální protokoly byly schváleny Výborem pro výzkumnou praxi, HKUST.

Příprava mitochondriálních frakcí

Nasekané srdeční ventrikulární tkáně (~{0}},6g) byly homogenizovány v 10-násobném (w/v) přebytku ledově chladného sacharózového pufru [0,32M sacharóza, 1mM kyselina ethylendiamintetraoctová (EDTA), 50 mM Tris/HCl; pH 7,4] za použití homogenizéru z teflonu a skla, při 4000 ot./min, s 25–30 zdvihy. Mitochondriální pelety byly připraveny z tkáňových homogenátů centrifugací při 800 x g při 4 stupních po dobu 30 minut a čistota byla stanovena měřením relativních specifických aktivit sukcinátdehydrogenázy a laktátdehydrogenázy v supernatantu a v peletě, jak bylo popsáno dříve (Evans, 1992). Mitochondriální pelety byly suspendovány v 1 ml homogenizačního pufru.

Měření hladin mitochondriálně redukovaného glutathionu a oxidovaného glutathionu

Hladiny mitochondriálně redukovaného glutathionu (GSH) byly stanoveny enzymaticky pomocí 5,59-dithiobis(2- nitrobenzoové kyseliny) (DTNB) a glutathionreduktázy (GR), v protokolu upraveném podle Griffitha (198{{17} }). Alikvot (210 µL) mitochondriální frakce byl smíchán s 90 µL 10 procenta (v/v) 5-kyseliny sulfosalicylové (SSA) a směs byla centrifugována při 600 x g po dobu 10 minut. Pro měření hladin oxidovaného glutathionu (GSSG) byla 100 ul množství SSA supernatantů smíchána s 10 ul 20 procent (w/v) 2-vinylpyridinu a 10 ul 60 procent (v/v) triethanolaminu v mikrocentrifugačních zkumavkách. Každá zkumavka se nechala stát při teplotě místnosti po dobu alespoň 1 hodiny. Reakční směs obsahující 0,63 mM DTNB a 0,053 mM NADPH (redukovaný nikotinamid adenindinukleotid fosfát) ve fosfátovém pufru (0,1 M, s 5 mM Na2EDTA; pH 7,5) byla preinkubována při 30 stupních po dobu 2 minut. Alikvot (30 ul) buď supernatantu vzorku SSA (celkový glutathion) nebo vzorku GSSG byl přidán do jamky 96-jamkové mikrotitrační destičky a 180 ul předehřáté reakční směsi obsahující 0,525 U /mL GR, byl dále přidán. Změny absorbance při 412 nm byly monitorovány spektrofotometricky po dobu 5 minut. Koncentrace GSH a GSSG byly odhadnuty z kalibračních křivek s použitím GSH a GSSG [rozpuštěných ve 3 procentech (w/v) SSA] jako standardů a vyjádřeno jako nmol/mg proteinu. Hladiny GSH byly odhadnuty odečtením dvojnásobného množství GSSG od celkového množství GSH.

Měření mitochondriálního obsahu Ca2 plus

Obsah mitochondriálního Ca2 plus byl měřen pomocí fluorescenční sondy citlivé na Ca2 plus, Fluo-5N AM ester (Molecular Probes, Eugene, OR) za použití Victor2 Multi-Label Counter (model 1420; PerkinElmer, Turku, Finsko), jak je popsáno v Menze et al. (2005). Ca2 plus disociační konstanty (hodnoty Kd) byly stanoveny pomocí kalibrační soupravy Ca2 plus platné v koncentračním rozmezí 1–1000 µM; odhadované hodnoty Kd byly 90–100 µM, s vysokou spolehlivostí, podle údajů výrobce soupravy. Alikvot (25 ul) mitochondriální frakce (konečná koncentrace 0,5 mg proteinu/ml) byl smíchán s 25 ul inkubačního pufru {100 mM KCI a 30 mM MOPS [3-(N-morfolino)propansulfonová kyselina]; pH 7,2} v 96-jamkové černé mikrotitrační destičce. Směs byla inkubována při 25 stupních po dobu 15 minut; Poté bylo přidáno 25 ul digitoninu (50 ug/ml) a 25 ul Fluo-5N AM esteru (1 uM v 0,005 procentech (w/v) Pluronic F-127). Usnadněním membránové permeace zprostředkoval digitonin mitochondriální vstup fluorescenčního barviva. Zjistili jsme, že hladiny Fluo-5N v mitochondriálních preparátech ze srdce potkana byly 20-násobně zvýšeny v přítomnosti digitoninu. Reakční směsi byly inkubovány při 25 stupních po dobu 30 minut a hodnoty fluorescence byly měřeny při excitační vlnové délce 488 nm a emisní vlnové délce 532 nm. Obsah mitochondriálního Ca2 plus byl odhadnut pomocí kalibrační křivky a vyjádřen jako umol/mg proteinu.

Měření mitochondriálního membránového potenciálu

Membránový potenciál (ΔΨm) byl hodnocen metodou modifikovanou z metody Bonavita et al. (2003), za použití fluorescenčního barviva, lipofilní kationtové sondy 5,596,69- tetrachlor-1,193,39-tetraethyl benzimidazolylkarbocyanin jodid běžně nazývaný JC-1. Alikvoty (50 ul) mitochondriálních frakcí (upravené na 1 mg proteinu/ml) byly inkubovány při 37 stupních s 50 ul roztoku substrátu (obsahujícího 6 mM pyruvát a 6 mM malát), 25 ul předem upraveného roztoku adenosindifosfátu (ADP) (30 mM), a 25 ul 3 uM JC-1, ve tmě. Hodnoty ΔΨm byly získány měřením fluorescence při 535nm (FL1) versus 580nm (FL2) pomocí Victor2 Multi-Label Counter. JC-1 tvoří agregáty v mitochondriích, což vede k vysokým hodnotám fluorescence FL2 a ukazuje normální mitochondriální potenciál. Ztráta ΔΨm vede ke snížení fluorescence FL2 (JC-1 agregáty v menší míře) a současnému zvýšení fluorescence FL1 (z JC-1 monomerů). Data byla vyjádřena jako poměry hodnot fluorescence FL1/FL2. K ověření testu byl použit karbonylkyanid m-chlorfenylhydrazon (CCCP), ΔΨm-kolapsující činidlo.

Měření mitochondriálního dýchání

Rychlost mitochondriálního dýchání byla měřena při 37 stupních za použití přístroje Hansatech Oxygraph-Plus vybaveného kyslíkovou elektrodou Clarkova typu (Sarasota, FL, USA). Mitochondriální frakce (0,6 mg proteinu/ml) byly suspendovány v dýchacím pufru obsahujícím 125 mM KCI, 2 0 mM MOPS, 10 mM Tris, 0,5 mM ethylenglykoltetraoctové kyseliny (EGTA) a 2 mM KH2P04; pH 7,2. Po inkubaci při 37 stupních po dobu 2 minut každý vzorek obdržel 50 ul roztoku substrátu (5 mM pyruvát a 5 mM malát). Rychlosti dýchání byly měřeny v přítomnosti (stav 3) 1 mM ADP a po fosforylaci veškerého ADP na ATP (stav 4). Poměr dechových frekvencí ve stavu 3:stav 4 je index kontroly dýchání, který ukazuje těsnost spojení mezi dýcháním a fosforylací (Javadov et al., 2005; Kuwabara et al., 1997). Před přidáním roztoku substrátu byla měřena rychlost dýchání ve stavu 1 až do zahájení dýchání ve stavu 2 a rychlost dýchání ve stavu 2 byla odhadnuta před přidáním ADP.

Statistická analýza

Data byla analyzována jednosměrnou analýzou rozptylu (ANOVA) pro více skupinových srovnání. Hodnoty nejméně významného rozdílu (LSD) byly použity k identifikaci významných rozdílů mezi těmito dvěma skupinami, když hodnoty p byly <>

Cistanchemáléčivýhodnota

Výsledek

Jak je znázorněno na obrázcích 1 a 2, ošetření methanolovým extraktem z Herba Cistanche (0,5 nebo 1.0g/kg/den × 3) významně zvýšilo stav mitochondriálního glutathionu v srdcích potkanů. doloženo na dávce závislým zvýšením hladin GSH (11–30 procent) a snížením hladin GSSG (31 procent).

Léčba Herba Cistanche v závislosti na dávce snižovala hladiny mitochondriálního Ca2 plus v srdcích potkanů ​​ve srovnání s kontrolami; suprese byla 41 procent při dávce 10 g/kg (obrázek 3).

Léčba Herba Cistanche zvýšila mitochondriální ΔΨm, o čemž svědčí pokles (14–16 procent) poměru FL1/FL2. CCCP (100 uM) způsobil kolaps ΔΨm, jak je indikováno zvýšením poměru FL1/FL2 (obrázek 4).

Léčba Herba Cistanche zlepšila mitochondriální dýchání, jak dokazuje významně vyšší míra dýchání ve stavu 3 (84 procent) u testovaných zvířat ve srovnání s kontrolami (tabulka 1). Hladiny dýchání ve stavu 2 a stavu 4 byly zvýšeny o 47 a 80 procent, v daném pořadí, ale stimulace dýchání ve stavu 4 byla zcela potlačena 1 mM guanosin-5'-difosfátem, inhibitorem uncoupling proteinu 2/3. Léčba přípravkem Herba Cistanche neovlivnila index respirační kontroly, jak se odhaduje poměrem dechové frekvence ve stavu 3/stavu 4.

Cistanchemáneuroprotektivnívlastnosti

Diskuse

Mitochondrie izolované ze srdcí krys ošetřených Herba Cistanche vykazovaly zvýšený stav glutathionu, jak naznačují zvýšené hladiny GSH a snížené hladiny GSSG. Udržení redoxního stavu mitochondriálního glutathionu je rozhodující pro kardioprotekci proti I/R poškození (Chiu & Ko, 2003). Cytosolický obsah Ca2 plus se zvyšuje během ischemie myokardu prostřednictvím vychytávání vnitřní membránou Ca2 plus uniporter (Ataka et al., 1992; Grover et al., 1990), což vede k mitochondriální akumulaci Ca2 plus. Naše výsledky naznačují, že léčba extrakty Herba Cistanche zvýšila redoxní stav mitochondriálního glutathionu a snížila mitochondriální hladinu Ca2 plus, což může poskytnout ochranu proti I/R poškození myokardu (Leung, 2006). Neschopnost léčby Herba Cistanche při vyšší dávce 1,0 g/kg dále snižovat hladiny GSSG a Ca2 plus může souviset s existencí samoomezujícího regulačního mechanismu ovlivňujícího redoxní potenciál glutathionu a stav vápníku v mitochondriích.

Mitochondrie generují elektrochemický protonový gradient přes vnitřní membránu transportem elektronů. Tento gradient využívá ATP syntáza k fosforylaci ADP na ATP. Snížený potenciál mitochondriální membrány, jako při hypoxii/reoxygenaci po poškození kultivovaných kardiomyocytů (Chiu et al., 2008), má za následek snížení tvorby ATP. Léčba Herba Cistanche, která může zvýšit potenciál mitochondriální membrány myokardu, pravděpodobně zvyšuje tvorbu ATP, zejména během postischemické reperfuze. Opět platí, že existence samoomezujícího regulačního mechanismu může vysvětlit, proč účinky léčby Herba Cistanche na potenciál mitochondriální membrány nejsou závislé na dávce.

Léčba Herba Cistanche značně zvýšila rychlost dýchání ve stavu 3 v mitochondriích srdce potkana, jak bylo hodnoceno spotřebou kyslíku. Toto zjištění je v souladu s výsledky získanými z in vitro a situ měření kapacity mitochondriální tvorby ATP (Leung & Ko, 2008). Je zajímavé, že ačkoli léčba Herba Cistanche snížila hladinu ATP v myokardu v ustáleném stavu (data nejsou uvedena), léčba zvýšila tvorbu mitochondriálního ATP. Tato rozporná pozorování může vysvětlit zapojení nespojeného dýchání. K nespřažené oxidativní fosforylaci dochází, když se protony přesouvají přes vnitřní mitochondriální membránu zpět do mitochondriální matrice, čímž se rozptýlí membránový potenciál tvořený elektronovým transportním řetězcem. To má za následek snížení protonové hybné síly, která pohání tvorbu ATP (Garvey, 2003). V důsledku toho je koncentrace Ca2 plus a produkce ROS v mitochondriích dramaticky oslabena (Teshima et al., 2003). Tento návrh je v souladu s výsledky této studie, která prokázala pokles mitochondriálních hladin Ca2 plus v srdcích léčených Herba Cistanche. Co se týče nevázané respirace, syntéza uncoupling proteinů (UCPs) může být indukována léčbou Herba Cistanche. Je známo, že UCP rozpojují oxidativní fosforylaci a exprese UCP1 v srdcích transgenních myší chrání před poškozením myokardu indukovaným I/R (Hoerter et al., 2004). Uncoupling efekt UCP byl inhibován purinnukleotidovými difosfáty a trifosfáty (jako je ADP, ATP, guanosindifosfát (GDP) a GTP) (Echtay et al., 2002). V této studii byly měřeny mitochondriální parametry, jako je membránový potenciál a rychlost dýchání v přítomnosti ADP (jako substrátu); odpojovací účinek UCP byl proto inhibován. Když však byla měřena rychlost dýchání mitochondriálního stavu 4 v nepřítomnosti ADP, byla tato rychlost vyšší v mitochondriích připravených ze srdcí ošetřených Herba Cistanche než v srdcích neléčených kontrol. Rychlost dýchání ve stavu 4 odráží spotřebu kyslíku mitochondriemi, když protony unikají zpět do mitochondriální matrice prostřednictvím mechanismu, který nezahrnuje F1F0 -ATPázu (Garvey, 2003). Možné zapojení UCP do zvýšení dýchání ve stavu 4 vyvolané Herba Cistanche je podpořeno zjištěním, že toto zvýšení bylo potlačeno HDP (Bento et al., 2007).

Závěrem lze říci, že léčba Herba Cistanche může zlepšit stav mitochondriálního glutathionu, snížit mitochondriální hladinu Ca2 plus a zvýšit potenciál mitochondriální membrány a rychlost dýchání v srdcích potkanů. Zlepšení stavu a funkční schopnosti mitochondriálního glutathionu a domnělá indukce UCP může souviset s kardioprotekcí, kterou poskytuje léčba Herba Cistanche po I/R poranění.

Cistanchemůže zvýšitmitochondriálnídýchání hodnotit

Prohlášení o zájmu

Autoři neuvádějí žádný střet zájmů. Za obsah a psaní příspěvku odpovídají autoři.

Reference

Ataka K, Chen D, Levitsky S, Jimenez E, Feinberg H (1992): Vliv stárnutí na intracelulární Ca2 plus, pHi a kontraktilitu během ischemie a reperfuze. Náklad 86 II371–II376.

Bento LM, Fagian MM, Vercesi AE, Gontijo JA (2007): Účinky systémové metabolické acidózy vyvolané NH4 Cl na mitochondriální vazbu ledvin a transport vápníku u potkanů.

Nephrol Dial Transplant 22: 2817–2823. Bonavita F, Stefanelli C, Giordano E, Columbaro M, Facchini A, Bonafe F, Caldarera CM, Guarnieri C (2003): Srdeční myoblasty H9c2 podléhají apoptóze v modelu ischemie sestávající ze sérové ​​deprivace a hypoxie: inhibice PMA. FEBS Lett 536: 85–91.

Chen P (1998): Tonic Herbs. Pokročilá řada TCM. Peking, Science Press, s. 233–320.

Chiu PY, Ko KM (2003): Časově závislé zlepšení stavu mitochondriálního glutathionu a kapacity tvorby ATP léčbou schismdrinem B snižuje náchylnost krysích srdcí k ischemicko-reperfuznímu poškození.

Biofaktory 19: 43–51. Chiu PY, Luk KF, Leung HY, Ng KM, Ko KM (2008): Stereoizomery Schisandrinu B chrání před hypoxií/reoxygenací indukovanou apoptózou a inhibují související změny v přechodu mitochondriální permeability indukované Ca2 plus a potenciálu mitochondriální membrány v kardiomyocytech H9c2. Life Sci 82: 1092–1101.

Echtay KS, Roussel D, St Pierre J, Jekabsons MB, Cadenas S, Stuart JA, Harper JA, Roebuck SJ, Morrison A, Pickering S, Clapham JC, Brand MD (2002): Superoxid aktivuje mitochondriální uncoupling proteiny. Příroda 415: 96–99.

Evans WH (1992): Izolace a charakterizace membrán a buněčných organel. In: Rickwood D, ed., Preparative Centrifugation. Praktický přístup. New York, Oxford University Press, s. 233–270.

Garvey WT (2003): Role uncoupling proteinu 3 v lidské fyziologii. J Clin Invest 111: 438-441. Griffith OW (1980): Stanovení glutathionu a glutathiondisulfidu pomocí glutathionreduktázy a 2-vinylpyridinu.

Anal Biochem 106: 207-212. Grover GJ, Dzwonczyk S, Sleph PG (1990): Rutheniová červeň zlepšuje postischemickou kontraktilní funkci v izolovaných srdcích potkanů. J Cardiovasc Pharmacol 16: 783–789.

Hoerter J, Gonzalez-Barroso MD, Couplan E, Mateo P, Gelly C, Cassard-Doulcier AM, Diolez P, Bouillaud F (2004): Mitochondriální uncoupling protein 1 exprimovaný v srdci transgenních myší chrání před ischemicko-reperfuzním poškozením. Náklad 110: 528–533.

Javadov S, Huang C, Kirshenbaum L, Karmazyn M (2005): Inhibice NHE-1 zlepšuje poškozenou mitochondriální permeabilitu přechodu a respirační funkci během postinfarktové remodelace u potkana. J Mol Cell Cardiol 38: 135-143.

Kuwabara M, Takenaka H, ​​Maruyama H, Onitsuka T, Hamada M (1997): Vliv prodloužené hypotermické ischemie a reperfuze na spotřebu kyslíku a celkovou mechanickou energii v myokardu potkana: účast mitochondriální oxidativní fosforylace. Transplantace 64: 577–583.

Lemasters JJ, Nieminen AL, Qian T, Trost LC, Elmore SP, Nishimura Y, Crowe RA, Cascio WE, Bradham CA, Brenner DA, Herman B (1998): Přechod mitochondriální permeability při buněčné smrti: společný mechanismus při nekróze, apoptóza a autofagie. Biochim Biophys Acta 1366: 177–196.

Leung HY (2006): Účinek Herba Cistanche na mitochondriální tvorbu ATP: farmakologický základ "Yang-invigoration". MPhil Thesis, Hong Kong University of Science and Technology, s. 67–69.

Leung HY, Ko KM (2008): Extrakt Herba Cistanche zvyšuje mitochondriální tvorbu ATP v srdcích potkanů ​​a buňkách H9C2. Pharma Biol 46: 418-424.

Menze MA, Hutchinson K, Laborde SM, Hand SC (2005): Přechod mitochondriální permeability u korýšů Artemia franciscana: nepřítomnost pórů regulovaných vápníkem tváří v tvář hlubokému ukládání vápníku. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 289: R68–R76.

Redegeld FA, Moison RM, Koster AS, Noordhoek J (1992): Deplece ATP, ale ne GSH ovlivňuje životaschopnost potkaních hepatocytů. Eur J Pharmacol 228: 229-236.

Teshima Y, Akao M, Jones SP, Marban E (2003): Nadměrná exprese uncoupling proteinu-2 inhibuje dráhu mitochondriální smrti v kardiomyocytech. Circ Res 93: 192–200.

Yim TK, Ko KM (2002): Antioxidační a imunomodulační aktivity čínských tonizujících bylin. Pharm Biol 40: 329-335.