Extrakt Herba Cistanche zvyšuje mitochondriální tvorbu ATP v krysích srdcích a buňkách H9c2
Mar 04, 2022
Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Hoi Yan Leung a Kam Ming Ko
Chcete-li citovat tento článek: Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko (2008) Herba Cistanche Extract Enhances Mitochondrial ATP Generation in Rat Hearts and H9c2 Cells, Pharmaceutical Biology, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/1388025883205
Abstraktní
Pro zkoumání farmakologického základu "Yang-povzbudivého" účinku Herbal Cistanche [sušená celá rostlina Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae)] v čínské medicíně byly účinky metanolového extraktu Herba Cistanche na mitochondriální kapacitu tvorby ATP. vyšetřeny za použití ex vivo modelu krysího srdce a in situ buněčného testu H9c2. Léčba extraktem Herba Cistanche zvýšila u potkanů kapacitu myokardiální mitochondriální tvorby ATP v závislosti na dávce, jak bylo hodnoceno měřením in vitro. Stimulace kapacity tvorby ATP byla spojena s paralelním zvýšením mitochondriálního elektronového transportu podporovaného pyruvátem, ale ne sukcinátem. Léčba Herba Cistanche také zvýšila aktivity myokardiálního mitochondriálního komplexu I a komplexu III, přičemž rozsah stimulace aktivity komplexu I byl větší. Léčba Herba Cistanche vyvolala zvýšení kapacity mitochondriální tvorby ATP v buňkách H9c2 závislé na dávce a čase. Výsledky naznačují, že léčba Herba Cistanche může zvýšit mitochondriální tvorbu ATP v srdcích potkanů ex vivo a buňkách H9c2 in situ, pravděpodobně prostřednictvím zvýšení oxidativní fosforylace.
klíčová slova:ATP, Cistanche deserticola, buňky H9c2, srdce, mitochondrie.
Úvod
"Jangové povzbuzení", které v čínské medicíně ztělesňuje všeobecné zlepšení tělesné funkce, zahrnuje využití energie při řízení různých biochemických procesů. V tomto ohledu je ATP, který je univerzální měnou energie pro podporu buněčné funkce, generován hlavně oxidativní fosforylací v mitochondriích. Předpokládali jsme, že byliny „oživující jang“ mají schopnost zvýšit mitochondriální kapacitu tvorby ATP (Ko et al., 2004). To je podpořeno naším nedávným zjištěním, že čínské tonizující byliny „osvěžující jang“, ale nikoli „vyživující jin“, by mohly zvýšit kapacitu myokardiální tvorby ATP v myších srdcích ex vivo (Ko et al., 2006). Herba Cistanche, sušená celá parazitická rostlina (kromě květu) Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), je v tradiční čínské medicíně klasifikována jako tonizující bylina „posilující jang“ (Chen, 1998) a jeví se jako nejoblíbenější. přísada v řadě čínských patentových přípravků používaných pro povzbuzení Yang“. V Číně a Japonsku se Herba Cistanche široce používá k léčbě řady symptomů nedostatku Yang. Farmakologické studie ukázaly, že Herba Cistanche může vychytávat volné radikály (Xiong et al., 1996), mít sedativní (Lu, 1998), antiaging (Lee et al., 1990), antinociceptivní a protizánětlivé účinky (Lin et al., 2002 a zvyšují imunitní funkci (Wu et al., 2005). Hlavní účinnou látkou Herba Cistanche jsou fenylethanoidní glykosidy (Ouyang et al., 2003), u kterých bylo zjištěno, že mají antibakteriální, antistresové a antioxidační vlastnosti (Xiong et al., 1998) a také antiapoptotické účinky na kultivované rostliny. neurony (Tian & Pu, 2005). V této studii byly za účelem prozkoumání farmakologického základu Yang povzbuzujícího účinku Herba Cistanche zkoumány účinky léčby Herba Cistanche na kapacitu tvorby ATP v mitochondriích izolovaných ze srdcí potkanů ex vivo a kultivovaných H9c2 kardiomyocytů in situ. Abychom prozkoumali biochemický mechanismus, který je základem účinku zvyšujícího tvorbu ATP, účinky léčby Herba Cistanche na mitochondriální transport elektronů a komplexní I–IV aktivity byly také zkoumány v srdcích potkanů.
Extrakt z Cistanche deserticola
Materiály a metody
Chemikálie, buněčné kultury a rostlinné materiály ATP, ADP a 3-[4,5-dimethylthiozol-2-yl]-2,5-difenyl-tetrazolium bromid ( MTT) byly zakoupeny od Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Roztok luciferázy (ATPlite) byl získán od PerkinElmer (Boston, MA, USA). Dulbeccovo modifikované Eagleovo médium (DMEM) a fetální bovinní sérum (FBS) byly zakoupeny od GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, USA). Buněčná linie H9c2 byla zakoupena od ATTC (Rockville, MD, USA). Herba Cistanche dodal místní prodejce bylinek (Lee Hoong Kee). Bylina byla ověřena dodavatelem a vzorek voucheru (HKUSTY00301) byl uložen na katedře biochemie Hong Kong University of Science & Technology (HKUST).
Bylinná extrakce
Herba Cistanche (100 g) se nakrájí na malé kousky a poté se extrahuje zahříváním pod zpětným chladičem ve 300 ml methanolu
při 65 °C po dobu 2 hodin. Postup byl opakován dvakrát. Shromážděný extrakt byl vysušen odpařením rozpouštědla za sníženého tlaku a byl získán methanolový extrakt Herba Cistanche s výtěžkem 39 procent (hmotn./hmotn.). Chemická analýza ukázala, že metanolový extrakt Herba Cistanche obsahoval celkové saponiny, celkové flavonoidy, celkové lignany a polysacharidy v koncentracích 1,62 procenta (hmot.), 0.08 procent, 0,15 procenta a 75,6 procenta.
Péče o zvířata
Dospělí samci potkanů Sprague-Dawley (8–10 týdnů; 250–300 g) byli chováni v 12-hodinovém cyklu tma/světlo v místnosti s řízenou vzduchem/vlhkostí při teplotě asi 22 °C a potrava a voda jim byla povolena ad libitum v zařízeních péče o zvířata
na HKUST. Experimentální protokoly byly schváleny Výborem pro výzkumnou praxi při HKUST.
Léčba drogami
Zvířata byla náhodně rozdělena do skupin, v každé bylo pět až šest zvířat. V léčebných skupinách byl potkanům intragastricky podáván methanolový extrakt Herba Cistanche (rozpuštěný/suspendovaný ve vodě) ve zvyšujících se denních dávkách ({{0}},031–0,5 g/kg) po dobu 3 dnů. Kontrolní zvířata dostávala pouze vodu. Dvacet čtyři hodin po poslední dávce bylo srdce získáno od zvířat anestetizovaných fenobarbitalem a podrobeno biochemické analýze.
Příprava mitochondriálních frakcí a měření kapacity generování ATP (ATP-GC) ex vivo
Vzorky tkáně levé komory srdce byly vyříznuty a promyty ledově chladným izotonickým pufrem (0,32 M sacharóza, 1 mM EDTA, 50 mM Tris/HCl, pH 7,4). Srdeční mitochondriální frakce byly připraveny diferenciální centrifugací v izotonickém pufru při 4◦C. 10% (w/v) srdeční homogenát byl připraven homogenizací nasekané ventrikulární tkáně homogenizátorem z teflonu při 4000 otáčkách za minutu pro 20–30 úplných zdvihů. Homogenát byl centrifugován při 600 g po dobu 10 minut, aby se odstranila jádra a zbytky buněk. Supernatant byl poté centrifugován při 8000 g po dobu 30 minut, aby došlo k sedimentaci mitochondrií (Evan, 1992). Pelety byly resuspendovány v 1 ml izotonického pufru a rekonstituovány mitochondriální frakce. Mitochondriální ATP-GC neléčených zvířat byl měřen metodou podle Leung et al. (2005).
Měření mitochondriálního elektronového transportu
Měření transportu elektronů v izolovaných mitochondriích, které je založeno na redukci MTT, bylo provedeno tak, jak popsali Cohen et al. (1997). Mitochondrie byly připraveny v koncentraci proteinu 1 mg/ml s inkubačním pufrem (250 mM sacharóza, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7,4) . Alikvot (40 ul) mitochondrií byl smíchán se 100 ul každého z 15 mM pyruvátu nebo 0,5 mM sukcinátu a 0,42 mg/ml MTT. Reakční směs byla inkubována při 37 °C po dobu 10 minut za mírného třepání. Po inkubaci byla reakční směs ukončena přidáním 100 ul lyzačního pufru (10 procent, hmotn./obj., dodecylsulfát sodný a 45 procent dimethylformamidu, upraveno na pH 4,7 ledovou kyselinou octovou). Po 5 minutovém stání byly odečteny absorbance reakční směsi pomocí čtečky mikrotitračních destiček (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) a uvedeny jako rozdíl mezi 570 nm a 630 nm. Data byla vyjádřena jako procento průměrné hodnoty kontrolní (tj. Herba Cistanche – neošetřená) skupina.
Buněčná kultura
Buňky H9c2, permanentní buněčná linie odvozená ze srdečních myoblastí (Hescheler et al., 1991), byly kultivovány jako monovrstvy v DMEM doplněném 10 procenty (obj./obj.) FBS. Médium obsahovalo glukózu (4,5 g/l) a glutamin (4,5 mM), doplněné NaHC03 (17 mM), penicilinem (100 IU/ml) a streptomycinem (100 ug/ml). Všechny buňky byly pěstovány v atmosféře 5 % (obj./obj.) CO2 ve vzduchu při 37 °C. Médium bylo nahrazeno čerstvým médiem každé 2 nebo 3 dny. Zásoba buněk byla pěstována v 75 cm2 kultivační baňce a rozdělena před konfluencí v subkultivačním poměru 1:10. Pro test ATP-GC byly buňky H9c2 nasazeny v hustotě 2 5 104 buněk/jamku do 24-jamkové destičky. Po připojení buněk byl do média aplikován extrakt Herba Cistanche (rozpuštěný ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem; PBS) a buňky byly inkubovány po prodlužující se časové období (2–16 hodin). Kontrolní (neošetřené) buňky dostaly pouze PBS.
Měření ATP-GC in situ
Po uvedených obdobích inkubace s extraktem Herba Cistanche při zvyšujících se koncentracích (5{{10}}–300 µg/ml) byl proveden test ATP-GC. Médium bylo odsáto a buňky byly ošetřeny digitoninem (50 ug/ml) v inkubačním pufru (120 mM KCI, 5 mM KH2P04, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0,1 mM MgCl2, 0,5 procenta BSA, pH 37). min při 37◦C. Po odsátí digitoninu byly k buňkám přidány glutamát (5 mM), malát (5 mM) a ADP (60 uM) pro mitochondriální tvorbu ATP, která byla monitorována ve zvyšujících se časových intervalech v rozmezí od 0 do 15 minut. Reakce byla ukončena přidáním 60 ul kyseliny chloristé (30 procent, w/v) a reakční směsi byly poté centrifugovány při 600 g po dobu 10 minut při 4 °C. Alikvot (120 ul) supernatantu byl smíchán s 90 ul 1,4 M KHC03 pro neutralizaci. Směsi byly znovu centrifugovány při 600 g při 4 °C a v supernatantech byl měřen obsah ATP, jak bylo popsáno dříve. ATP-GC neošetřených buněk byla odhadnuta výpočtem plochy pod křivkou grafu (AUC1) vynesením generovaného ATP (nmol/mg proteinu) proti času (0–15 min) a vyjádřeného v libovolných jednotkách. U buněk ošetřených Herba Cistanche byly hodnoty AUC1 prodlužujících se inkubačních časů (3, 5, 7, 10 a 15 minut) normalizovány na příslušnou střední kontrolní hodnotu z neošetřených vzorků a vyjádřeny jako procento kontroly. Poté byla vypočtena plocha pod křivkou (AUC2) grafu vynášejícího procentuální kontrolní hodnoty proti inkubační době (3–15 min) a vyjádřena v libovolných jednotkách. Údaje o skupinách léčených Herba Cistanche byly vyjádřeny jako procento kontroly z rovnice:
[AUC2(HerbaCistanche – ošetřená)/AUC2(neléčená)]×100 procent .
Měření komplexu I–IV a aktivity citrátsyntázy
Aktivity komplexu I–III mitochondriálního elektronového transportního řetězce (ETC) byly měřeny spektrofotometrickými metodami za použití komplexně specifických substrátů (NADH pro komplex I, sukcinát pro komplex II a decylubichinol pro komplex III), jak je popsáno (Grad & Lemire, 2004; Hsu et al., 2005; Mark et al., 2001). Aktivita komplexu IV byla měřena pomocí testovací soupravy cytochrom c oxidázy od Sigma. Aktivita mitochondriální citrátsyntázy byla měřena metodou Srere (1969).
Proteinový test
Koncentrace proteinů mitochondriálních frakcí a buněčných lyzátů byly stanoveny pomocí soupravy pro stanovení proteinů BioRad s použitím hovězího sérového albuminu jako standardu ({{0}},038–0,600 mg/ml).
Statistická analýza
Všechna data byla vyjádřena jako střední standardní chyba průměru (SEM). Byly analyzovány jednocestnou analýzou rozptylu (ANOVA). Post hoc vícenásobná srovnání byla provedena s LSD. P hodnoty<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">
Výsledek
Účinky léčby Herba Cistanche na mitochondriální ATP-GC myokardu u potkanů
Jak je znázorněno na obrázku 1, léčba extraktem Herba Cistanche v dávkách až 0,5 g/kg zvýšila u potkanů mitochondriální ATP-GC myokardu v závislosti na dávce, přičemž stupeň stimulace byl 89 procent v dávce 0,5 g/kg.
Účinky léčby Herba Cistanche na mitochondriální transport elektronů v srdcích potkanů
Rozsah elektronového transportu v izolovaných mitochondriích byl měřen sledováním redukce MTT. Substrát použitý pro test byl buď pyruvát nebo sukcinát. Jak je znázorněno na obrázku 2a, léčba Herba Cistanche v závislosti na dávce zvýšila rozsah mitochondriálního elektronového transportu podporovaného pyruvátem v srdcích potkanů, s optimální stimulací pozorovatelnou při dávkách 0,5 g/kg. Žádné významné změny v rozsahu mitochondriálního elektronového transportu podporovaného sukcinátem však nebyly detekovány v srdcích potkanů ošetřených Herba Cistanche (obr. 2b).
Účinky léčby Herba Cistanche na aktivity mitochondriálního respiračního komplexu v srdcích potkanů
Jak je znázorněno na obrázku 3, léčba Herba Cistanche v optimální dávce 0,5 g/kg významně zvýšila aktivity komplexu I (34 procent) a komplexu III (22 procent) v srdcích potkanů. Aktivita citrátsyntázy, klíčového enzymu pro cyklus trikarboxylových kyselin, nebyla ošetřením Herba Cistanche ovlivněna (obr. 3). Analýza Western blot ukázala, že hladiny proteinů komplexu I a III nebyly ovlivněny ošetřením Herba Cistanche (data nejsou uvedena).
Časový průběh změn mitochondriálního ATP-GC vyvolaných Herba Cistanche v buňkách H9c2
Změny v ATP-GC byly zkoumány v buňkách ošetřených Herba Cistanche (50 a 150 µg/ml) po 2 až 16 hodinách inkubace. Jak je znázorněno na obrázku 4, léčba Herba Cistanche zvýšila ATP-GC časově závislým a dvoufázovým způsobem v buňkách H9c2, s maximální stimulací (44 procent a 89 procent, v daném pořadí) pozorovatelnou po 8 hodinách inkubace pro obě koncentrace léčiva. ATP-GC se poté vrátil na neošetřené kontrolní hodnoty, když se inkubační doba prodloužila na 16 hodin. K dřívějšímu nástupu stimulace došlo, když byly buňky ošetřeny vyšší koncentrací (150 ug/ml) extraktu Herba Cistanche.
Koncentrační závislost Herby
Cistanche-indukované zvýšení ATP-GC v H9c2 buňkách
Buňky H9c2 byly ošetřeny zvyšujícími se koncentracemi (50–300 µg/ml) extraktu Herba Cistanche po dobu 4 hodin. Obrázek 5 ukazuje, že léčba Herba Cistanche zvýšila ATP-GC způsobem závislým na koncentraci, s maximální stimulací (82 procent) pozorovatelnou při koncentraci 300 ug/ml.
Extrakt z cistanche zvyšuje produkci ATP
Diskuse
Upregulace buněčných aktivit pro posílení funkce těla, jako je svalová kontrakce a imunitní reakce pomocí Yang povzbuzení, vyžaduje zvýšení spotřeby ATP, což je zase podporováno mitochondriální oxidativní fosforylací. V současné studii bylo zjištěno, že léčba Herba Cistanche v závislosti na dávce zvyšuje kapacitu mitochondriální tvorby ATP ex vivo v srdcích potkanů. Toto pozorování je v souladu s naším předchozím zjištěním, že mezi čínskými tonizačními bylinami povzbuzujícími Yang vyvolala léčba Herba Cistanche relativně větší rozsah stimulace mitochondriální tvorby ATP v myších srdcích (Ko et al., 2006). Zvýšení mitochondriální tvorby ATP bylo paralelní se zvýšením mitochondriálního elektronového transportu řízeného pyruvátem, ale ne sukcinátem, jak bylo hodnoceno snížením MTT. Výsledky získané z kinetického měření mitochondriálního komplexu I–IV ukázaly, že aktivity obou komplexů I a III byly u srdcí ošetřených Herba Cistanche zvýšeny, přičemž rozsah stimulace aktivity komplexu I byl větší než u komplexu III. Protože aktivita citrátsyntázy, klíčového enzymu cyklu trikarboxylových kyselin, nebyla ovlivněna, zvýšení kapacity mitochondriální tvorby ATP léčbou Herba Cistanche lze přičíst především stimulaci aktivit komplexu I a/nebo III. Většinu požadavků srdce na ATP uspokojují mitochondrie, které se téměř výhradně spoléhají na oxidaci mastných kyselin a glukózy vázanou na komplex I (NADH) (Stanley et al., 1997; Taegtmeyer, 1998). Komplex I, který vykazuje nižší aktivitu než jiné respirační komplexy, je považován za důležitý faktor v regulaci oxidativní fosforylace. Stimulace nebo inhibice aktivity komplexu I tedy může mít velký dopad na srdeční energetiku. Ačkoli analýza Western blot neodhalila žádné změny v hladině proteinů těchto dvou komplexů (data nejsou uvedena), zvýšená aktivita enzymu může být důsledkem změn stavu proteinového thiolu a/nebo lipidového prostředí (Davey et al., 1998; Paradies a kol., 2004).
Extrakt Herba Cistancheby mohl vyvolat účinek zvyšující tvorbu ATP v kultivovaných buňkách H9c2 in situ. Relativně brzký nástup stimulačního účinku vyvolaného léčbou Herba Cistanche, zejména při vysokých dávkách, je v souladu s pozorováním ze studií ex vivo, které naznačovaly, že syntéza komplexu I a III proteinů se pravděpodobně nepodílí na tvorbě ATP – zvýšení akce. Demonstrace zesílení tvorby ATP in situ vyvolaného Herba Cistanche podporuje názor, že zvýšení kapacity mitochondriální tvorby ATP, jak bylo hodnoceno měřením ex vivo, může pouze odrážet paralelní účinek vyvolaný léčbou in vivo. Měření tvorby ATP v izolovaných mitochondriích a kultivovaných buňkách s použitím malátu a glutamátu jako substrátů je nepřímým měřítkem mitochondriální respirace ve stavu 3 (Chen et al., 2003). Při použití stejného bioluminiscenčního testu ATP byla rychlost tvorby mitochondriálního ATP v různých tkáních neléčených potkanů, jak bylo uvedeno dříve v naší laboratoři (Leung et al., 2005), v dobré shodě s nedávno publikovanými údaji (Drew & Leeuwenburgh, 2003 ). Kapacita generování ATP byla odhadnuta dvoustupňovou integrací časově závislých změn hladiny ATP v testech ex vivo i in situ. Pozorovaný stimulační účinek vyvolaný léčivem byl proto pro srovnání zvětšen. Zvýšení kapacity tvorby ATP léčbou Herba Cistanche v mitochondriích srdce potkana ex vivo bylo paralelní se stimulací tvorby ATP v buňkách H9c2 in situ. Vzhledem k přítomnosti aktivity zvyšující tvorbu ATP v čínských tonizačních bylinách povzbuzujících Jang, včetně Herba Cistanche, v myších srdcích ex vivo (Ko et al., 2006), výsledky naznačují, že měření kapacity tvorby ATP v buňkách H9c2 v situ lze použít jako farmakologický test pro čínské tonizující byliny nebo bylinné přípravky povzbuzující jang.
Závěrem lze říci, že léčba extraktem Herba Cistanche by mohla zvýšit kapacitu mitochondriální tvorby ATP v srdcích potkanů ex vivo a v buňkách H9c2 in situ. Zjištění podporují náš předpoklad, že farmakologický základ Yang-oživení zahrnuje posílení tělesných funkcí prostřednictvím stimulace mitochondriální produkce ATP.
Extrakt Herba Cistanche zvyšuje mitochondriální kapacitu tvorby ATP
Reference
Chen P (1998): Tonic Herbs. Pokročilá řada TCM. Peking, Čína, Science Press, s. 233–320.
Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Produkce reaktivních forem kyslíku mitochondriemi: centrální role komplexu III. J Biol Chem 278: 36027-36031.
Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Parkinsonova nemoc: Nové spojení mezi monoaminooxidázou a mitochondriálním tokem elektronů. Proč Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.
Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Energetické prahy v mozkových mitochondriích. Potenciální zapojení do neurodegenerace. J Biol Chem 273: 12753-12757.
Drew B, Leeuwenburgh C (2003): Metoda měření produkce ATP v izolovaných mitochondriích: Produkce ATP v mozkových a jaterních mitochondriích krys Fischer-344 s věkovou a kalorickou restrikcí. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 285: R1259–R1267.
Evan WH (1992): Izolace a charakterizace membrán a buněčných organel. In: Rickwood D, ed. Preparativní centrifugace: praktický přístup. New York, Oxford University Press, s. 223–270.
Grad LI, Lemire BD (2004): Mutace mitochondriálního komplexu I u Caenorhabditis elegans způsobují nedostatek cytochrom c oxidázy, oxidační stres a laktátovou acidózu reagující na vitamíny. Human Mol Genetics 13: 303–314.
Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Morfologická, biochemická a elektrofyziologická charakterizace klonální buněčné (H9c2) linie z krysího srdce. Circ Res 69: 1476–1486.
Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): Deplece glutathionu vedoucí k selektivní inhibici mitochondriálního komplexu I v dopaminergních buňkách je prostřednictvím NO-zprostředkované dráhy nezahrnující peroxynitrit: Důsledky pro Parkinsonovu chorobu. J Neurochem 92: 1091–1103.
Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): Charakteristický farmakologický účinek čínských tonizujících bylin „povzbudivých Yang“: Zvýšení kapacity myokardiální tvorby ATP. Fytomedicína 13: 636–642.
Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): Farmakologický základ 'Yang-invigoration' v čínské medicíně. Trends Pharmacol Sci 25: 3–6.
Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Studie o účinku proti stárnutí Cistanche deserticola Ma. Shanghai J Trad Chin Med 11: 22–23.
Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): Metabolická regulace fenylethanoidních glykosidů z Herba cistanches v gastrointestinálním traktu psů. Yao Xue Xue Bao 36: 432–435
Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): Yang povzbuzující čínský bylinný přípravek zvyšuje mitochondriální funkční schopnost a antioxidační kapacitu v různých tkáních samců a samic potkanů. Rejuven Res 8: 238–247.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu ČR (2002): Antinociceptivní a protizánětlivá aktivita způsobená Cistanche deserticola u hlodavců. J Ethnopharmacol 83: 177–182.
Lu MC (1998): Studie o sedativním účinku Cistanche deserticola. J Ethnopharmacol 59: 161–165.
Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Stanovení aktivity mitochondriálního respiračního komplexu v mitochondriích izolovaných z lidských buněk a tkání. Meth Cell Biol 65: 97-117.
Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Účinky prvků vzácných zemin na růst buněk Cistanche deserticola a produkci fenylethanoidních glykosidů. J Biotech 102: 129-134.
Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Pokles aktivity mitochondriálního komplexu I v ischemickém/reperfuzním srdci potkana: Zapojení reaktivních forem kyslíku a kardiolipinu. Circ Res 94: 53–59.
Srere PA (1969): Citrát syntáza. Cyklus kyseliny citronové. Meth Enzymol 13: 3–11.
Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Regulace metabolismu sacharidů myokardu za normálních a ischemických podmínek. Potenciál pro farmakologické zásahy. Cardiovasc Res 33: 243–257.
Taegtmeyer H (1998): Metabolismus energetického substrátu jako cíl farmakoterapie u ischemického a reperfundovaného srdečního svalu. Heart Metab 1: 5–9.
Tian XF, Pu XP (2005): Fenylethanoidní glykosidy z Cistanches salsa inhibují apoptózu indukovanou 1-methyl-4- fenylpyridiniovým iontem v neuronech. J Ethnopharmacol 97: 59–63.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): Arabinogalaktan izolovaný ze stonků Cistanche deserticola indukuje proliferaci kultivovaných lymfocytů. Int J Biol Macromol 37: 278-282.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Hepatoprotektivní aktivita fenylethanoidů z Cistanche deserticola. Planta Med 64: 120–125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Antioxidační účinky fenylethanoidů z Cistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.
