Hepcidinem zprostředkovaná hypoferemie narušuje imunitní odpověď na očkování a infekci, část 1

SOUHRN

Pozadí:

Jak specifické živiny ovlivňují adaptivní imunitu, je předmětem širokého zájmu. Nedostatek železa je celosvětově nejběžnějším nedostatkem mikroživin a představuje významnou zátěž globálních onemocnění; jeho účinky na imunitu však zůstávají nejasné.

Imunita, jak se v medicíně nazývá, je schopnost lidského imunitního systému chránit se. Jedním z hlavních úkolů je schopnost těla odolávat infekcím, jako jsou bakterie nebo viry. Stručně řečeno, celý proces rozpoznávání a odstraňování antigenních cizích těles tělem se nazývá imunita. Imunitu musíme zlepšit i v každodenním životě, jako je zdravá strava nebo cvičení. Výzkumem bylo zjištěno, že Cistanche může také zlepšit imunitu. Předpokládá se, že přípravek Cistanche má účinek na posílení imunity.

Princip zahrnuje především tyto tři aspekty: 1. Cistanche je bohatá na různé živiny, jako jsou polysacharidy, aminokyseliny, stopové prvky atd., které mohou zlepšit obranyschopnost organismu.

2. Cistanche obsahuje některé protizánětlivé složky, jako jsou cistanche, cistanche alkaloidy atd., které mohou zmírnit zánět, snížit zátěž imunitního systému a zlepšit imunitu.

3. Cistanche dále obsahuje některé antioxidační látky, jako jsou flavonoidy, vitamín C atd., které mohou pomoci odstranit volné radikály v těle a snížit oxidační poškození buněk, čímž nepřímo zlepšují imunitu.

Kliknutím poznáte celé potraviny cistanche

Metody:

Použili jsme mimetikum hepcidinu a několik genetických modelů ke zkoumání vlivu nízké dostupnosti železa na T buňky in vitro a imunitní odpovědi na vakcíny a virovou infekci u myší. Zkoumali jsme humorální imunitu u lidských pacientů se zvýšeným hepcidinem a nízkým sérovým železem způsobeným mutantem TMPRSS6. Testovali jsme účinek suplementace železa na humorální imunitu vyvolanou očkováním u selat, což je přirozený model nedostatku železa.

zjištění:

Ukazujeme, že nízká hladina železa v séru (hypoferremie), způsobená zvýšeným hepcidinem, vážně zhoršuje efektorové a paměťové reakce na imunizaci. Intenzivní metabolismus aktivovaných lymfocytů vyžaduje podporu zvýšeného získávání železa, což je umožněno IRP1/2 a TFRC. V souladu s tím poskytování extra železa zlepšilo odpověď na vakcinaci u podkožních myší a selat, zatímco naopak, hypodermičtí lidé s chronicky zvýšeným hepcidinem mají snížené koncentrace protilátek specifických pro určité patogeny. Zavedení hypoferemie otupilo T lymfocyty a B lymfocyty a neutralizovalo protilátkové reakce na infekci virem chřipky u myší, což umožnilo viru přetrvávat a zhoršovalo zánět plic a nemocnost.

Závěry:

Hypoferremie, dobře zachovaná fyziologická vrozená odpověď na infekci, může působit proti rozvoji adaptivní imunity. Tento kompromis mezi živinami je důležitý pro pochopení a zlepšení imunitních reakcí na infekce a vakcíny v celosvětově běžných kontextech nedostatku železa a zánětlivých poruch.

Financování:

Lékařství výzkum Rada, UK

ÚVOD

Adaptivní imunita je nezbytná pro ochranu před infekčními chorobami a pro zachování zdraví. Po aktivaci antigen-specifické lymfocyty rychle proliferují, diferencují se a získávají efektorové funkce, což vyžaduje zrychlený metabolismus a makromolekulární syntézu.1 Železo je nezbytné pro mnoho základních buněčných procesů, včetně syntézy DNA, cyklu trikarboxylových kyselin a oxidativní fosforylace,2 a vzácná mutace transferinového receptoru, která narušuje schopnost buněk získávat železo, způsobuje imunodeficienci.3

Vysoká globální prevalence nedostatku železa a anémie je výsledkem kombinace nutričního nedostatku železa, ztráty krve a zánětem vyvolaného hepcidinu.4 Hlavní regulační hormon železa hepcidin potlačuje vstřebávání železa z potravy a recyklaci železa z makrofágů inhibicí proteinu exportujícího železo, ferroportin, který uvolňuje železo do séra.5,6 Exprese hepcidinu je regulována jak železem jako součást homeostatických mechanismů,5,7, tak zánětem jako součást vrozených imunitních odpovědí, které se pokoušejí odepřít železo invazním patogenům.8 Hepcidin rychle snižuje sérové ​​koncentrace železa a přetrvávající vysoký hepcidin a hypoferémie mohou vést k anémii.9 U gambijských kojenců jsme našli velmi nízké koncentrace sérového železa a vysoké hladiny hepcidinu (způsobené zánětem).10,11

Existuje mnoho studií spojujících nedostatek železa a zhoršenou imunitu, ale výsledky byly nekonzistentní a metody používané k definování nedostatku železa a analýze imunitních odpovědí se značně lišily, což vedlo k nejistotě.12,13 Novější zprávy naznačují, že železo může zhoršit autoimunitní aktivita T lymfocytů14 a závažný nutriční nedostatek železa mohou zhoršit proliferativní odpovědi B lymfocytů.15 Zda však hepcidin jako hormon regulující železo ovlivňuje adaptivní imunitu vůči očkování a infekci, není známo. V této studii ukazujeme, jak fyziologické rozdíly v koncentracích železa v séru, kontrolované hepcidinem nebo suplementací železa, hluboce ovlivňují biologii lymfocytů a imunitní odpovědi.

VÝSLEDEK

Aktivita hepcidinu inhibuje reakce na imunizaci prostřednictvím hypoferemie

Aby se začalo testovat, jak změny v hladinách železa v séru ovlivňují adaptivní imunitní odpověď, byly myši umístěny na dietu s nízkým obsahem železa (2 ppm Fe), aby se modeloval nízký přísun železa. Tři dny po imunizaci byl myším denně injikován mini hepcidin (mimetikum hepcidinu se stejným mechanismem účinku16), který přechodně potlačuje koncentrace železa v séru na ~5 mmol/l (obrázky 1A a S1A). Myši ve skupině s nízkým obsahem železa měly nízké sérové ​​železo a sníženou expresi endogenní jaterní hepcidinové mRNA (obrázek 1A, což ukazuje na nízké zásoby železa) a vykazovaly hluboce potlačenou antigen-specifickou odpověď CD8 T buněk na imunizaci rekombinantním adenovirem kódujícím ovalbumin (AdHu{ {8}}ovalbumin [OVA]) a na OVA protein v adjuvans (obrázky 1B a 1C).

Kromě toho byly reakce T folikulárních pomocných buněk, B buněk germinálního centra (GC) a plazmatických buněk nápadně sníženy a titry anti-OVA IgG byly potlačeny (obrázek 1D). Rozebrali jsme klíčové aspekty změněné homeostázy železa, které ovlivnily adaptivní imunitní odpověď. Myši na dietě s nízkým obsahem železa po dobu 4 týdnů měly podstatně snížené jaterní železo a jaterní hepcidin mRNA, což ukazuje na nízké zásoby železa, ale železo v séru zůstalo nezměněno a antigen-specifické odpovědi CD8 plus T buněk a GC B buněk na imunizaci byly nezměněny (obrázky S1B a S1C). Nedostatečný účinek 4 týdnů diety s nízkým obsahem železa na změnu sérového železa, ale na vyčerpání železa v játrech, byl reprodukovatelný bez imunizace (obrázek S1D) a dieta s nízkým obsahem železa nezměnila rychlost růstu myší (obrázek S1E). Kromě toho 4 týdny diety s nízkým obsahem železa vedly pouze k mírné mikrocytární hypochromní anémii (obrázek S1F).

U myší na normální železné dietě (188 ppm Fe) jediná injekce mini hepcidinu 3 hodiny před imunizací OVA v adjuvans způsobila nízkou hladinu železa v séru po dobu ~24 hodin současně s interakcemi dendritických buněk (DC)-T buňky, nezpůsobila změnit velikost následných odpovědí OT-I (OVA-specifické CD8 plus T buňky) (obrázek S1G).

Nicméně 2 injekce mini hepcidinu ve dnech 3 a 4 po imunizaci byly dostatečné k potlačení expanze buněk OT-I a méně odpovídajících buněk mělo zvýšenou expresi transferinového receptoru (TFRC), což ukazuje na relativní nedostatek buněčného železa a mRNA jaterního hepcidinu byla poklesl, což je v souladu s hypoferémií (obrázek 1E). Injekce citrátu železitoamonného zachránila mini hepcidinem indukovanou supresi expanze OT-I, snížila expresi TFRC na odpovídajících T buňkách a zvýšila jaterní hepcidinovou mRNA (obrázek 1E). Ani hepcidinový peptid, ani mini hepcidin přímo nezměnily proliferaci T buněk nebo expresi TFRC in vitro (obrázky S2A–S2C), což naznačuje, že in vivo účinek mini hepcidinu je zprostředkován redistribucí železa během expanzní fáze imunitní odpovědi. Hepcidin způsobuje hypoferémii částečně tím, že sekvestruje železo v makrofázích sleziny.

Injekce železa-dextranu myším, který indukuje akumulaci železa v makrofázích sleziny bez snížení sérového železa, však neinhibovala (na rozdíl od mini hepcidinu) odpověď OT-I na imunizaci (obrázky S2D–S2G). Snížení sérového železa způsobené mini hepcidinem je proto nezbytné a dostatečné pro narušení odpovědi aktivovaných a proliferujících antigen-specifických lymfocytů na imunizaci.

Hypoferremie inhibuje produkci cytokinů T-buněk v reakci na virové vektory

Při hlubším prozkoumání tohoto konceptu jsme zjistili, že mini injekce hepcidinu snížily endogenní CD8 T buněčnou OVA-specifickou odpověď na AdHu5-OVA ve slezině a periferní krvi, slezinnou OT-I odpověď na modifikovanou vakcínii Ankara kódující OVA (MVA-OVA), slezinná OT-I reakce na OVA v adjuvans a endogenní CD8 T buněčná slezinná slezinná vakcinia specifická (B8R peptid) reakce na MVAOVA, všechny u myší na standardní železné dietě (obrázky 2A a 2B). Kromě účinků na proliferaci vylučovaly buňky OT-I CD8 z minihepcidinových myší méně efektorových cytokinů interferon g (IFNg) a tumor nekrotizující faktor-a (TNF-a) a méně těchto buněk produkovalo interleukin{{16 }} (IL-2), na ex vivo restimulaci (obrázek 2C). Minihepcidin také suprimoval endogenní cytokin produkující efektorovou CD4 T buněčnou odpověď na MVA-OVA a CD4 OT-II T folikulární pomocnou odpověď T buněk na OVA v adjuvans; dále méně slezinných OT-II efektorových buněk CD4 vylučovalo IL-2 nebo TNF-a při restimulaci peptidem ex vivo a reakce GC B buněk sleziny byly potlačeny (obrázky 2D a 2E). Stručně řečeno, hypoferémie inhibuje několik prvků imunitních odpovědí napříč různými vakcinačními platformami a různými antigeny.

Získávání železa je základním požadavkem buněk pro odezvy lymfocytů

Abychom prozkoumali buněčnou povahu reakcí závislých na železe, testovali jsme, jak mutace Y20H v TFRC, která zhoršuje buněčnou absorpci železa a způsobuje imunodeficienci u lidí,3 ovlivňuje odpovědi lymfocytů na imunizaci. Byly provedeny kompetitivní experimenty s transplantací kostní dřeně, ve kterých byla kostní dřeň z myší divokého typu (WT) a myší TfrcY20H/Y20H smíchána a přenesena do letálně ozářených myší příjemců WT a byla analyzována lymfopoéza i odpověď na imunizaci (obrázek 3A). Alela TfrcY20H/Y20H neovlivnila rekonstituci T-buněk nebo B-buněk do oběhu (obrázek 3B), ale po imunizaci pomocí MVA-OVA reagovaly na antigen-specifické CD8 T-buňky, T-folikulární pomocné buňky a GC B-buňky nesoucí alely TfrcY20H/Y20H byly ve srovnání s jejich protějšky WT nedostatečně zastoupeny, což ukazuje, že mutace TfrcY20H/Y20H uděluje buněčné vnitřní defekty proliferativním lymfocytárním odpovědím specificky po imunizaci (obrázek 3C).

Zhoršená akvizice železa zhoršuje fyziologii T-buněk

Abychom porozuměli základu citlivosti T buněk na deprivaci železa, hodnotili jsme expresi klíčových proteinů manipulujících se železem5 během prvních 24 hodin po aktivaci CD8 T buněk ve standardních buněčných kultivačních médiích z publikovaných souborů dat.17 TFRC byl vysoce regulovaný, železnatý importéry iontů DMT1 (Slc11a2) a ZIP14 (Slc39a14) a intracelulární senzory železa18 IRP1 a IRP2 (proteiny 1 a 2 reagující na železo), zatímco hladiny feritinu pro ukládání železa (FTL a FTH) nebyly výrazně změněno; protein exportující železo ferroportin (Slc40a1) nebyl detekován, ale exprese mRNA ferroportinu byla po aktivaci silně snížena (obrázky S3A a S3B). Tyto změny naznačují snahu vnímat, získávat a uchovávat železo po aktivaci.

IRP1 a IRP2 kontrolují buněčnou homeostázu železa.18 K testování funkční důležitosti těchto regulátorů v CD8 plus T buňkách jsme použili floxované alely Irp1 a Irp2, které jsou vyříznuty tamoxifenem aktivovanou Cre-ERT2 rekombinázou (obrázek S3C). Stimulované CD8 plus T buňky indukované k deleci Irp1 a Irp2 nezvyšovaly TFRC ve stejném rozsahu jako kontrolní buňky a proliferovaly relativně špatně; proliferace se však podstatně zlepšila přidáním anorganického FeSO4, který je přijímán nezávisle na TFRC (obrázky 4A, 4B a S3D). Pro proliferaci po aktivaci je tedy nutná kontrola Irp1/2 TFRC zprostředkovaného získávání železa T buňkami.

Obrázek 2. Deficit železa v séru zprostředkovaný minihepcidinem inhibuje odpověď CD8 T buněk na různé řady imunizací a zhoršuje kvalitu odpovědí CD4 T buněk.

(A) Experimentální schéma pro zkoumání účinku mini hepcidinové injekce na imunizaci. (B) Antigen-specifické populace T buněk kvantifikované průtokovou cytometrií 7 dní po imunizaci. Zleva doprava: počet endogenních OVA-specifických CD8 T-buněk ve slezině po imunizaci AdHu5-OVA, frekvence endogenních OVA-specifických CD8 T-buněk jako procento celkových CD8 v periferní krvi po AdHu5-OVA imunizace, počet slezinných OT-I OVA-specifických CD8 T-buněk po imunizaci MVA-OVA, počet slezinných OT-I OVA-specifických CD8 T-buněk po OVA a adjuvantní imunizaci a frekvence endogenní vakcínie (B8R epitop)-specifické CD8 T buňky jako procento celkových CD8, rozlišené produkcí IFNg po ex vivo restimulaci peptidu, indukované imunizací MVA-OVA. Znamená G SD. t-test. Studentův 2-tailed t-test, nepárový.

(C) Zleva doprava: relativní MFI IFNg a TNF-a pro OT-I efektorové buňky produkující příslušný cytokin, MFI normalizovaný na průměr skupiny vehikula; procento OT-I efektorových buněk, které vylučují IL-2. Buňky produkující cytokiny se rozlišily intracelulárním cytokinovým barvením po ex vivo restimulaci splenocytů z myší peptidem SIINFEKL 7 dní po imunizaci MVA-OVA. Znamená G SD. t-test. Studentův 2-tailed t-test, nepárový. (D) Frekvence endogenních IFNg, TNF-a nebo IL-2 produkujících CD40L plus CD4 Th1 efektorových T buněk jako procento celkových CD4, vyřešeno intracelulárním cytokinovým barvením po ex vivo restimulaci splenocytů pomocí MVA - OVA-pulzované dendritické buňky. Znamená G SD. t-test. Studentův 2-tailed t-test, nepárový.

(E) Počet slezinných OT-II T folikulárních pomocných buněk indukovaných OVA a adjuvantní imunizací. Frekvence slezinných TNF-a plus a IL-2 plus OT-II efektorových buněk indukovaných OVA a adjuvantní imunizací jako procento celkových OT-II CD4 T buněk po ex vivo restimulaci peptidem. Frekvence slezinných GC B buněk jako procento B buněk po OVA a adjuvantní imunizaci. Všech 7 dní po imunizaci. Znamená G SD. t-test. Studentův 2-tailed t-test, nepárový.

Abychom dále prozkoumali vliv nízké dostupnosti železa na aspekty fyziologie T lymfocytů, aktivovali jsme T lymfocyty WT CD8 in vitro v řadě koncentrací transferinu a železa. Nízký obsah železa nezměnil časnou upregulaci CD69, ale měl za následek méně buněk s vyšším než 2N obsahem DNA během 24 hodin a sníženou proliferaci během 3 dnů (obrázek S3E). Nedostatek železa snížil celkový obsah buněčného ATP 24 hodin po aktivaci a snížil produkci ATP kvůli nižší tvorbě mitochondriálního ATP, zatímco produkce glykolytického ATP byla nezměněna a po 72 hodinách měly T buňky s deficitem železa relativně depolarizované mitochondrie (obrázek 4C). Zejména syntéza DNA a mitochondriální syntéza ATP jsou procesy závislé na železe, zatímco naproti tomu žádný z 10 enzymů, které zprostředkovávají glykolýzu, nevyžadují železo.

Savčí cíl rapamycinového komplexu 1 (mTORC1) snímá různé environmentální signály a je důležitým regulátorem diferenciace T buněk17,19; zatímco na železe závislá regulace mTORC1 může regulovat erytroidní odpověď na nedostatek železa,20 přítomnost této signalizační osy u jiných primárních typů buněk není známa. Zjistili jsme, že nízký obsah železa také snížil aktivitu mTORC1 CD8 plus T buněk (měřeno intracelulárním fosforylovaným ribozomálním proteinem S6) a expresi aminokyselinového transportéru CD98 a snížil velikost buněk (obrázek S3F). Kromě toho byly sníženy hladiny granzymu B a IL-2 receptoru (CD25), což ukazuje na narušený efektorový fenotyp (obrázek S3G). V komplementárních experimentech jsme zvýšili dostupnost železa pro aktivované CD8 T buňky z myší TfrcY20H/Y20H poskytnutím železa ve formách, které obcházejí defektní protein Y20H TFRC (obrázek S4A). Rychlá upregulace CD69 nebyla ovlivněna, ale FeSO4 zlepšil obsah ATP TfrcY20H/Y20H CD8 T buněk, mitochondriální zdraví, zvětšil velikost buněk a procento buněk phosphor-S6 plus a zachránil proliferaci (obrázky S4B–S4D). Stručně řečeno, po aktivaci CD8 T buňky transformují svou schopnost získávat železo a železo je vyžadováno pro mitochondriální a efektorové funkce T buněk, optimální metabolickou aktivitu a progresi buněčného cyklu.

Přechodná hypoferremie má dlouhodobé důsledky na paměť T buněk

In vitro požadavky T buněk na železo a silné účinky hypoferémie na primární imunitní odpovědi nás vedly k testování, zda nízká dostupnost železa má dlouhodobější vliv na tvorbu imunologické paměti. Přenesli jsme OT-I buňky do recipientních myší, injikovali jsme OVA protein v adjuvans, pak jsme myši ošetřovali mini hepcidinem denně po dobu 4 dnů; O 28 dní později, kdy bylo sérové ​​železo normalizováno, došlo k okrajovému snížení celkového slezinného OT-I paměťových buněk a výraznému významnému snížení frekvence paměťových buněk s centrálním fenotypem podobným paměti (CD62L plus nebo CD27 plus, CD43 nebo CX3CR1) 21,22 od myší, které dostaly mini hepcidin během primární aktivace (obrázek S5A).

Po restimulaci in vitro bylo u myší, které měly během primární imunitní odpovědi nízkou hladinu sérového železa, detekováno méně slezinných paměťových buněk schopných syntetizovat IL-2, IFNg a TNF-a (jednotlivě nebo v kombinaci); odpovídající buňky také produkovaly méně každého cytokinu (obrázky S5B–S5E). Nakonec, aby se otestovaly odezvy na vyvolání paměti v samostatném experimentu, myši, kterým byl injikován OVA v adjuvans s minihepcidinem nebo bez minihepcidinu ve dnech 3–6 po imunizaci, byly znovu vystaveny OVA subkutánně v den 35 po imunizaci a sekundární odpověď analyzováno 40. den. Hypoferémie během primární aktivace redukovala OVA-specifickou CD8 T lymfocytární vybavovací reakci a procento IFNg produkujících CD8 plus T lymfocytů (obrázek 5A). Přechodná hypoferémie během primárních odpovědí tedy zhoršuje kvalitu a kvantitu následné paměti T-buněk a paměťové kapacity u myší.

Zhoršená protilátková odezva u selat a lidí s nedostatkem železa

Abychom pochopili, zda podobné principy imunitních reakcí omezujících železo platí u druhů s různými metabolickými potřebami, využili jsme přirozenou fyziologii selat, ve které jsou nízké zásoby železa při narození v důsledku velké velikosti vrhu, rychlého postnatálního růstu a železa. -špatné mléko prasnice vyžaduje dodatečnou dodávku železa, aby se zabránilo rychlému nástupu anémie.23 U selat chovaných pouze na náhražce mléka prasnice bez přidaného železa bylo železo v séru relativně nízké a hladiny hemoglobinu stabilně klesaly během 4 týdnů po narození; počet červených krvinek byl také snížen, zatímco krevní destičky byly zvýšeny, což ukazuje na anémii z nedostatku železa (IDA) (obrázky 6A, S6A a S6B). Ve věku 2 týdnů byla selata očkována.

Mycoplasma hyopneumoniae (standardní imunizace proti důležitému patogenu selat24), v té době nebyl žádný významný rozdíl v titru protilátek (obrázek S6C). O dva týdny později byla protilátková odpověď specifická pro vakcínu relativně zvýšená u selat, která dostala železo (obrázky 6B a S6C). Proto na pozadí IDA suplementace železem nejen udržuje hemoglobin, ale může také zlepšit reakce na očkování.

Vzácná forma IDA refrakterní na železo (IRIDA) u lidí je způsobena zvýšeným množstvím hepcidinu u pacientů s mutacemi v TMPRSS6, proteáze, která normálně hepcidin potlačuje.25 Kvalita adaptivní imunity u pacientů s IRIDA nebyla dosud zkoumána. U skupiny 12 pacientů s IRIDA, kteří měli zvýšené hladiny hepcidinu, hypoferémii (~5 mmol/l Fe v séru) a hematologické parametry svědčící pro IDA (obrázek S6D), jsme zkoumali protilátky specifické pro různé patogeny, na které jsou zaměřeny vakcíny. podobný věk shromážděný na stejné klinice (obrázek 6C). Žádný z pacientů s IRIDA (a kontrol) neměl zvýšený C-reaktivní protein (všichni pacienti s IRIDA<0.5 mg/L), indicating a lack of systemic inflammation (Figure S6D). Compared to the control group, the IRIDA group had lower serum immunoglobulin G (IgG) concentrations against rubella, Hib, and anti-Streptococcus pneumoniae serotype 1 (PS1), a leading cause of invasive pneumococcal disease globally26 (Figure 6D). 

U anti-PS1 žádný z pacientů s IRIDA nedosáhl koncentrace protilátek nad ochranným prahem Světové zdravotnické organizace (WHO) 0,35 mg/ml (obrázek 6D) a celkově bylo u pacientů s IRIDA nižší pravděpodobnost dosažení ochranné koncentrace sérotypů S. pneumoniae (obrázek S6E). Při kontrole věku a pohlaví jsme zjistili genotypové účinky na antiPS1 (p=0,005), anti-PS18C (p=0,048) a anti-Hib (p=0,066 ) sérové ​​IgG (všechny nižší ve skupině IRIDA). Tato data ukazují, že stav trvale vysokého hepcidinu je spojen s nižšími hladinami protilátek proti některým důležitým patogenům u lidí.

Hypoferremie zhoršuje infekci virem chřipky a zánět plic

Vrozené imunitní reakce na infekci zvyšují hepcidin, což přispívá k hypoferémii infekce.8 Zkoumali jsme, jak léčba mini hepcidinem k vynucení prodloužené hypoferémie ovlivnila imunitní odpověď na respirační virovou infekci (virus chřipky A) u myší (obrázek 7A). Pozorovali jsme méně virově specifických CD8 T buněk ve slezině a plicích; méně slezinných CD8 T buněk exprimujících granzym B; a méně T-folikulárních pomocných buněk, CD44 plus CD4 buněk se zkušenostmi s antigenem a GC B buněk v mediastinálních lymfatických uzlinách 8. den po infekci (obrázky 7B a 7C); avšak exprese plicní mRNA prozánětlivých cytokinů IL-6 a TNF-a byla vyšší (obrázek S7A). Buněčné imunitní reakce ve slezině byly také sníženy 10. den po infekci (obrázek S7B), cirkulující protilátky neutralizující chřipku byly nedetekovatelné (obrázek 7D) a plicní virová zátěž (měřená jako chřipkový nukleoprotein RNA) byla významně vyšší (obrázek 7E) .

Histologicky byl fokální zánět dýchacích cest přítomen u všech infikovaných myší, ale navzdory potlačeným lymfocytárním odpovědím byl perivaskulární/peribronchiolární zánět závažnější v plicích infikovaných myší minihepcidinem s výrazným rozšířením do alveolárního parenchymu (obrázky 7F a 7G ). Zvýšené infiltráty zánětlivých buněk u myší ošetřených mini hepcidinem obsahovaly jak mononukleární buňky, tak neutrofily, přičemž větší oblasti plic vykazovaly narušené alveolární struktury (obrázky 7F, 7G S7C a S7D); nebyla však pozorována žádná změna v obsahu nehemového železa v plicích (obrázek S7E). Kromě tohoto zvýšeného poškození tkáně se myši ošetřené minihepcidinem nedokázaly zotavit z úbytku hmotnosti vyvolaného infekcí (obrázek S7F). Proto měly myši s přetrvávající hypoferémií potlačenou adaptivní imunitní odpověď, byly méně schopné zbavit se viru a prodělaly závažnější plicní onemocnění a trvalou morbiditu.

For more information:1950477648nn@gmail.com