Extrakt z listu Glochidion Littorale vykazuje neuroprotektivní účinky u Caenorhabditis Elegans prostřednictvím aktivace DAF-16

Pro více informací kontaktujte emailtina.xiang@wecistanche.com 
Abstraktní:Řada rostlin používaných v lidovém léčitelství v Thajsku a východní Asii přitahuje zájem díky vysoké bioaktivitě jejich extraktů. Cílem této studie bylo prozkoumat extrakty z jedlých listů 20 rostlin nalezených v Thajsku a prozkoumat potenciální neuroprotektivní účinky nejvíce bioaktivního vzorku. U všech 20 extraktů z listů byl stanoven celkový obsah fenolů a flavonoidů a aktivita 2,{2}}difenyl-1-pikrylhydrazylradikálů. Na základě těchto testů byl extrakt z listů Glochidionlittorale (GLE), který vykazoval vysokou hodnotu ve všech testovaných parametrech, použit v dalších experimentech k hodnocení jeho účinků na neurodegeneraci vCaenorhabditis elegans. Léčba GLE zlepšila oxidační stres vyvolaný H2O2- tím, že zmírnila akumulaci reaktivních forem kyslíku a chránila červy před neurodegenerací vyvolanou 1-methyl-4-fenylpyridiniem. Pozorované neuroprotektivní účinky mohou souviset s aktivací transkripčního faktoru DAF-16. Charakterizace tohoto extraktu pomocí LC-MS identifikovala několik fenolických sloučenin, včetně myricetinu, kumestrinu, kyseliny chlorogenové a hesperidinu, které mohou hrát klíčovou roli vneuroprotekce. Tato studie popisuje novou neuroprotektivní aktivitu GLE, která může být použita k vývoji léčby neurodegenerativních onemocnění, jako je Parkinsonův syndrom.

klíčová slova: Caenorhabditis elegans; extrakt z listů;neuroprotekce; antioxidační aktivita; DAF-16

1. Úvod 

Neurodegenerativní poruchy včetně Alzheimerovy choroby a Parkinsonovy choroby (PD) představují velké zdravotní a finanční problémy pro globální zdravotnické organizace [1]. Ačkoli se délka lidského života v průmyslových zemích v posledních několika desetiletích prodloužila, zvýšila se také prevalence nemocí souvisejících s věkem. Očekává se, že výskyt poruch s pozdním nástupem, jako jsou neurologické poruchy, v příštích několika desetiletích rychle vzroste. Proto je klíčové podporovat studie a provádět klinické studie na sloučeninách, které mohou mít potenciál léčit, předcházet nebo alespoň oddálit nástup neurodegenerativních onemocnění [2]. Jedním z charakteristických rysů PD je progresivní ztráta dopaminergních (DA) neuronů v substantia nigra [3]. V patogenezi PD hraje klíčovou roli při ztrátě DA buněk zvýšená produkce reaktivních forem kyslíku (ROS) [4]. Proto je snížení oxidačního stresu považováno za slibný terapeutický přístup v léčbě PD [5]. 1-methyl-4-fenylpyridinium (MPP plus ), které inhibuje aktivitu mitochondriálního komplexu I, může vyvolat příznaky podobné PD u lidí a zvířecích modelů [6].

PoužitíCaenorhabditis elegansjako in vivo model poskytuje určité výhody při studiu PD [7]. Nematoda je jednoduchá, levná a má krátký životní cyklus. Podporuje studie zahrnující rozsáhlé analýzy. Navíc byla kompletně zmapována neuronální síť C. elegans. Obsahuje 8 DA neuronů a homologní geny související s PD [8]. Neurodegeneraci, která napodobuje parkinsonské symptomy, lze u C. elegans vyvolat léčbou neurotoxiny, jako je MPP plus [9].
Přírodní antioxidační sloučeniny představují atraktivní zdroje pro vývoj léků k léčbě neurodegenerativních onemocnění díky svým neuroprotektivním účinkům na zvířecích modelech a nízké toxicitě [3]. Polyfenoly jsou známé jako jedny z nejhojnějších antioxidantů v lidské stravě [10]. Bylo také zjištěno, že oxidační procesy jsou zapojeny do mnoha patologií, včetně neurodegenerace, rakoviny, cukrovky, kardiovaskulárních a protizánětlivých onemocnění. Nalezení polyfenolů vykazujících antioxidační vlastnosti z přírodních zdrojů by tedy mohlo přispět k prevenci nebo léčbě těchto patologií. Tato studie se zaměřila na extrakty z jedlých listů rostlin nalezených v Thajsku. Většina odrůd široce pěstovaných v severním a jižním Thajsku byla používána jako lidová medicína proti celkovým zraněním a nemocem; nicméně existuje jen málo zpráv o jejich neuroprotektivních účincích.
V této studii jsme nejprve zkoumali extrakty jedlých listů z 20 rostlin pěstovaných v Thajsku a hodnotili jejich obsah fenolů a flavonoidů a jejich aktivitu 2,{2}}difenyl-1- pikrylhydrazyl (DPPH) pohlcovat radikály. Účinky extraktu z listů Glochidion littorale (GLE), který vykazoval vysokou hodnotu ve všech testovaných parametrech, byly hodnoceny na C. elegans s neurodegenerací. Dále byly zkoumány potenciální dráhy zapojené do neuroprotektivního účinku GLE spolu s identifikací hlavních složek GLE.
Protože je známo, že transkripční faktor DAF-16 hraje klíčovou roli v regulaci oxidačního stresu [11], byla vyslovena hypotéza, že GLE může cílit na DAF-16. Kmen C. elegans CF1038, což je mutantní kmen DAF-16 se ztrátou funkce, byl použit ke stanovení míry přežití červů léčených s GLE a bez něj. U H2O2-indukovaného oxidačního stresu léčba GLE nezvýšila míru přežití transgenních červů (obrázek 1C).

2. Výsledky

2.1. Promítání listů thajských rostlin

Surové extrakty z jedlých listů z rostlin pěstovaných v Thajsku byly připraveny ultrazvukem. Extrakty z listů 20 rostlin byly testovány na obsah fenolů a flavonoidů a antioxidační aktivitu pomocí testu DPPH vychytávání radikálů. U několika testovaných vzorků, jako je Glochidion sphaerogynum a Mentha piperita, bylo zjištěno, že má vysokou aktivitu pohlcující radikály s nízkým obsahem fenolických látek a flavonoidů, zatímco některé vzorky, jako Clinacanthus nutans a Ocimum × citriodorum, vykazovaly opačný trend (Tabulka 1 ). Extrakt z listů G. littorale vykazoval vysokou aktivitu vychytávání DPPH radikálů a také vysoký obsah fenolů a flavonoidů. Proto byly bioaktivity spojené s G. littorale dále zkoumány.

2.2. Zvýšená odolnost GLE proti oxidativnímu stresu prostřednictvím DAF-16 v C. Elegans

Byl zkoumán účinek GLE na přežití červů N2 pod oxidativním stresem. Léčba H2O2 (5 mM) vyvolala 75% úmrtí v kontrolní skupině, zatímco souběžná léčba 50 ug/ml a vyššími koncentracemi GLE byla spojena s vysokou mírou přežití (obrázek 1A). Mezi testovanými koncentracemi GLE byly 100 ug/ml a 200 ug/ml spojeny s nejvyšší mírou přežití (82,0 procent a 88,2 procent, v tomto pořadí). Proto byly tyto dvě koncentrace použity v následujících experimentech. Pro hodnocení antioxidačního účinku GLE in vivo byly intracelulární hladiny ROS měřeny u hlístic divokého typu pomocí 2',7'-dichlordihydroflfluorescein diacetátu (H2DCF-DA), dobře známé fluorescenční sondy pro detekci intracelulární produkce ROS. Byl pozorován významný pokles intenzit fluorescence ve skupinách léčených GLE ve srovnání s neléčenou skupinou (obrázek 1B), což potvrzuje antioxidační vlastnosti GLE.

2.3. Léčba GLE snížila letalitu neurotoxicity MPP plus indukované DA prostřednictvím DAF-16 u C. Elegans C. elegans má 8 neuronů DA [8]. Selektivní degenerace těchto DA neuronů byla hodnocena po expozici MPP plus. Léčba divokých červů N2 pomocí 0,75 mM MPP plus vedlo k významnému snížení přežití (obrázek 2). Současná léčba s GLE však významně zvýšila přežití červů. Byl zkoumán účinek léčby GLE na mutantní červy daf{12}}. Jak je znázorněno na obrázku 3 a tabulce 2, léčba GLE nezvýšila přežití těchto červů po expozici MPP plus ve srovnání s kontrolní skupinou. Tyto výsledky naznačují, že DAF-16 může být vyžadován pro zprostředkování neuroprotektivního účinku GLE u C. elegans. Dále byl použit mutantní kmen DAF-2 se ztrátou funkce, CB1370, k určení, zda se DAF-2 podílel na pozorovaných neuroprotektivních účincích. Jak je znázorněno na obrázku 4 a tabulce 3, medián a maximální přežití se významně zvýšilo u daf-2 mutantních červů léčených GLE.

2.4. Účinky GLE na lokalizaci DAF-16

Bylo prokázáno, že aktivace DAF-16 je regulována jeho jadernou akumulací [12]. Následně jsme zkoumali, zda GLE může indukovat jadernou akumulaci DAF-16 v transgenním kmeni TJ356, který exprimuje fúzní protein DAF-16::GFP. Výsledky ukázaly, že po 48 hodinách inkubace se 100 ug/ml GLE se intenzita zelené fluorescence DAF-16 v jádře významně zvýšila ve srovnání s neléčenou skupinou (obrázek 5).

2.5. Fytochemická charakterizace v GLE

LC-MS byla provedena pro profilování fytochemikálií v GLE a její výsledky jsou uvedeny na obrázku6. Chromatografické píky byly identifikovány porovnáním MS dat s databázemi na základě hledání m/z hodnot píků molekulárních iontů v pozitivní režim [M plus H]Plus. V důsledku toho byly jako hlavní sloučeniny detekovány myricetin, kuumestrin, kyselina chlorogenová a hesperidin (tab.4).

3. Diskuse

Rostlinné extrakty jsou bohatým zdrojem přírodních bioaktivních látek. Mnoho studií hodnotilo rostlinné extrakty používané v zemích jihovýchodní Asie, včetně Thajska, kde jsou tyto extrakty součástí lidového léčitelství [13,14]. V této studii byly testovány extrakty z 20 listů jedlých rostlin z Thajska a G. littorale byla vybrána pro další zkoumání, protože vykazovala vysoký obsah fenolů, obsah flavonoidů a aktivitu pohlcující radikály. Několik studií zkoumalo různé druhy rodu Glochidion [15–19]; existuje však jen málo studií týkajících se funkčních vlastností a složek G. littorale. Naše data ukázala, že GLE chránil C. elegans proti H2O2-indukovanému oxidativnímu stresu snížením intracelulární akumulace ROS. To mohlo být způsobeno vysokým obsahem fenolických sloučenin, jako jsou flavonoidy, o kterých je známo, že mají silnou antioxidační aktivitu [20]. Tato zjištění jsou podobná těm, která získala Duangjan et al. (2019), kteří prokázali, že extrakty z listů G. zeylanicum mohou chránit C. elegans před oxidačním stresem [21]. Inzulinová/inzulinu podobná signální dráha (IIS) reguluje růst, schopnost reagovat na stres a dlouhověkost u C. elegans [22,23]. Zjistili jsme, že daf-16 nulový mutant C. elegans ošetřený GLE byl citlivý na oxidační stres. Tento výsledek naznačuje, že antioxidační účinek GLE při snižování oxidačního stresu u hlístic se pravděpodobně podílí nejen na aktivitě vychytávání radikálů, ale také na regulaci transkripčního faktoru DAF-16.

Byly zkoumány ochranné účinky GLE proti toxicitě indukované MPP plus u C. elegans. DA neurony v nematodách vychytávají MPP plus hlavně prostřednictvím vysoce afinitních DA transportérů, což je podobně pozorováno u savců. Akumulace MPP plus uvnitř neuronů inaktivuje mitochondriální komplex I dýchacího řetězce a indukuje buněčnou smrt [24–27]. Bylo zjištěno, že léčba GLE významně snižuje letalitu spojenou s léčbou MPP plus u červů divokého typu. Dráha IIS je modulována inzulinu podobnými peptidy prostřednictvím receptoru DAF-2 u C. elegans [28]. Za normálních podmínek dráha IIS inhibuje fosforylaci DAF-16 a zabraňuje jeho jaderné translokaci. U nulových mutantů daf-2 přežila skupina léčená GLE déle než kontrolní skupina. Na rozdíl od toho nebyl pozorován žádný rozdíl v přežití mezi kontrolní skupinou a skupinou léčenou GLE obsahující mutantní červy daf-16 null. Je známo, že downregulovaná signalizace DAF-2 usnadňuje vstup DAF-16 do jádra, kde může upregulovat expresi cílových genů a kontrolovat odolnost vůči stresu a dlouhověkost [29]. To může vysvětlit, proč daf-2 mutantní červi léčení GLE vykazovali relativně vyšší přežití. Kromě toho byla pozorována zvýšená jaderná akumulace DAF-16 u červů léčených GLE pomocí transgenního TJ356 DAF-16::GFPC. elegáni. Tyto výsledky kumulativně ukázaly, že GLE mohl vykazovat své neuroprotektivní účinky prostřednictvím aktivace DAF-16.

4.3. Celkový obsah fenolů Ke stanovení celkového obsahu fenolů byla použita metoda Folin-Ciocalteu. Stručně, 11,4 ul extraktu (1 mg/ml) bylo smícháno s 227,3 ul 2% (w/v) roztoku Na2C03 a poté byla směs ponechána stát při teplotě místnosti po dobu 2 minut. Po přidání 11,4 µl 10% (v/v) Folin-Ciocalteuova činidla. Inkubace ve tmě byla prováděna po dobu 30 minut. Následně byla měřena absorbance při 750 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Nivo 3F Multimode Plate Reader, PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Kyselina gallová byla použita jako standard pro kalibrační křivku. Celkový obsah fenolů byl vyjádřen jako ekvivalenty kyseliny gallové (mg ekvivalentu kyseliny gallové/g rostlinného extraktu).

4.4. Celkový obsah flavonoidů K měření celkového obsahu flavonoidů byla použita kolorimetrická metoda chloridu hlinitého. Stručně, 25 ul extraktu (2 mg/ml) bylo smícháno se 7,5 ul 5% (w/v) roztoku NaN02 a 152,5 ul destilované vody. Po 6 minutách bylo přidáno 15 ul 10% (w/v) roztoku AICI3 a ponecháno stát po dobu 5 minut. Poté bylo ke směsi přidáno 50 ul 1M roztoku NaOH. Následně byla směs inkubována ve tmě po dobu 15 minut a absorbance byla měřena při 510 nm pomocí čtečky mikrodestiček. Celkový obsah flavonoidů byl vypočten vytvořením kalibrační křivky za použití kvercetinu jako standardu a výsledky byly vyjádřeny jako ekvivalent kvercetinu (mg ekvivalentu kvercetinu/g rostlinného extraktu).4.5. Aktivita vychytávání volných radikálů Schopnost vychytávat volné radikály byla hodnocena pomocí testů DPPH [32]. Stručně, 100 ul extraktu (1 mg/ml) bylo smícháno se 100 ul roztoku DPPH. Po 30 minutách byla měřena absorbance při 517 nm pomocí čtečky mikrodestiček. Výsledky byly vyjádřeny jako procento inhibice DPPH radikálů.

4.10. Nukleární lokalizace DAF-16transgenního C. elegans TJ356, který exprimuje DAF-16-fúzní protein GFP, byl použit ke zkoumání intracelulární distribuce DAF-16. Hlístice ve stádiu L1 byly ošetřeny GLE po dobu 48 hodin při 2{{30}} ◦C. Červi pak byli přeneseni na 2% agarózový polštářek na podložní sklíčko a anestetizováni přidáním jedné kapky (přibližně 20 ul) 25 uM azidu sodného na agarózový polštářek. Exprese GFP byla zkoumána pomocí fluorescenční mikroskopie (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, USA). Průměrná intenzita fluorescence DAF-16 v jádrech byla analyzována pomocí softwaru Image J (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). 4.11. Fytochemické profilování pomocí LC-MS Extrakt z listů byl analyzován pomocí LCMS-8040 (Shimadzu). Hmotnostní spektra byla získána v rozsahu m/z 50–1000 pomocí skenovacího režimu Q3. Roztok byl nastříknut na Inertsil ODS{20}} (250 × 2,1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tokyo Japan) při teplotě kolony při 40 °C s použitím gradientu (A) 0,1 % kyseliny mravenčí a (B ) acetonitril/voda (80/20) obsahující 0,1 procenta kyseliny mravenčí. Byl použit následující gradient s průtokem 0,2 ml/min: 0–100 procent B (0–45 minut), 100 procent B (45–50 minut) a 0 procent B (50–60 minut). Sloučeniny byly domněle identifikovány porovnáním experimentálních hodnot m/z s knihovnou teoreticky vypočtených hodnot m/z v databázích, včetně databáze lidského metabolomu a databáze METLIN. 4.12. Statistická analýza Data byla vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka pro každou skupinu. Významný rozdíl mezi těmito dvěma skupinami byl hodnocen pomocí t-testu, zatímco rozdíl mezi třemi a více skupinami byl hodnocen pomocí jednocestné ANOVA, po které následoval Tukeyho post-hoc srovnávací test. Statistická významnost byla nastavena na p < 0,001="" a="" p="">< 0,0001.="" pro="" testy="" délky="" života="" bylo="" přežití="" c.="" elegans="" vyneseno="" do="" grafu="" pomocí="" kaplan-meierových="" křivek="" přežití="" a="" analyzováno="" pomocí="" log-rank="" testů="" pomocí="" softwaru="" graphpad="" prism="" (verze="" 9.01;="" graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca,="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4, Dhiraj A. Vattem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 a Shigeru Katayama 1,2,*

1 Graduate School of Medicine, Science and Technology, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japonsko;

2Institut pro biomedicínské vědy, Univerzita Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japonsko;

3 School of Agro-Industry, Mae Fah Luang University, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Thajsko;saroat@mfu.ac.th

4 Edison Biotechnology Institute, Konneker Research Laboratories, Ohio University, Athens, OH 45701, USA;

5 College of Health Sciences & Professions, Ohio University, Athens, OH 45701, USA

6 Graduate School of Agriculture, Kyoto University, Kyoto 606-8502, Japonsko;

Příspěvky autora:

Autorské příspěvky: Konceptualizace, SR, DAV a SK; vyšetřování, AFB, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV a KS; psaní – příprava původního návrhu, AFB; psaní—recenze a redakce, SK; supervize, SN Všichni autoři si přečetli a souhlasí s publikovanou verzí rukopisu.
Financování: Tento výzkum neobdržel žádné externí financování.
Prohlášení institucionální revizní komise: Neuplatňuje se.
Prohlášení o informovaném souhlasu: Neuplatňuje se.
Prohlášení o dostupnosti dat: Údaje jsou k dispozici příslušným autorem na základě přiměřené žádosti.
Střet zájmů: Autoři neprohlašují žádný střet zájmů.
Dostupnost vzorků: Vzorky sloučenin nejsou u autorů k dispozici

Reference

1 Pohl, F.; Lin, PKT Potenciální využití rostlinných přírodních produktů a rostlinných extraktů s antioxidačními vlastnostmi pro prevenci/léčbu neurodegenerativních onemocnění: in vitro, in vivo a klinické studie. Molekuly 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rhie, SJ; Yoon, S. Role oxidačního stresu u neurodegenerativních onemocnění. Exp. Neurobiol. 2015, 24, 325–340. [CrossRef] [PubMed]

3. Lu, X.-1.; Yao, X.-1.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Ochranné účinky xyloketalu B proti neurotoxicitě indukované MPP plus u buněk Caenorhabditis elegans a PC12. Brain Res. 2010, 1332, 110–119. [CrossRef]

4. Trimmer, PA; Bennett, JP, Jr. Cybridní model sporadické Parkinsonovy choroby. Exp. Neurol. 2009, 218, 320–325. [CrossRef]

5. Cheon, S.-M.; Jang, I.; Lee, MH; Kim, DK; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia chrání dopaminergní neurodegeneraci u Caenorhabditis elegans. Pharm. Biol. 2016, 55, 481–486. [CrossRef]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Neurochemické nálezy v MPTP modelu Parkinsonovy choroby. J. Neural Transm. 2001, 108, 1263–1282. [CrossRef] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slone, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Funkční analýza neuroprotekce zprostředkované VPS41- u Caenorhabditis elegans a savčích modelů Parkinsonovy choroby. J. Neurosci. 2012, 32, 2142–2153. [CrossRef] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, H.-J.; Liu, S.-P.; Chen, C.-S.; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, R.-J.; Tsai, S.-Y.; Hung, H.-S.; a kol. n-Butylidenftalid chrání před dopaminergní neuronovou degenerací a akumulací -synukleinu u Caenorhabditis elegans modelech Parkinsonovy choroby. PLOS ONE 2014, 9, e85305. [CrossRef]

9. Jadiya, P.; Khan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Antiparkinsonské účinky Bacopa monnieri: Postřehy z transgenních a farmakologických modelů Parkinsonovy choroby Caenorhabditis elegans. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2011, 413, 605–610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Polyfenolové antioxidanty z přírodních zdrojů a příspěvek k podpoře zdraví. In Polyfenoly v lidském zdraví a nemoci; Elsevier BV: Amsterdam, Nizozemsko, 2014; s. 253–265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Regulace stárnutí a onemocnění souvisejících s věkem společností DAF-16 a faktor tepelného šoku. Science 2003, 300, 1142–1145. [CrossRef]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf-16 integruje vývojové a environmentální vstupy ke zprostředkování stárnutí u háďátka Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 2001, 11, 1975–1980. [CrossRef]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Antioxidační a volné radikály zachycující aktivity některých rostlin používaných v thajské lidové medicíně. Pharm. Biol. 2006, 44, 221–228. [CrossRef]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, P. Antioxidační aktivita a ultrastrukturální změny v buněčných liniích rakoviny žaludku vyvolané extrakty severovýchodních thajských jedlých lidových rostlin. Doplněk BMC. Alternativní. Med. 2013, 13, 60. [CrossRef]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. Výskyt triterpenoidů a steroidů u tří druhů Glochidion. Fytochemie 1970, 9, 1099–1102. [CrossRef]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, glukosid (7S,8R)-dihydrodeh ydrodiconiferyl alkoholu z listů glochidia obovatum. Fytochemie 1998, 49, 2137–2139. [CrossRef]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Chemické složky z Glochidion wrightii Benth. Biochem. Syst. Ecol. 2012, 45, 7–11. [CrossRef]

18. Tian, ​​J.-M.; Fu, X.-Y.; Zhang, Q.; He, H.-P.; Gao, J.-M.; Hao, X.-J. Chemické složky z Glochidion assamicum. Biochem. Syst. Ecol. 2013, 48, 288–292. [CrossRef]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Hodnota živin a obsah antioxidantů v původní zelenině z jižního Thajska. Food Chem. 2015, 173, 838–846. [CrossRef]

20. Pietta, P.-G. Flavonoidy jako antioxidanty. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1035–1042. [CrossRef] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang, S.; Wink, M.; Výtažky z listů Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum vykazují vlastnosti prodlužující životnost a odolnost vůči oxidativnímu stresu u Caenorhabditis elegans prostřednictvím signálních drah DAF-16/FoxO a SKN-1/Nrf-2. Fytomedicína 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Cíle DAF-16 podílející se na dlouhověkosti dospělých Caenorhabditis elegans a tvorbě dauer. Exp. Gerontol. 2006, 41, 922–927. [CrossRef] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. FOXO Transkripční faktory v regulačních sítích dlouhověkosti. J. Biochem. 2007, 141, 769–774. [CrossRef]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; Thomas, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Dopaminergní neuronální ztráta a motorické deficity u Caenorhabditis elegans nadměrně exprimující lidský -synuklein. J. Neurochem. 2004, 86, 165–172. [CrossRef] [PubMed]

25. Nass, R.; Hall, DH; Miller, DM; Blakely, RD Neurotoxinem indukovaná degenerace dopaminových neuronů u Caenorhabditis elegans. Proč. Natl. Akad. Sci. USA 2002, 99, 3264–3269. [CrossRef]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Le, W.-D. Deplece ATP je hlavní příčinou MPP plus indukované dopaminové neuronální smrti a letality červů u -synukleinu transgenního C. elegans. Neurosci. Býk. 2007, 23, 329–335. [CrossRef]

27. Braungart, E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister, R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP plus Model Parkinsonovy choroby pro vysoce výkonné screeningy léků. Neurodegener. Dis. 2004, 1, 175–183. [CrossRef]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Signály mládí: Endokrinní regulace stárnutí u Caenorhabditis elegans. Trendy Endocrinol. Metab. 2009, 20, 259–264. [CrossRef]