Experimentální studie ochranného účinku předběžného ošetření glykosidy Cistanche na ischemicko-reperfuzní poškození ledvin

další informace:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Chirurgické oddělení, Baoshan okresní nemocnice integrované tradiční čínské a západní medicíny, Šanghaj 201900)

【Abstraktní】Cíl Sestavit model resuscitace hemoragického šoku u potkanů ​​a pozorovat ochranný účinekCistanchecelkové glykosidy (CTG) na renální ischemicko-reperfuzní poškození. Metody SD potkani byli náhodně rozděleni do 3 skupin: skupina falešné operace, experimentální skupina (skupina šokové resuscitace), skupina léčená CTG, 10 krys v každé skupině. Experimentální skupina a skupina léčená CTG vytvořily modely renální ischemie-reperfuze. Krysám v léčebné skupině bylo intraperitoneálně injikováno CTG 400 mg/kg a experimentální skupině a skupině se simulovanou operací byl injikován fyziologický roztok. Obsah myokardu v krvi, obsah močovinového dusíku a cystatin C každé skupiny byly detekovány pro stanovení renální funkce, průtoková cytometrická analýza byla použita k detekci rychlosti apoptózy renálních buněk; enzym-linked immunoassay (ELISA) byl použit k detekci X-chromozomové vazby u potkanůledvinatkáňová exprese X-vázaného inhibitoru proteinu apoptózy (XIAP). Výsledky Při srovnání CTG skupiny s experimentální skupinou byly významně sníženy krevní Cr, BUN a cystatin C (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistanchemají ochranný účinek na renální ischemicko-reperfuzní poškození u potkanů, což může souviset s podporou exprese XIAP.

[klíčová slova] ledviny; ischemicko-reperfuzní poškození; celkové glykosidy cistanche; chromozomově vázaný inhibitor proteinu apoptózy; apoptóza; krysa

[Klasifikační číslo čínské knihovny] R692 [Kód pro označení dokumentu] A [Číslo článku] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Kliknutím zobrazíte Cistanche EXTRAKTNÍ PRÁŠEK na ledviny

Ischemicko-reperfuzní (I/R) poranění je častým patofyziologickým jevem renálního poškození v procesu hemoragického šoku, těžkého traumatu,ledvinatransplantace aledvinaoperace nádoru. Studie ukázaly, že apoptóza je důležitou součástí poškození funkce ledvin způsobené I/R poškozením (1). X-vázaný inhibitor proteinu apoptózy (XIAP) je jedním z nejsilnějších dosud nalezených endogenních inhibitorů apoptózy (2). Existuje jen málo studií o antiapoptotickém účinku XIAP v renální tkáni po poranění I/R.Cistanchecelkové glykosidy (CTG) jsou fenylethanoidní celkové glykosidy extrahované zCistanche, který má různé biologické funkce. Existuje jen málo studií o jeho renální ochraně po I/R poranění. . Tato studie vytvořila model resuscitace hemoragického šoku u potkanů ​​a vytvořila model systémového poranění I/R, aby se prozkoumal ochranný účinek celkových glykosidů masové kýly naledvinaz I/R poranění a prozkoumat jeho možný mechanismus.

1Materiály a metody

1.1 Zvířata a seskupování

Experimentální centrum Shanghai University of Traditional Chinese Medicine poskytuje 30 čistých a zdravých samců potkanů ​​o hmotnosti (320 ± 30) g. Náhodně rozděleni do 3 skupin: skupina falešné operace, experimentální skupina (skupina šokové resuscitace), skupina CTG, každá s 10 krysami.

1.2 Hlavní činidla a přístroje

Celkové glykosidy lepkavé rýže (číslo šarže: 20081516) byly zakoupeny od Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; pentobarbital sodný, Hoechst 33258, a propionyljodid byly zakoupeny od Sigma, USA; Protein Assay Kit (XIAP) a ELISA Kit byly zakoupeny od Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; čtečka mikrodestiček byla zakoupena od Thermo Company, USA; multiparametrový fyziologický detektor byl zakoupen od společnosti Nihon Kohden Company, Japonsko; průtokový cytometr BDFACSAria byl zakoupen od Becton, USA - Dickinson Company; 24G trokar byl zakoupen od Shandong Jierui Medical Devices Company.

1.3 Experimentální metoda

1.3.1 Příprava zvířecího modelu SD potkani byli nalačno 12 hodin před experimentem a anestetizováni intraperitoneální injekcí pentobarbitalu sodného (50 mg/kg).

Krysa byla fixována v poloze na zádech, byla provedena 3 cm incize v levém podbřišku, byla oddělena femorální tepna, byl zaveden trokar 24G a byl připojen multiparametrový fyziologický detektor. Průměrný krevní tlak krysy byl měřen jako (113 ± 15) mmHg, 20 ml injekční stříkačka heparin. Krevní tlak byl snížen na 40 mmHg (1 mmHg=0. 133 kPa) pomocí chemického spojovacího třícestného zařízení. Šok byl považován za zahájený a krevní tlak byl udržován po dobu 90 minut. Objem krve byl (13 ± 3) ml a poté autologní krev ve stříkačce Pomalá reinfuze trvá asi 30 minut a krevní tlak se vrátí na více než 90 procent základní hodnoty a resuscitace je považována za úspěšnou (3) . Trokar byl vytažen, femorální tepna byla podvázána a řez byl sešit. Poté, co se krysy probudily, byly vráceny do klece k pozorování a mohly volně jíst a pít. 24 hodin po resuscitaci byla použita intraperitoneální injekce pentobarbitalu sodného (50 mg/kg) k anestezii, laparotomii, bylo odebráno 5 ml krve z dolní duté žíly, krysy byly okamžitě usmrceny a byla jim odebrána levá a pravá ledvina. použití.

1.3.2 Metody medikace Skupině léčené CTG bylo podáváno CTG 2 hodiny před odběrem krve krysám a injikováno do břišní dutiny v dávce 400 mg/kg. Experimentální skupině byly intraperitoneálně injikovány 3 ml normálního fyziologického roztoku 2 hodiny před odběrem krve; skupina s předstíranou operací podstoupila pouze anestezii, laparotomii a oddělení stehenní tepny, umístění trokaru a sešití řezu, ale bez krvácení nebo resuscitace. Zbytek byl stejný jako u experimentální skupiny.

1. 4 detekční indikátory a metody

1.4.1 Stanovení obsahu BUN, Cr a cystatinu C v krvi Cystatin C je endogenním markerem změn rychlosti glomerulární filtrace. Při poruše funkce ledvin se snižuje rychlost glomerulární filtrace, koncentrace cystatinu C v krvi se může 10krát zvýšit a diagnostická přesnost cystatinu C je výrazně lepší než u intoxikace sérových svalů. Obsah krve BUN, Cr a Cystatin C byl předložen ke stanovení do laboratoře naší nemocnice.

1.4.2 Stanovení rychlosti apoptózy buněk K detekci rychlosti apoptózy ledvinových buněk byla použita průtoková cytometrie. Vezměte ledvinu a nasekejte ji ostřím, přidejte trochu PBS a přeneste do zkumavky. Přidejte 0,3 procenta trypsinu k digesci ve vodní lázni 37 P, inkubujte 20 min, když se obsah ve zkumavce zakalí, přidejte 2krát PBS, aby se trávení zastavilo, filtrujte nylonové síto 30}0 mesh, odstraňte nečistoty a odstřeďte v nízkoteplotní odstředivce. Poloměr centrifugy 8 cm, 12,000 ot./min., centrifugujte 5 minut, odstraňte supernatant, upravte koncentraci buněk na 1 ~ 1,5 x 106/ml, odeberte 0,4 ml výše uvedené buněčné suspenze a přidejte 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), tmavý 37 t: inkubujte ve vodní lázni, zkumavku uzavřete, po 5 minutách opláchněte PBS, poloměr centrifugy 8 cm, 12 000 ot./min., centrifugujte 5 minut , zlikvidujte supernatant, znovu opláchněte stejným způsobem. Přidejte 0,4 ml PI, barveného po dobu 5 minut, a detekujte procento normálních, nekrotických a apoptotických buněk v ledvině. Podle afinity dvou barviv různých typů buněk je známo, že pouze buňky zbarvené PI jsou mrtvé buňky, pouze buňky Hoechst 33258 jsou apoptotické buňky a ani jedna z nich není zbarvená normální živé buňky.

1.4.3 Enzyme-linked immunoassay (ELISA) pro detekci exprese XIAP v tkáních ledvin potkana Vezměte každou skupinu ledvin a ošetřete čerstvé tkáně ledvin tkáňovým lyzátem. Centrifugujte v nízkoteplotní odstředivce při 12 000 ot./min. po dobu 5 min. Odeberte supernatant a postupujte podle pokynů soupravy XIAP ELISA Kit. Shanghai Jiaotong University Fenghe Technology Co., Ltd. je zodpovědná za testování.

1.5 Statistické zpracování

Experimentální data každé skupiny jsou reprezentována půdami Yuan a SPSS 17. Pro statistickou analýzu se používá software 0. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche může zlepšit sexuální funkce

2 výsledky

Hodnoty indexu funkce ledvin Cr, BUN a cystatinu C byly statisticky významné (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Tabulka 1 Indexy funkce ledvin Cr, BUN a hodnoty cystatinu-C potkanů ​​v každé skupině Tab. 1 Indexy renálních funkcí ve třech skupinách

Ve srovnání se skupinou falešných operací, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Mechanismus ischemicko-reperfuzního poškození ledvin je velmi komplikovaný. Jde o patologický proces, který se vyskytuje mnoha způsoby působením různých faktorů, jako je přetížení vápníkovými ionty, poškození peroxidací lipidů, buněčná apoptóza a nekróza, mezi nimiž je apoptóza buněk závislá na kaspáze jednou z hlavních forem renálních tubulárních epiteliálních buněk. poškození vyvolané I/R poškozením ledvin (4). Inhibitor rodiny apoptózových proteinů (IAP) je jediným endogenním inhibitorem kaspáz, který se dosud nacházel v savčích buňkách a který může účinně zabránit výskytu buněčné apoptózy. XIAP je členem s nejsilnějším inhibičním účinkem na kaspázu v rodině IAP. Může inhibovat buněčnou apoptózu způsobenou řadou patologických podnětů a má ochranný účinek na poškozené orgány (5).

V současnosti většina metod pro vytvoření zvířecích modelů renálního I/R poškození spočívá v odstranění jedné ledviny a sevření druhé strany ledvinového pediklu nebo renální tepny ⑹ pro simulaci stavu transplantace ledviny. Tato studie využívá model hemoragického šoku/resuscitace, který je bližší patofyziologickému procesu systémové ischemie-reperfuze, ke kterému dochází u klinického traumatického šoku. V tomto experimentu byly hladiny BUN, Cr a cystatinu C v krvi SD potkanů. Významné zlepšení, těžce narušená funkce ledvin, je ideálním zvířecím modelem pro studium I/R poškození ledvin.

CTG je důležitou léčivou složkou tradiční čínské medicíny masové dívčí pasty. Lilek pasta, která je teplé povahy, sladká a slaná, se vrací do meridiánu ledvin a tlustého střeva a byla původně obsažena v Shennong's Materia Medica. "Ben Sutra": Hlavních pět porodů a sedm zranění, vyživuje střed, vyživuje pět vnitřních orgánů, posiluje jin, vyživuje esenci a čchi;Cistanchese v mé zemi používá již dva tisíce let. V minulosti se řadí na 1. místo ve složení zvyšujících sílu a na 2. místo ve výživných formulích po ženšenu. Studie to ukázalyCistancheumětzlepšit sexuální funkce, regulovat neuroendokrinní, azlepšit imunitní funkce. , Antioxidantypodporuje látkovou výměnu, chrání ischemický myokard a další funkce. Jako hlavní léčivá složka masového rodinného pyré má CTG mnoho funkcí. Výzkum na modelech cerebrální ischemie-reperfuze zjistil, že CTG může snížit excitační aminokyseliny v mozkové tkáni po ischemii-reperfuzi a chránit mozkovou tkáň SD potkanů ​​(7). CTG máantioxidační účinekna myší tkáně a má určitý ochranný účinek na akutní mozkovou hypoxii u myší a poškození srdečního svalu u myší (9). CTG může výrazně zlepšit neurobehaviorParkinsonovimodelují myši a inhibují pokles počtu dopaminových neuronů v substantia nigra (9). Tím, že zvyšuje aktivitu enzymů pohlcujících volné radikály, zabraňuje peroxidaci lipidů, inhibuje ukládání B-amyloidního peptidu v mozku a inhibuje apoptózu mozkových buněk, CTG významně zlepšuje učeníAlzheimerova chorobamyši způsobené B-amyloidním peptidem Paměťová schopnost w. Tato studie ukázala, že po aplikaci předléčby CTG se obsah BUN, Cr a cystatinu C v krvi u potkanů ​​významně snížil a poškození ledvin se snížilo. CTG zvýšilo apoptózu-inhibující protein XIAP v I/R poškozené renální tkáni a blokovalo buněčnou apoptózu. Výskyt úmrtí má ochranný vliv na poškození ledvin.