Hodnocení složení mastných kyselin, antioxidantů a farmakologických aktivit oleje z dýňových semen (Cucurbita Moschata) z vodné enzymatické extrakce část 1

May 08, 2023

Abstraktní:Dýňový olej je vedlejší produkt, bohatý na živiny a bioaktivní složky, které podporují několik zdravotních výhod. Cílem této studie bylo porovnat chemické složení, antioxidační a farmakologické účinky dýňových olejů extrahovaných z Cucurbita moschata Duch. Ex Poir. (PSO1) a Cucurbita moschata (japonská dýně) (PSO2) vodnou enzymatickou extrakcí. V procesu enzymatické extrakce byla použita směs enzymů sestávající z pektinázy, celulázy a proteázy (1:1:1). Složení mastných kyselin v olejích bylo stanoveno pomocí methylesteru mastných kyselin/plynové chromatografie-hmotnostní spektrometrie. Testy antioxidační aktivity byly měřeny pomocí testu stabilního volného radikálu difenylpikrylhydrazyl, radikálový kationt 2,20 -azinobis-(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonát, železité redukční/antioxidační síla a thiokyanát železitý. Inhibice byly zkoumány enzymy zahrnující proces stárnutí pokožky a bělení. Kyselina linolová byla hlavní složkou všech olejů z dýňových semen. Kromě toho bylo zjištěno také významné množství kyseliny olejové, kyseliny palmitové a kyseliny stearové. PSO2 měl nejvyšší antioxidační aktivitu ve srovnání s PSO1 a komerční oleje z dýňových semen (COM1 a COM2). PSO1 i PSO2 vykazovaly vyšší inhibiční účinky na hyaluronidázu, kolagenázu a tyrosinázu než reklamy. Proto by vodná enzymatická extrakce mohla poskytnout oleje z dýňových semen s vyšším obsahem antioxidantů, proti stárnutí a To je výhodné pro další farmakologické studie a může být použito jako funkční potravina pro blahodárné účinky na pokožku.

Podle relevantních studiícistancheje obyčejná bylina, která je známá jako "zázračná bylina, která prodlužuje život". Jeho hlavní složkou jecistanosid, která má různé účinky jako napřantioxidant, protizánětlivé, apodpora imunitních funkcí. Mechanismus mezi cistanche akůže běleníspočívá v antioxidačním účinku cistancheglykosidy. Melanin v lidské kůži je produkován oxidací tyrosinu katalyzovanoutyrosinázaa oxidační reakce vyžaduje účast kyslíku, takže se volné radikály v těle stávají důležitým faktorem ovlivňujícím produkci melaninu. Cistanche obsahuje cistanosid, což je antioxidant a může tak snížit tvorbu volných radikálů v těleinhibující produkci melaninu.

cistanche para que serve

Klikněte na doplněk Cistanche Tubulosa

Další informace:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Klíčová slova:Cucurbita moschata; Japonská dýně; dýňový olej; vodná enzymatická extrakce; mastné kyseliny; antioxidant; proti stárnutí

1. Úvod

Dýně patří do rodu Cucurbita a čeledi Cucurbitaceae, což je běžná a známá rostlina, která se pěstovala v severním Mexiku a rozšířila se do Evropy, západní Ameriky a Asie [1]. Dýně je považována za funkční potravinu, která obsahuje velké množství živin, jako jsou bílkoviny, sacharidy, lipidy, vláknina atd., spolu s fytochemickými sloučeninami, jako jsou tokoferoly, karotenoidy a sitosterol [2]. Bylo zjištěno, že fytonutrienty z různých částí dýně mají farmakologické účinky [2]. Extrakt z dýňové kůry prokázal příznivé účinky na popáleniny na zvířecích modelech [3]. Dýňová dřeň prokázala antioxidační, protizánětlivou a antiangiogenní aktivitu [2] a také aktivitu proti únavě u myší [4]. Kromě toho je dýňová semena dobrým přírodním zdrojem esenciálních mastných kyselin a fytosterolů, které snižují riziko kardiovaskulární mortality [5,6]. Dýňový olej je vedlejším produktem zpracování dýňových semen, která jsou bohatá na různé mastné kyseliny a bioaktivní sloučeniny, jako jsou -karoteny, -tokoferol, vitamín B, lutein, fytosteroly a další minerály [7,8]. Olej má antioxidační, protizánětlivé, antibakteriální a hojivé účinky [1,9]. Navíc má několik zdravotních výhod proti nemocem, jako je například hypertenze, cukrovka a rakovina [8,10].

Byly vyvinuty různé metody pro extrakci oleje ze semen, včetně mechanických metod, jako je lisování za studena [11] a vysokotlaká extrakce [12]. Rovněž byla dokumentována extrakce oleje ze semen pomocí organických rozpouštědel, jako je hexan, ethylacetát, aceton a methanol [13,14]. Extrakce za pomoci enzymu je alternativní metodou pro průmysl rostlinných olejů, protože se jedná o ekologicky šetrnou a bezpečnou technologii. Hlavním mechanismem vodné enzymatické extrakce je hydrolýza a rozbití buněčných stěn rostlinného materiálu, což vede k větší permeabilitě a uvolňování bioaktivních složek, včetně olejové fáze [15]. Různé směsi enzymů použité při této extrakci jsou složeny z pektináz, celuláz, hemiceluláz, arabinózy, -glukanázy a xylanázy [16,17]. Optimalizované podmínky směsi enzymů, například teplota, pH, reakční doba, velikost částic a koncentrace enzymu, také zvýšily aktivitu enzymu [16]. V současné době je tato metoda široce používána k extrakci oleje z mnoha plodů a semen rostlin [18,19]. Některé předchozí studie prokázaly optimalizovaný stav dýňového oleje pro dosažení vysokého výtěžku a účinných farmakologických aktivit [20,21].

V současnosti lidé konzumují dýňový olej v dezertech nebo salátových dresincích a je také oblíbenou přísadou do kosmetiky. Stárnutí kůže je komplexní biologický proces, který je charakterizován vráskami, ztrátou elasticity, ztrátou vlhkosti a hrubou strukturou způsobenou oxidačním stresem, poškozením DNA a pokročilou akumulací konečného produktu glykace [22]. Kyselina hyaluronová, kolagen a elastin, které jsou důležitými složkami kůže, mohou být degradovány enzymy hyaluronidázou, kolagenázou a elastázou, což vede ke stárnutí kůže. Několik rostlinných olejů, jako je olivový olej, slunečnicový olej, hroznový olej a jojobový olej, bylo použito pro kosmetické vlastnosti pokožky k udržení vlhkosti, zlepšení funkce kožní bariéry a prevenci stárnutí pokožky [23]. Kromě toho je pigmentace kůže proměnlivým a nápadným fenotypem u lidí, který zahrnuje melanogenezi a je regulován enzymem tyrosinázou [24]. V současné době byly různé rostlinné extrakty testovány v kosmetice a léčivech ke snížení produkce melaninu, který působí jako bělící činidla [25,26].

cistanche tubulosa supplement

Nedávno C. moschata Duch. Ex Poir je kultivar dýně, který se běžně pěstuje a je populární v Thajsku, ale existuje jen málo studií, které by zahrnovaly jeho funkční hodnoty a farmakologické vlastnosti. Kromě toho je vodná enzymatická extrakce zajímavou metodou pro extrakci oleje z dýňových semen pro dosažení vysokého výtěžku a účinnosti. Proto se tato studie zaměřila na stanovení hlavních složek, antioxidačních a farmakologických aktivit dýňového oleje z C. moschata Duch. Ex Poir. (thajský kultivar) a C. moschata (japonská dýně) metodou vodné enzymatické extrakce.

2. Materiály a metody

2.1. Rostlinné materiály

Čerstvé plody C. moschata Duch. Ex Poir a C. moschata (japonská dýně) byly zakoupeny na místním trhu v Chiang Mai, Thajsko v prosinci 2020. Semena byla shromážděna a všechny vláknité prameny byly odstraněny. Po odstranění povlaku semen byla vyloupaná dýňová semena promyta a vysušena při teplotě místnosti. Semena byla až do dalšího experimentování uchovávána v uzavřeném plastovém sáčku. Kromě toho byly dva komerční vzorky dýňového oleje (COM1 a COM2) zakoupeny ze supermarketu v Chiang Mai, Thajsko. Všechny experimenty byly provedeny během data vhodnosti pro spotřebu komerčních olejů.

2.2. Chemikálie a činidla 

Kolagenáza z Clostridium histolyticum (ChC-EC.3.4.23.3), elastáza z prasečí slinivky (PE-EC 3.4.21.36), N-sukcinyl-Ala-Ala-p-nitroanilid, síran železitý (FeSO4), sodná sůl kyseliny hyaluronové z Streptococcus equi, hyaluronidáza z bovinních testů, pektináza z Aspergillus niger (EC 3.2.1.15, větší nebo rovno 5 jednotkám/mg proteinu, optimální pH=4.{{20}}, optimální teplota=61 ◦C), celuláza z Aspergillus niger (EC 3.2.1.4, větší nebo rovno 0,3 jednotek/mg pevné látky, optimální pH=6,5, optimální teplota {{ 30}}–55 ◦C), proteáza z Aspergillus Saito (EC 3.4.21.112, větší nebo rovno 0,6 jednotek/mg pevné látky, optimální pH=5,1, optimální teplota=57,2 ◦ C), 2,20 -azinobis3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonát (ABTS), 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazylhydrát (DPPH), 2,4,6 tripyridyl-s-triazin (TPTZ), 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-karboxylová kyselina (Trolox), hovězí sérový albumin, kyselina kojová, L -tyrosin, L-DOPA, kyselina linolová, dihydrogenfosforečnan sodný (NaH2PO4·2H2O), hydrogenfosforečnan sodný a tyrosináza z hub byly zakoupeny od Sigma-Aldrrich (St. Louis, MO, USA). Navíc 37 procent kyseliny chlorovodíkové, 95 procent ethanolu, destilovaná (DI) voda, dimethylsulfoxid (DMSO) a methanol byly zakoupeny od RCI Labscan Co., Ltd. (Bangkok, Thajsko). Thiokyanát amonný (NH4SCN) a chlorid železnatý (FeCl2) byly zakoupeny od Loba Chemie Pvt. Ltd. (Bombaj, Indie). Tris (hydroxymethyl) aminomethan byl zakoupen od společnosti Merck (Darmstadt, Německo).

2.3. Vodná enzymatická extrakce

Oleje z dýňových semen od obou C. moschata Duch. Ex Poir a C. moschata (japonská dýně) byly extrahovány metodou vodné enzymatické extrakce za použití parametrů enzymatické hydrolýzy z předchozí studie Kanopky et al. (2016), včetně koncentrace enzymu, poměru enzymu k substrátu, reakční teploty, pH a reakční doby [21]. Tři různé typy enzymů, včetně pektinázy, celulázy a proteázy, byly kombinovány v hmotnostním poměru 1:1:1, aby vznikl koncentrovaný koktejl enzymů. Poté byl výsledný koncentrátový koktejl zředěn v DI vodě za vzniku 2% hmotn./hmotn. vodné enzymatické směsi. K výsledné vodné enzymatické směsi byla poté přidána dýňová semínka bez slupky v hmotnostním poměru 1:1. Směs byla poté jemně rozemleta za použití mixéru Moulinex DB81 při teplotě místnosti, dokud nebyla homogenní. pH výsledné kaše bylo poté upraveno na 4,7 pomocí 0,1 M HC1 a inkubováno při 54 °C po dobu 15 hodin. Poté, co byla kaše ochlazena na teplotu místnosti, byla centrifugována při 11 500 x g po dobu 10 minut. Shromáždila se horní vrstva supernatantů, což byla olejová fáze. Krém vzniklý během extrakčního procesu nebyl emulgován, ale odstraněn odsáváním pomocí mikropipety. Zbytek dýňových semen byl odstraněn filtrací přes filtrační papír Whatman č. 1 ve vakuu [21]. Dýňový olej z C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) a C. moschata (japonská dýně) (PSO2) byly až do dalšího experimentování uchovávány v dobře uzavřených nádobách odolných vůči světlu při pokojové teplotě.

2.4. Stanovení chemického složení dýňového oleje pomocí methylesteru mastných kyselin/plynové chromatografie-hmotnostní spektrometrie (FAME/GC/MS)

Složení mastných kyselin v oleji z dýňových semen bylo stanoveno pomocí metody methylester mastných kyselin/plynová chromatografie-hmotnostní spektrometrie (FAME/GC/MS). FAME je typ esteru mastné kyseliny, který se získává kysele katalyzovanou transesterifikací tuků methanolem. V této studii byly oleje z dýňových semen (PSO1, PSO2, COM1 a COM2) zmýdelněny přidáním 0,5M roztoku NaOH v methanolu při 100 ◦C po dobu 15 minut . Po ochlazení byly vzorky oleje derivatizovány fluoridem boritým (BF3) v methanolovém roztoku při 10}0 ◦C po dobu 1 minuty za vzniku FAME produktů. Po ochlazení a přidání nasyceného NaCl a hexanu byly FAME rozděleny do hexanové fáze a byly shromážděny do lahviček pro injekci. Extrakty FAME byly analyzovány pomocí techniky GC/MS za následujících podmínek: rozměr kapilární kolony (TR-FAME, velikost 60 m × 0,25 mm, velikost částic 0.25-µm), provozní teplotní program 50 ◦C ; držet 2 min s rychlostí 1 10 ◦C/min až do 180 ◦C, držet 15 min; rampa 2 rychlost 4 ◦C/min, konečná teplota 230 ◦C, výdrž 22,50 min. Jako nosný plyn bylo použito helium při průtoku 1,0 ml/min. Vzorky oleje byly vstřikovány v splitless režimu (rozdělovací poměr 1:20 a split fellow 20 ml/min) při 235 ◦C pomocí autosampleru. MS-detektor vybavený elektrosprejovým ionizačním zdrojem (ESI) pracujícím při 70 eV s teplotami iontového zdroje a přenosové linky nastavenými na 200 ◦C, respektive 220 ◦C, zaznamenával hmotnostní spektra v rozsahu m/z 38–600. Analyzované sloučeniny byly přiřazeny porovnáním jejich hmotnostních spekter s publikovanými daty (National Institute of Standards and Technology, 2008). Procentuální složení bylo vypočteno integrací píku v celkových iontových chromatogramech (TIC). Všechna měření byla provedena Výzkumnou a servisní laboratoří, The Halal Science Center, Chulalongkorn University, Bangkok, Thajsko v rámci Halal GMP/HACCP a Halal-QHS/ISO 22000.

cistanches herba

2.5. Stanovení antioxidačních aktivit

2.5.1. 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH) Radical Scavenging Assay

Aktivita vychytávání DPPH radikálů (DPPH•) byla stanovena pomocí metody stanovené Chaiyana et al. (2017) [27]. Stručně řečeno, 20 ul vzorků oleje (PSO1, PSO2, COM1, COM2) a kyseliny linolové rozpuštěné v DMSO byly smíchány se 180 ul 167 uM DPPH ethanolového roztoku v 96-jamkové destičce a poté inkubovány po dobu 30 minut při pokojová teplota ve tmě. Kyselina askorbová (1 mg/ml) byla použita jako pozitivní kontrola. Optická hustota (OD) byla měřena při 520 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Microplate reader EZ Read 2000, Biochrome, Anglie). Experimenty byly provedeny v triplikátech a byly provedeny ve třech nezávislých. Procento inhibice DPPH bylo vypočteno pomocí rovnice (1):

Inhibice DPPH ( procento )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (1)

kde ODA je OD směsi obsahující DI vodu a DPPH•roztok; B je ODB směsi obsahující DI vodu a DMSO; C je ODC směsi obsahující vzorky oleje a roztok DPPH•; a ODD je OD směsi obsahující vzorky oleje a DMSO.

2.5.2. 2,20 -azino-bis-3-ethylbenzthiazolin-6-test na kyselinu sulfonovou (ABTS)

Aktivita vychytávání ABTS kationtových radikálů (ABTS•plus) byla měřena kolorimetrickou metodou podle Chaiyana et al. (2017) a Paradee a kol. (2019) [27,28] s mírnou úpravou. ABTS• plus byl vytvořen přidáním 2 ml 7 mM ABTS s 3 ml 2,45 mM persíranu draselného a inkubován po dobu 16–24 hodin při pokojové teplotě ve tmě. Výsledný ABTS•plus byl následně zředěn ethanolem pro získání OD 0,7 ± 0,1 při 750 nm. Stručně řečeno, 20 ul vzorků oleje (PSO1, PSO2, COM1, COM2) a kyseliny linolové rozpuštěné v DMSO byly smíchány se 180 ul ABTS• plus ethanolického roztoku v 96-jamkové destičce a inkubovány po dobu 5 minut při teplotě místnosti . OD byla měřena při 750 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Microplate reader EZ Read 2000, Biochrome, Anglie). Kyselina askorbová (1 mg/ml) byla použita jako pozitivní kontrola. Standardní křivka byla vytvořena vynesením absorbance při 750 nm proti různým koncentracím Troloxu v rozmezí 2,5–30 µg/ml. Aktivita ABTS• plus scavenging byla vypočtena ze standardní křivky Trolox (R2=0.9922) a vyjádřena jako ekvivalentní antioxidační kapacita Trolox (TEAC). Experimenty byly provedeny v triplikátech a byly provedeny ve třech nezávislých.

2.5.3. Ferric Reduceing Antioxidant Power (FRAP) test

Ferric redukční antioxidační síla (FRAP) každého ze vzorků byla stanovena pomocí testu FRAP, jak je popsáno v předchozí studii Chaiyana et al. (2017), který byl mírně upraven od Saeio et al. (2011) [27,29]. Činidlo FRAP bylo čerstvě vytvořeno smícháním 300 mM acetátového pufru (pH 3,6), 10 mM 2,4,6 tripyridyl-s-triazinu (TPTZ) ve 40 mM HC1 a 20 mM FeCl3 v poměru 10:1:1. V této studii bylo 20 ul vzorků oleje (PSO1, PSO2, COM1, COM2) a kyseliny linolové smícháno se 180 ul činidla FRAP v 96-jamkové destičce a inkubováno po dobu 5 minut při pokojové teplotě ve tmě. OD byla měřena při 595 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Microplate reader EZ Read 2000, Biochrome, Anglie). Kyselina askorbová (1 mg/ml) byla použita jako pozitivní kontrola. Standardní křivka byla vytvořena vynesením absorbance při 595 nm proti různým koncentracím síranu železitého (FeSO4) v rozmezí 0,003–0,5 mM. Hodnota FRAP byla vypočtena ze standardní křivky FeSO4 (R2=0.9965) a vyjádřena jako ekvivalentní kapacita (EC1). Experimenty byly provedeny v triplikátech a byly provedeny ve třech nezávislých.

2.5.4. Zkouška thiokyanatanu železitého (FTC).

Inhibice peroxidace lipidů byla zkoumána metodou thiokyanatanu železitého (FTC). Tato metoda byla provedena podle kroků popsaných Osawa et al. (1981) [30] s mírnou úpravou. Směs se skládala z 50 µL vzorků oleje (PSO1, PSO2, COM1, COM2) a kyseliny linolové, 50 µL 50% kyseliny linolové v DMSO, 50 µL 10% vodného roztoku thiokyanatanu amonného (NH4SCN) a 50 ul 2 mM chloridu železnatého (FeCl2). Poté byla směs inkubována při 37 ± 2 °C po dobu 1 hodiny a OD byla měřena při 500 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Microplate reader EZ Read 2000, Biochrome, Anglie). -Tokoferol (0,025–0,1 mg/ml) byl použit jako pozitivní kontrola. Experimenty byly provedeny v triplikátech a byly provedeny ve třech nezávislých. Aktivita inhibice peroxidace lipidů byla vypočtena pomocí rovnice (2):
Inhibice peroxidace lipidů ( procenta )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA−ODB)} × 100, (2)
kde ODA je OD směsi obsahující kyselinu linolovou, NH4SCN a FeCl2; ODB je OD DMSO; ODC je OD směsi obsahující vzorky oleje, kyselinu linolovou, NH4SCN a FeCl2; a ODD je OD směsi obsahující vzorky oleje a DMSO.

2.6. Stanovení aktivit proti stárnutí

2.6.1. Anti-hyaluronidázová aktivita

Měření antihyaluronidázové aktivity bylo provedeno tak, jak bylo dříve popsáno v Chaiyana et al. (2020) [31]. Nejprve byly 20 ul vzorků oleje (PSO1, PSO2, COM1, COM2) smíchány se 100 ul 15 U/ml roztoku hyaluronidázy a inkubovány při 37 °C po dobu 10 minut. Po inkubaci bylo přidáno 100 ul 0,03 % hmotn./obj. kyseliny hyaluronové, která byla rozpuštěna ve 20 mM fosfátovém pufru (pH 5,35), a poté byla inkubována při 37 °C po dobu 45 minut. Poté byl přidán 1 ml 0,1% hovězího sérového albuminu a inkubováno při teplotě místnosti po dobu 10 minut. OD byla stanovena při 600 nm pomocí multimódového detektoru (Beckman Coulter DTX880, Fullerton, CA, USA). Kyselina oleanolová (0,25 procent w/v) byla použita jako pozitivní kontrola. Experimenty byly provedeny v triplikátech a byly provedeny ve třech nezávislých. Procento inhibice hyaluronidázy bylo vypočteno pomocí rovnice (3):

Inhibice hyaluronidázy ( procento )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (3)
kde ODA je OD směsi obsahující DI vodu, roztok hyaluronidázy a kyselinu hyaluronovou; ODB je OD směsi obsahující DI vodu a fosfátový pufr (pH 5,35); ODC je OD směsi obsahující vzorky oleje, roztok hyaluronidázy a kyselinu hyaluronovou; a ODD je OD směsi obsahující vzorky oleje a fosfátový pufr (pH 5,35).

2.6.2. Anti-kolagenázová aktivita

Měření anti-kolagenázové aktivity bylo provedeno podle postupu stanoveného Chaiyana et al. (2019) a Thring a kol. (2009) s mírnými úpravami [32,33]. Stručně řečeno, 20 ul vzorků oleje (PSO1, PSO2, COM1, COM2) bylo smícháno s 20 ul 0,1 U/ml roztoku kolagenázy z Clostridium histolyticum a inkubováno při 37 °C po dobu 15 minut. Po inkubaci bylo přidáno 80 ul 50 mM tricinového pufru (400 mM NaCl a 10 mM CaCl2, pH 7,5) a 40 ul N-[3-(2-furyl)akryloyl]-Leu-Gly- Byl přidán roztok substrátu Pro-Ala (FALGPA). OD byla okamžitě detekována při 340 nm a poté nepřetržitě měřena po dobu 20 minut pomocí čtečky mikrodestiček (Microplate reader EZ Read 2000, Biochrome, Anglie). Kyselina oleanolová (1 procento w/v) byla použita jako pozitivní kontrola. Experimenty byly provedeny v triplikátech a byly provedeny ve třech nezávislých. Procento inhibice kolagenázy bylo vypočteno pomocí rovnice (4):

Inhibice kolagenázy ( procento )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (4)
kde ODA je OD směsi obsahující vzorky oleje, roztok kolagenázy, tricinový pufr a substrát FALGPA; a ODB je OD směsi obsahující DMSO, roztok kolagenázy, tricinový pufr a substrát FALGPA.

2.6.3. Anti-elastázová aktivita

Měření antielastázové aktivity bylo provedeno podle postupu stanoveného Chaiyanou et al. (2019) a Thring a kol. (2009) s drobnými úpravami [32,33]. Stručně řečeno, 10 ul vzorků oleje (PSO1, PSO2, COM1, COM2) bylo smícháno se 40 ul 0,03 U/ml roztoku elastázy z prasečí slinivky, poté 50 ul 200 mM pufru Tris-HCL (pH 8,0) a 100 ul Byl přidán 0,8 mM substrátový roztok N-sukcinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilidu (AAAPVN). OD byla okamžitě detekována při 410 nm a poté nepřetržitě měřena po dobu 20 minut pomocí čtečky mikrodestiček (Microplate reader EZ Read 2000, Biochrome, Anglie). Kyselina oleanolová (1 procento w/v) byla použita jako pozitivní kontrola. Experimenty byly provedeny v triplikátech a byly provedeny ve třech nezávislých. Procento inhibice elastázy bylo vypočteno pomocí rovnice (5):

Inhibice elastázy ( procento )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (5)
kde ODA je OD směsi obsahující vzorky oleje, roztok elastázy, pufr Tris-HCl a substrát AAAPVN; a ODB je OD směsi obsahující DMSO, roztok elastázy, pufr Tris-HCl a substrát AAAPVN.

2.7. Stanovení anti-tyrosinázových aktivit

Bělící účinek přírodního extraktu byl stanoven měřením antityrosinázové aktivity, které bylo provedeno podle Saeio et al. (2011) a Laosirisathian et al. (2020) [29,34]. L-tyrosin a L-DOPA byly substráty enzymu tyrosinázy v této studii. Stručně řečeno, 10 ul vzorků oleje (PSO1, PSO2, COM1, COM2) bylo smícháno s 30 ul tyrosinázy v 96-jamkové destičce, poté inkubováno při teplotě místnosti po dobu 10 minut. Po inkubaci bylo přidáno 100 ul substrátu, což je 2,5 mM L-tyrosinu nebo L-DOPA, a inkubováno po dobu 30 minut. OD byla stanovena při 450 nm pomocí čtečky mikrodestiček (Microplate reader EZ Read 2000, Biochrome, Anglie). Kyselina kojová (20 ug/ml) byla použita jako pozitivní kontrola. Experimenty byly provedeny v triplikátech a byly provedeny ve třech nezávislých. Procento inhibice tyrosinázy bylo vypočteno pomocí rovnice (6):

Inhibice tyrosinázy ( procento )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (6)
kde ODA je OD směsi obsahující DMSO, tyrosinázový enzym a L-tyrosin; ODB je OD směsi obsahující enzym tyrosinázu a PBS s pH 6,8; ODC je OD směsi obsahující vzorky oleje, tyrosinázový enzym a L-tyrosin; a ODD je OD směsi obsahující vzorky oleje, tyrosinázový enzym a PBS s pH 6,8.

2.8. Statistická analýza

Všechna data byla prokázána jako průměr ± standardní odchylka (SD). Statistická významnost byla analyzována pomocí jednosměrné analýzy rozptylu (ANOVA) následované Tukeyho post-hoc testem pomocí GraphPad Prism (verze 8.0, GraphPad Software) a bylo uvažováno p < 0.05 statisticky významný.

cistanche herb

3. Výsledky a diskuse

3.1. Charakter dýňový olej

V této studii jsme použili vodnou enzymatickou extrakci místo extrakce organickým rozpouštědlem k extrakci dýňového oleje z C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) a C. moschata (PSO2), protože jde o jednoduchý, efektivní a produktivní proces [15,21]. PSO1 byla tmavě hnědá kapalina s nízkou viskozitou, zatímco PSO2 byla zelenohnědá kapalina s nízkou viskozitou. Oba oleje z dýňových semínek měly svou charakteristickou vůni. Výtěžky PS01 a PS02 byly 17,7 % obj./hm. a 15,6 % obj./hm. Kromě oleje se uvádí, že dýňová semena obsahují různé nutriční sloučeniny. Přibližným složením C. moschata byly hlavně uhlohydráty (39,51 procenta), následované tuky (28,49 procenty), bílkovinami (19,23 procenty), vodou (7,67 procenty) a popelem (5,18 procenta) [35]. Ve srovnání s předchozími studiemi využívajícími rozpouštědlo a mechanické lisování však tato studie odhalila nižší výtěžky oleje C. moschata. Ačkoli byla jako nejúčinnější metoda extrakce oleje popsána extrakce rozpouštědlem, při níž se ze semen extrahuje až 98 procent olejů, existují určité problémy týkající se zbytků rozpouštědel a čistoty vyrobeného oleje [36]. Navíc rozpouštědlo použité v extrakčním procesu ovlivnilo výtěžek generovaného oleje. Extrakce hexanem, petroletherem, petrolbenzenem, cyklohexanem, isopropyletherem, ethylacetátem, tetrahydrofuranem, propan{26}}olem a acetonem poskytla 43,4–64,4 procenta [37,38]. Proto byl lis za studena výhodnější než extrakce rozpouštědlem. Lis za studena však může způsobit určité komplikace v počáteční fázi použití šroubového lisu [39]. Vodná enzymatická extrakce by proto mohla být alternativní metodou extrakce, protože poskytla vyšší obsah oleje z dýňových semen (36.0 procent) ve srovnání s olejem lisovaným za studena (33,5 procenta) [21]. Přestože proces vodné enzymatické extrakce byl složitější než lisování za studena, zahrnuje relativně levnější investiční náklady, pokračující snižování nákladů na komerční enzymatické přípravky, potenciál současně izolovat jedinečné a cenné fytochemické složky, jakož i řešení rozšířená touha po zavádění zelených technologií [21]. Předběžné studie popsaly, že několik enzymů, jako jsou celulázy, pektinázy, hemicelulázy a proteázy, bylo často používáno k destrukci struktury buněčné stěny rostlin za účelem zvýšení bioaktivní extrakce z rostlin [16,17]. Proto jsme tuto studii navrhli tak, aby extrahovala olej ze semen pomocí enzymové směsi obsahující pektinázu, celulázu a proteázu (1:1:1), jak dříve popsal Kanopka et al. (2016), kteří optimalizovali podmínky enzymatické hydrolýzy pro získání nejvyššího výtěžku dýňového oleje [21]. Kromě toho tato metoda ukazuje bezpečnější a ekologicky udržitelnější alternativy k extrakci rozpouštědlem, zde nazývané „zelená extrakce“.

3.2. Chemické složení dýňového oleje

Pro analýzu složení mastných kyselin byl dýňový olej s použitím vodné enzymatické extrakce (PS01 a PSO2) porovnán a analyzován společně s komerčním dýňovým olejem (COM1 a COM2) vyrobeným lisováním za studena. Složení mastných kyselin PSO1, PSO2, COM1 a COM2 je uvedeno v tabulce 1. Všechny vzorky dýňového oleje se skládaly z polynenasycených (PUFA), mononenasycených (MUFA) a nasycených mastných kyselin. Kyselina cis-linolová (C18:2) byla hlavní složkou ve všech vzorcích oleje. COM2 obsahoval nejvyšší obsah mastných kyselin (51,74 procenta), následovaný COM1 (48.00 procent), PSO1 (39,{41}}9 procent) a PSO2 (37,63 procenta). Podobně kyselina cis-olejová (C18:1) byla přítomna ve vysokém procentu, zejména v PSO2 (37,45 procenta), následovala COM1 (33,39 procenta), PSO1 (31,22 procenta) a COM2 (28,64 procenta). Nasycené mastné kyseliny, jako je kyselina palmitová (C16:0) a kyselina stearová (C18:0), byly nalezeny pouze v malých množstvích v každém ze vzorků oleje. Byla také pozorována a identifikována stopová množství dalších PUFA, MUFA a nasycených mastných kyselin.

V literatuře je kyselina linolová známá také jako omega-6, esenciální mastná kyselina, kterou si lidské tělo nedokáže syntetizovat, pouze ji přijímá ve stravě. Kyselina linolová je důležitou živinou pro zdravotní funkce u lidí, zahrnuje prekurzor ceramidů, který je hlavní složkou buněčných membrán, vitamin D a řadu hormonů [40,41]. Studie na zvířatech prokázaly, že nedostatek kyseliny linolové může způsobit šupinatou a svědění kůže [23]. Kyselina linolová z rostlinného oleje navíc podporuje hojení kožních ran spolu s prevencí kožních zánětů a akné [23]. Kyselina olejová neboli omega-9 je navíc prospěšná při prevenci rakoviny, autoimunitních a zánětlivých onemocnění [42]. Kyselina olejová totiž významně snížila produkci oxidu dusnatého v místě rány, což vedlo k rychlejšímu uzavření rány [43]. Tyto údaje potvrzují, že dýňový olej, který obohacuje kyselinu linolovou (omega-6) ​​a kyselinu olejovou (omega-9), vykazuje potenciální zdravotní přínosy.

cistanche tubulosa

Podle našich zjištění se dýňový olej (PSO1, PSO2, COM1 a COM2) skládal z mnoha mastných kyselin včetně kyseliny linolové (C18:2), kyseliny olejové (C18:2), kyseliny palmitové (C16:0) a kyselina stearová (C18:0), které jsou běžnými složkami obsaženými v dýňovém oleji [44]. Kyselina linolová (omega-6) a kyselina olejová (omega-9) byly dominantní ve všech vzorcích oleje. Nejvyšší množství kyseliny linolové bylo COM2, následované COM1, PSO1 a PSO2. Také nejvyšší množství kyseliny olejové bylo PSO2, následované COM1, PSO1 a COM2. Tyto výsledky vysvětlují, že vodná enzymatická extrakce dýňového oleje měla mírně nižší obsah kyseliny linolové, ale nikoli kyseliny olejové než extrakce lisováním za studena. Důvodem nižšího obsahu kyseliny linolové v dýňových semenech z vodné enzymatické extrakce než v komerčních vzorcích oleje byl rozdíl v procesu extrakce. Předchozí studie zjistily nekonzistence v množství nenasycených mastných kyselin, zejména kyseliny olejové a kyseliny linolové, v olejích z dýňových semen z různých extrakcí [39]. Obsah kyseliny olejové se pohyboval od 28,19 procenta v dýňovém oleji lisovaném za studena do 30,56 procenta v dýňovém oleji extrahovaném pentanem, zatímco obsah kyseliny linolové se pohyboval od 43.86 procent v dýňovém oleji extrahovaném pentanem až 46,67 procenta v oleji z dýňových semen lisovaného za studena [39]. Kromě různých extrakčních metod ovlivnila obsah kyseliny linolové v rostlinných semenech také rozpouštědla použitá v procesu extrakce a teplota při zrání semen. Předchozí studie zdůraznila, že petrolether poskytuje lněný olej s nízkým obsahem linolové kyseliny (26,2 procenta), zatímco n-hexan poskytuje protichůdné výsledky s obsahem kyseliny linolové 46,5 procenta [45]. Kyselina linolová je navíc nepřímo úměrná teplotě během zrání slunečnicových semen [46].

Kromě toho relativní studie zjistila, že chemické složení z hlediska složení mastných kyselin odhalilo, že kyselina linolová a olejová jsou přítomny v 47,45 procentech a 35 procentech v oleji z dýňových semen (C. maxima) extrahovaném pomocí diethyletheru [47]. . Podle Akina a kol. (2018) se obsah kyseliny linolové pohyboval od 53,19 procenta do 53,27 procenta, následovala kyselina olejová, která byla také přítomna ve vysokém množství v rozmezí od 27,52 procenta do 27,59 procenta v za studena lisovaném oleji ze semen C. pepo L. [48 ]. Vodná enzymatická extrakce v této studii proto také získala nižší výtěžky mastných kyselin než extrakce rozpouštědlem a extrakce lisováním za studena uvedené v předchozích studiích. Při srovnání kultivarů jsme zjistili, že PSO1 (C. moschata Duch. Ex Poir) vykazoval vyšší množství kyseliny linolové než PSO2 (C. moschata, neboli japonská dýně). Na druhou stranu PSO2 představoval vyšší množství kyseliny olejové než PSO1. Důležité je, že rozdíly v profilech mastných kyselin a množství dýňového oleje závisely na původu konkrétních kultivarů, klimatických podmínkách a posklizňovém řízení [49]. Kromě rozdílů v profilech mastných kyselin olejů z dýňových semen získaných různými extrakčními metodami byly oleje z vodné enzymatické technologie uváděny jako bohaté na fytosterol a tokoferol [50]. Proto jsou PSO1 a PSO2, které byly vyrobeny metodou zelené extrakce, navrženy jako alternativní oleje z dýňových semen pro další aplikace.


Další informace: david.deng@wecistanche.com WhatApp:{0}}

Mohlo by se Vám také líbit