Inhibice enteropeptidázy zlepšuje funkci ledvin u potkaního modelu diabetického onemocnění ledvin

edmund.chen@wecistanche.com

ÚVOD

Diabetes mellitus 2. typu je chronická metabolická porucha charakterizovaná hyperglykémií, inzulínovou rezistencí a relativní inzulínovou insuficiencí. Jde o globální klinický problém, který vede k mikrovaskulárním a makrovaskulárním diabetickým komplikacím.1 Diabetik nemoc ledvin(DKD) je hlavní mikrovaskulární diabetická komplikace, která vede k chronickýmnemoc ledvin(CKD) a koncová fázenemoc ledvin. Ve Spojených státech má více než 40 procent pacientů s diabetem 2. typu DKD.2 DKD je definována mikroalbuminurií následovanou proteinurií, což odráží glomerulární poškození způsobené hyperfiltrací vyvolanou hyperglykémií, hypertenzí a poškozením podocytů.3 U proteinurie je nadměrná bílkovina zatížení proximálních tubulárních buněk způsobujeledvinovézánět a intersticiální fibróza, klíčové cesty vselhání ledvinprogrese.4 Blokáda renin-angiotenzinového systému (RAS) buď inhibitory angiotenzin-konvertujícího enzymu, nebo blokátory receptoru pro angiotenzin II (ARB) se klinicky používá jako standardní léčba u pacientů s DKD.5 V poslední době se kotransportér sodíku a glukózy{ Inhibitory {6}} byly zavedeny jako nová třída renoprotektivních léků.6,7 Bez ohledu na tyto lékové intervence však pacienti s postupně se zhoršujícífunkce ledvin zůstávají a ke zlepšení jejich účinků jsou zapotřebí nové léky s novými mechanismy účinkuledvinovépatologický stav.Nadměrný příjem bílkovin ve stravě je považován za urychlení progreseselhání ledvinindukcí glomerulární hyperfiltrace, akumulace uremických toxinů a inhibicí glomerulární autofagie.8 Bylo hlášeno, že zvýšený příjem bílkovin v potravě pozitivně koreluje se zvýšeným rizikem progrese do konečného stadiaselhání ledvinu pacientů s CKD;9 však terapeutický význam snížení příjmu bílkovin ve stravě profunkce ledvinzůstává kontroverzní10 a účinnost farmakologických intervencí při regulaci proteinových trávicích kaskád je nejasná.

CISTANCHE ZLEPŠÍ SELHÁNÍ LEDVIN/RENÁL

Enteropeptidáza je transmembránová serinová proteáza typu II, která je vysoce exprimována na luminální straně enterocytů na kartáčkovém lemu duodena. Převádí neaktivní trypsinogen na aktivní trypsin prostřednictvím štěpení v místě aktivace trypsinogenu a aktivovaný trypsin následně aktivuje další trávicí zymogeny vylučované z pankreatu, včetně chymotrypsinogenu, proelastázy a prokarboxypeptidáz.11–13 Tyto aktivované enzymy regulují rozklad bílkovin na aminokyseliny ( AA). Enteropeptidáza tedy hraje klíčovou roli při trávení bílkovin a absorpci AA. SCO-792 je nový perorálně dostupný inhibitor enteropeptidázy s polovinou maximální inhibiční koncentrace<10 nm="" against="" rat="" and="" human="" enteropeptidase="" in="" vitro.14="" in="" mouse="" models,="" enteropeptidase="" inhibition="" improves="" obesity="" and="" diabetes.15="" how="" ever,="" the="" pharmacological="" effects="" of="" enteropeptidase="" inhibition="" on=""> ledvinakomplikace jsou z velké části neznámé. Vzhledem k tomu, že enteropeptidáza je nejdále před enzymy zapojenými do procesu trávení proteinů a absorpce, může být užitečné prozkoumat terapeutický účinek inhibice enteropeptidázy na stav DKD.V této studii jsme zkoumali účinky inhibitoru enteropeptidázy, SCO-792, naledvina proměnné u potkanů ​​Wistar mastných (WF), zvířecího modelu s DKD.16 Nejprve jsme hodnotili metabolické a renoprotektivní účinky SCO-792 u potkanů ​​WF. Dále byl hodnocen příspěvek změn v absorpci AA k účinnosti SCO-792. Byly provedeny další experimenty k odhalení účinku SCO 792 na aktivitu glomerulární autofagie a ke zkoumání kombinovaného účinku SCO-792 s ARB.

klíčová slova:antidiabetický lék, diabetická nefropatie, vývoj léků; nemoc ledvin; selhání ledvin; ledvinové

MATERIÁLY A METODY

MateriályVšechna činidla byla zakoupena od FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation (Osaka, Japonsko), pokud není uvedeno jinak. SCO-792 byl syntetizován společností Takeda Pharmaceutical Co. Ltd (Tokio, Japonsko). Pioglitazon hydrochlorid byl zakoupen od Tokyo Chemical Industry (Tokio, Japonsko). Irbesartan byl zakoupen od LKT Laboratories, Inc. (St Paul, Minnesota).

ZvířataSamci WF potkanů ​​a odpovídající netypovaní Wistar lean (WL) potkani byli získáni od RABICS Ltd (Kanagawa, Japonsko). Všechna zvířata byla umístěna v místnosti s řízenou teplotou (23 C), vlhkostí (55 procent) a osvětlením (světla byla rozsvícena mezi 7:00 AM a 19:00 PM), s volným přístupem na standardní laboratorní stravu (CE-2; CLEA Japan, Inc., Tokio, Japonsko) a vodu z vodovodu. Postupy péče o zvířata a protokoly pokusů na zvířatech použité v těchto studiích byly schváleny Institutional Animal Care and Use Committee (Shonan Health Innovation Park), který je akreditován Americkou asociací pro akreditaci péče o laboratorní zvířata.

CISTANCHE ZLEPŠÍ FUNKCI LEDVIN/RENÁL

Dvoutýdenní studie s opakovaným dávkováním u WF potkanůSamci potkanů ​​WF, stáří 31 týdnů, s výchozí tělesnou hmotností 693,5 ± 22,5 g a hladinou glykovaného hemoglobinu 7,4 ± 0,4 procenta, byli randomizováni do pěti skupin (vehikulum, 6, 20). a 60 mg/kg SCO-792 a 1 mg/kg hydrochloridu pioglitazonu; n=7), s ohledem na počáteční poměr albuminu ke kreatininu v moči (UACR), glykovaný hemoglobin, plazmatická glukóza, plazmatický inzulín a tělesná hmotnost. WL krysy byly použity jako kontroly (n=5). Krysám bylo perorálně podáváno buď vehikulum (0,5 procenta [w/v] methylcelulózy), SCO-792 nebo pioglitazon hydrochlorid jednou denně po dobu 15 dnů. První den léčby byl označen jako den 0. Tělesná hmotnost a příjem potravy byly monitorovány každý 1 až 4 dny a stolice byla odebírána v den 7. Vzorky krve byly odebrány před randomizací a v den 14 pro hodnocení krevních proměnných. Vzorky moči byly odebrány před randomizací a ve dnech 3, 7 a 13 pro měření proměnných moči. V den 15,ledvinatkáně byly izolovány z anestetizovaných krys a skladovány při -80 °C až do použití.

Měření rychlosti glomerulární filtraceSamci potkanů ​​WF, stáří 30 týdnů, byli randomizováni do dvou skupin (n=7) na základě jejich počáteční glomerulární filtrace (GFR), UACR, glykovaného hemoglobinu a tělesné hmotnosti a poté jim byla podávána perorálně vehikulum (0,5 procenta methylcelulózy) nebo 60 mg/kg SCO-792 po dobu 4 dnů. WL krysy byly použity jako kontroly (n=5). GFR byla měřena pomocí fluorescein isothiokyanát (FITC)-inulin (F3272; Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri). FITC-inulin rozpuštěný ve fyziologickém roztoku byl injikován do krysích ocasních žil v dávce 36 mg/kg a krev byla odebrána 20, 40, 60 a 80 minut po injekci pro měření koncentrace FITC-inulinu. GFR byla vypočtena z FITC-inulinové clearance.17

Hodnocení suplementace AA u WF potkanůSamci potkanů ​​WF, stáří 24 týdnů, byli randomizováni do čtyř skupin (n=5) na základě jejich počáteční UACR, glykovaného hemoglobinu, glukózy v plazmě a tělesné hmotnosti. Potkani dostávali buď práškovou CE{2}} dietu, nebo dietu zahrnující 51,8% nárůst AA (při stejném poměru CE{5}}) po suplementaci 18 L-AA (kyselina asparagová, threonin, serin, glutamová kyselina, glycin, alanin, valin, isoleucin, leucin, tyrosin, fenylalanin, lysin, histidin, arginin, prolin, cystein, methionin a tryptofan). Buď vehikulum (0,5 procent methylcelulózy) nebo 60 mg/kg SCO- 792 bylo perorálně podáváno krysám jednou denně po dobu 11 dnů. K vyhodnocení změn hladin AA v plazmě byly odebrány vzorky krve před a 3, 8 a 13 hodin po podání SCO-792 v den 9. Vzorky moči byly odebrány v den 11 pro měření UACR.

Měření markerů glomerulární autofagieSamci potkanů ​​WF ve věku 29 týdnů byli randomizováni do dvou skupin na základě jejich UACR, hladiny glykovaného hemoglobinu, hladiny glukózy v plazmě a tělesné hmotnosti (n=7) a poté jim bylo orálně podáváno vehikulum (0). 5 procent methylcelulózy) nebo 60 mg/kg SCO-792. Po 3 hodinách,ledvinaz anestetizovaných potkanů ​​byly izolovány tkáně a následně byly glomeruly izolovány prosévací metodou.18 Hladiny cílových proteinů, včetně LC3A/B, p62, p-S6, S6, Wilms tumor 1 (WT1) a -aktinu, v glomeruly byly detekovány Western blotem.

CISTANCHE ZLEPŠÍ INFEKCI LEDVIN/RENÁL

Čtyřtýdenní kombinovaná léčba SCO-792 s irbesartanem u WF potkanůSamci potkanů ​​WF, stáří 32 týdnů, s výchozí tělesnou hmotností 675,7 ± 31,2 g a glykovaným hemoglobinem 7.0 procent ± 0,3 procenta byli randomizováni do šesti skupin (vehikulum, {{ 9}}.02 procenta SCO-792, 0.{{20}}5 procent SCO-792, 15 mg/kg irbesartan, { {29}}.02 procenta SCO-792 plus 15 mg/kg irbesartanu a 0,05 procenta SCO-792 plus 15 mg/kg irbesartanu; n=7) na základě jejich UACR, glykovaný hemoglobin, plazmatická glukóza a tělesná hmotnost. WL krysy byly použity jako normální kontroly (n=5). Potkani měli volný přístup k práškové stravě CE-2 obsahující každou sloučeninu (hmotnostní: 0,02 a 0,05 procenta SCO-792) nebo samotné práškové dietě CE-2. Jednou denně bylo orálně podáváno buď vehikulum (0,5 procenta methylcelulózy) nebo irbesartan (15 mg/kg). Vzorky krve byly odebírány v den 28 pro stanovení krevních proměnných. Vzorky moči byly odebrány před randomizací a ve dnech 7 a 30 pro stanovení proměnných moči.ledvinytkáně byly izolovány z anestetizovaných krys v den 33 a skladovány při -80 °C až do použití.

Statistické analýzyStatistická významnost byla nejprve analyzována pomocí Bartlettova testu homogenity rozptylů, následoval Williamsův test (P > {{0}}.05) a Shirley-Williamsův test (P Menší nebo rovno 0.{{10}}5) pro studie závislé na dávce Dunnettův test (P > 0.05) a Steel test (P Menší než nebo rovno 0.05) pro vícenásobná srovnání versus kontrola, nebo Tukeyho test (P > 0,05) pro všechna párová srovnání. Alternativně byla statistická významnost analyzována pomocí F testu na homogenitu rozptylů, po kterém následoval Studentův t-test (P > 0,2) nebo Aspin-Welchův test (P menší nebo rovno 0,2). Williamsovy a Shirley-Williamovy testy byly provedeny s použitím jednostranné hladiny významnosti 2,5 procenta (0,025). Další testy byly provedeny s použitím dvoustranných hladin významnosti 1 procento (0,01) a 5 procent (0,05). Aby bylo možné vyhodnotit, zda kombinovaná léčba pomocí SCO-792 a irbesartanu měla významné aditivní nebo synergické účinky, byla provedena dvoucestná ANOVA, která poskytla hlavní účinky a interakční účinek SCO-792 a irbesartanu. Všechna data jsou uvedena jako průměr ± SD. Metody pro kvantifikaci obsahu bílkovin ve stolici, měření proměnných v krvi a moči, analýzu genové exprese, izolaci glomerulu, provádění Western blottingu a měřeníledvinovéobsah kolagenu je popsán v příloze S1.

VÝSLEDEK

SCO-792 zlepšilo metabolické proměnné u WF potkanůK vyhodnocení anti-DKD potenciálu inhibice enteropeptidázy byl SCO-792 perorálně podáván WF potkanům jednou denně po dobu 2 týdnů. Krysy WF byly vytvořeny křížením potkanů ​​Wistar Kyoto a mastných potkanů ​​Zucker19 a jsou ideální pro použití jako model DKD kvůli jejich reprezentativním metabolickým fenotypům (hyperglykémie, inzulínová rezistence s těžkou obezitou, progresivní proteinurie od věku 12 týdnů16). Hladiny fekálních proteinů, které jsou farmakodynamickým markerem sníženého trávení proteinu po inhibici enteropeptidázy ve střevě, byly zvýšeny v závislosti na dávce u potkanů ​​léčených SCO-792- (obrázek 1A). Během studie bylo pozorováno snížení příjmu potravy a kumulativní příjem potravy byl významně snížen SCO-792 (obrázek 1B). Tělesná hmotnost byla konzistentně nižší u potkanů ​​léčených SCO{11}}(obrázek 1C). Diabetické proměnné, jako je plazmatická glukóza, glykovaný hemoglobin, plazmatický inzulin a plazmatické hladiny glukagonu, byly sníženy po 2-týdenním opakovaném podávání SCO-792 (obrázek 1D–G). Hladiny lipidů v plazmě byly také sníženy SCO-792 (obrázek 1H,I).

SCO-792 zlepšilo renální proměnné u WF potkanůKromě zlepšení diabetických proměnných SCO-792 rychle snížilo UACR a tento účinek byl zachován během opakovaného podávání (obrázek 2A). Naproti tomu UACR zůstal nezměněn u potkanů, kterým byl podáván pioglitazon, agonista receptoru aktivovaného peroxisomovým proliferátorem, a to navzdory silnému snížení hladiny glukózy v plazmě

ekvivalentní SCO-792 (obrázky 1D, 2A). Na konci studieledvinovéHladiny mRNA Col1a1, markeru fibrózy,20 a Ccl2, markeru zánětu,21 byly sníženy u potkanů, kterým byl podáván SCO-792 (obrázek 2B). Močovéledvinamolekula poranění-1 (KIM-1), která je biomarkeremledvinatubulární poranění22 bylo také sníženo u potkanů ​​léčených SCO-792-(obrázek 2C). Měření GFR pomocí FITC-inulinu odhalilo stav glomerulární hyperfiltrace u WF potkanů ​​ve srovnání s WL potkany. Po 4-denním podávání SCO-792 se však glomerulární přetížení u WF potkanů ​​zcela normalizovalo (obrázek 2D).

AA suplementace stravy zvrátila snížení UACR pomocí SCO-792 u WF potkanůPozorované zvýšení hladiny fekálního proteinu po léčbě SCO-792 potvrdilo, že inhibice enteropeptidázy zabránila trávení proteinu (obrázek 1A). SCO-792 tedy zeslabil tvorbu AA z proteinů v lumen střeva. Ke zkoumání role příjmu AA v renoprotektivních účincích SCO-792 byly krysy, kterým bylo podáváno vehikulum nebo SCO-792, umístěny s volným přístupem k normální potravě nebo ke stravě doplněné AA. Jak se očekávalo, u normálních potkanů ​​krmených potravou SCO- 792 snížil celkovou hladinu AA v plazmě (obrázek 3A,C). Suplementace AA do stravy však negovala změnu vyvolanou enteropeptidázou (obrázek 3B,C). Zatímco plazmatické hladiny aminokyselin s rozvětveným řetězcem (BCAA), jako je valin, leucin a isoleucin, byly zvláště sníženy SCO-792 u normálních potkanů ​​krmených potravou, opět byly tyto změny negovány suplementací AA (obrázek 3D–F ). V souladu s pozorovanými změnami hladin AA v plazmě bylo snížení UACR vyvolané SCO-792- do značné míry zeslabeno u potkanů ​​krmených potravou s přídavkem AA (obrázek 3G).

SCO-792 aktivoval autofagickou signalizaci v glomerulu WF potkanůAminokyseliny působí jako klíčový regulátor intracelulární proteinové homeostázy, čímž modulují rovnováhu mezi anabolickými (syntéza proteinů) a katabolickými (autofagie) procesy.23 Toho je dosaženo prostřednictvím AA snímacích proteinů, jako je savčí cíl rapamycinu (mTOR), a obecná kontrola nederepresivní kinázy 2. Aby bylo možné zjistit, zda SCO-792 ovlivňuje autofagickou dráhu v glomerulu, byla exprese proteinů LC3A/BI a LC3A/B-II v glomerulu potkanů ​​WF

měřeno metodou Western blotting. LC3A/B je autofagozomový marker, zatímco LC3A/BI je konvertován na LC3A/B-II C-terminální lipidací během autofagie. Proto se jako indikátor autofagie používá poměr proteinové exprese LC3A/B-II k LC3A/BI.24 Zde analýza Western blotting odhalila, že SCO-792 významně zvýšil poměr LC3A/B-II k LC3A/BI v glomerulu WF potkanů ​​(obrázek 4A,B). Naproti tomu hladina proteinu p62, alternativního autofagického markeru, který dodává autofagické substráty do autofagozomů a je degradována autofagií,25 byla pomocí SCO-792 snížena (obrázek 4A,C). Navíc SCO-792 významně snížila hladinu fosforylace proteinu S6; to indikovalo deaktivaci signalizace mTOR (obrázek 4A,D). Naproti tomu hladiny exprese WT1, podocytového markeru, a -aktinu, kontroly nanášení pro Western blot, byly mezi skupinami nezměněny (obrázek 4A,E,F).

Kombinace SCO-792 s irbesartanem aditivně snížila UACR u WF potkanůProtože inhibitory RAS jsou široce používány jako standardní léčba pacientů s DKD, je u nových léků proti DKD vyžadován doplňkový účinek k inhibitorům RAS. Chcete-li vyhodnotit kombinovaný účinek SCO-792 s ARB, SCO-792 (0.02 procenta a 0.05 procent v dietě) a irbesartan (15 mg/kg perorální dávka jednou denně) samostatně nebo v kombinaci byly podávány WF potkanům po dobu 4 týdnů. Bylo zajímavé vyhodnotit účinnost trvalé inhibice enteropeptidázy na proměnné onemocnění; proto bylo v této studii provedeno podávání SCO{12}} s příměsí stravy. Vypočítané dávky SCO-792 (mg/kg/d) pro každou skupinu byly 6,81 pro skupinu 0.02procentní SCO-792, 13,10 pro 0,05procentní SCO -792, 6,59 pro 0,02% SCO-792 plus irbesartan a 11,44 pro 0,05% SCO-792 plus irbesartan. Zatímco samotný SCO-792 a samotný irbesartan snížily UACR, kombinace SCO-792 a irbesartanu dále snížila UACR. Významný aditivní účinek na snížení UACR byl pozorován po podání SCO- 792 v kombinaci s irbesartanem (obrázek 5A,B). V porovnání,irbesartan neovlivnil antidiabetický nebo antiobezitní účinek dosažený SCO-792 (obrázek 5C-F). SCO-792 výrazně snížiloledvinovéobsah kolagenu (obrázek 5G).

DISKUSEV této studii jsme hodnotili účinky nového inhibitoru enteropeptidázy, SCO-792, na chorobný stav na preklinickém potkaním modelu DKD. Orální podávání SCO-792 potkanům WF okamžitě zmírnilo albuminurii již po 3 dnech léčby a tento účinek byl zachován po celou dobu podávání léku. Navíc tento účinek byl pravděpodobně nezávislý na kontrole glukózy. Kromě toho pokles markerů fibrózy, zánětu a tubulárního poškozeníledvinabyla pozorována u potkanů ​​léčených SCO-792-. SCO-792 dávkování vyvolalo dalšíledvinaochranné účinky, včetně zmírnění glomerulární hyperfiltrace a aktivace autofagie v glomerulu. SCO-792-indukované snížení UACR bylo do značné míry zmírněno doplňováním stravy AA. A konečně, kombinace SCO-792 a irbesartanu účinně snížila UACR Aminokyseliny jsou známým induktorem hyperfiltrace.26 U lidí jedno jídlo bohaté na bílkoviny nebo infuze AA přechodně zvýší GFR.27,28 Stav hyperfiltrace způsobený bohaté na bílkovinyPředpokládá se, že dieta urychluje progresivní poklesfunkce ledvinu pacientů s CKD.29 V této studii WF potkani vykazovali zvýšenou GFR, což ukazuje na glomerulární hyperfiltraci, která pravděpodobně zvyšuje UACR. Zatímco léčba SCO-792 snížila hladiny AA v plazmě a snížila UACR u potkanů ​​WF, tento účinek byl negován po doplnění AA do stravy. Kromě toho léčba SCO-792 normalizovala GFR u WF potkanů. Celkově vzato, SCO-792-indukovaný pokles cirkulujících AA může hrát roli ve zlepšení glomerulární hyperfiltrace a snížení UACR u WF potkanů. Kromě toho SCO-792 zlepšila markery fibrózy, zánětu a tubulárního poraněníledvin.Může vyvolat nadbytek bílkovin v glomerulárním filtrátuledvinovézánětu a intersticiální fibrózy v proximálních tubulárních buňkách.4 Zmírnění albuminurie by proto mohlo chránit glomerulární aledvinovétubulárních buněk u potkanů ​​léčených SCO-792-z progreseledvinovépoškození.

CISTANCHE ZLEPŠÍ BOLESTI LEDVIN/RENÁL

Změny poměru LC3AB-II k LC3AB-I a hladiny proteinu p62 prokázaly SCO-792-indukovanou autofagickou aktivaci v glomerulární frakciledvinatkání u WF potkanů. Je zajímavé, že SCO-792 akutně snížila plazmatické hladiny BCAA u WF potkanů. BCAA, zejména leucin, jsou klíčovými regulátory autofagické dráhy se signalizací mTOR a inhibují tvorbu autofagozomů.23,30 Ve skutečnosti byla fosforylace proteinu S6, který je následnou signální molekulou mTOR, silně inhibována SCO{{ 4}}, což ukazuje, že snížené hladiny BCAA v plazmě inhibicí enteropeptidázy se mohou podílet na aktivaci glomerulární autofagie prostřednictvím inaktivace dráhy mTOR. Autofagie je obecně reakcí na nedostatek živin, ale podílí se také na různých fyziologických procesech a rozvoji onemocnění, včetněonemocnění ledvin.31 V glomerulu je autofagie nezbytná k ochraně podocytů před stresem endoplazmatického retikula a k udržení funkce podocytů, a proto je v podocytech vysoká bazální úroveň autofagické aktivity.32 Porucha autofagie specifické pro podocyty vede k proteinurii, což naznačuje klíčovou roli autofagie v mechanismu glomerulární filtrace.32,33 Aktivace glomerulární autofagie tedy může být jedním z mechanismů souvisejících s AA, kterým SCO-792 zlepšil albuminurii u WF potkanů.

Uvádí se, že chronická hyperglykémie je zapojena do dráhy geneze DKD indukcí aktivace polyolové dráhy, vytvářením pokročilých konečných produktů glykace, oxidativním stresem a zánětem.34 V této studii pioglitazon, který zlepšil hyperglykémii, nedokázal snížit UACR u WF potkanů. To naznačuje, že zlepšení hyperglykémie není hlavním faktorem rychlého snížení UACR o SCO-792 v tomto modelu. RAS je klíčovou cestou pro progresiselhání ledvina příznivý účinek jeho inhibice pomocí ARB u pacientů s DKD je dobře prokázán.5 Kombinovaná studie odhalila, že doba do nástupu snížení UACR se u SCO-792 a irbesartanu liší a že tyto sloučeniny působí aditivně ke zlepšení UACR u WF potkanů. Tyto výsledky naznačují, že mechanismus, který je základem antialbuminurického účinku SCO-792, je nezávislý na RAS. WF potkani jsou normotenzní a SCO-792 neměl žádný vliv na krevní tlak u WF potkanů; pozorovaný účinek SCO-792 tedy nemusí záviset na kontrole krevního tlaku (obrázek S1). Proto může být SCO-792 použit jako přídavná terapie k inhibitorům RAS v jakémkoli budoucím klinickém prostředí. Kromě toho se předpokládá, že trvalá inhibice enteropeptidázy je účinnější při léčbě proměnných onemocnění, protože podávání SCO-792 s příměsí stravy prokázalo silnější terapeutickou účinnost při nižší denní dávce než perorální dávkování jednou denně

Jak bylo uvedeno výše, hladiny BCAA v plazmě byly zvláště sníženy mezi AA pomocí SCO-792 u WF potkanů. Vztahy mezi metabolickými onemocněními a BCAA byly značně korelovány s inzulinovou rezistencí.35 Požití proteinů navíc vyvolává svalovou inzulinovou rezistenci u lidí.36 Proto snížení BCAA v plazmě způsobené podáváním SCO-792 může zlepšit inzulinovou rezistenci a zmírnit diabetický fenotyp u WF potkanů. To je v souladu s výsledky předchozí studie na diabetických myších, které naznačují, že SCO-792 zvýšilo citlivost na inzulín (hlavně ve svalu) v hyperinzulinémicko-euglykemické svorkové studii.15 Navíc snížené hladiny AA pomocí SCO{{7} } se může podílet na snížení plazmatického glukagonu prostřednictvím cyklu vzájemné zpětné vazby mezi glukagonem a AA.37 Zajímavé je, že silné zlepšení diabetických proměnných bylo pozorováno i při dávce, která měla jen malý vliv na tělesnou hmotnost v 2-týdenním opakovaném studie dávkování SCO{10}}. To naznačuje, že na antidiabetickém účinku SCO-792 se kromě účinku závislého na redukci tělesné hmotnosti pravděpodobně podílejí i mechanismy závislé na AA, včetně zlepšení inzulinové rezistence a snížení hladiny glukagonu v plazmě.

Hlavním omezením této studie je, že nebyl hodnocen účinek SCO-792 na pozdní fázi DKD. WF potkani vykazovali albuminurii se zvýšenou GFR, chorobný stav představující relativně ranou fázi DKD. K vyřešení tohoto omezení by byly pro hodnocení dlouhodobéholedvinovévýsledek po léčbě SCO-792. V poslední době střeva-ledvinaosa se stala jedním z témat zájmu a asociace střevní mikroflóry a jejích metabolitů sonemocnění ledvin38 Vzhledem k fyziologické úloze enteropeptidázy může její inhibice modulovat složení střevní mikroflóry. Proto jsou také potřeba další analýzy zaměřené na SCO-792-indukované změny v mikrobiotě.

Závěrem lze říci, že toto je první studie, která prokazuje, že inhibitor enteropeptidázy SCO-792 účinně zlepšujeledvinaproměnné v potkaních modelech DKD. Inhibice rozpadu proteinů ve střevě, následovaná sníženou absorpcí AA, je pravděpodobně hlavní cestou pro renoprotektivní účinky SCO-792, což vede k úlevě od glomerulární hyperfiltrace a aktivaci autofagie v glomerulu. Celkově výsledky naznačují, že SCO-792 má potenciál jako nová terapeutická možnost pro pacienty s DKD.