Účinky echinosidu na monoaminové neurotransmitery v extracelulární tekutině striata u potkanů ​​s cerebrální ischemií

Wei Lili1, Chen Hong1, Jiang Yong2, Tu Pengfei 2, Zhong Ming1, Du Juan1, Liu Fei1, Liu Chunyang1, Wang Lei1

(1. Farmaceutická fakulta, Univerzita Shihezi, Klíčová laboratoř speciální rostlinné medicíny v Xinjiang, Ministerstvo školství, Shihezi, Xinjiang 832002;2. Moderní výzkumné centrum tradiční čínské medicíny, Pekingská univerzita, Peking 100083)

Čínské knižní klasifikační číslo: R-332; R284．1; R322．81; R338．14; R743.310.531

ID dokumentu: A Article No.: 1001-1978 (2011) 02-0174-04

Abstraktní: Cíl Studovat účinekEchinosid(ECH) na monoaminové neurotransmitery v extracelulární tekutině striata u potkanů ​​s fokální cerebrální ischemií a prozkoumat možný mechanismus neuroprotektivního účinku ECH na mozek. Metody SD potkani byli náhodně rozděleni do kontrolní skupiny, modelové skupiny, skupiny s vysokou a nízkou dávkou ECH a skupiny s ligustrazinem (CXQ). Krysám v každé skupině byly podávány odpovídající léky nebo fyziologický roztok intraperitoneálně jednou denně po dobu 7 dnů. Třetí den podávání bylo pouzdro sondy zapuštěno do striata v mozku. Jednu hodinu po posledním podání byl vytvořen potkaní model fokální mozkové ischemie (MCAO). Po zhotovení modelu byla ihned provedena mikrodialýza. Dialyzát byl vstříknut do vysokoúčinného kapalinového chromatografu-elektrochemického detektoru (HPLC-ECD) ke stanovení obsahu norepinefrinu (NE), dopaminu (DA), 5-hydroxytryptaminu (5-HT), 3 ,4-kyselina dihydroxyfenyloctová (DOPAC), kyselina homovanilová (HVA), kyselina 5-hydroxyindoloctová (HIAA) v extracelulární tekutině striata každé skupiny. Výsledky Ve srovnání s kontrolní skupinou se hladiny NE, DA a 5-HT v modelové skupině zvýšily a zvýšily se také kyselé metabolity DOPAC, HVA a HIAA. Ve srovnání s modelovou skupinou se snížil obsah šesti látek ve skupinách s vysokou a nízkou dávkou ECH (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) a CXQ. Závěr Neuroprotektivní účinek ECH může souviset se zvýšením monoaminových neurotransmiterů po mozkové ischemii.

Cistanche prášek

Klíčová slova: Echinosid; cerebrální ischemie; striatum; HPLC-ECD; Monoaminové neurotransmitery a metabolity

Echinaceosid(ECH) je účinnou složkou fenylethanoidových glykosidů izolovaných a přečištěnýchCistanche deserticola, speciální závod v Sin-ťiangu. Studie ukázaly, že ECH má neuroprotektivní účinky, jako je antioxidace [1-2], ochrana nervů [3-4], anti-aging [5] a zlepšení učení a paměti [6-8]. Výsledky Chen Hong et al. potvrdil, že ECH má ochranný účinek na DA neurony u Parkinsonovy choroby [9]. Monoaminové neurotransmitery jsou druhem důležitých látek, které regulují fyziologické aktivity těla.Obsah ve tkáni může odrážet procesy biosyntézy, uvolňování, vychytávání a inaktivace neurotransmiterů [10-11]. V současné době neexistuje žádná relevantní zpráva o účinku ECH na přenašeče monoaminů v mozku potkanů ​​s cerebrální ischemií. V této studii byl pomocí technologie mozkové mikrodialýzy zkoumán vliv ECH na obsah monoaminových neurotransmiterů v extracelulární tekutině striata potkanů ​​s mozkovou ischemií a předběžně byl zkoumán možný mechanismus ECH na neuroprotekci mozku.

Prášek z extraktu cistanche

1.Materiál

1.1 Pokusná zvířata

SD potkani, ♂, tělesná hmotnost 250~300 g (zakoupeno od Xinjiang Experimental Animal Center, licenční číslo: 2009-0053).

1.2 Léky a činidla

ECH je darován profesorem Tu Pengfei, School of Pharmacy, Peking University (čistota vyšší než 95 procent); Norepinefrin (NE), dopamin (DA), 5-hydroxytryptamin (5-HT), 3,4-kyselina dihydroxyfenyloctová (DOPAC), kyselina homovanilová (HVA)

5-kyselina hydroxyindoloctová (HIAA) je Sigma; Tetramethylpyrazin hydrochlorid pro injekci (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Zinkofosfátový cement (produkt Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., složený z kapaliny a prášku, smíchaný s časem); 1-alkylsulfát sodný (DIKMA); Hydrát kyseliny citronové (Tianjin Jinke Fine Chemical Research Institute); citrát trisodný (Acros); kyselina disodná ethylendiamintetraoctová (JTTakerChemicalco); methanol (DIKMA); acetonitril (DIKMA); Cerebrální mikrodialyzační perfuzní tekutina je injekce sloučeniny chloridu sodného (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Veškerá použitá voda je přepařená voda.

1.3 Nástroj

American BAS4100 krysí mozkový stereotaktický aparát; sonda CMA/12 a pouzdro sondy; CMA/120 zvířecí zařízení při vědomí; CMA/402 mikročerpadlo; CMA/150 nízkoteplotní automatický sběrač vzorků. infuzní pumpa Esa 5600A; infuzní pumpa Esa 5600A; Automatické zařízení pro vstřikování vzorků Esa 542; elektrochemický detektor Esa CoulArray; Pracovní elektroda ze skelného uhlíku a referenční elektroda Ag/AgCl; kolona C18 (DIKMA, ODS5 um, 150 mm x 4,6 mm); chromatografická pracovní stanice CoulArraywin (společnost Esa); Vírový mixér (typ QL{14}}); Stolní tester kyselosti (HANNA-211); Stolní vysokorychlostní odstředivka (typ XYJ-2).

2.Metoda

Cistanche doplněk blízko mě – Improkázat paměť

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Improve Memory

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.1 Seskupování a podávání zvířat

Třicet krys bylo náhodně rozděleno do pěti skupin: ① Kontrolní skupina: 1 ml · kg-1 · d-1 normálního fyziologického roztoku; ② Modelová skupina: normální fyziologický roztok 1ml · kg-1 · d-1; ③ Model plus ligustrazin (CXQ) 30 mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Model plus skupiny s vysokou a nízkou dávkou ECH (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d{13}}; Všem zvířatům v každé skupině byla podávána intraperitoneální injekce po dobu 7 dnů.

2.2 Metoda modelování a mikrodialýza

Každá krysa byla pohřbena kanylou třetí den podávání: krysy byly anestetizovány 10 procentem chloralhydrátu (3,5 ml · kg-1), upevněným na BAS4100 mozkový stereotaktický aparát a sondový katétr byl implantován do levého striata (souřadnice AP: plus 0,2 mm; ML: - 3,0 mm; DV: - 3,5 mm) týkající se „Stereotaktické mapy krysího mozku“ George Paxinose ". Po posledním podání byly krysy anestetizovány o 1 hodinu později a krysám byl vytvořen model fokální mozkové ischemie (model MCAO) za použití vylepšené metody Longa sutury od Yang Zanzhang [12]. Vlasec v kontrolní skupině byl zaveden pouze 10 mm a ostatní kroky byly stejné jako v operační skupině. Po modelaci vložte mikrodialyzační sondu do stavu vědomého a volného pohybu a použijte Ringerův roztok k μ Mozkový mikrodialyzát byl odebrán při 4 stupních a zkumavka dialyzátu byla odebrána po 20 minutách. Poté, co je každá zkumavka s dialyzátem odebrána, musí být okamžitě uložena v chladničce - 20 stupňů a po dialýze přenesena do chladničky - 70 stupňů. Rychlost obnovy sondy byla měřena před použitím, což bylo použito pro konverzi koncentrace monoaminových neurotransmiterů v dialyzátu.

co dělá cistanche – zlepšuje paměť

2.3 Analýza HPLC-ECD

Konfigurace mobilní fáze: mobilní fáze obsahuje 829 ml 0,15mol · L-1 pufru kyselina citrónová-citrát sodný na litr; 0,1mol · L-1 disodná sůl EDTA 1ml; Methanol 150ml; {{10}}alkylsulfát sodný 0,283 g. Nastavte průtok mobilní fáze na 0,7ml · min-1 a teplotu v peci kolony na 28 stupňů. Pracovní napětí elektrochemického detektoru je 200mV, 400mV a 600mV se 2, 3 a 4 kanály; Zisk je 2nA. Vstřikovací objem je 25 μl. Standardní křivka je nakreslena směsným standardním roztokem s gradientem 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 mg · L-1.

2.4 Statistické zpracování

Experimentální data jsou vyjádřena v poli x ± s a data opakovaných měření jsou analyzována pomocí statistického softwaru SPSS13.0.

Obr. 1-6 znázorňuje změny hladin NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA a 5-HT v extracelulární tekutině krysího striata. Z obrázku je vidět, že po mozkové ischemii mají monoaminové neurotransmitery v extracelulární tekutině striata metabolickou poruchu a obsah každého neurotransmiteru se zvýšil. V určitém rozmezí je nárůst patrnější s prodloužením doby ischemie. Po 90 minutách ischemie byla koncentrace DA a NE v extracelulární tekutině striata více než trojnásobkem úrovně kontrolní skupiny. Hladiny NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA a 5-HT v kontrolní skupině poklesly z vysoké na nízkou, což může souviset s dočasnou ischémií levého mozku po podvázání levé společné karotidy a poškození způsobené vložením sondy. Z křivky změny mohou ECH a CXQ snížit maximální koncentraci DA, DOPAC, HIAA, HVA a 5-HT po mozkové ischemii a CXQ a ECH ve vysokých dávkách jsou patrnější. Posun křivky časového průběhu každého neurotransmiteru směrem dolů ukazuje, že ECH může inhibovat nárůst neurotransmiterů a jejich metabolitů v mozku krys s cerebrální ischemií.

                                                                           Obr. 2 Vliv echinosidu na extracelulární hladinu DA ve striatu krys

Obr3 ÚčinekEchinosidna extracelulární úrovni DOPAC ve striatu krys ObrEchinosidjedna extracelulární hladina HIVV ve striatu krys

Obr.5 ÚčinekEchinosidna extracelulární úrovni HVA ve striatu krys Obr. 6 ÚčinekEchinosidna extracelulární úrovni 5-HT instriatum krys

4.Diskuse

Superman bylinky cistanche – Improv paměti

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Mechanismus poranění mozku způsobeného mozkovou ischemií je komplexní. V případě cerebrální ischemie jsou monoaminové neurotransmitery v mozku narušeny a obsah NE, DA a 5-HT je významně snížen. Čím závažnější je cerebrální ischemie, tím nižší je obsah NE, DA a 5-HT v mozkové tkáni [13]. Metoda intracerebrální mikrodialýzy prokázala, že obsah monoaminových neurotransmiterů se v extracelulární tekutině při mozkové ischemii zvýšil, přetrvával po celé ischemické období a dále se zvyšoval s prodlužováním ischemického času. Experimentální výsledky byly v souladu se zprávou [14].Echinosidje účinnou složkou fenylethanoidových glykosidů izolovaných a čištěných z Cistanche deserticola, speciální rostliny v Xinjiangu. Má mnoho neuroprotektivních účinků, jako je anti-aging, zlepšení učení a paměti a anti-neuronální apoptóza. V této studii byla použita domácí pokročilá mozková mikrodialýza kombinovaná s technologií detekce HPLC-ECD k předběžnému prozkoumání účinkuEchinosidna monoaminové neurotransmitery a jejich metabolity v extracelulární tekutině striata experimentálních potkanů ​​s cerebrální ischemií. Výsledky ukázaly, že ECH může snížit nárůst monoaminových neurotransmiterů v extracelulární tekutině striata způsobený mozkovou ischemií a má lepší vliv na zlepšení poškození mozkové ischemické tkáně.

odkaz:

［1］ Pellati F, Benvenuti S, Magro L a spol. Analýza fenolických sloučenin a aktivity vychytávání radikálů Echinacea spp［J］］. JPharm Biomed Anal, 2004,35(2): 289．

［2］ Kuang R, Sun YG, Deng TL, Zheng XX. Ochranný účinek a mechanismy echinakosidu na H2O2 -poškozené buňky PC12［J］［. Chin Pharmacol Bull, 2009, 25( 4): 515 – 8.

［3］ Zhao X, Pu XP, Geng XC. Efekty echinakosidu na expresi proteinů ze substanti anigra a striatální tkáně u myšího MPTP modelu Parkinsonovy choroby pomocí analýzy rozměrovou elektroforézou［J］］. Chin Pharmacol Bull, 2008,24(1): 28 – 32.

［4］ Koo KA, Sung SH, Park JH a další. In vitro neuroprotektivní aktivity fenylethanoidových glykosidů z callicarpa dichotoma［J］］. Planta Med, 2005,25(4): 356．

［5］ Li Y, Song YY, Zhong HQ. Vliv echinakosidu na imunitní funkci a relativní obsah mitochondriální DNA u stárnoucích myší ［J］］. Chin Pharmacol Bull, 2010, 26( 6): 810 – 3.

［6］ GLNE, Lei L, Tu PF a další. Studie molekulárního mechanismu echi nakosidu proti stárnutí［J］］. Acta Biophysica Sitica, 2004,20 (3): 184.

［7］ Gao C, Wang CS, Wu GZ a další. Účinek glykosidů Cistanche na poruchy učení a paměti u potkanů ​​s vaskulární demencí［J］］. Chin Tradit Herb Drugs, 2005,36( 12): 1852．

［8］ Tian F, Zhang K, Kang AJ a spol. Účinek a mechanismus echinakosidu na schopnost učení a paměti SAM-P /8［J］［. Lab orat Anim Sci Manag,2006,2(23): 510．

［9］ Chen H, Jing FC, Li CL a spol. Echinakosid zabraňuje snížení striatálních extracelulárních hladin monoaminových neurotransmiterů u 6-krys s lézí hydroxydopaminu［J］］. J Ethnopharmacol, 2007, 114 (3): 285.

［10］ Amara SG. Nedávný pokrok v transportérech neurotransmiterů［J］［. Annu Rev Neurosci, 1993,16(1): 73 – 93.

［11］ Wu GX, Su RB, Li J. Role dopaminového transportéru v závislosti na psychostimulanciích［J］］. Chin Pharmacol Bull, 2010, 26 ( 2 ): 141 – 3.

［12］ Yang ZZ, Chen H. Zlepšení a zkušenosti s metodami sutury u potkaního modelu fokální mozkové ischemie［J］］. Lishlzhen Med Mat Med Res, 2008,19( 9): 2189 – 90.

［13］ Tanaka K, Wada N, Ogawa N. Chronická cerebrální hypoperfuze způsobuje přechodné reverzibilní monoaminergní změny v mozku krys ［J］］. Neurochem Res, 2000, 25 ( 2): 313.

［14］ Li H［. Účinek puerarinu na monoaminové neurotransmitery ve stria tum potkanů［J］］. J Zhejiang Univ Sci Technol, 2005,17(1): 13 – 7.