Účinky Cistanche na funkční poškození plic, jater a brzlíku u potkanů ​​se sepsí

Abstraktní

Cíl: Studovat účinky extraktu Cistanche na akutníjátrapoškození funkce plic a brzlíku u potkanů ​​se septickým šokem a prozkoumat léčbu septického šoku.

Metody: Pomocí ligace a perforace slepého střeva (CLP) replikujte model septického šoku, sledujte patologické změnyjátratkáně plic a brzlíku a určit biologické ukazatele akutního poškození jater, plic a brzlíku a vlivCistanchevýpis.

Výsledky: Po CLP u potkanů ​​byly významně sníženy mitochondriální stav III, P/O poměr a rychlost respirační kontroly hepatocytů ve skupině s normálním fyziologickým roztokem a aktivita ATPázy sodno-draslíko-vápenaté hořečnaté membrány byla významně snížena; poměr hmotnosti plic za mokra k suchu, alveolární komunikace index permeability, permeabilita plicních kapilár a malondialdehyd plicní tkáně byly významně zvýšeny a superoxiddismutáza byla významně snížena; procento apoptózy thymocytů a fragmentace DNA se významně zvýšilo. VCistancheskupině s podáním byly výše uvedené ukazatele významně zlepšeny ve srovnání se skupinou s normálním fyziologickým roztokem a dosáhly nebo se blížily úrovni skupiny s umělou operací.

Závěr:Cistanchemá dobrý ochranný účinek na akutníjátra, plíce aporanění brzlíkuu krys se septickým šokem. Jeho mechanismem může být snížení poškození tkání volnými kyslíkovými radikály, zlepšení funkce buněčných membrán a zlepšení imunitní funkce těla a schopnosti stresu.

klíčová slova:

rostlinné extrakty/farmakologieCistanchedeserticola/farmakologie sepse/komplikace šok, sepse/čínská medicína terapie potkanů.

Tato studie pozorovala účinkyCistanchena modelu septického šoku u potkanů ​​s akutními plícemi,játra, a brzlíku a dalších poškození orgánů, se snaží chránit funkci buněk jako průlom, prozkoumat účinek a mechanismusCistanchepři sepsi, s cílem vyvinout účinné ochranné léky proti sepsi Provádějte užitečné průzkumy.

Pro více informací prosím kontaktujte:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche tubulosa zabraňuje onemocnění ledvin, kliknutím sem získáte vzorek

1. materiály a metody

1.1 Léky, činidla a nástroje:

Pentobarbital sodný (China National Pharmaceutical Group Shanghai Chemical Reagent Company), souprava malondialdehydu (MDA), souprava superoxiddismutázy (SOD), činidlo ATPáza (Institut biologického inženýrství Nanjing Jiancheng),CistancheHodnotil Dr. Wang Chizhi z Katedry tradiční čínské medicíny, Univerzita Three Gorges) Vodní odvar, Evansova modř. Přístroj: Hitachi H-600 transmisní elektronový mikroskop, průtokový cytometr (EPICS, Beckman Coulter), spektrofotometr typu 721.

1.2 Příprava extraktu Cistanche deserticola

Výtažek zCistanche\ byla připravena metodou louhování. Vezměte 200 g suché hmotnostiCistanche, dejte do kádinky, přidejte destilovanou vodu v poměru 1:1O, namočte 30 min až 1 h, zahřívejte na elektrickém sporáku 1 h, přefiltrujte a proces dvakrát opakujte. Sebraný filtrát byl zahříván k odpaření a koncentrován na 1 g/ml, a poté uzavřen a uložen v chladničce při 4 stupních pro pozdější použití.

1.3 Zvířata a zvířecí modely septikémie

Zdraví samci potkanů ​​SD (poskytnutí Experimental Animal Center of Huazhong University of Science and Technology, vážící 200 25 og. Zvířata byla náhodně rozdělena do 3 skupin, do skupiny falešné operace (, z-8), normální kontrolní skupina s fyziologickým roztokem (, z-8) a aCistanchedeserticolaskupina (jedna 8). Skupině s předstíranou operací a kontrolní skupině byl podán žaludeční sondou normální fyziologický roztok (1,{2}} ml/kg) a skupině, které byla podávána, byl podán 1 g/ml (aplikační dávka 200 mg/kg)Cistanchežaludeční sondou, ld 2 krát, a krmeni do 15 dnů fyziologie. Kontrolní skupina s fyziologickým roztokem aCistanche deserticolaskupina použila ligaci a perforaci slepého střeva k replikaci modelu sepse. Před operací měla zvířata pitnou vodu zdarma a 12 hodin hladovění.

1.4 Měření mitochondriální aktivity ATPázy jater potkana a mitochondriální respirační funkce jater

16 hodin po operaci 6g krysjátrabyla rychle umístěna do {{0}}stupňového separačního média (250mmol sacharózy, 2mmol ethoxy-ethylpiperazin 2-ethylsulfonové kyseliny, 0,1mmol kyseliny ethylendiamintetraoctové, pH 7.4), s použitím diferenciální rychlosti Krysí mitochondrie byly připraveny nízkoteplotní odstředivou separací. K měření aktivity ATPázy použijte metodu stanovení fosforu [2. Clarkova metoda kyslíkové elektrody [3] byla použita k zaznamenání křivky mitochondriální redoxní reakce pomocí JYD-IA měřiče rozpuštěného kyslíku a rychlosti dýchání stadia III a stadia IV, rychlosti kontroly respirace (RCR) a poměru fosfor-kyslík ( ADlP/0) byly vypočteny.

1.5 Histologie plic potkana a měření plicních funkcí

Po 16 hodinách byl otevřen hrudník a vyjmut levý lalok plíce. Po zvážení mokré hmotnosti se peklo v peci (80 stupňů, 20 h), dokud nebyla hmotnost konstantní, a byla vypočtena suchá hmotnost. Pro obsah bílkovin vypočítejte index plicní permeability (protein alveolární lavážní tekutiny/ga plazmatický protein, LPI). Podle metody nitrožilní injekce Evansovy modři zavedené Zhou et al. [4] byly měřeny změny plicní vaskulární permeability (PVP) potkana. Ke stanovení aktivity malondialdehydu (MDA) v plicní tkáni potkana byla použita metoda Ls s thiobarbiturovou kyselinou (TBA). Použití metody xanthinoxidázy [6 ke stanovení aktivity SOD.

1.6 Tkáň brzlíku

Fyzikální vyšetření a stanovení rychlosti buněčné apoptózy 2 až 3 krysy v každé skupině byly usmrceny v odpovídající době po operaci, byl izolován neporušený brzlík a byly vyrobeny rutinní parafinové řezy, obarveny HE a pozorovány pod světelným mikroskopem; 2.5 fixace glutaraldehydem, Proveďte řez elektronovým mikroskopem a pozorujte jej transmisním elektronovým mikroskopem. Další příprava suspenze thymocytů, průtoková cytometrie detekce počtu buněk umístěných v apoptotické zóně, získání procenta apoptotických buněk. Podle Burtona a kol. L7] (difenylaminová metoda), čtečka mikrodestiček detekuje a vypočítává procento fragmentace genomové DNA thymocytů.

1.7 Statistické zpracování

Experimentální data jsou vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka ± s). Software SPSS provádí jednosměrnou analýzu rozptylu a korelační analýzy. P<0.05 indicates="" a="" statistical="">

2. Výsledek

2.1 Změny ve stavu jaterních mitochondrií Ⅲ, RCR a kontrolní skupina P/O poměru

Frekvence dýchání ve stavu III byla významně nižší než u skupiny s falešnou operací (P<0.01). the="" breathing="" rate="" of="" state="" iv="" was="" not="" significantly="" changed="" compared="" with="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group.="" as="" a="" result,="" the="" rcr="" of="" the="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group=""><0.01). the="" rcr="" in="" the="">Cistancheléčebná skupina byla blíže skupině s falešnou operací. Poměr ADP/0 v kontrolní skupině se snížil a poměr ve skupině léčené Cistanche se obnovil. Ve srovnání se skupinou falešných operací byl významný rozdíl (P<>

2.2 Účinek Cistanche na aktivitu mitochondriální ATPázy

Mitochondriální membránové kalciové ATPázy, sodno-draselné ATPázy, magnesium-ATPázy a kalcium-hořčíkové ATPázy hepatocytů v kontrolní skupině byly významně nižší než ve skupině s falešnou operací. Enzymové aktivityCistancheléčebné skupiny byly významně vyšší než odpovídající kontrolní skupina a dosáhly úrovně skupiny s falešnou operací.

2.3 Účinek Cistanche na apoptózu thymocytů

Výsledky průtokové cytometrie ukázaly, že ve srovnání se skupinou s falešnou operací se apoptóza thymocytů v kontrolní skupině po operaci významně zvýšila, zatímcoCistancheExtrakt z deserticoly mohl účinně snížit rychlost apoptózy a procento fragmentace DNA bylo podobné tomu, které bylo zjištěno průtokovou cytometrií. Výsledky jsou v zásadě stejné (tabulka 4).

2.4 Účinek přípravku Cistanche na histologické změny brzlíku

Pozorování brzlíku parafínovým řezem ve skupině s falešnou operací neprokázalo žádné zjevné patologické změny. Thymocyty byly hustě distribuovány v kůře brzlíku, jádro bylo kulaté, tmavě modře zbarvené a méně cytoplazmy; po přechodu do dřeně se jádro postupně zvětšovalo a převládají světleji zbarvené epiteliální retikulární buňky. V kontrolní skupině byla kůra brzlíku zvířat řídce složena z buněk, lymfocytů ubylo a makrofágů přibylo. Lokálně byla pozorována fokální nekróza a rozptýlené fragmenty buněk. Buňky dřeně brzlíku se významně nesnížily a buňky byly distribuovány hustěji než kortikální oblast, což tvořilo takzvaný fenomén "kortikálně-dřeňové inverze". Fragmenty thymocytů zvířat vCistanche-podávané skupině byly významně sníženy a fenomén "kortexu a inverze pulpy" byl také významně zlepšen.

Elektronové mikroskopické pozorování kontrolní skupiny ukázalo, že většina objemu buněk byla zmenšena, buněčný povrch byl zmenšený, puchýřnatý, chromatin aglomerovaný, některé buňky měly tvar srpku, vytvořila se apoptotická tělíska, časté byly buněčné nekrózy a lýzy. VCistancheléčené skupině byly změny v buněčné morfologii významně sníženy a fenomén buněčné nekrózy a lýzy byl významně zlepšen.

3. Diskuse

Syndromy víceorgánové dysfunkce jsou základním důvodem nevratného stavu a vysoké mortality v pozdní fázi septického šoku. Ochrana funkce orgánů má velký význam pro snížení vysoké klinické mortality septického šoku. Cistanche je tradiční čínská bylinná medicína naší země. Poprvé byla publikována v „Shenlong Materia Medica“. Je to jeden ze slavných tradičních čínských léků pro výživu esence a krve, výživu ledvin a posílení jangu. Moderní farmakologické studie ukázaly, že může zlepšit imunitní funkce těla a stres, podporovat syntézu DNA, odolávat 7 záření, odolávat stárnutí, zvyšovat rychlost syntézy buněčné DNA a chránit buňky tkání. Mezi hlavní složky v něm obsažené patří Cistanche Polysaccharide (cDPS) a D-mannitol, které dokážou účinně odstraňovat volné radikály.Cistanchepolysacharidy mohou také podporovat proliferaci T a B lymfocytů a mohou synergicky stimulovat proliferaci myších thymocytů pomocí ConA a PHA. Tento experiment vychází ze základního bodu zlepšení a ochrany funkce důležitých životně důležitých orgánů při septickém šoku a myšlenky TČM posilující organismus pomocí objektivních a citlivých detekčních metod k pozorování efektuCistancheve státě Ⅲjátramitochondrie u potkanů ​​se septickým šokem, rychlost kontroly dýchání (RCR), P/O poměr, membránová ATPáza a index plicní permeability, permeabilita plicních cév, MDA plicní tkáně, aktivita SOD, apoptóza thymocytů. Experimentální výsledky to ukazujíCistanchemůže zvýšitjátramitochondriální RCR, poměr P/O, zesíleníjátramitochondriální respirační funkce, urychlují přenos elektronů v mitochondriálním dýchacím řetězci, zvyšují stupeň spojení oxidativní fosforylace a membránové aktivity ATPázy a zvyšují intracelulární syntézu ATP. Ve skupině, které byla podávána Cistanche, se významně snížil index plicní permeability a plicní vaskulární permeabilita, snížila se malondialdehydová aktivita plicní tkáně a významně vzrostla superoxiddismutáza. Předpokládá se, že Cistanche může svým antioxidačním účinkem snižovat poškození buněk plicní tkáně volnými kyslíkovými radikály a má dobrý ochranný účinek na poškození plic. Při septickém šoku mohou thymocyty, zejména nezralé T-lymfocyty, velké množství apoptózy způsobit snížení uvolňování zralých lymfocytů do periferních lymfatických orgánů a pak přímo nebo nepřímo poškodit imunitní funkce těla. Korekce abnormální apoptózy thymocytů při septickém šoku je prospěšná pro zlepšení imunity těla. Tato experimentální studie to zjistilaCistancheextrakt může významně zlepšit apoptózu thymocytů a má významný ochranný účinek na thymocyty septikemických zvířat. Dále zvyšuje obranyschopnost organismu při infekčním procesu a snižuje poškození důležitých orgánů cizími toxiny. Také jsme zjistili, že krevní tlak lékové skupiny se významně zlepšil a úmrtnost byla významně snížena. Cistanche a Cistanche zvýšily funkci jaterních a plicních buněk a snížily apoptózu thymocytů. Existuje významná pozitivní korelace, která tomu nasvědčujeCistanchemůže zlepšit funkce životně důležitých orgánů těla a posílit imunitu těla může být důležitým farmakologickým základem pro Cistanche při léčbě septického šoku.

Cistanchemá významný ochranný účinek při akutním poškození orgánů a jeho mechanismem může být: ① odolnost vůči peroxidaci membránových esterů, zvýšení stability membrány a snížení poškození struktury membrány volnými radikály. ② Podporujte syntézu tkáňové nukleové kyseliny a zpomalte rozklad a destrukci nukleové kyseliny, podporujte syntézu proteinů a urychlete opravu a regeneraci tkáňových buněk. ③Posílit imunitní funkce těla a snížit poškození těla způsobené patogenními faktory. ④ Inhibujte nadměrnou apoptózu tkáňových buněk. ⑤Zlepšete mikrocirkulaci těla a zajistěte prokrvení životně důležitých orgánů.

Reference

[1] Jin Huiming, model sepse po podvázání a perforaci slepého střeva [J]. China Disease Journal of Physiology, 1990, 6(2):126.

[2]3 Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Moderní lékařské experimentální metody [M]. North Beijing: People's Health Publishing House, l997:342.

[3] Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Moderní lékařské experimentální metody [M3. Severní Peking: People's Health Press, 1997: 508-510.

[4] Zhang Xiuming, Li Jianzhai, Wei Mingjing aj. Moderní klinické biochemické vyšetření

[5]. Beijing: People's Army Medical Press, 2001: 896-899.

[6] He Weijing, Li Wei, Bi Zheng aj. Detekce apoptózy u leukemických buněk Metoda difenylaminu [J]. Shanghai Journal of Medical Testing, 2001, 16(3): 160.