Účinky polysacharidu Cistanche Deserticola na imunitní buňky a aktivitu telomerázy u stárnoucích myší

Zhang Hongquan, Li Yuan, Song Yuanyuan (Institut medicíny, Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu)

Abstraktní: Cíl Studovat účinky polysacharidu z Cistanche deserticola (PCD) na obsah malondialdehydu (MDA), aktivitu telomerázy a imunitní funkce ve tkáni subakutně stárnoucích myší. Metody Subakutní model stárnutí myší byl indukován D-galaktózou. Obsah MDA byl detekován kolorimetrií s kyselinou thiobarbiturovou; Telomerasová aktivita byla detekována pomocí PCR-ELISA; Reakce proliferace lymfocytů byla měřena metodou MTT; Fagocytární funkce myších peritoneálních makrofágů byla měřena neutrálním červeným testem; Obsah IL-2 v séru byl stanoven pomocí enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Výsledky Obsah MDA v srdci, játrech a mozku modelové skupiny se významně zvýšil, zatímco aktivita telomerázy, proliferační reakce lymfocytů, fagocytóza peritoneálních makrofágů a obsah IL-2 v periferní krvi významně poklesly. Po podání PCD byl obsah MDA v srdci, játrech a mozku myší významně snížen a aktivita telomerázy v srdci a mozkové tkáni, reakce proliferace lymfocytů, fagocytóza peritoneálních makrofágů a obsah IL-2 v periferní krev se výrazně zvýšila. Závěr PCD může antagonizovat poškození volnými radikály, zvýšit aktivitu telomerázy v srdeční a mozkové tkáni a imunitní funkci stárnoucích myší a zlepšit stárnutí vyvolané D-galaktózou.

Klíčová slova: Cistanche deserticolapolysacharid; malondialdehyd; telomeráza;Imunizace; být senilní

Doplněk Cistanche blízko mě— Zlepšit imunitu

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Enhance Immunity

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Klasifikace čínské knihovny č.: R284 Kód dokumentu: A Číslo článku: 1001-2494 (2011) 14-1081-05

Cistanche deserticola je sušená dužnatá nať s fosforovými listy Cistanche deserticola, která má funkci tonizace jater a ledvin a prospívá esenci a čchi [1]. Polysacharid Cistanche deserticola je surový polysacharid oddělený od Cistanche deserticola, který je odstraněn od ve vodě rozpustných malomolekulárních nečistot, deproteinován metodou Sevag a opakovaně zpracováván vodou a alkoholem za účelem získání PCD [2]. Tento experiment začíná imunitní teorií a teorií telomer stárnutí a využívá model stárnutí D-galaktózy na myších k pozorování účinku PCD na obsah malondialdehydu (MDA) a telomerázové aktivity v srdci, játrech a mozku a předběžně prozkoumá jeho mechanismu.

1.materiály a metody

1.1 Zvířata, léky, činidla a nástroje

3-měsíc staré myši ICR, čistý stupeň, 26-32g, napůl samec a napůl samice [Centrum experimentálních zvířat univerzity Yangzhou, číslo certifikátu kvality experimentálních zvířat: SCXK (Su) 2002-0009] . Teplota v místnosti je 20 ~ 25 stupňů, přirozené osvětlení a prostředí je vhodné pro krmení po dobu jednoho týdne před experimentem. PCD poskytuje Nanjing Wildlife Research Institute a rozpouští se v destilované vodě; D-galaktóza (D-Gal, Shanghai Second Reagent Factory); Testovací souprava telomerázové aktivity (MB Company, USA); Detekční souprava MDA a souprava IL{8}} ELISA pro myši (Nanjing Jiancheng Biological Engineering Research Institute). ELX800UV enzymový marker (BIO-TEK, USA); PT-MR3100D tkáňový homogenizátor (Polytron, Švýcarsko); Stolní mrazicí odstředivka MODEL550 (Eppendorf, Německo); Elektronická váha BP110S (Sartorius, Německo).

Cistanche deserticola— Zlepšit imunitu

1.2 Seskupování zvířat, příprava modelu a podávání

Model stárnoucí myši byl připraven podle metody v literatuře [3]. 10 procent D-Gal bylo připraveno s vodou pro injekci a 10 ml · kg-1 bylo subkutánně injikováno do krku a zad myší jednou denně po dobu 6 týdnů. Myši byly náhodně rozděleny do pěti skupin: normální kontrolní skupina, modelová kontrolní skupina, skupiny PCD25, 50 a 100 mg · kg-1 (skupiny PL, PM, PH), přičemž v každé skupině bylo 12 myší. Myši v modelové skupině a skupině pro podávání PCD byly založeny podle zákona a PCD25, 50 a 100 mg · kg-1 o objemu 20 ml · kg-1 byly podávány sondou každý den. Normální kontrolní skupině myší byl injikován stejný objem vody pro injekci a žaludeční sondou byl podán stejný objem normálního fyziologického roztoku.

1.3 Stanovení obsahu MDA a telomerasové aktivity

24 hodin po posledním podání byla odstraněna oční bulva a byla odebrána krev, myši byly usmrceny, srdce, játra a mozek byly rychle odstraněny a byl proveden homogenát čerstvé tkáně za nízké teploty, centrifugace a byl odebrán supernatant. Obsah MDA byl stanoven kolorimetrií s kyselinou thiobarbiturovou. Telomerasová aktivita byla detekována pomocí PCR-ELISA. Operační kroky byly provedeny podle pokynů na soupravě. Hodnota A byla měřena při 450 nm enzymového markeru.

1.4 Stanovení reakce proliferace lymfocytů [4]

Vyjměte myší slezinu asepticky na ultračistém pracovním stole, připravte suspenzi buněk myší sleziny a upravte hustotu buněk na 1 × 109 · L-1, konkanavalin A (ConA) byl kultivován jako stimulátor in vitro pro 48 hodin a reakce buněčné proliferace byla měřena metodou MTT. Hodnota A byla měřena při vlnové délce 570 nm měřená enzymovým linkerem a výsledek byl vyjádřen jako střední hodnota tří komplexních děr A.

1.5 Stanovení fagocytární funkce peritoneálních makrofágů metodou neutrální červené

Mužské výhody Cistanche-Improkázat imunitu

24 hodin po posledním podání byly myši dekapitovány a usmrceny. Peritoneální tekutina myší se shromáždila asepticky a odstředila při 1000r.min-1, buňky byly třikrát promyty Hanksovým roztokem a buněčná suspenze byla připravena s 1640 kultivačním roztokem. Vezměte 3 ml a vložte je do kultivační misky, kultivujte při 37 stupních a 5 procentech CO2 po dobu 2 hodin. Makrofágy přilnou k povrchu nádobky, nafouknou a nasají 4stupňovým Hanksovým roztokem, odeberou adherentní buňky, spočítají na destičce na stanovení krevních buněk a upraví hustotu buněk na 2 × 109 buněk · L-1, kultivovaných v v inkubátoru při 37 stupních po dobu 2 hodin, supernatant a neadherentní buňky byly odstraněny. Vezměte adherentní makrofágy, přidejte 0,1 procenta neutrálního červeného fyziologického roztoku, pokračujte v kultivaci při 37 stupních po dobu 30 minut, zlikvidujte neutrální červeň, opakovaně promyjte makrofágy PBS při 37 stupních, zřeďte 50 procenty kyseliny octové a 50 procenty ethanolu objemově a změřte hodnota A.

1.6 Stanovení hladiny IL-2 v séru

Odeberte krev z oční bulvy, odstřeďte (3000r · min-1, 10 min), abyste oddělili sérum, a určete obsah IL-2 v séru pomocí enzymatického imunosorbentního testu (ELISA). Konkrétní operace je podle návodu kitu. Hladina IL-2 v séru myší v každé skupině je detekována při 450nm enzymového markeru.

1.7 Statistická analýza

Data byla zpracována pomocí SPSS11.0 a naměřená data byla vyjádřena s průměrem ± směrodatná odchylka (x ± s) pomocí jednocestné ANOVA a meziskupinového t-testu.

Pouštní ženšen –Improkázat imunitu

2.Výsledek

2.1 Vliv PCD na obsah MDA v srdci, mozku a játrech stárnoucích myší

Byl významně vyšší než u normální kontrolní skupiny (P<0.01). After intragastric administration of PCD25, 50 and 100 mg · kg-1, the content of MDA in the heart, brain, and liver of mice decreased in a dose-dependent manner compared with the model group (P<0.01, P<0.05), and the content of MDA in the high-dose group was close to the normal level (Table 1).

2.2 Vliv PCD na aktivitu telomerázy v srdci, mozku a jaterní tkáni stárnoucích myší

Compared with the normal control group, the telomerase activity of the heart, liver, and brain tissue in the model group was significantly reduced. After intragastric administration of PCD, the activity of telomerase in heart and brain tissue was increased in a dose-dependent manner, and the level of the high dose group was close to that of the normal control group. There was no significant effect on telomerase activity in the liver tissue of aging mice (P>0.05) (Tabulka 2). 2.3 Účinky PCD na proliferační reakci lymfocytů, fagocytózu peritoneálních makrofágů a obsah sérového IL-2 u starých myší byly významně nižší než u normální kontrolní skupiny (P<0.01). After intragastric administration of PCD, the lymphocyte proliferation reaction, peritoneal macrophage phagocytosis and serum IL-2 content of aging mice increased in dose dependence, which was significantly different from the model group (P<0.01, P<0.05) (Table 3).

3.Diskuse

Přesný mechanismus stárnutí je stále nejasný. V průběhu let vědci doma i v zahraničí předložili desítky teorií stárnutí, jako je teorie volných radikálů. Molekulární kyslík je nezbytný pro přežití organismů a živiny v organismech uvolňují energii oxidací. Oxidační stav buněk hraje důležitou roli při stárnutí, vzniku nádorů a vývoji. Při některých oxidačních procesech však budou vznikat volné radikály a stárnutí úzce souvisí s abnormálními reakcemi volných radikálů. Když se volné radikály hromadí v těle příliš, způsobí to peroxidaci nenasycených mastných kyselin v těle, zejména v biologické membráně, což má za následek změny ve struktuře buněčné membrány, poškození funkce membrány a produkci MDA. a lipofuscin (LPF) [5].

MDA je extrémně aktivní síťovací činidlo. Může se kovalentně zesíťovat s proteiny, enzymy a volnými aminokyselinami na nukleových kyselinách za vzniku Schiffových bází. Kvůli svým abnormálním vazbám nemůže být po spolknutí lysozomy tráven hydrolázou a může se shromažďovat v buňkách za vzniku lipofuscinu, který může otrávit buňky, blokovat přenos látek a zpráv v buňkách a vést k jadernému zrychlení stárnutí a smrt buněk.

Proto lze MDA použít jako spolehlivý indikátor stárnutí orgánů a buněk. Teorie telomer věří, že délka chromozomu (telomer) na vrcholu chromozomu úzce souvisí se stárnutím a délkou života. Délka telomer je asi 2 až 15 kb. Kvůli problému terminální replikace ztratí telomerová DNA 50 až 200 bp pokaždé, když je DNA zkopírována. S nárůstem počtu buněčných dělení se telomerová DNA bude postupně zkracovat. Když se zkrátí na určitou mez, neudrží stabilitu barvení a buňka ztratí schopnost dělení a proliferace a zemře stárnutím. Toto zkrácení je známkou stárnutí [6]. Buňka vstupuje do stadia proliferativního selhání a buňka nadále přežívá, ale nemůže se dělit a proliferovat [7]. Proto jsou telomery také známé jako „biologické hodiny“ buněk a stárnutí buněk určuje stárnutí celého těla. Výzkum Brymy zjistil, že délka telomer souvisí s aktivitou telomerázy. Čím vyšší je aktivita telomerázy, tím delší je telomera, tím lepší je stabilita a integrita chromozomů, tím delší je doba buněčného dělení a tím delší je životnost.

Doplněk Cistanche v mém okolí — Zlepšete imunitu

Imunitní systém jako kompletní a autonomní systém hraje důležitou roli při udržování a úpravě životních aktivit a pokles imunitních funkcí je nejvýraznějším znakem stárnutí. Imunitní dysfunkce může urychlit stárnutí organismu[8]. Výsledky tohoto experimentu to ukázalyPCD by mohlo významně snížit obsah MDA v srdeční, mozkové a jaterní tkáni, zvýšit aktivitu telomerázy v srdci a mozkové tkáni stárnoucích myší, stejně jako reakci proliferace lymfocytů, peritoneální makrofágovou fagocytózu a obsah IL{{0 }} v periferní krvi stárnoucích myší. Lze konstatovat, že PCD má dobrou roli v antagonizaci poškození volnými radikály, může podporovat proliferaci lymfocytů, zlepšovat nespecifickou buněčnou imunitu a imunitní regulační funkce těla a hrát roli při oddálení stárnutí těla.

REFERENCE

[1] MAZG.Different of Processed Cistanche sinensis G.Beck a Herba Cistanche pomocí HPLCF ingerprints[ J] .ChinPharmJ, 2011, 46(12):899-902.

[2] SHIHF, LINAP, ZHANGHQ, etal. Účinek polysacharidů z Cistanche deserticola YCMa na potkany se syndromem nedostatku sleziny[ J] .Chin Wild Plant Res, 2000, 19(6):49-51.

[3] XUSY, BIANRL, CHENX. Metoda farmakologických experimentů)[ M] .Vol 3. Beijing:People's Medical Publishing House, 2002:1465-1466.

[4] LIUYQ, SUW, WUJJ, et al. Vliv extrakce cynomorium coccineum na imunitní funkci a metabolismus volných radikálů stárnoucích myší[J] .JCell MolI mmunol=, 2009, 25(1):1155-1157 .

[5] YANGHJ, WANGZL, XUESH. Pokrok ve studiích mechanismu stárnutí[ J] .Chin J Control Endem Dis=, 2008, 23(1):35-37.

[6] YANGJ, ZHANXH, SUNY, et. (6):531-533.

[7] ZHANGXH, ZHANGJN. Telomera, telomeráza, stárnutí a rakovina[ J] .IntJGenetics=, 2007, 30(1):69-71.

[8] SONGSX, LVZJ. Průběh výzkumu stárnutí T,B buněk a jejich molekulárního mechanismu[J] .JCell MolI mmunol, 2002, 18(3):306-308.