Účinky Cistanche Deserticola Deserticola a Kaempferolu na vývoj buněk granulózy v kuřecích předagregovaných folikulech

Abstraktní:K prozkoumání účinků Cistanche deserticola a Kaempferolu na vývoj kuřecích folikulů experiment analyzoval účinky různých koncentrací Cistanche deserticola a Kaempferol na aktivitu kuřecích granulózních buněk předem tříděných metodou MTT a určil optimální koncentraci. Fluorescenční kvantitativní PCR v reálném čase byla použita k detekci účinků Cistanche deserticola a Kaempferolu na nukleární antigen proliferačních buněk (PCNA), receptor folikuly stimulujícího hormonu (FSHR) a estrogenový receptor kuřecích granulózových buněk pregradovaných předem (ER） vliv exprese mRNA; Účinky Cistanche deserticola a kaempferolu na vývoj ovariálních folikulů byly analyzovány in vitro kultivací ovariální tkáně. Výsledky ukázaly, že Cistanche deserticola i Kaempferol v koncentraci 1 × At 10-4 mol/l může významně podporovat proliferaci granulózních buněk a zároveň podporovat PCNA, FSHR a ER v granulózních buňkách expresi mRNA (P<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

Klíčová slova: Cistanche deserticola; kaempferol; Kuře; Granulované buňky před jakostí; Ovariální tkáň

Čínská bylina cistanche

U velkochovů nosnic má míra produkce vajec vliv na ekonomický přínos a vývoj ovariálních folikulů přímo ovlivňuje produkční výkonnost nosnic. Folikuly jsou rozděleny do tří fází podle jejich funkčního stavu: primární folikuly, sekundární folikuly a zralé folikuly [1]. Každý den je vybrán folikul, aby se vyvinul do zralosti, a vajíčko je vypuzeno do vejcovodu, prochází nálevkou, rozšířením, isthmem, dělohou a vagínou a vytváří strukturu podobnou vejci [2-3]. Iniciace primitivních folikulů souvisí s vývojem folikulárních granulózních buněk. Folikulostimulační hormon (FSH) se váže na folikuly stimulující hormonový receptor (FSHR) na granulózních buňkách, indukuje tvorbu receptoru luteinizačního hormonu (LHR) a stimuluje syntézu steroidních hormonů [4-6]. FSH a luteinizační hormon (LH) synergicky působí na granulózní buňky, aby podpořily vývoj a zrání folikulů a podílely se na selekci dominantních folikulů. Výzkum zjistil, že ačkoli byly aktivovány primordiální folikuly bez granulózních buněk, u všech se nakonec vyvinula atrézie [7]. Během vývoje folikulů může estrogen podporovat proliferaci ovariálních granulózních buněk, zatímco spolupracuje s FSH a LH na podpoře proliferace a diferenciace ovariálních granulózních buněk. Když se obsah estrogenu v plazmě zvýší, bude přiváděn zpět do hypotalamu negativně přes periferní oběhový systém, čímž se inhibuje sekrece hormonu uvolňujícího gonadotropin (GnRH) z hypotalamu. GnRH může stimulovat adenohypofýzu k syntéze a sekreci FSH a LH k podpoře vývoje ovariálních folikulů. Když je sekrece GnRH nízká, může inhibovat sekreci FSH a LH, což nakonec vede k inhibici vývoje folikulů [8-9].

Předchozí studie zjistily, že Cistanche deserticola a Cuscuta chinensis měly po zotavení dobrý reparační účinek na atrofické vejcovody a poškozené vejcovody a mohly by zlepšit snášku u nízkonosnic [10]. V živočišné výrobě může aplikace flavonoidů výrazně zlepšit výkonnost živočišné výroby, zlepšit odolnost zvířat vůči chorobám a zlepšit imunitní funkce zvířat.

Čínské léky, jako je ženšen, Cistanche deserticola a Astragalus

Celkové flavonoidy Cistanche deserticola mohou významně podporovat proliferaci kuřecích folikulárních granulózních buněk pregrade a grade in vitro, úroveň transkripce steroidogenního rychlého regulačního proteinu (StAR), mRNA enzymu štěpícího postranní řetězec cholesterolu (CYP11A1) a sekreci progesteronu. Reprezentativní složkou celkových flavonoidů Cistanche deserticola je Cistanche deserticola. Jeho molekulová hmotnost je malá a má tu výhodu, že prochází hematoencefalickou bariérou. Zároveň má protizánětlivé, protinádorové účinky a účinky podobné estrogenu [11]. Hlavní chemickou složkou Cuscuta chinensis jsou celkové flavonoidy Cuscuta chinensis. V současné době byly z Cuscuta chinensis izolovány různé flavonoidy, zejména kvercetin a kaempferol, které mají vysokou antioxidační aktivitu.

Aplikace extraktu flavonoidů z dodder seed u samic potkanů ​​vykazuje estrogenní aktivitu, která má určitý vliv na podporu posílení funkce ovariálního hCG/LH receptoru; Má gonadotropinový účinek na mladé myši a může podporovat vývoj jejich reprodukčního systému [12-14].

V tomto experimentu jsme vybrali folikulární granulózní buňky kuřecí pregrade a prozkoumali jsme podpůrný účinek Cistanche deserticola a Kaempferolu na proliferaci folikulárních granulózních buněk kuřecí pregrade a související expresi receptoru prostřednictvím účinku Cistanche deserticola a Kaempferolu na vývoj kuřecích folikulů, poskytnout teoretickou referenci pro výzkum a vývoj bezpečných, účinných a bezezbytkových krmných přísad pro zlepšení produkční výkonnosti nosnic.

Účinky Cistanche-Tonifying ledviny

1 Materiál a metody

1.1 Zkušební materiály

Cistanche deserticola (čistota větší nebo rovna 98 procentům) byla zakoupena od Shanghai Jizhi Biochemical Technology Co., Ltd; Kaempferol (čistota větší nebo rovna 98 procentům) byl zakoupen od Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.

1.2 Hlavní činidla a přístroje

Hlavní činidla: kolagenáza typu II a DMEM byly zakoupeny od Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd; DMSO byl zakoupen od Beijing Solebao Technology Co., Ltd; Souprava M5 Super qPCR RT se sadou pro odstranění reverzní transkripce gDNA byla zakoupena od společnosti Beijing Jumei Biotechnology Co., Ltd. Hlavní nástroj: BCM-1300čistící pracovní stůl zakoupený od společnosti Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. Medical Equipment Factory; Vysokorychlostní mrazicí centrifuga AXTGL20M byla zakoupena od Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd; Inkubátor Heracell 150i GP s konstantní teplotou byl zakoupen od Bingshan Songyang Biotechnology (Dalian) Co., Ltd; LightCycle ® Zařízení pro fluorescenční kvantitativní PCR 96 typu a zařízení pro značení enzymů typu DR-200BS byly oba zakoupeny od společnosti Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd.

1.3 Izolace a extrakce granulózních buněk z folikulů před klasifikací kuřat

Bylo vybráno třicet 150-denních zdravých nosnic hailanských hnědých (poskytovaných společností Hebei Baoding Dingnong Company), usmrceno prokrvením krční tepny a asepticky jim byly odebrány vaječníky (in vivo výzkumné testy na zvířatech byly podle pokynů schválených společností Výbor pro etiku zvířat Zemědělské univerzity Hebei). Pregrade folikuly lze rozdělit na malé bílé folikuly (SWF,<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

Poznámka: SWF představuje malé bílé folikuly, LWF představuje velké bílé folikuly, SYF představuje malé žluté folikuly, LYF představuje velké žluté folikuly a F1, F2, F3, F4 a F5 představuje pět zralých folikulů.

Odebrané folikuly byly třikrát promyty 75% alkoholem a nakonec jednou promyty PBS. Sterilní jehla byla použita k uvolnění žloutkové tekutiny v PBS obsahujícím 3 procenta penicilinu a streptomycinu, odstranění vrstvy membránových buněk a oddělení vrstvy granulárních buněk. Bylo odebráno 15 ml EP zkumavky pro přidání vrstvy naříznutých granulózních buněk folikulů a byly přidány 4 ml 0,1 procenta kolagenázy typu II. Byl třepán v třepačce při 37 stupních po dobu 3 minut. Po dokončení oscilace přidejte stejné množství kultivačního roztoku obsahujícího 0,5 % FBS, abyste ukončili trávení. Filtruje se sítem 200 mesh a sítem 400 mesh. Centrifugujte filtrát při pokojové teplotě při 1200 ot./min po dobu 5 minut a centrifugujte dvakrát. Odstraňte supernatant, přidejte kultivační médium, rovnoměrně profoukněte a aspirujte a zřeďte buněčnou suspenzi na 5 × 106 kusů/ml a rovnoměrně přidejte do Petriho misky o průměru 100 mm a kultivujte při 37 stupních a 5 procentech CO2 .

1.4 Účinky Cistanche deserticola a Kaempferolu na aktivitu granulózních buněk

Granulované buňky byly rutinně kultivovány v médiu DMEM obsahujícím 10 procent fetálního bovinního séra. Buňky v logaritmické růstové fázi byly odebrány a štěpeny 2,5 g/l trypsinu. Buňky byly rovnoměrně rozprostřeny v 96jamkových destičkách. Každá destička byla rozdělena do 10 skupin se 6 opakovanými otvory v každé skupině. Přidejte 200 do otvorů kolem kultivační destičky μl PBS slouží jako zvlhčující pór. Koncentrace Cistanche deserticola je nastavena na 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/ L, 5 × 10-8 mol/L, 1 × 10-8 mol/L, 5 × 10-9 mol/L, 1 × 10-9 mol/L, 1 × {{ 24}} mol/l. Nastavte prázdnou kontrolní skupinu. Po společné kultivaci buněk s Cistanche deserticola po dobu 24 hodin přidejte 10 procent do každé jamky μ 5 mg/ml MTT L. Po další kultivaci po dobu 4 hodin přidejte do každé jamky 150 μl DMSO a oscilujte 3 minuty v třepačka s konstantní teplotou 37 stupňů. Změřte absorbanci při 450 nm. Experiment byl opakován třikrát a proces screeningu optimální bezpečné dávky Kaempferolu pro granulózní buňky byl stejný jako výše.

Pouštní žijící cistanche-Tonizující ledvina

1.5 Účinky Cistanche deserticola a Kaempferolu na proliferující buněčný jaderný antigen, receptor folikuly stimulujícího hormonu a estrogenový receptor v granulózních buňkách

Účinek exprese mRNA byl pozorován u granulózních buněk logaritmické růstové fáze, inokulovaných do tří kultivačních misek s hustotou buněk 5 × 106 kusů/ml. Petriho misky byly rozděleny do slepé kontrolní skupiny; skupina Cistanche deserticola, tj. po 24 hodinách kultivace buněk, přidat 1 × 10-4 mol/l Cistanche deserticola; Ve skupině Kaempferol přidejte 1 po 24 hodinách buněčné kultury × 10-4 mol/L Kaempferolu; Estrogenová skupina, přidejte 5 po 24 hodinách buněčné kultury × Ošetřete 10 až 8 mol/l estrogenu. Po 24 hodinách kultivace zlikvidujte veškeré kultivační médium, opláchněte PBS, přidejte 1 ml pankreatického enzymu pro štěpení a po několika minutách přidejte stejné množství kultivačního média k ukončení štěpení. Centrifugujte buněčnou suspenzi při 1000 ot./min. po dobu 5 minut, odstraňte supernatant a přidejte činidlo Trizol do nádoby na led. Následně byl přidán chloroform a důkladně protřepán, umístěn do lednice na přibližně 3 minuty a odstřeďován při 4 stupních při 12 000 ot./min po dobu 10 minut. Přeneste RNA do nové EP zkumavky, přidejte stejný objem isopropanolu, jemně promíchejte a nechte 10 minut stát v lednici. Po centrifugaci při 4 stupních po dobu 10 minut při 12 000 ot./min. odstraňte supernatant a promyjte sraženinu 80% ethanolem. Centrifugujte při 10 000 ot./min a 4 stupních po dobu 5 minut, vylijte etanol, sušte na vzduchu po dobu 5-10 minut a přidejte DEPC vodu pro profouknutí a odsávání, aby se sraženina rozpustila. Změřte koncentraci RNA pomocí UV spektrofotometru.

K získání cDNA použijte M5 Super plus qPCR RT kit s gDNA remove kit pro reverzní transkripci. Detekce jaderného antigenu proliferující buňky, receptoru folikuly stimulujícího hormonu a receptoru estrogenu v granulózních buňkách pomocí fluorescenční kvantitativní PCR MRNA relativní transkripce v reálném čase. Informace o primeru jsou uvedeny v tabulce 1 a primery byly navrženy a syntetizovány společností Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. Vnitřní referenční skupina - aktin, relativní úroveň transkripce mRNA pro každý gen je určena pomocí 2- ΔΔ Vypočteno pomocí Ct.

Tabulka 1 Informace o primeru

1.6 Kultivace in vitro a morfologické pozorování ovariální tkáně

Vezměte tkáň vaječníků 30 40-denních nosnic hailanských hnědých a třikrát ji opláchněte 75% alkoholem. Nakrájejte ovariální tkáň na malé kousky o velikosti 1-2 mm3 na ultračistém stole, s rychlostí 500 μl na jamku přidaných do média DMEM a ITS (10 μG/ml inzulínu, 5 μG/ml transferinu a 30 nmol/l seleničitanu sodného). Po 72 hodinách kultivace v inkubátoru ošetřete podle situace seskupení. Ovariální tkáň byla rozdělena do slepé kontrolní skupiny, skupiny Cistanche deserticola, skupiny Kaempferolu a estrogenové skupiny. Po 72 hodinách kultivace byla tkáň vaječníků fixována 4% formaldehydem a řezy tkáně byly rutinně připraveny pro pozorování pod optickým mikroskopem.

1.7 Statistika a analýza

Data qPCR byla analyzována pomocí softwaru Biorad CFX Manager 2.{1}} a softwaru Microsoft Excel a software SPSS 21.0 byl použit pro jednosměrnou analýzu ANOVA. Pro vícenásobná srovnání byla použita Duncanova metoda. Výsledky jsou uvedeny jako "průměr ± standardní odchylka" a vyneseny pomocí softwaru GraphPad Prism 5.0. P<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 Výsledky a analýza

2.1 Účinky Cistanche deserticola a Kaempferolu na proliferaci granulózních buněk

Z obrázků 2 a 3 je vidět, že jak Cistanche deserticola, tak Kaempferol mohou podporovat proliferaci granulózních buněk. Při 1 × 10-4~1 × V rámci koncentračního gradientu 10-10 mol/l ve srovnání se slepou kontrolní skupinou je koncentrace 1 × 10-4 mol/l, 1 × {{ 9}} mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × Při 10-7 mol/L byl rozdíl extrémně významný (P<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

Poznámka: „* *“ označuje významný rozdíl ve srovnání se slepou kontrolní skupinou (P<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

2 Hodnoty absorbance granulózních buněk vystavených Cistanche deserticola v různých koncentracích po dobu 24 hodin Obr.

3 Hodnoty absorbance granulózních buněk vystavených Kaempferolu v různých koncentracích po dobu 24 hodin Obr.

2.2 Účinky Cistanche deserticola a Kaempferolu na nukleární antigen proliferujících buněk, receptor folikuly stimulujícího hormonu a estrogenový receptor kuřecích pregranulózních buněk Vliv mRNA na relativní transkripční hladiny

Z tabulky 2 je vidět, že skupiny Cistanche deserticola a Kaempferol mají účinky na nukleární antigen proliferujících buněk, receptor folikuly stimulujícího hormonu a receptor estrogenu kuřecích granulózních buněk předem klasifikovaných. Relativní transkripční hladina mRNA byla významně vyšší než u slepého pokusu kontrolní skupina a estrogenová skupina (P<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

Tabulka 2 Účinky Cistanche deserticola a Kaempferolu na nukleární antigen proliferujících buněk, receptor folikuly stimulujícího hormonu a estrogenový receptor kuřecích pregranulózních buněk Vliv mRNA na relativní transkripční hladiny

2.3 Histologické pozorování vaječníků

Z obrázku 4 je vidět, že ve srovnání s kontrolní skupinou se počet folikulů ve tkáni vaječníků ošetřených Cistanche deserticola a Kaempferol významně zvýšil a granulózní buňky proliferovaly z jedné vrstvy do vícevrstvé. Ve srovnání s estrogenovou skupinou mají skupina Cistanche deserticola a skupina Kaempferol zjevnější schopnost podporovat zrání a vývoj ovariální tkáně a skupina Cistanche deserticola a skupina Kaempferol mají zjevnější účinek než skupina Kaempferol.

3 Diskuse

3.1 Účinek Cistanche deserticola a Kaempferolu

Celý proces vývoje folikulů je doprovázen proliferací granulózních buněk, které mají velký význam pro vývoj folikulů. Iniciují růst primitivních folikulů vytvořením příznivých molekulárních mikroprostředí. Během vývoje folikulů hraje apoptóza granulózních buněk důležitou roli v regulaci růstu folikulů, zrání vajíček a sekreci estrogenu [15-16]. Cistanche deserticola, čínský bylinný lék, má účinek podobný pohlavním hormonům, který může podporovat vývoj zvířecích folikulů a produkci spermií, podporovat normální příchod říje, zlepšovat funkci a aktivitu vaječníků a zlepšovat reprodukční funkce. Cuscuta chinensis, jako tradiční čínská medicína tonizující ledviny, má jako účinná složka flavonoidy antioxidační, reprodukční a anti-aging účinky. Studie ukázaly, že určitá dávka flavonoidů z Cuscuta chinensis má proliferační účinek na intersticiální buňky myších varlat [17-18]. V tomto experimentu byly Cistanche deserticola a Kaempferol jako hlavní složky tradiční čínské medicíny Cistanche deserticola a dodder vybrány ke studiu jejich účinků na expresní schopnost kuřecích folikulárních granulózních buněk a jejich příbuzných receptorů a tkáně vaječníků, aby se potvrdily účinky Cistanche deserticola a Kaempferol o vývoji reprodukčního systému drůbeže.

Účinky Cistanche-Tonifying ledviny

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche pro onemocnění ledvin

【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

3.2 Nukleární antigen proliferující buňky, receptor folikuly stimulujícího hormonu a receptor estrogenu Úloha

PCNA je proliferující buněčný jaderný antigen, který hraje důležitou roli při iniciaci buněčné proliferace a je dobrým indikátorem buněčné proliferace. Proto nárůst PCNA ve výsledcích testu potvrdil, že Cistanche deserticola a Kaempferol podporují buněčnou proliferaci, když působí na granulózní buňky. FSH je hlavním hormonem, který podporuje vývoj folikulů [19], a místo exprese receptoru folikuly stimulujícího hormonu (FSHR) je soustředěno hlavně ve vaječnících a folikulech. Hlavním způsobem, jakým se FSH podílí na reprodukčních aktivitách slepic, je regulace vývoje folikulů. Když se sekrece FSH zvýší, může to podpořit zvýšení FSHR v granulózních buňkách a kombinace těchto dvou může vyvolat syntézu LHR aktivací aromatázy. Kuře může vyvolat ovulaci za synergického účinku FSH a LH [20-22]. Před selekcí folikulů granulózní buňky exprimují pouze bazální hladiny FSHR, které se používají k přijímání signálů FSH a produkují nízké hladiny cyklického adenosinfosfátu pro udržení buněčné aktivity. Když je exprese FSHR významně upregulována v granulózních buňkách folikulu předběžného stupně, naznačuje to, že folikul bude vybrán tak, aby se stal folikulem stupně [23-24]. V této studii byla ve srovnání s kontrolní skupinou exprese mRNA FSHR ve skupinách Cistanche deserticola a Kaempferol významně zvýšena, což naznačuje, že Cistanche deserticola a Kaempferol mohou podporovat transkripci mRNA FSHR, zvyšovat sekreci FSH a podporovat selekci. folikulů jako folikulů stupně. E2 je druh steroidního hormonu vylučovaného buňkami theca. Jeho funkcí je podporovat pohlavní dospělost samic zvířat a ukazovat druhou pohlavní vlastnost. Působením FSH aromatáza produkovaná ovariálními granulózními buňkami přeměňuje androgen na E2, který je regulován dvěma estrogenovými receptory (ER a ER） Působí na různé orgány samic zvířat a hraje důležitou roli v reprodukci zvířat, zejména ve fyziologickém aktivity, jako je vývoj folikulů Během růstu folikulů je estrogen klíčovou intracelulární regulační molekulou, která urychluje proliferaci granulózních buněk a zesiluje účinky FSH a LH na proliferaci a diferenciaci ovariálních buněk ER Hlavní úpravou je negativní zpětná vazba, ER Vývoj folikulů je regulován vnitřními i vnějšími cestami vaječníků [26] ER Je exprimován hlavně ve tkáních a orgánech, jako je mléčná žláza, děloha a vagina zvířat, zatímco ER je exprimován hlavně ve varlatech. , vaječníky, prostata a hypotalamus [27].

V této studii ER Hladiny exprese Cistanche deserticola a Kaempferol byly významně zvýšeny ve skupinách Cistanche deserticola a Kaempferol, což naznačuje, že cistanche a kaempferol mají pozitivní účinky na vývoj, zrání a ovulaci kuřecích vaječníků. Výsledky této studie zjistily, že byl měřen ER. Úroveň exprese je relativně nízká. To je v souladu se zjištěními výzkumu Guo Miao [28], že v embryonálním vývoji kuřat mají vaječníky raných kuřat specifická vazebná místa pro ER. V bílých folikulech, žlutých folikulech a granulózních buňkách kuřat je ER exprese výrazně vyšší než ER. Sojové flavonoidy jako rostlinný estrogen mohou zvýšit produkci vajec u nosnic, když jsou přidány do stravy [29], což ukazuje na přímý vztah mezi hladinami estrogenových hormonů a rychlostí produkce vajec.

Obrázek 4 Ovariální tkáň po barvení HE (10 ×）

3.3 Účinky Cistanche deserticola a Kaempferolu na ovariální tkáň

V tomto experimentu bylo kokultivací Cistanche deserticola a Kaempferolu s ovariální tkání zjištěno, že počet folikulů ve tkáni vaječníků postižených Cistanche deserticola a Kaempferol se významně zvýšil a granulózní buňky proliferovaly z jedné vrstvy do vícevrstvé. To dále dokazuje, že Cistanche deserticola a Kaempferol mohou podporovat vývoj vaječníků z histologického hlediska. Antigen proliferující buňky, receptor folikuly stimulujícího hormonu a estrogenový receptor měřené ve výsledcích tohoto experimentu Změny indikátorů potvrdily, že Cistanche deserticola a Kaempferol mají účinky podobné estrogenu, což poskytuje experimentální základ pro zkoumání cíle hlavních složek z Cistanche deserticola a dodder.

4 Závěr

Tato studie potvrdila, že Cistanche deserticola a Kaempferol mohou podporovat proliferaci granulózních buněk pregradovaných kuřetem a zvyšovat PCNA, FSHR a ER Úroveň transkripce mRNA může významně podporovat vývoj folikulů.

Odkaz:

［1］Yang Pengyun, Song Beibei, Ma Jinrui a kol. Úloha granulózních buněk při tvorbě vajíček [J] Poultry Science, 2021 (11): 50-54

［2］ HUO SY,LI YR,GUO Y, et al. Zlepšení účinků flavonoidů Epimedi⁃ um na vybrané reprodukční znaky u nosnic po nuceném línání［J］. Drůbežářství, 2020,99(5）): 2757-2765.

［3］ HUO SY, LI YR, ZHANG S, et al. Funkce Epimédia na regresním vejcovodu a folikulech slepic nuceně lítovaných nosorožců ［J］. Časopis světového výzkumu drůbeže, 2020, 10（2）:326- 335.

［4］ RAJU GR,CHAVAN R,DEENADAYAL M,et al. Luteinizační hormon a synergie hormonu stimulujícího folikuly: přehled role v kontrolované ovariální hyperstimulaci［J］. Journal of hu⁃ man reprodukční ences, 2013, 6（4）:227-234.

［5］ SCHMIDT D. Myší okřídlený-helixový transkripční faktor Foxl2 je nutný pro diferenciaci granulózních buněk a udržování vaječníků［J］. Vývoj, 2004, 131（4）:933-942.

［6］ SULLIVAN MW,STEWART-AKERS A,KRASNOW JS,et al. Ovariální reakce u žen na rekombinantní folikuly stimulující hormon a luteinizační hormon (LH): role LH v závěrečných fázích zrání folikulů J. Journal of clini⁃ cal endokrinologie & metabolismus, 1999, 84（1）:228-232.

［7］ GUO Y, LI YR, ZHANG S, et al. Vliv celkových flavonoidů epimédia na vývoj granulózních buněk u nosnic ［J］. Drůbežářství, 2020, 99（9）:4598-4606.

［8］ ZHANG WD, LI N, DU ZR, et al. Receptor IGF-1 se podílí na regulačních účincích icariinu a icaritinu v astrocytech v bazálních podmínkách a po zánětlivém testu［J］. European Journal of pharmacology, 2021,906（5）:174269- 174278.

［9］ FREDERIQUE RZ,MIGUEL F,GE Y,et al. Regulační architektura LT2 gonadotropní buňky, která je základem odpovědi na hormon uvolňující gonadotropin［J］. Hranice v endokrinol⁃ ogii,2018,9:34.

［10］ Huo Shuying, Kang Jingmin, Li Yurong a kol. Účinek „Yimu Powder“ na opravu vejcovodů a výkonnost nosnic [J] Chinese Poultry, 2018, 40 (19): 4

［11］ WANG S, WANG Q, WANG H, et al. Indukce ROS a stárnutí závislé na poškození DNA icaritinem přispívá k jeho protinádorové aktivitě v buňkách hepatocelulárního karcinomu［J］. Farmaceutická biologie, 2019, 57（1）:424-431.

［12］ Wang Jianhong, Wang Minzhang, Wu Qinghua, et al Vliv flavonoidů z Cuscuta chinensis na endokrinní funkci vaječníků u stresovaných potkanů ​​[J] Chinese herbal medicine, 2002 (12): 46-48

［13］Miao Jiangxia Pokrok ve výzkumu aktivních složek a mechanismu působení semen dodder při regulaci reprodukce//Sborník z akademické konference o farmaceutické fytochemii a udržitelném rozvoji zdrojů tradiční čínské medicíny (I), 2009: 323-325

［14］ TAO CC, WU Y, GAO X, et al. Protinádorové účinky Icari⁃ cínu proti rakovině prsu souvisí s estrogenovými receptory［J］. Současná molekulární medicína, 2020, 21（1）:73-85.

［15］ MONNIAUX, DANIELLE. Řízení folikulogeneze pomocí dialogu oo⁃ cyt-somatická buňka: lekce z genetických modelů［J］. The⁃ riogenology, 2016, 86（1）:41-53.

［16］TAKASHI SHIMIZU A,NAOMICHI KOSAKA A,CHIAKIMU⁃ RAYAMA A,et al. Exprese apelinu a receptoru APJ v buňkách granulosy a theca během různých fází vývoje folikulů ve vaječnících skotu: zapojení apoptózy a hormonální regulace – sciencedirect［J］. Věda o reprodukci zvířat, 2009,116（1-2）:28-37.

［17］ Lin Siwen, Chen Shaobo, Yin Changchang, et al Estrogenní účinek celkových flavonoidů Cistanche deserticola deserticola na podporu osteogenní diferenciace ［ J ］ Research and Development of Natural product, 2020, 32 (3): {{4}

［18］ Tao Jinliang, Wang Xiao, Wei Yuanyuan, et al Ochranný účinek flavonoidů z Cuscuta chinensis na BPA indukovanou abnormální sekreci mužských hormonů v myších testikulárních intersticiálních buňkách [J] Progress in Animal Medicine 2019, 40 (5): { {4}}

［19］ Wang Peng, Hou Deyu, Shi Liguang a kol.

［20］ ZHANG M,SHI H,SEGALOFF DL,et al. Exprese a lokalizace receptoru luteinizačního hormonu v reprodukčním traktu samic myší［J］. Biologie reprodukce, 2001, 64（1）: 179-187.

［21］ Li Qin, Wang Qigui TGF- Pokrok ve výzkumu a vyhlídky členů rodiny regulující vývoj folikulů u drůbeže ［ J ］ Chinese Poultry, 2019, 41 (19): 1-5

［22］Guan Hongbin, Li Qingzhang Pokrok ve výzkumu folikuly stimulujícího hormonu [J] Journal of Northeast Agricultural University, 2002, 8 (3): 306-311

［23］ Wu Xinpei, Wang Shuying Imunohistochemická lokalizace FSHR a LHR ve vaječnících černé kozy Laiwu ［ J ］ Life Science Research, 2006, 25 (4): 367-371

［24］ TISCHKAU SA,HOWELL RE,HICKOK JR,et al. Nárůst lu⁃ teinizačního hormonu reguluje expresi genu pro cirkadiánní hodiny⁃ v kuřecím vaječníku［J］. Chronobiology international, 2011, 28（1）:10-20.

［25］Tang Haifei, Wang Zhiwen, Zheng Xuesong a kol. Pokrok ve výzkumu funkce estrogenu [J] Reprodukce a antikoncepce, 2019, 39 (4): 334-340

［26］ Liu Lingbin Vliv monochromatického záření na estrogenový receptor (ER, ER), Vliv exprese progesteronového receptoru (PR-A, PR-B) ve tkáni vaječníků Ya'an: Sichuan Agricultural University, 2013

［27］ COUSE JF,LINDZEY J,GRANDIEN K,et al.Tkáňová distribuce⁃ a kvantitativní analýza estrogenového receptoru-alfa［ERal⁃pha）a estrogenového receptoru-beta（ERbeta）messenger ribonucle⁃ kyseliny u divokého typu a ERalpha-knockout myš［J］. En⁃ dokrinologie, 1997, 138（11）:4613-4621.

［28］Guo Miao ER ve tkáni vaječníků nosnic Zjevná regulace dynamických změn a screening regulačního genu Tai'an: Shandong Agricultural University, 2017. [ Zhao Biqian Pokrok ve výzkumu aplikace daidzeinu v produkci nosnic [J ] Guangdong Feed, 2017, 26 (8): 31-33