Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 98. nemocnice Čínské lidové osvobozenecké armády, Huzhou, Zhejiang 313000

2 Univerzita tradiční čínské medicíny Zhejiang, Hangzhou, Zhejiang 310053

3 Fuyang Tradiční čínská medicína Ortopedická nemocnice, Hangzhou City, Zhejiang Province, Hangzhou 311400, Zhejiang, Čína

Abstraktní

Cíl: Pozorovat účinekCistanchevodní extraktna uzdraveníosteoporotickézlomeniny u potkanů ​​a prozkoumat její mechanismus. Metody: Krysí samice SD stupně SPF byly náhodně rozděleny do kontrolní skupiny, modelové skupiny a léčebné skupiny a modelovány podle příbuzných metod. 24 hodin po modelování zlomeniny byla kontrolní skupině a modelové skupině podána žaludeční sonda s normálním fyziologickým roztokem a léčené skupině byla podána žaludeční sondaCistanchevodní extrakt jednou denně. Po 2 týdnech a 6 týdnech intervence byla odebrána krev z břišní aorty k detekci interleukinů. Hladiny TP (IL-1 B) a transformujícího růstového faktoru-B l (TGF-8 1), odběr vzorků zlomenin současně, provedení Micro-CT skenu po fixaci, měření R0 Objemová frakce kalusové kosti (BV/TV) a další související parametry Po dekalcifikaci, dehydrataci a zalití byly z ní vyrobeny voskové bloky pro použití. Výsledky: 6 týdnů po vytvoření modelu osteoporózy byla hustota kostních minerálů potkanů ​​v modelové skupině a léčené skupině nižší než u kontrolní skupiny (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistanchemůže podpořit hojeníosteoporotickézlomenin a jeho mechanismus může souviset s jeho inhibicíosteoporotickézlomeniny. Po potkaním séru IL-1B a podporuje sekreci TGF-8 1, což může zlepšit osteoporózu a podpořit hojení zlomenin.

Klíčová slova: osteoporotická zlomenina, Cistanche, hojení zlomenin, potkan

Osteoporóza je onemocnění, při kterém se snižuje hustota kostí, je zničena jemná struktura kostní tkáně a zvyšuje se křehkost kosti. Pacienti mohou v každodenním životě způsobit zlomeniny pod mírnou vnější silou. Jde o běžné klinické onemocnění a často se vyskytující onemocnění. Navíc tento typ zlomenin je většinou u starších pacientů, často spojený s jinými nemocemi, a většina zlomenin je rozdrobených, se špatnou stabilitou, někdy dochází k pomalému nebo nesjednocení zlomeniny a je zde vysoká invalidita a letalita. V současné době se její léčba provádí především chirurgickým zákrokem, ručním restaurováním a antiosteoporózní léčbou. Chybí léky pro cílenou léčbu pro pacienty sosteoporotickézlomeniny. Tradiční čínská medicína má dlouhou historii léčby osteoporózy a má pozitivní vliv. Bylo prokázáno, že mnoho tradičních čínských léků zlepšuje kosti. Chudost může také podporovat hojení zlomenin. Rongrong se běžně používá jako reprezentativní lék pro výživu jangu ledvin a má účinek na výživu jater a ledvin. Tradiční čínská medicína věří, že ledvina řídí kost a k ledvině a esenci neodmyslitelně patří i léčba zlomenin. Moderní farmakologie zjistila, že popel z masa má také určitý estrogenní účinek. Tato studie má v úmyslu použít měření hustoty kostí, Micro-CT a sérový interleukin-13 (IL-10), pozorování hladiny transformujícího růstového faktoru-P KTGF-P 1) a vodní extrakt z masové kýlní pasty na uzdravení zosteoporotickézlomeniny u krys

Cistanche

1Materiály a metody

1.1 Experimentální zvířata a vybavení činidel: 52 samic SPF potkanů ​​SD o hmotnosti 210~250g je chováno ve zvířecím experimentálním centru Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine. Komplexní jód, Hangzhou Lonzo Medical Desinfectant Co., Ltd., číslo šarže 20160720; Penicilin, North China Pharmaceutical Co., Ltd., číslo šarže F3117217; IL-18 kit (číslo šarže: 20160715), TGF-8 1 kit (číslo šarže: 20160722); Dvouenergetický rentgenový skener kostní denzity, 0STE0C0RE2; Micro-CT, Skyscan1176O

1.2 ExtrakceCistanchevodní extrakt: namočte zeminucistanche(Farmaceutická továrna Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine) 10krát ultračistou vodou po dobu 0,5 hodiny, odvar z pánve po dobu 1,5 hodiny, extrakci opakujte 2krát a rotační parní hrnec se směsí léčivých kapalin Koncentrát na koncentraci 1,5 g /ml a uchovávejte v chladničce při 4 stupních pro pozdější použití.

1.3 Příprava modelování: Body jsou následující.

1.3. 1 Model osteoporózy: Potkani byli adaptivně chováni po dobu 1 týdne před modelováním a náhodně rozděleni do kontrolní skupiny, modelové skupiny a léčebné skupiny se 16 potkany, 18 potkany a 18 potkany, a každá skupina byla založena na časovém bodu 2 týdny a 6 týdnů. Každý byl rozdělen do dvou skupin. Léčebná skupina i modelová skupina byly anestetizovány 1% pentobarbitalem sodným (0,4ml/100g), kůže byla anestetizována, dezinfikována, přikryta rouškou a kůže byla řezána. Potkani byly odstraněny bilaterální vaječníky. Kontrolní skupina měla pouze řez. Ne

Odstranění vaječníků

1.3. 2 Model zlomeniny: 6 týdnů po přípravě modelu osteoporózy bude připraven model zlomeniny. Poté, co jsou krysy v každé skupině anestetizovány, je měřena minerální hustota kosti středního femuru. , Řez, zhotovte model příčné zlomeniny středního femuru, zafixujte 1mm Kirschnerovým drátem, sterilizujte a zašijte kůži řezu

1.4 Léková intervence: Rentgenová detekce femuru byla provedena po modelování, potkani, u kterých selhala příprava modelu, byli vyřazeni a po modelaci jim bylo intramuskulárně injikováno 80,000 jednotek penicilinu, aby se zabránilo infekci. 24 hodin po operaci byl léčené skupině podáván vodní extrakt z masové kýlní pasty (koncentrace 1,5 g/ml, lg/kg, jednou denně). Kontrolní skupině a modelové skupině byl podán stejný objem normálního fyziologického roztoku.

1.5 Odběr vzorků: Vzorky potkanů ​​byly odebrány 2 a 6 týdnů po intervenci. Po 1% anestezii pentobarbitalem sodným bylo z břišní aorty odebráno 5-10ml krve pro přípravu séra a uloženo v -20chladničce B. náhradní. Potom byly krysy usmrceny a byly odebrány vzorky zlomenin stehenní kosti a umístěny do 10% neutrálního formaldehydu na 72 hodin.

1.6 Testovací indikátory: Body jsou následující.

1.6. 1 Hustota kostního minerálu: Všechny krysy po modelu osteoporózy byly před modelem zlomeniny anestetizovány a poté byla měřena hustota kostního minerálu středního femuru. Tři skupiny krys dostaly vzorky po 2 a 6 týdnech intervence a vzorky byly fixovány po dobu 72 hodin a poté byla znovu změřena hustota kostí.

1.6. 2 Micro-CT: Micro-CT sken se provede po fixaci vzorku po dobu 72 hodin, s 200 snímky nad a pod koncem zlomeniny jako oblast zájmu (R01), úhel skenování 360 stupňů, proud 555uA, napětí 42kV, filtr Al 0,2mm, rozlišení 8,73um, po dokončení rekonstrukce trojrozměrného obrazu a analýzy kalusu. Parametry detekce jsou následující: frakce objemu kosti BV/TV, modelový faktor kostní trabekulární (Tb. Pf); index strukturálního modelu (SMI) atd."

1.6.3 Stanovení sérového IL-1P a TGF-P1: Rozmrazte potkaní sérum z lednice na -20 stupeň a proveďte detekci krok za krokem v souladu s IL-13 a návod k soupravě TGF" 1.

1.7 Statistické metody: pro zpracování použijte statistický analytický software SPSS.19. Experimentální data jsou vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka (G±s) a kostní minerální hustota tří skupin krys. Parametry Micro-CT JL-1 P Hladiny JGF-P 1 jsou zprůměrovány jednosměrnou analýzou rozptylu a používají se párová srovnání mezi skupinami Inspekce, hladina inspekce je P<0.>

2 výsledky

2.1 Hustota kostí tří skupin: viz tabulka 1.

Tabulka 1 Výsledky minerální hustoty kostí ve středním femuru každé skupiny potkanů ​​(x±s, g/cm²)

Poznámka: Ve srovnání s modelovou skupinou, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Micro-CT dvourozměrný příčný řez: sagitální dvourozměrný příčný řez vybírá obrázky podélné osy femuru v každém časovém bodě v každé skupině (viz obrázek 1) a horizontální dvourozměrný příčný řez řez vybírá pro srovnání 100. obrázek pod linií lomu (obrázek 2) ), z obrázku je vidět, že kalus každé skupiny se postupem času postupně zvětšoval, ale 6 týdnů po zlomenině byl plastický v různé míře; současně je vidět, že mozol v kontrolní skupině byl velký a kůra kalusu byla tlustá a plazila se přes linii zlomeniny po 6 týdnech, zatímco kalus v modelové skupině V kalusu bylo méně kosti. 2 týdny a kůra kalusu byla uvolněná po 6 týdnech. Přestože objem kalusu v léčené skupině nebyl po 2 týdnech velký, kostní hmota v kalusu byla větší než v modelové skupině. Kalus byl lépe tvarován po 6 týdnech. A linie lomu není zřejmá.

Kontrolní skupina Modelová skupina Léčebná skupina

Obrázek 1 Sagitální příčný řez středním femurem každé skupiny

Obrázek 2 Horizontální řez středním femurem každé skupiny

2.3 Třírozměrná rekonstrukce Micro-CT: trojrozměrná rekonstrukce kalusu na zlomeném konci femuru je znázorněna na obrázku 3. Z obrázku 3 je vidět, že kalus se vytvořil podél periostu na obou koncích zlomeniny linie 2 týdny po zlomenině v každé skupině byla vlákna zlomeniny v každé skupině stále čistá, zejména v modelové skupině a léčené skupině, zatímco kalus v kontrolní skupině byl tlustý a tlustý, většinou s dlahami 6 týdnů po zlomenině . Trabekulární kosti byly převládající a linie zlomeniny zmizela, zatímco modelovou skupinou byly volné kosti a linie zlomeniny byla neostrá, ale léčená skupina měla více kalusové kosti, pravidelnou a silnou trabekulární kost a linie zlomeniny nebyla zřejmá.

Obrázek 3 Trojrozměrná rekonstrukce kalusu R0I na zlomeném konci

2.4 Parametry Micro-CT: Použijte software k analýze kalusu na zlomeném konci. Související parametry viz Tabulka 2.

Tabulka 2 Porovnání parametrů Micro-CT každé skupiny (x±s)

Kontrolní skupina Modelová skupina Léčebná skupina

Poznámka: Ve srovnání s modelovou skupinou, *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Hladina IL-1 P .TGF-P 1 v séru: viz tabulka 3.

Tabulka 3 Porovnání hladin IL-1 P JGF-0 1 v každé skupině G±s, n=8)

Poznámka: Ve srovnání s modelovou skupinou, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

Tradiční čínské léky Yinyangdian, Drynaria fortune a jejich sloučeniny (Qing's Pills, Liuwei Dihuang Pills aj.) se v posledních letech v klinické praxi osvědčily jako výrazné zlepšení osteoporózy. Tento typ čínské medicíny a sloučeniny se většinou používají k výživě jater a ledvin. To je v souladu s principem výživy ledviny a obnovy svalů ve střední a pozdní fázi zlomeniny. "Deset dní. Masitá pasta na končetiny byla poprvé publikována v "Shen Nong's Materia Medica". , Teplé povahy, má funkce vyživování ledvin a posilování jangu, doplňování esence a dřeně, vyživování krve a zvlhčující suchost a příjemnou barvu a prodloužení života.

V této studii byla hustota kostních minerálů u léčené skupiny vyšší než u modelové skupiny po 2 a 6 týdnech intervence (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">osteoporotickéhojení zlomenin. Přímo odráží kostní obsah kalusu. To ukazuje, že Rouganrong může mít účinek na podporu osteogeneze. Analýza může být účinná v masové kýlní pastě. Složky mají účinek na zvýšení BMP2 a BMP2 je jedním z členů rodiny TGF-8. A tento výsledek potvrzují i ​​další parametry Micro-CT skenu (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). Tb. Sp a SMI odrážejí biomechanické vlastnosti kalusu a hodnoty v léčené skupině jsou výrazně lepší než u modelové skupiny, což také dále naznačuje, že Roudongrong má účinek na zlepšení úbytku kostní hmoty, podporu osteogeneze a urychlení hojení zlomenin.

Pokud jde o hladiny IL-1B a JGF-P 1 v séru, po 2 týdnech a 6 týdnech intervence bylo zjištěno, že hladina IL-1P v léčebné skupině byla nižší než u ostatních dvou skupiny ve 2 týdnech a v 6 týdnech. Přestože hladina IL-1 B u léčené skupiny byla vyšší než u kontrolní skupiny, stále výrazně nižší než u modelové skupiny (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">Cistancheumětzlepšit úbytek kostní hmotypodporují osteogenezi a urychlují hojení zlomenin. Může snížit úroveň IL-13 inosteoporotickézlomeniny krys a inhibice zlomenin. Je dosaženo aktivity kostních buněk; navíc to může souviset i s tím, žeCistanchemůže zvýšit hladinu TGF-B 1 u zlomených potkanů, podporovat osteogenní diferenciaci a zrání a tvarování kalusu.

Stručně řečeno, na základě analýzy hustoty kostního minerálu, parametrů mikro-CT skenu a hladin sérového IL-1P, TGF"1 bylo zjištěno, že vodný extraktCistancheumětzlepšit úbytek kostní hmotyapodporují hojení osteoporotických zlomenin. Mechanismus s tím může souviset. Může inhibovat sekreci sérového ILT 8 a podporovat sekreci TGF-B 1 u potkanů ​​poosteoporotickézlomenin, čímž se zlepšuje osteoporóza a podporuje se hojení zlomenin.

4 Reference

[1] Ma Yuanzheng, Wang Yipeng, Liu Qiang a kol. Pokyny pro diagnostiku a léčbu osteoporózy u starších osob v Číně (2018) [J], Chinese Journal of Osteoporosis, 2018, 24(12): 1541-1567.

[2]Zhu Gang, Sun Haibin, Xu Gang a kol. Terapeutický účinek a mechanismus alkoholového extraktu z masové kýly na ovariektomizované krysy s osteoporózou[J]. Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2018, 44(1): 68-72.

[3] Karvande A, Khedgikar V, Kushwaha P, et al. Extrakt z jádrového dřeva z Dalbergia sissoo podporuje hojení zlomenin a jeho aplikaci u osteoporotických potkanů ​​vyvolaných ovariektomií [J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2017, 69(10): 1381-1397.

[4]Kevin 0'Neill, Christopher MS, Nicholas AM a kol. Hodnocení progrese hojení zlomenin u myší pomocí mikropočítačové tomografie[j]. Bone, 2012, (6): 1357-1367.

[5] Yao Xinmiao, Shi Xiaolin, Wang Jian a kol. Odborný konsensus o odstupňované diagnostice a léčbě primární osteoporózy pomocí tradiční čínské medicíny v provincii Zhejiang (2017) [J], Zhejiang Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 53(4): 237- 241.

[6] Ma Meng, Zhang Zhiguo, Ma Xiaohui. Pokrok ve výzkumu v prevenci a léčbě osteoporózy jednotlivými a kombinovanými čínskými léky[J]. Čínský lékařský průvodce, 2018, 20(8) =477-481.

[7] Zhang Yuequan, Zheng Danhong, Xu Jianfeng a kol. Vliv pyré z rodiny pouštního masa na expresi proteinu BMP-2 u rychle stárnoucích osteoporotických myší[J]. Ningxia Medical Journal, 2014, 36(12): 1114-1116