Rozdíl fenylethanolových glykosidů ve stolních cistanches Herba od 2 hostitelů Rozdíl mezi fenylethanolovými glykosidy ve stolních cistanches Herba od 2 hostitelů na základě analýzy UPLC-QQQ-MS a PLS-DA analyzované na základě analýzy UPLC-QQQ-MS a PLS-DA

Cistanche deserticolaje vytrvalá holoparazitická rostlina patřící do čeledi Orobanchaceae. Jedná se o sušenou dužnatou nať pokrytou šupinovitými listyCistanche deserticola YC Ma[1-2]. Tato rostlina je rozšířena především ve Vnitřním Mongolsku, Sin-ťiangu a Gansu, kde parazitujeHaloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge, xerofytická pouštní rostlina Chenopodiaceae [3-4]. Primární aktivní složkyCistanche deserticolazahrnují fenylethanoidní glykosidy, iridoidy a polysacharidy [5-7], které vykazují vlastnosti, jako je ochrana reprodukční funkce, antioxidace a ochrana jater [8-10]. S více než 2 000 lety používání v Číně je na prvním místě v receptech tradiční čínské medicíny zaměřených na posílení vitality a na druhém místě v přípravcích proti stárnutí [11]. Nicméně, kvůli nadměrné sklizni a ničení životního prostředí, divoké zdrojeCistanche deserticolajsou na pokraji vyhynutí, což vede k jejich zařazení mezi národně chráněné rostliny (kategorie II) a zařazení doMezinárodní seznam ochrany volně žijících rostlin[12]. Aby se vyřešila nerovnováha mezi nabídkou a poptávkou na trhu s léčivy, stala se umělá kultivace zásadní pro udržitelný rozvojCistanche deserticolaprůmysl.

 

 

 

Extrakt z Cistanche deserticola na prodej

Kontaktujte nyní

 

 

 

Nedávné studie uvádějí úspěšné očkováníCistanche deserticolanaAtriplex canescens[13], stálezelený keř z čeledi Chenopodiaceae. Běžně označovaný jako „biologický odsolovač“,Atriplex canescensje vysoce kvalitní dřevina pro zlepšení slano-alkalické půdy [14]. PěstováníCistanche deserticolanaAtriplex canescensnabízí významné výhody, jako je vysoký výnos a vynikající kvalita. V důsledku toho hodnocení kvalityAtriplex canescens-Cistanche deserticolase stal aktivním bodem výzkumu [15-16]. Předchozí výzkum se zaměřoval především na léčivé vlastnosti sušenéhoCistanche deserticola, zatímco studie o aktivních složkách v čerstvé formě jsou stále vzácné. Zejména po zařazeníCistanche deserticolajako potravina a léčivá látka podléhající systému řízení zkoušek (Notice No. 9 of National Health Commission, 2023), jeho vývoj a využití jako dvouúčelové léčivé byliny získaly významnou pozornost v oblasti tradiční čínské medicíny [17]. ČerstvýCistanche deserticolaje oblíbený pro svou vynikající chuť a pohodlí, díky čemuž je velmi slibný pro vývoj. Čerstvé léčivé materiály jsou nezpracované čerstvé rostlinné, živočišné nebo houbové látky s terapeutickými nebo zdraví prospěšnými vlastnostmi. Mezi 2000 běžně používanými čínskými léčivými bylinami je 486 čerstvých odrůd [18].

Metoda ultravýkonné kapalinové chromatografie-triple quadrupole tandem mass spectrometrie (UPLC-QQQ-MS) je vysoce citlivá, díky čemuž je vhodná pro detekci nízkokoncentračních a komplexních složek [19]. K řešení problému vysokého obsahu vody vCistanche deserticola, kde jsou fenylethanoidové glykosidy náchylné k enzymatické hydrolýze vedoucí ke snížení obsahu, metoda sušení s inaktivací enzymů účinně zachovává obsah fenylethanoidních glykosidů [20]. Tato studie využívá UPLC-QQQ-MS k hodnocení 8 fenylethanoidových glykosidů, včetně echinakosidu a akteosidu, jako klíčových aktivních složek v čerstvémCistanche deserticolaze dvou hostitelských rostlin [21-22]. Studie zkoumá rozdíly v obsahu složek šťávy a zbytků z čerstvéhoCistanche deserticolapěstované na dvou hostitelích. Kromě toho byl zbytek podroben enzymatické inaktivaci při 80 stupních po dobu 5 minut s následným sušením, aby se dále porovnala retence aktivních složek vCistanche deserticola. Cílem zjištění je poskytnout vědecké důkazy a technickou podporu pro hodnotu čerstvého ovoce s dvojím účelemCistanche deserticolaa optimalizaci jeho zpracovatelských technik.

1 Nástroje a materiály

1.1 Nástroje

1290-6460 ultravýkonná kapalinová chromatografie-trojitý kvadrupólový tandemový hmotnostní spektrometr (Agilent Technologies, USA).

Elektronické analytické váhy AL104 (Mettler-Toledo, Švýcarsko).

H-2050R odstředivka (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).

Ultrazvuková čistička SB25-12DTD (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).

1.2 Materiály

TheAtriplex canescens-Cistanche deserticolaaHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolavzorky byly odebrány v březnu, dubnu a květnu 2024 zCistanche deserticolapěstitelská základna ve městě Xiquan, okres Jingtai, provincie Gansu. Vzorky identifikoval profesor Sun Xuegang z Gansu Agricultural University jako masité stonkyCistanche deserticola YC Mas listy šupin.

Referenční normy:

Echinakosid (číslo šarže: 23031605; čistota: 99,74 %).

Akteosid (číslo šarže: 21102103; čistota: 98,83 %).

Cistanosid A (číslo šarže: 23041703; čistota: 98,30 %).

Isoakteosid (číslo šarže: 23052508; čistota: 99,90 %).

2'-Acetyllakteosid (číslo šarže: 210053102; čistota: 97,12 %).

Salidrosid (číslo šarže: 22051208; čistota: 98,43 %).

Cistanosid B (číslo šarže: 20120903; čistota: 98,57 %).

Tubulosid A (číslo šarže: 21060302; čistota: 93,24 %).

Všechny byly zakoupeny od Chengdu Pfeide Biotechnology Co., Ltd.

Reagencie:

Methanol (číslo šarže: O1140576, chromatograficky čistý).

Acetonitril (číslo šarže: S3641440, chromatograficky čistý). Oba byly zakoupeny od Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd.

Kyselina mravenčí (číslo šarže: 20230710, chromatograficky čistá) byla zakoupena od Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd.

Čištěná voda (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).

2 Metody a výsledky

2.1 Metody

2.1.1 Příprava vzorku

Tři várkyAtriplex canescens-Cistanche deserticola(čísla šarží: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) a tři šaržeHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticola(čísla šarží: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), celkem bylo shromážděno šest šarží s pěti rostlinami na šarži. Rostliny byly omyty čistou vodou.

Zpracování:

Vzorky byly rozdrceny a odšťavněny, což vedlo ke šťávě a zbytku ze dvou hostitelských buněkCistanche deserticola.

Zbytky byly vysušeny za dvou podmínek:

Bez inaktivace enzymů.

S inaktivací enzymů (5 minut při 80 stupních v troubě).

Vysušené zbytky byly skladovány pro další analýzu. Každá šarže léčivého materiálu byla rozdělena do čtyř skupin, jak je uvedeno v tabulce 1.

 

Karta. 1 Ukázkové informace o seskupení

Skupina	Typ	Atriplex canescens-Cistanche deserticola	Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola
①	Zbytek	C1	S1
②	Šťáva	C2	S2
③	Enzymově inaktivovaný zbytek (5 min sušení, drcený)	C3	S3
④	Neenzymově neinaktivovaný zbytek (sušený a drcený)	C4	S4

 

2.1.2 Chromatografické podmínky

Sloupec: Kolona Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 (2,1 mm × 150 mm, 1,8 μm).

Průtok: 0,3 ml/min.

Objem vstřiku: 1 μL.

Teplota kolony: 35 stupňů.

Mobilní fáze: 0,1% kyselina mravenčí ve vodě (A) a acetonitril (B).

Čas analýzy: 12 minut.

Eluční gradient:

0–1,5 min: 10 % → 20 % B.

1,5–3 min: 20 % → 30 % B.

3–5 min: 30 % → 32 % B.

5–8 min: 32 % → 38 % B.

8–9,6 min: 38 % → 10 % B.

9,6–12 min: 10 % B.

Chromatogramy směsných referenčních standardů a zkušebních vzorků jsou uvedeny na obrázku 1.(Potvrďte prosím, zda je mobilní fází 0,01% kyselina mravenčí ve vodě (A) a acetonitril (B).)

Obr. 1 Chromatogramy referenčních látek (A) a vzorku (B) 1-salidrosidu; 2-echinakosid; 3−cistanosideA; 4-tubulosidA; 5-akteosid; 6-isoakteosid; 7-2'-acetylakteosid; 8-tubulosid B.

 

 

2.1.3 Podmínky hmotnostní spektrometrie

Typ zdroje iontů: Elektrosprejová ionizace (ESI).

Režim: Monitorování více reakcí (MRM) v režimu záporných iontů.

Teplota iontového zdroje: 350 stupňů.

Tlak nebulizátoru: 35 psi.

Kolizní plyn: Dusík, nastavený na střední úroveň.

Parametry hmotnostní spektrometrie pro složky, které mají být analyzovány, jsou uvedeny v tabulce 2.

---

2.1.4 Příprava smíšeného standardního roztoku

Přesně zvažte vhodná množství referenčních standardůechinakosid, akteosid, cistanosid A, isoacteosid, 2'-acetylakteosid, salidrosid, cistanosid Batubulosid Aa umístěte je do 10ml jantarových lahví na činidlo. Přidáním 50% methanolu připravíte směsný standardní roztok o koncentraci 0,2 mg·mL⁻¹ a uchováte jej pro pozdější použití.

---

2.1.5 Příprava testovacích roztoků

Odvažte přesně 0,2 g čerstvéhoAtriplex canescens-Cistanche deserticolazbytek (C1), čerstvýHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolazbytek (SI), vysušenAtriplex canescens-Cistanche deserticolazbytky (C3, C4) a suší seHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolazbytky (S3, S4). Vzorky se umístí do 10 ml jantarových odměrných baněk, přidá se 50% methanol, doplní se na objem a zaznamená se hmotnost. Namočte 0,5 hodiny, 40 minut ultrazvukujte (250 W, 35 kHz), ochlaďte na pokojovou teplotu a znovu zaznamenejte hmotu. Pro kompenzaci ztráty hmotnosti použijte 50% methanol, dobře promíchejte, odstřeďte a nechte roztok usadit. Supernatant se filtruje přes 0,22 μm mikroporézní membránu, aby se získal filtrát.

Pro čerstvéAtriplex canescens-Cistanche deserticolašťáva (C2) a čerstváHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolašťávy (S2), odeberte z každé 10 ml, přesně zvažte, dobře promíchejte, odstřeďte a nechte roztok usadit. Supernatant se filtruje přes 0,22 μm mikroporézní membránu, aby se získal filtrát.

---

2.1.6 Linearita studie

Příslušná množství smíšeného standardního roztoku připraveného v části 2.1.4 byla zředěna, aby se vytvořil koncentrační gradient51,2, 128,0, 320,0, 800,0, 4 000,0 a 20 000,0 ug·L⁻¹. Vzorky byly vstřikovány postupně od nízkých po vysoké koncentrace za podmínek popsaných v částech 2.1.2 a 2.1.3. Byla provedena lineární regrese s použitím injekční koncentrace jako osy X a plochy píku jako osy Y. Lineární vztahy osmi složek jsou uvedeny v tabulce 3.

 

Tab. 3 Výsledky vyšetření lineárních vztahů 8 komponent v tabulce Cistanches Herba

 

Komponent	Regresní rovnice	r	Lineární rozsah (ug·L⁻¹)
Echinakosid	Y = 16.410 × X − 0.804	0.9996	51.2–20,000.0
Akteosid	Y = 102.794 × X − 55.793	0.9998	51.2–20,000.0
Isoacteosid	Y = 31.007 × X − 45.169	0.9999	51.2–20,000.0
2'-Acetyllakteosid	Y = 110.235 × X − 8.953	0.9992	51.2–20,000.0
Salidrosid	Y = 19.678 × X − 0.557	0.9993	51.2–20,000.0
Tubulosid A	Y = 26.785 × X − 13.630	0.9997	51.2–20,000.0
Tubulosid B	Y = 71.810 × X − 0.993	0.9998	51.2–20,000.0
Cistanosid A	Y = 0.578 × X + 1.531	0.9994	51.2–20,000.0

 

2.1.7 Zkouška přesnosti

Smíšený standardní roztok připravený za podmínek v oddíle 2.1.4 byl zředěn 50% methanolem a injikován šestkrát po sobě za podmínek uvedených v oddílech 2.1.2 a 2.1.3. Relativní standardní odchylky (RSD) ploch píku proechinakosid, akteosid, isoacteosid, 2'-acetylakteosid, salidrosid, cistanosid B, tubulosid Aacistanosid Abyly 0,95 %, 1,47 %, 0,56 %, 1,05 %, 0,93 %, 1,08 %, 1,19 % a 0,91 %, v daném pořadí, což ukazuje na dobrou přesnost.

 

2.1.8 Test stability

Jediný vzorekCistanche deserticola(S4) byl připraven za podmínek popsaných v části 2.1.5. Zkušební roztok byl injikován a analyzován po 0, 2, 4, 8, 12 a 24 hodinách za podmínek popsaných v částech 2.1.2 a 2.1.3. RSD oblastí špičky proechinakosid, akteosid, isoacteosid, 2'-acetylakteosid, salidrosid, cistanosid B, tubulosid Aacistanosid Abyly 1,46 %, 0,79 %, 0,95 %, 1,29 %, 1,22 %, 0,56 %, 0,49 % a 1,18 %, v tomto pořadí, což ukazuje, že roztok vzorku byl stabilní během 24 hodin.

 

2.1.9 Zkouška opakovatelnosti

Jedna várkaCistanche deserticolaVzorek (S4) (číslo šarže: 20240420-2) byl připraven v šesti paralelních testovacích roztocích za podmínek popsaných v části 2.1.5. Vzorky byly nastříknuty a analyzovány za podmínek popsaných v oddílech 2.1.2 a 2.1.3. RSD obsahu proechinakosid, akteosid, isoacteosid, 2'-acetylakteosid, salidrosid, cistanosid B, tubulosid Aacistanosid Abyly 1,26 %, 0,98 %, 1,55 %, 1,06 %, 1,33 %, 0,99 %, 1,65 % a 0,95 %, v daném pořadí, což prokazuje dobrou opakovatelnost.

 

2.1.10 Test obnovy

Devět vzorků ze stejné šaržeCistanche deserticola(S4, číslo šarže: 20240420-2) s 0,1 g na vzorek. Vzorky byly rozděleny do tří skupin, se třemi replikáty na skupinu. Každá skupina byla obohacena o 80 %, 100 % a 120 % referenčního standardního obsahu vCistanche deserticolaochutnat. Zkušební roztoky byly připraveny podle metody popsané v oddíle 2.1.5 a analyzovány za podmínek v oddílech 2.1.2 a 2.1.3. Byly vypočteny výtěžky osmi fenylethanoidových glykosidů a výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.

 

Tab. 4 Míry obnovy 8 testovaných komponent v Cistanches Herba

 

Komponent	Ukázkový obsah (mg)	Zvýšený (mg)	Měřeno (mg)	Průměrné zotavení (%)	RSD (%)
Echinakosid	0.513 8	0.410 1	0.911 2	99.85	1.37
Echinakosid	0.513 8	0.513 8	1.015 2	99.88	0.95
Echinakosid	0.513 8	0.616 5	1.129 4	99.85	1.06
Akteosid	0.421 5	0.337 2	0.759 6	99.90	1.02
Akteosid	0.421 5	0.421 5	0.843 5	99.87	1.18
Akteosid	0.421 5	0.505 8	0.926 7	99.84	1.24
Isoacteosid	0.327 1	0.261 7	0.588 6	99.85	0.86
Isoacteosid	0.327 1	0.327 1	0.654 2	99.86	1.05
Isoacteosid	0.327 1	0.392 5	0.719 1	99.84	1.13
2'-Acetyllakteosid	0.110 2	0.088 2	0.198 3	99.87	1.15
2'-Acetyllakteosid	0.110 2	0.110 2	0.220 1	99.86	1.09
2'-Acetyllakteosid	0.110 2	0.132 2	0.242 4	99.85	1.21
Salidrosid	0.081 6	0.065 3	0.146 7	99.84	1.18
Salidrosid	0.081 6	0.081 6	0.163 1	99.85	1.02
Salidrosid	0.081 6	0.097 9	0.179 7	99.84	1.17
Tubulosid B	0.072 3	0.057 9	0.130 0	99.86	1.09
Tubulosid B	0.072 3	0.072 3	0.144 1	99.86	1.05
Tubulosid B	0.072 3	0.086 8	0.159 2	99.84	1.24
Tubulosid A	0.043 8	0.035 0	0.078 5	99.86	1.16
Tubulosid A	0.043 8	0.043 8	0.087 5	99.86	1.02
Tubulosid A	0.043 8	0.052 5	0.096 2	99.84	1.15