Stanovení Acteosidu A Echinacosidu Cistanche Tubulosa

[Abstraktní]Cíl: Sestavit metodu stanovení (účinná složka státu a echinacey) v Cistanche Tubulosa pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Porovnat obsah hlavní složky ve dvou biotopech, čtyřech hostitelích a čtyřech skupinách u Cistanche tubulosa. Poskytnout vědecké důkazy pro použití druhů Cistanche tubulosa. Metody: Použití Kromasil C18 (4,6 mm×250 mm, 5 μm) chromatografické kolony; Mobilní fáze: methanol, acetonitril-1% kyselina octová (1469∶77); Průtok: 1.0 ml·min-1; Detekční vlnová délka 334 nm; Teplota kolony byla 30 stupňů Výsledky: Dvě složky měly v testu dobrý lineární rozsah standardní křivky (r=0.999,9). Průměrná míra obnovy je 96,89 procenta a 100,7 procenta a procento RSD bylo 0,91 procenta a 1,96 procenta. Výsledky analýzy ukázaly, že existuje významný rozdíl mezi obsahem hlavních účinných složek (státní a echinakosid) v různých oblastech, šaržích a hostitelích u Cistanche tubulosa. Závěr: Metoda je jednoduchá, přesná a reprodukovatelná. Poskytuje experimentální základ pro léčivou hodnotu Cistanche tubulosa.

[klíčová slova] Cistanche tubulosa; akteosid; echinakosid; určení obsahu

Experiment Cistanche deserticola

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche

【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Cistanche deserticola byla poprvé zaznamenána v „Shennong Materia Medica Classic“ a je jedním z nejčastěji používaných léků v předpisech na tonizaci ledvin a posílení jangu. V posledních letech vedly rozsáhlé vykopávky Cistanche deserticola k rychlému snížení divokých zdrojů. Jako náhrada za Cistanche deserticola představuje trubkovitý květ Cistanche deserticola vyráběný v Sin-ťiangu 60 procent zásob země.

Cistanche prášek

Fenylethanolové glykosidy jako echinakosid a ergosterolové glykosidy jsou jednou z hlavních farmakologických složek Cistanche tubulosa. Echinosid má neuroprotektivní účinky [3], osteoprotektivní účinky [4] a účinky proti stárnutí [5]. Ergosterosid má účinky na zlepšení poruchy paměti, léčbu Alzheimerovy choroby a má účinky podobné androgenům. Tubulární Cistanche: také známý jako Hongliu Dayun, hostitelem jsou různé rostliny Tamarix L. [8-9]. Autor použil metodu HPLC ke stanovení obsahu výše uvedených dvou složek v Cistanche deserticola. Metoda stanovení a výsledky poskytují vědecký základ pro kontrolu kvality a léčivou hodnotu tohoto léku.

Fenylethanolglykosid je hlavní aktivní složkou Cistanche deserticola

1 Přístroj a testovací lék

Činidlo a testovací lék: Echinacetin (číslo šarže 111670-200401), ergosterol (číslo šarže 111530-200505), referenční látka poskytnutá Čínským institutem pro kontrolu farmaceutických a biologických produktů. Acetonitril a methanol jsou chromatograficky čisté, zatímco voda je ultračistá voda; Všechna ostatní činidla jsou analyticky čistá. Všechny léčivé materiály Cistanche deserticola byly shromážděny a identifikovány profesorem Ju Aihua z Lékařské univerzity Vnitřního Mongolska. Přístroj: American Agilent 1100 vysokoúčinná kapalinová chromatografie.

2 Metody a výsledky

2.1 Chromatografické podmínky a test adaptability systému

Chromatografická kolona: Chromatografická kolona Kromasil C18 (4,6 mm × 25 0 mm,5 μm）); Mobilní fáze: acetonitril methanol 1% roztok kyseliny octové (9:14:77); Detekční vlnová délka je 334 nm; Průtok rychlost: 1,0 ml · min-1; Teplota kolony 30 stupňů; Objem nástřiku 20 μl. Teoretický počet destiček by neměl být menší než 5000 na základě výpočtu glykosidů echinacey. Stupeň separace dvou farmakologických složek je dobrý, se stupněm separace větším než 1,5 od sousedních píků. (Viz obrázek 1-3)

Obrázek 1 Chromatogram referenční látky echinacetinu

Obrázek 2 Chromatogram referenční látky ergosterolu

Obrázek 3 Chromatogram Cistanche deserticola

2.2 Příprava roztoku vzorku

Přesně odvažte asi 0,5 g prášku Cistanche deserticola (prosátý přes síto 60 mesh) a vložte jej do 100 ml hnědé kuželové baňky. Přesně přidejte 50 ml mobilní fáze, zvažte hmotu, sonikujte po dobu 40 minut a umístěte ji při pokojové teplotě; Hmotu znovu zvažte, použijte mobilní fázi ke kompenzaci úbytku hmotnosti, dobře protřepejte, přefiltrujte, znovu odeberte filtrát a odložte stranou.

2.3 Příprava referenčního roztoku

Přesně odvažte vhodné množství referenčních materiálů echinacetinu a ergosterolu a přidejte mobilní fázi, aby se připravil roztok obsahující přibližně {{0}},14 mg echinacetinu a 0,10 mg ergosterolu na 1 ml, v daném pořadí.

2.4 Kontrola lineárního vztahu

Přesně navažte 6,4 mg referenční látky echinacey a 3.0 mg referenční látky ergosterolu, vložte je do 10ml odměrné baňky, nařeďte je mobilní fází a rovnoměrně protřepejte; Přesně nasajte 0.1, 0.25, 0.5, 1.0, 2.{16}} a 3.{21}} ml do odměrné baňky o objemu 5 ml, zředit na stupnici mobilní fází a protřepat; Respektive absorbujte 20 μ Inject L vzorku a měřte podle výše uvedených chromatografických podmínek. Osa Y představuje plochu píku a osa X představuje injekční objem. Nakreslete standardní křivku. Naměřená data ukazují, že množství Echinacetinu je 0,26 μg-7,75μ Mezi plochou píku a injekčním objemem je dobrý lineární vztah mezi g a regresní rovnice je Y=831.41X21. 88, R2=0,9999; Množství ergosterolového glykosidu je 0,30 μg-7,50μ Mezi plochou píku a injekčním objemem je dobrý lineární vztah mezi g a regresní rovnice je Y=671,53X plus 158,71, R{ {39}}.9999.

Echinosid, hlavní chemická složka Cistanche deserticola

2.5 Zkouška přesnosti

Přesně odvažte 0,5 g výše uvedeného léčivého prášku, připravte zkušební roztok podle metody popsané v bodě 2.2, vstříkněte 6 po sobě jdoucích časů a zaznamenejte plochy píků 2 složek. Procento RSD oblasti vrcholu jeho echinacosidu je 1,46 procenta; Obsah ergosterolglykosidu je 1,62 procenta.

2.6 Test stability

Vezměte {{0}},5 g prášku vzorku a připravte testovací roztok podle metody popsané v "2.2". Vstříkněte vzorek v 0, 1, 2, 4, 8 a 12 hodin po přípravě. Výsledky ukázaly, že procento RSD plochy píku Echinacetinu bylo 1,5 procenta; Obsah ergosterolglykosidu je 2,0 procenta.

2.7 Zkouška opakovatelnosti

Přesně zvažte 6 vzorků prášku ze stejné šarže vyrobené v Minfeng, Hotan, Xinjiang, každý o hmotnosti přibližně 0,5g. Připravte a změřte plochu píku podle metody uvedené v "2.2". Vypočítejte procento RSD plochy píku echinakosidu v 6 vzorcích jako 1,85 procenta a ergosterolu jako 1,93 procenta.

2.8 Přidání vzorku a test obnovy

Zvažte přesně 6 vzorků léčivého prášku ze stejné šarže vyrobené v Minfeng, Hotan, Xinjiang, přičemž každý vzorek váží přibližně 0,1 g. Přidejte určité množství echinacetinu a ergosterolu a připravte zkušební roztok podle metody popsané v bodě 2.2. Průměrná míra obnovy byla 96,89 procenta a 100,7 procenta v tomto pořadí, přičemž procento RSD bylo 0,91 procenta a 1,96 procenta. (Viz tabulky 1-2)

Tabulka 1 Výsledky testu obnovy glukosidu v ananasovém džusu

Tabulka 2 Výsledky testu obnovy glykosidu ergosterolu

2.9 Stanovení vzorku

Vezměte léčivý prášek Cistanche deserticola z každé zkumavky a postupujte podle metody v "2.2". Naměřené výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

Tabulka 3 Stanovení echinacetinu a ergosterosidu v Cistanche deserticola

3 Diskuse

3.1 Výběr mobilní fáze

Byly porovnány dvě sady mobilních fází: 1) methanol acetonitril 1% roztok kyseliny octové (14:9:77); (2) Methanol: 1% kyselina mravenčí (21,5:78,5). Výsledky ukázaly, že eluce mobilní fází (1) vedla ke střední relativní retenční době, menšímu počtu píku nečistot a dobré separaci dvou složek.

3.2 Volba podmínek extrakce

Byly porovnány účinky různých extrakčních metod (zahřívání pod zpětným chladičem, ultrazvuk) a extrakční doby (40 min, 50 min) na obsah účinných látek za použití mobilní fáze jako extrakčního rozpouštědla. Nakonec bylo zjištěno, že ačkoli byl nejvyšší obsah naměřen po zahřívání a refluxování po dobu 50 minut, nebylo na výběr kvůli špatnému tvaru píku. Obsah měřený ultrazvukem po dobu 40 minut a ultrazvukem po dobu 50 minut je podobný, proto byl jako extrakční podmínka zvolen ultrazvuk po dobu 40 minut.

3.3 Výzkum ukázal

Čínská bylina cistanche

Skutečnost, že různí hostitelé a stanoviště mají významné rozdíly v obsahu echinakosidu a ergosterolu v Cistanche deserticola, což naznačuje, že kvalitu léčivého materiálu významně ovlivňuje lokalita a hostitel. Systematické studium korelace mezi původem, hostitelem a kvalitou léčivého materiálu Cistanche tubulosa má proto velký význam pro výběr optimálních hostitelských rostlin a hodnocení kvality Cistanche tubulosa.

odkaz

[1] Chen Fei, Chen Zhuo, Xing Xuefei a kol. Pokrok ve výzkumu na Cistanche deserticola [J]. Drug Evaluation Research, 2013, 36 (6): 469-475

[2] Song Hailong, Jia Xiaoguang, Xie Haihui. Pokrok ve výzkumu chemických složek Cistanche tubulosa [J]. Tradiční čínská medicína Xinjiang, 2010, 28 (01): 76-78

[3] ZHU M,LUC,LIW. Přechodná expozice echinakosidu je dostatečná k aktivaci signalizace Trk a ochraně neu－ ronálních buněk před rotenonem [J].J Neurochem,2013,124(4): 571-580. [4] LIF YANG X,YANG Y,etal. Antiosteoporotická aktivita echinakosidu u krys po ovariektomii [J]. Fytomedicína, 2013, 20(6):549-557.

[5] XIE H, ZHU H, CHENG C, a kol. Echinakosid zpomaluje stárnutí buněk lidských fibroblastických buněk MRC-5[J]. Pharmazie, 2009, 64(11):752-754.

[6] Park Jinghua, Pu Xiaoping, Ma Jian a kol. Zlepšení poruchy získávání paměti vyvolané skopolaminem coeliaosidem [J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2001, 17 (6): 625-626

[7] Lai Qinghai, Wang Linlin, Ding Hui a kol. Pokrok ve výzkumu léčby osteoporózy pomocí Cistanche deserticola [J]. Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, 2016, 18 (3): 102-104

[8] Wang Changlin, Guo Yuhai, Tu Pengfei a kol. RAPD analýza parazitické Cistanche deserticola na různých druzích Tamarix [J]. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2009, 34 (3): 264-268

[9] Huang Xiaofang, Xu Rong, Chen Jun a kol. Stav výzkumu a vyhlídky týkající se charakteristik stanovišť, parazitních mechanismů a transportu živin Cistanche deserticola [J] Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 37 (19): 2831-2835