Asociace cytokinových genů s vlastním hodnocením ranní a večerní únavy u onkologických pacientů a jejich rodinných pečovatelů

Abstraktní

Cíle:Kultivovaná divokácistanche(cWG), tzvRoucongrong, byl klinicky používán u pacientů schronická únavav Koreji. Málo je známo o účincíchacistanchevyrobené destilované (těkavé) složkyběhem odpařování. Nedávno jsme jeden poprvé identifikovalihlavní složka z destilovaného extraktu cWG, panaxydol, pomocí hmotnostní spektrometrie. Nicméně funkčnívlastnosti cWG destilovaného extraktu a panaxydolu zůstávají zachoványnepolapitelný. Proto tato studie hodnotilaúčinek destilovaného extraktu cWG nebo panaxydolu na cvičení-indukovanýúnavau krys.

Metody: Únavabyla vyvolána nuceným plaváníma doba imobility byla analyzována u mužůKrysy Sprague-Dawley. Zvířata dostávala intraperitoneálněbuď vehikulum, cWG destilovaný extrakt nebo panaxydol 10 min před začátkem nuceného plavánítest (FST) jednou denně po dobu 5 dnů. Po FST dne 5.také jsme analyzovali biochemické úrovně související s únavou, včetněmočovinový dusík v krvi (BUN), kyselina laktátová (LAC),a laktátdehydrogenázy (LDH) v séru a hladináchglykogenu v játrech a m. soleus.

Výsledek:Nucená doba plavání v cWG destilovanáextraktem (0,6 ml/kg) léčené skupiny byla významnědéle než u kontrolní skupiny v den 4 a5. Skupiny léčené panaxydolem (0,1 a 0,25 mg/kg)prokázal výrazně lepší výkon vnucené plavání ve srovnání s kontrolou. Kromě toho abyl zjištěn významný pokles hladiny LDH v séruskupiny léčené panaxydolem, zatímco nebyly žádné střídánív hladinách sérového BUN a LAC a glykogenu vjater nebo m. soleus.

Závěr:Tato studie prokázala cWGdestilovaný extrakt a jeho účinná složka panaxydol majífunkceproti únavě.  

Kliknutím sem se dozvíte více informací o funkci proti únavě cistanche

1. Úvod

Únavaje pocit extrémní fyzické nebo psychické únavya vyčerpání jako jeden z běžných fyziologickýchreakce vyplývající z těžkého stresu, těžké fyzické popřduševní práce. Únava může být spojena s mnoha poruchamia je způsobeno především vyčerpáním zdrojů energiekteré zahrnují akumulaci konečných produktůúnava, pokles spotřeby jaterního glykogenu [1].Zejména fyzická únava je přechodná neschopnostsval pro udržení optimálního fyzického výkonu a jevyvolaná intenzivním fyzickým cvičením často vede k azhoršení výkonu, což způsobuje pokles svalové hmotysíly a vytrvalosti a v mentálních funkcích [2].cistancheje známá léčivá bylina a bylatradičně používaný jako protinádorový lék [3], antioxidant[4], protizánětlivé [5] a hypoglykemickévlastnosti [6]. cistanche byl také použit ke zvýšenífyzickou sílu, zejména u pacientů, kteří trpěliz těžké únavy [7, 8] a únavy související s rakovinou [9].Složky cistanche, jako jsou polysacharidy cistanchenebo oligopeptidy s malou molekulou izolované z Panaxcistancheprokázaly protiúnavovou aktivitu a účinkyna fyziologických biomarkerech únavy [10] a produkovalprotiúnavový účinek zvýšením nuceného plaváníčas a zesílení laktátdehydrogenázy (LDH)a hladiny glykogenu v játrech myší [11].Jako druh cistanche jsou korejské divoké cistanche (SanSam,horské cistanche) se přirozeně pěstují v hlubokých horácha v Koreji docela vzácné a drahé. Napodobovatpřirozeně pěstované cistanches, často se pěstují cistanchesv hlubokých horách a klasifikován do SanYangSam (cistanchepěstované v horách) a SanYangSanSam (divokýcistanchepěstované v horách nebo pěstované divoké cistanche,cWG), v závislosti na typech semen cistanche. Hrubé respdestilované extrakty z cWG (nazývané jako SanYangSanSam)bylo hlášeno, že mají protinádorový nebo rakovinový účinek [12,13]. Zejména destilované extrakty z cWG bylyklinicky se používá k injekci do akupunkturních bodů vKorea [13] a také se ukázalo, že snižují zánět vmodel potkana indukovaný lipopolysacharidem (LPS) [14] a oxidativnístres u obézních potkanů ​​[15]. Zatímco předchozí experimentálnístudie potvrdily účinnost cWGdestilovaný extrakt, aktivní složky cWG destilovanéextrakt a jejich biologické účinky jsou do značné míry neznámé.Nedávno pomocí kapalinové chromatografie-tandemové hmotyspektrometrie a kvadrupólové ortogonální zrychleníhmotnostní spektrometrií doby letu jsme zjistili, že cWG destilovalextrakt obsahoval jako hlavní složku panaxydola hladina panaxydolu byla asi 30krát vyšší nežty z cistanche pěstované v horách (SanYangSam)[16]. Jako cWG destilovaný extrakt byl dlouho používán klinickyza účelem zvýšení fyzické energie u pacientů s rakovinoutrpící únavou, cWG destilovaný extrakt a jeho majorsložka panaxydol může hrát roli při snižování únavy.Tato studie byla navržena tak, aby vyhodnotila účinek proti únavěvlastnosti cWG destilovaného extraktu a jeho aktivnísložka panaxydol u potkanů ​​provedením nucenéhoplavecký test a měření biomarkerů souvisejících s únavou[17] jako je dusík močoviny v krvi (BUN), kyselina mléčná (LAC),LDH a glykogen v játrech a svalech krys.

2. Materiály a metody

2.1. Zvířata

Samci krys Sprague-Dawley byli zakoupeni od Daehan animal Co. (Soul, Jižní Korea) o hmotnosti 270-320 ga byli chováni ve skupinách po 2-3 zvířatech na klec v apokojová teplota 22 ± 2 stupně s 12hodinovým cyklem světlo-tmaa dostávali ad libitum jídlo a vodu. Vše experimentálnípostupy byly provedeny v souladu s národníSměrnice institutu zdraví pro péči a použití laboratořezvířat a schváleno Institutional AnimalVýbor pro péči a používání na Univerzitě Daegu Haany aUniverzita Daejeon.

2.2. Experimentální návrhy

Pro testování byly provedeny dva samostatné experimentyhypotéza, že destilované vlastnosti cWG proti únavěextrakt a jeho aktivní složka panaxydol u potkanů ​​tímprovedení testu nuceného plavání a měření únavybiomarkery související s BUN, LAC, LDH aglykogenu v játrech a svalech krys. První experimentbyla provedena za účelem stanovení, zda cWG destilovaný extraktovlivňuje dobu nuceného plavání a hladiny glukogenu v játrecha m. soleus. Krysy byly tedy rozděleny do dvou experimentálníchskupiny: skupina ošetřená fyziologickým roztokem (n=6) a cWG disskupina ošetřená obdělaným extraktem (n=6). Druhý experimentbyla provedena, aby se zjistilo, zda panaxydol, aktivní složkacWG, mění dobu nuceného plavání, biochemhladiny jako BUN, LAC a LDH v séru a hladinyglykogen v játrech a svalech ploských. Pro tento experiment,krysy byly rozděleny do tří experimentálních skupin: vehikulum(n {{0}}), léčeni panaxydolem (0,1 mg/kg) (n=5) a panaxemydolem (0,25 mg/kg) léčených (n=5) skupin.

2.3. Drogy a chemikálie

Kultivovaná divoká cistanche (cWG, ChonBangNongSan Inc.,Chungnam, Korea), asi 8-10 let starý, byl použit. Theintaktní cWG byl promyt, vysušen a rozdrcen na velmi jemnéprášek (střední velikost částic, 7,5 um) za použití turbo mlýnu. Destilovanýextrakt z cWC (SanYangSanSam, 20 ml/lahvička)byl vyroben v Korejském institutu pro výzkum farmakopunktury(KPRI), jak bylo popsáno dříve [16] 16]. Poukazové vzorky(#CWG-2015-03-DE) byly uloženy naKPRI. Stručně řečeno, divoká cistanche byla promyta destilacívodou k odstranění nečistot a nečistot. Čtyři gramysušené divoké cistanche byly smíchány s 250 ml destilované vodyv kulaté desce a zahřátý na 80ºC přes uzavřenou smyčkuextrakční systém (KyungSeo machines Com., Incheon,Korea) (obr. 1A). Během 24 hodin zahřívání pára kondenzovalachlazením v systému s uzavřenou smyčkou a destilací cWGbyl získán extrakt asi 200 ml. Panadol bylzakoupené od Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd(Čcheng-tu, Čína). Hladiny BUN, LDH, LAC a glykogenubyly stanoveny pomocí IDEXX VetTest Chemistry analyzer (IDEXX Laboratories, Westbrook, Maine, USA). jinýchemikálie byly zakoupeny od Sigma Aldrich (St. Louis,MO, USA). Panaxydol byl rozpuštěn ve 100% ethanolu apoté před použitím naředit na fyziologický roztok. Vehikulum, cWG destilovaný extrakt({{0}},6 ml/kg) nebo panaxydol (0,1 a 0,25 mg/kg, jednou zaden) byla intraperitoneálně (ip) podávána 10 minut předdo začátku zkoušky nuceného plavání (FST) po dobu 5 dnů.

2.4. Zkouška nuceného plavání

Silový plavecký test (FST) byl proveden tak, jak je popsánodříve [1]. Ve stručnosti, krysy byly umístěny jednotlivědo plastové nádoby (30 x 30 x 80 cm) naplněné vodou(25 ± 5 stupňů) do hloubky 60 cm. Skleněná tyčinka (10 procent těla krysyhmotnost) byla připojena k proximální části ocasu krysy.Celková doba plavání byla zaznamenávána při fyzicsíla krysy byla vyčerpána a nemohla se zvednoutpovrchu déle než 10 sekund.

2.5. Biochemické měření krveparametry

Po poslední FST v den 5 byly odebrány vzorky krve (500 ul).z břišní aorty pod anestezií isofluranem(2 procenta) a přeneseny do heparinizovaných zkumavek. Sérumbyl získán centrifugací při 3000 ot./min při 4 stupních po dobu 10min a skladovány při -80 stupních až do další analýzy. Úrovněsérové ​​BUN, LAC a LDH byly stanoveny při 562 nmpomocí chemického analyzátoru suchých sklíček (sérum VetTest 8008chemický analyzátor a reagenční sklíčka VetTest, IDEXX LaboratoriesInc, Westbrook,. Maine, USA) podlepokyny výrobce.

2.6. Měření obsahu tkáňového glykogenu

Krysy byly usmrceny při 4~5% anestezii isofluranempo odběrech vzorků krve (2 procenta isofluranu).svalové tkáně jater a soleus. Hladiny glykogenu v játrecha soleus mucleus byly měřeny pomocí této metodypopsáno dříve [18] Stručně, po obětování proodběr krve, játra a m. soleus byly rychle vypreparoványven, zmrazený v tekutém dusíku a skladován při -80 stupníchdo použití. Každý vzorek (20 mg na tkáň) byl vařen v 2,0M HC1 při 100 stupních po dobu 1 hodiny a homogenizována. Po odstředěnívzorky byly neutralizovány 2,{1}} M NaOH aznovu odstřeďována při 3000 otáčkách za minutu po dobu 10 minut. Hladina glykogenubyla stanovena při 562 nm pomocí chemického analyzátoruVetTest 8008.

2.7. Statistická analýza

Data byla provedena pomocí softwaru SigmaStat 3 (Systat Software, Inc, San Jose, CA, USA) a prezentovány jakoprůměr ± SEM (standardní chyba průměru). Statistická analýzabyla analyzována t-testem, jednosměrnou nebo dvoucestnou opakovanou analýzourozptylu (ANOVA), následovaný post hoc testem s použitímTukeyho metoda. Statistická významnost byla uvažována při(*) P< 0.05 a (**)P< 0.01. 

3. Výsledky

3.1. Účinek cWG destilovaného extraktu natest nuceného plavání u krys

Účinek cWG destilovaného extraktu na nucené plaváníčas krys je uveden na obr.1. Nucené plaváníčas skupiny ošetřené destilovaným extraktem cWG v den 4a 5 byla významně delší než u kontroly s fyziologickým roztokemskupina (obr. 1B, opakovaný t-test; léčbaF(1,20) = 10.384, P  = 0.023; časF(4,20) = 20.165, P< 0.001;=""> F(4,20) =  2.609, P = 0.066).  3.2. Účinky destilovaného extraktu cWG na glykogenv játrech nebo m. soleus krys.Vyhodnotit, zda účinek cWG destilovaného extraktunucené plavání souvisí s hladinami glykogenu,hladiny glykogenu byly odhadnuty v játrech a m. soleuskrys po FST v den 5. Jak je znázorněno na obr. 2A a 2B,cWG destilovaný extrakt neovlivnil hladinu glykogenu vjátra (obr. 2A: t-test,F(1,10) = 0.056, P= 0.82) nebo m. soleus

3.3. Účinky panaxydolu na nucenéplavecký test na krysách

 Testovali jsme účinek panaxydolu, polyacetylenické komlibra nalezená vPanax cistanche, na FST u potkanů. Jak je znázorněnona obr. 3B, skupiny léčené panaxydolem (0.1 nebo 0.25 mg/kg)ve srovnání s výrazně vyšší dobou nuceného plaváníkontrolní skupině s vehikulem v den 4 a 5 (dvoucestné, ošetřment F(2,32){{0}},997, P < 0,001;="" čas="">(4,32)= 120.756, P <0.001; interakce F(8,32) = 1.531, P = 0.186). 3.4. Účinky panaxydolu na bio sérumchemické parametry krysHladiny sérových biomarkerů souvisejících s únavou, BUN, LAC,a LDH byly měřeny po poslední FST. Panaxydol mělžádný vliv na hladinu sérového BUN (obr. 4A; jednosměrný, F(2,12) =  0.5842, P=0.0573) nebo LAC (obr. 4B; jednosměrné, F(2,12) = 0.6488,  P=0.5401). Hladina LDH však byla zvýšena nuceněplavání, které bylo výrazně utlumeno pamlskems panaxydolem v dávce 0,1 mg/kg po dobu 5 dnů (obr.4C; jednosměrný, F(2,10) {{0}},65, P=0,003, P < 0,01 vs. vozidlo).

3.5. Účinky panaxydolu na glykogen konstanu ve svalové tkáni jater a plosky ponucené plaváníMěřili jsme také hladinu glykogenu v játrech a chodidlechus sval krys po FST v den 5. Jak je znázorněno na Obr.5A a 5B, panaxydol neměl žádný významný účinek na hladinuglykogenu v játrech (obr. 5A: jednosměrný, F(2,12) = 0.256, P = 0.78)  nebo m. soleus (obr. 5B: jednosměrný, F(2,12) = 0.715, P = 0.51) ve srovnání s kontrolní skupinou s vehikulem.

4. Diskuze

cistanche má různé farmaceutické vlastnosti jako napřprotinádorové [3], antioxidační [4] a protizánětlivé aktivity[5] a obnovení zhoršené paměti [19]. Panaxidol, ployacetylenová sloučenina izolovaná z cistanche,ukázal potenciální protirakovinné činidlo [20], protektivvliv na neurodegeneraci v kortikálních neuronech [21] anapodobuje účinek nervového růstového faktoru v buňkách PC 12[22]. Několik studií také prokázalo účinnostcistanchenebo hlavní aktivní složky cistanche, jako napřginsenosidy Rb1 a oligopeptidy s malou molekulou naúnava ze cvičení nebo únava související s rakovinou [11, 23, 24]. Většinapředchozí studie využívaly extrakt cistanche vodnýsurové extrakty shromážděné extrakcí/kondenzacíkroky: kořeny cistanche se namočí do vody nebo metanolu,filtrována a kondenzována odstraněním přebytečné vody podvysavače. Na druhou stranu se málo ví o účincíchcistanche destilovaných (těkavých) složek vyrobených durodpařování.Tato studie ukazuje poprvé, pokud je nám známo, že destilovaný extrakt z cistanche a jeho aktivní složkypanaxidol měl účinek proti únavě u potkanů ​​FSTModelka. Únava je jednou z nejčastějších fyziologickýchreakce se objevily z cvičení, deprese, stárnutí, rakoviny, roztroušená skleróza a Parkinsonova choroba. FST jenejplatnější model pro hodnocení protiúnavové aktivityširoké škály potravin nebo rostlinných sloučenin [2, 25-27] 25-27]. V souladu s předchozí studií [28] 28, naše výsledkyodhalil, že cWG destilovaný extrakt zvýšil nucenoudoba plavání ve srovnání s kontrolní skupinou s fyziologickým roztokem. V reklamězvýšil se také panaxidol, hlavní složka cWGnucený čas plavání. Tento výsledek naznačuježe protiúnavový účinek cistanche může být spojen saktivita panaxidolu při nuceném plavání vyvolanémúnava.Únava způsobená cvičením, jako je nucené plavání, můžebýt hodnoceny biochemickými indikátory, včetně BUN,Hladiny LAC a LDH v krvi. Tak jsme změřili hladinuséra BUN, LAC a LDH u krys, kterým byla podána nucená dávkaplavání a léčba panaxydolem. Dusík močoviny v krvije metabolickým produktem bílkovin a aminokyselin, užívanýdůležitý ukazatel pro hodnocení zátěžové vytrvalostia stav únavy [29]. Kyselina laktátová je považována za hlavníindikátor svalové únavy. Intenzivní cvičení vede k hromaděnílaktátu, což vede ke snížení pH krvea svalů a následná tvorba únavy [30] 30].Laktátdehydrogenáza je index svalového poškození akatalyzuje vzájemnou konverzi pyruvátu a NADH plus naL-laktát ve svalových buňkách. V naší současné studii opakovánoléčby panaxydolem v dávce 0,1 mg/kg významnězmírnil zvýšenou hladinu sérového LDH (majorenzym pro produkci laktátu) u krys nucených plavánízatímco hladiny sérového BUN nebo LAC se nezměnily. Tomůže naznačovat, že lepší výkon při nuceném plaváníje spojen s LDH. Je však nutnéprozkoumat, jak může panaxydol snížit aktivitu LDH apoškození svalů. Glykogen, který je hlavní skladovací formouglukóza v játrech nebo svalech je také indexem únavy [31]31]. Glykogen v játrech doplňuje spotřebukrevní glukózy k udržení krevní glukózy ve fyziologickém stavurozsah a únava nastává, když je většinou jaterní glykogenspotřebováno [32, 33]. V naší současné studii hladiny glykogenu vjater nebo m. soleus cWG- nebo panaxydolem ošetřených krysbyly nezměněny. Dohromady tomu tato zjištění naznačujípanaxydol může zlepšit fyzickou únavu regulacísérové ​​hladiny LDH u potkanů ​​nucených plavání.Jako další možný mechanismus jeproti únavěúčinekpanaxydol může regulovat prostřednictvím zmírnění oxidačního stresu.Je známo, že oxidační stres nastává po FST anásledně může vést k patologii a klinickým symptomůmúnavy [34-36]. Bao L a kol. prokázali, že cistanchezlepšila a inhibovala mitochondriální funkceoxidační stres v kosterních svalech myší po FSTcož může být jeho akční cestaproti únavěefekty[11]. Proto může panaxydol působit proti únavěsnížením hladiny indikátorů oxidačního stresu jako napřjako superoxiddismutáza nebo malondialdehyd v nucenémplavecký model. Měly by být provedeny další studiepotvrdit mechanismy, které jsou základemproti únavěúčinekpanaxydolu na únavu způsobenou nuceným plaváním.

5. Závěr

V této studii byla doba nuceného plavání v cWG disskupina ošetřená extraktem byla významně delší nežkontrolní skupina v den 4 a 5. Léčeno Panaxydolemskupiny vykazovaly výrazně lepší výkon vnucené plavání ve srovnání s kontrolou. Navíc významnýsnížení hladiny LDH v séru bylo zjištěno u panadolu-léčená skupina, zatímco u levels séra BUN a LAC a glykogenu v játrech nebo soleussval. Převzato z těchto výsledků, destilovaný extrakt z kultivovanýchdivoká cistanche a její účinná složka produkují panaxydolprotiúnavovou aktivitu snížením aktivity LDH u krysmodel nuceného plavání. některé pentacyklické triterpenoidy.