Kurkumin zmírňuje stárnutí mezenchymálních kmenových buněk psí kostní dřeně během in vitro expanze, část 2

Prosím kontaktujteoscar.xiao@wecistanche.comPro více informací

2.5. Autofagické inovoloes při uplatňování ochranného účinku Cur v cBMSC senescence

Aby se prozkoumal účinek autofagie indukované Cur na stárnutí cBMSC, úroveň autofagie byla modulována pomocí použití RAP (200 nM) nebo 3-MA (5 mM).3-MA má významný inhibiční účinek na autofagickou aktivitu, projevující se významnou downregulací exprese mRNA lehkého řetězce proteinu 1 asociovaného s mikrotubuly 3(LC3), genu souvisejícího s autofagií (ATG)7, ATG12 a autofagii aktivující kinázy podobné unc{12}} {14}}(ULK1); snížený poměr exprese lehkého řetězce proteinu 1 asociovaného s mikrotubuly typu Ⅱ/I (LC3-I/I); a zvýšenou expresi p62 ve srovnání s kontrolní skupinou (obrázek 5A, B). V souladu s tím byl ve srovnání se skupinou Cur pozorován pokles autofagické aktivity ve skupině 3-MA plus Cur (obrázek 5A, B). Na rozdíl od toho bylo ve skupině RAP pozorováno zvýšení autofagické aktivity, jak dokazuje zvýšená exprese mRNA LC3, ATG12 a ATG7; zvýšená konverze LC3-I na LC3-II; a degradaci p62 (obrázek 5A, B).

Nejprve byla systematicky zkoumána autofagická aktivita. Tvorba autofagických vakuol (také nazývaných autofagozomy) byla hodnocena morfologickým pozorováním a výsledky ukázaly, že ve skupině Cur a skupině RAP bylo více autofagických vakuol a teček LC3 ve srovnání s kontrolní skupinou, zatímco počet autofagických vakuol a méně LC3 teček bylo pozorováno ve skupinách 3-MA a 3-MA plus Cur (obrázek 5C, E). Kromě toho barvení LysoTracker ukázalo, že lysozomální acidifikace byla zvýšena pomocí RAP a Cur v cBMSC a snížena v skupiny 3-MA a 3-MA plus Cur (obrázek 5D). Výsledky ukazují, že Cur a RAP mají podobný pozitivní účinek na aktivaci autofagie a že autofagická aktivita je potlačena 3-MA.velikost penisu cistanche,Inhibiční účinky 3-MA na autofagii však lze částečně zachránit použitím Cura.

Kliknutím sem se dozvíte více

Abychom potvrdili, zda se autofagie účastní regulace stárnutí CB MSc, dále jsme zkoumali fenotypy spojené se stárnutím po podpoře nebo potlačení autofagie prostřednictvím farmakologické léčby. Výsledky ukázaly, že snížený počet SA- -gal-pozitivních buněk byl přítomen ve skupinách Cur a RAP, zatímco zvýšený počet SA- -gal-pozitivních buněk byl pozorován u {{5} } MA skupina ve srovnání s kontrolní skupinou. Je pozoruhodné, že počet SA- -gal-pozitivních buněk byl významně zvýšen ve skupině 3-MA plus Cur ve srovnání se skupinou Cur (obrázek). Výsledky analýzy RT-qPCR ukázaly, že léčba pomocí RAP a Cur zvýšila úroveň exprese SOX-2 a Nanog a snížila úroveň exprese IL-6, TNF-a, p21 a p16 ve srovnání s kontrolní skupinou. Inhibice autofagie pomocí 3-MA však upregulovala expresi p16, p21, TNF- a IL-6 (obrázek 6C-E). Kromě toho ve srovnání s kontrolní skupinou byla účinnost tvorby kolonií cBMSC zvýšena ve skupinách Cur a RAP, zatímco počet a velikost CFU-F byly významně sníženy ve skupině 3-MA. Kromě toho se ukázalo, že zvýšený účinek Cur na počet cBMSC tvořících kolonie lze zrušit předkondicionováním s 3-MA (obrázek 6B).cistanche prášekTyto důkazy naznačují, že RAP a Cur mohou zlepšit stárnutí cBMSC, zatímco 3-MA zhoršuje stárnutí cBMSC a zeslabuje příznivé účinky, které má Cur.

Celkově vzato tyto výsledky naznačují, že inhibice autofagie pomocí 3-MA urychluje stárnutí cBMSC, zatímco aktivace autofagie pomocí Cur a RAP zmírňuje stárnutí cBMSC (obrázek 6F). Pozoruhodné je, že ochranné účinky vyvíjené Cur byly zmírněny předúpravou s 3-MA (obrázek 6F), což naznačuje, že autofagie indukovaná Cur je potenciálním molekulárním mechanismem pro zlepšení stárnutí cBMSC.

3. Diskuse

Organismy nepřetržitě opravují poraněné tkáně a zpomalují procesy související se stárnutím díky výrazným funkčním charakteristikám MSC, které se rozsáhle nacházejí v různých tkáních a orgánech [15]. Bohužel věk a onemocnění jsou klíčovými faktory pro stárnutí MSC in vivo a vnitřní a vnější rozdíly v buněčných prostředích urychlují senescenci MSC in vitro kultivaci, což obojí negativně ovlivňuje jejich schopnost imunosuprese, diferenciace a migrace, což v konečném důsledku snižuje účinnost sebe sama. -oprava a transplantace v MSC [7,14,49-51].extrakt z cistanche salsyOja a kolegové naznačili, že lidské BMSC přestaly proliferovat při páté až deváté pasáži kultur klinického stupně a vykazovaly typické fenotypy stárnutí, jako je hypertrofická a plochá morfologie, aktivace inhibitorů kinázy buněčného cyklu p16 a p21, snížená rychlost proliferace a zvýšená aktivita SA- -gal [52]. Je zřejmé, že expanze in vitro nevyhnutelně vede k předčasnému výskytu stárnutí u MSC, které jsou považovány za důležitý modelový systém pro výzkum buněčného stárnutí in vitro [42, A4, A5]. Naše současná studie zjistila, že cBMSC před 3. pasáží vykazovaly jednotnou morfologii, ale bylo pozorováno, že prošly řadou změn, pokud jde o buněčnou morfologii, fyziologii a genovou expresi po 6. pasáži (obrázky 2 a 7), což je v souladu s předčasným stárnutím. .

Cistanche může proti stárnutí

Rostoucí množství důkazů ukazuje, že farmakologická stimulace je slibným přístupem k záchraně MSC před senescencí [53,54]. S ohledem na tuto skutečnost byla rozsáhle zkoumána řada přírodních a syntetických sloučenin, aby se určil jejich protizánětlivý, antioxidační a anti-senescenční potenciál in vivo a in vitro [15,55]. Cur jako přirozeně se vyskytující fenolová sloučenina vzbudil velkou pozornost díky svým příznivým účinkům na biologii MSC [36,37,56,57]. Před implementací různých biomedicínských výzkumů by však měly být pečlivě zváženy komplexní účinky expozice Cur na MSC. Yang a kolegové uvedli, že vysoké koncentrace Cur (50 a 100 uM) mohou vyvolat akutní toxické účinky v lidských BMSC in vitro, zatímco nepřetržitá expozice (7 d) 10 uM Cur inhibuje proliferaci lidského BMSC a indukuje buněčnou apoptózu [58]. Je zajímavé, že jiná studie naznačila, že léčba Cur(<20 um)for="" 5="" days="" ameliorates="" h,="" o,-induced="" oxidative="" stress="" in="" human="" adscs[56].="" additionally,="" cur="" preconditioning="" （1="" μm="" and5um）="" for="" 24="" or="" 48h="" can="" help="" to="" maintain="" cellular="" viability="" and="" improve="" the="" lifespan="" of="" rat="" adscs[36,57.="" our="" results="" demonstrated="" that="" cur(1="" um="" and="" 10="" μm）="" was="" able="" to="" maintain="" the="" viability="" of="" cbmscs="" and="" alleviate="" cbmsc="" senescence="" after="" exposure="" for="" 24="" h,="" while="" the="" colony-forming="" efficiency="" of="" cbmscs="" was="" significantly="" decreased="" at="" a="" dose="" of="" 10="" μm（figure="" 3）.="" therefore,="" the="" beneficial="" effects="" of="" cur="" （10="" umd="" may="" be="" attributed="" to="" short-term="" stimulation,="" and="" it="" can="" impair="" the="" proliferation="" potential="" of="" cbmscs="" in="" the="" long="">

Nedávno byly biologické aktivity Cur rozsáhle popsány na různých modelech in vitro nebo in vivo, zejména pokud jde o modulaci biologických charakteristik MSC. Aktivita Cur proti stárnutí byla často diskutována a bylo zjištěno, že Cur vykazuje příznivé účinky na stárnutí a nemoci související s věkem na úrovni organismu a buněk. Mechanismus jeho regulace je však komplikovaný kvůli různým dávkám a formám Cur a také mechanismu stárnutí [19]. Jako hlavní intracelulární mechanismus degradace molekul a přeměny organel hraje autofagie hlavní roli v ochraně MSC proti stresovým podmínkám a udržování buněčné homeostázy. Modulace autofagie je považována za novou strategii pro zlepšení funkcí MSC [59]. Podle údajů získaných z rozsáhlých studií má podpora nebo potlačení autofagie pomocí Cur v různých buněčných modelech uspokojivé cytoprotektivní účinky [38-40].cistanche stonekNaše data ukázala, že zvýšená autofagická aktivita byla pozorována po expozici Cur, jak bylo identifikováno upregulací genů souvisejících s autofagií (LC3, ULK1, Atg7 a Atg12), generací LC3-II, zvýšením počtu autofagické vakuoly a kyselé vezikulární organely a významný pokles hladiny proteinu p62 (obrázek 4). Kromě toho je lysozom považován za nepostradatelnou organelu pro autofagii, zatímco dysregulace lysozomálního pH a změna aktivity vakuolární H plus -ATPázy (v-ATPázy) byly pozorovány v procesu stárnutí MSC, což podporuje lysozomální acidifikaci a autofagii a přispívá k oddálení stárnutí MSC [60]. Yan a kolegové naznačili, že Cur může aktivovat funkci lysozomů myších embryonálních fibroblastů (MEF) a indukovat autofagii, která slouží jako klíčový signál pro přežití [38]. Podobně jsme pozorovali, že léčba Cur zvyšuje okyselení lysozomů v cBMSC (obrázek 4), což naznačuje, že Cur se může podílet na aktivaci funkce lysozomů, která je nezbytná pro zvýšení autofagické aktivity.

Autofagie je převážně cytoprotektivní mechanismus a stále více důkazů ukazuje, že vlastnosti přírodních a syntetických sloučenin proti stárnutí korelují s modulací autofagie [29,54,61,62]. Účinky autofagické modulace na senescenci MSC a odpovídající mechanismy však dosud nebyly plně vyhodnoceny a prozkoumány. První zprávy naznačovaly, že autofagie je převážně cytoprotektivní mechanismus a že zvýšená úroveň autofagie může oddálit stárnutí buněk snížením akumulace toxických metabolitů a obnovením funkce organel [63]. Je zajímavé, že nedávné výzkumy také ukázaly, že během senescence MSC byl pozorován zvýšený počet autofagických vakuol a proteinů souvisejících s autofagií (LC3-II, ATG7 a ATG12), zatímco inhibice autofagie pomocí bafilomycinu A1 a {{11 Ukázalo se, že MA snižuje procento SA- -gal-pozitivních buněk a expresi p16 a p21 [35]. Pro další objasnění vztahu mezi Cur-indukovanou autofagií a jejími účinky na cBMSC senescence byla autofagie modulována předléčením rapamycinem nebo 3-MA. Je zřejmé, že bylo zjištěno, že autofagická aktivita je zeslabena 3-MA, zatímco RAP a Cur (1 uM) významně zesilují autofagii (obrázek 5). V souladu s předchozími zprávami [5] naše zjištění také prokazují, že inhibice autofagie pomocí 3-MA urychlila buněčnou senescenci v cBMSC. Téměř konzistentní účinky na aktivaci autofagie měly Cur(1uMand RAP, zatímco analogické cytoprotektivní účinky v Byly zobrazeny cBMSC.V souladu s tím, když byla autofagie inhibována 3-MA, ochranné účinky vyvíjené Cur byly sníženy (obrázek 7), což naznačuje, že autofagie indukovaná Cur je potenciálním molekulárním mechanismem pro zlepšení stárnutí cBMSC (obrázek 7).

Za fyziologických podmínek probíhá autofagie na bazální úrovni ve všech eukaryotických buňkách, aby byla zachována buněčná homeostáza. Různé stresové podmínky však mohou vést k abnormální autofagii, která má vliv na buněčný osud, pokud není autofagie obnovena na optimální úroveň [41,44,64]. Naše důkazy potvrdily, že autofagie indukovaná Cur vykazuje příznivé účinky na regulaci stárnutí cBMSC. V tomto scénáři by měly být před léčbou Cur pečlivě zváženy různé stimuly produkující stres a extracelulární nastavení a bylo by zajímavé prozkoumat, zda autofagie indukovaná Cur může selektivně zlepšit funkci MSC v předem stanovené dávce a trvání. Kromě toho systém dodávání kurkuminu založený na nanotechnologii vykazoval lepší úroveň rozpustnosti a biologické dostupnosti ve vodné fázi [65,66]; mohl by to být slibný nástroj, kterým lze oddálit a působit proti stárnutí MSC. Odpověď na otázku, zda je autofagie primárním základním mechanismem při oddálení stárnutí MSC, stále vyžaduje více podrobností, které poskytne budoucí výzkum.

4. Materiály a metody

4.1.Zvířata

Vzorky kostní dřeně byly odebrány od 6 zdravých dospělých samic čínských venkovských psů (ve věku 12-měsíců). Všechny studie byly schváleny fakultním výborem pro péči a použití zvířat Sichuan Agricultural University (č. schválení.2020-0608) a byly provedeny v souladu s etickými standardy zákonů na ochranu zvířat v Čínské lidové republice.

4.2. Příprava roztoku kurkuminu

Cur (HPLC větší nebo rovno 98 procent , číslo CAS:458-37-7; Solar Science & Technology Co., Ltd., Peking, Čína) byl rozpuštěn v DMSO na zásobní koncentraci 20 mmol/ L. filtrován přes 0,22 μm organickou mikroporézní filtrační membránu a skladován při -80 stupni. Různé roztoky Cur byly připraveny v médiu pro in vitro studii.

4.3. Buněčná kultura a expanze

cBMSC byly získány z kostní dřeně. Buňky byly kultivovány v kompletním médiu sestávajícím z nízkoglukózového Dulbecco's Modified Eagle Medium (LG-DMEM, Gibco Grand Island, NY, USA), 10% fetálního bovinního séra (FBS, TransGen Biotech Co., Ltd., Peking, Čína ) a 1 procento penicilin/streptomycin. Při 80-90 procentech konfluence byly adherentní buňky uvolněny pomocí Trypsin Digestion Solution (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Čína) a dále expandovány v poměru 1:2-1:3 [67 ].

4.4. Buněčný růst Curie

Pro stanovení proliferační schopnosti cBMSC v pasážích (P) 3, 6 a 9 byly buňky naočkovány do tří 48-jamkových destiček (2500 buněk/jamku). Po 48 hodinách inkubace byly buňky uvolněny roztokem pro trávení trypsinu a spočítány pomocí hemocytometru. Postup počítání buněk se opakoval každých 48 hodin a trval 14 dní.

4.5. Detekce imunofenotypu cBMSC průtokovou cytometrií

Ve 3. pasáži byly cBMSC promyty PBS a trypsinizovány. Buňky (3x105 buněk/ml) byly resuspendovány v barvicím pufru a buněčné suspenze (100 μl) byly inkubovány s FITC, PE nebo APC fluorescenčně značenými monoklonálními protilátkami proti povrchovým antigenům CD45, CD34 a ITGB1 (eBioscience, San Diego, CA, USA) a nefluorescenčně značené CD31, CD90 a CD105 (Biosynthesis biotechnology Co.Ltd. Beijing, China) po dobu 15 minut při 4 stupních. Buňky byly promyty PBS a inkubovány s FITC-konjugovaným kozím anti-králičím IgG po dobu 15 minut při 4 stupních. Povrchové antigeny byly detekovány průtokovou cytometrií (FACS Calibur, Becton Dickinson, San Jose, CA, USA). Analýza dat byla provedena pomocí softwaru CytExpert.

4.6. In vitro diferenciační test

cBMSC byly naneseny v hustotě 5x104 buněk/ml do 6-jamkových destiček. Při 70-80 procentech konfluence bylo kompletní médium nahrazeno osteogenním nebo adipogenním diferenciačním indukčním médiem a měněno každé 3 dny (Cvagen, Suzhou, Čína). Depozice vápníku byla detekována barvením Alizarin Red S (Solarbio, Peking, Čína) po 3 týdnech osteogenní indukce a akumulace lipidových kapiček byla pozorována pomocí barvení Oil Red O (Solarbio, Beijing, Čína) po 2 týdnech adipogenní indukce.

4.7. Vliv Cur na buněčnou životaschopnost

Buněčná životaschopnost cBMSC byla stanovena pomocí sady CCK-8 (Vazyme Biotech Co., Ltd., Nanjing, Čína).výhody a vedlejší účinky cistanche tubulosacBMSC byly předkultivovány na 96-jamkové destičce po dobu 24 hodin. cBMSC byly ošetřeny Cur v různých koncentracích (0.1, 0.5, 1, 5 a 1{ {14}} umol/l) po dobu 12 hodin, 24 hodin, 48 hodin a 72 hodin. Buňky byly ošetřeny 0,1 procenta DMSO, který byl použit jako kontrola Po inkubaci s 10 μl roztoku CCK{17}} na jamku po dobu 2 hodin byla optická hustota měřena čtečkou mikrodestiček při 450 nm (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Relativní životaschopnost buněk byla vypočtena v souladu s pokyny výrobce.

4.8. Test tvorby kolonií

Účinnost samoobnovy cBMSC byla detekována pomocí testu jednotky tvořící kolonie-fibroblast (CFU-F). cBMSC byly nasazeny (3x 102 buněk/jamka) do 6-jamkových destiček. Po dvou týdnech kultivace byly buňky fixovány 4% paraformaldehydem po dobu 30 minut a pozorovány pod inverzním mikroskopem (LX73, Olympus Corporation, Tokio, Japonsko) po barvení 1 procentem krystalové violeti po dobu 10 minut. Pro CFU-F bylo spočítáno více než 50 buněk. Účinnost CFU-F byla vypočtena následovně:

Účinnost CFU-F=počet CFU-F/počet semen (300 buněk)[68].

4.9. Test barvení beta-galaktosidázou

Aktivita galaktozidázy asociované se stárnutím (SA- -gal) v cBMSC byla odhadnuta pomocí SA- -gal barvící soupravy (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, China) podle pokynů výrobce . Po obarvení byly buňky zkoumány pod inverzním mikroskopem. Pozitivně obarvené buňky byly spočítány, aby se vyhodnotila buněčná senescence.

4.10. Reverzní transkripce Kvantitativní PCR v reálném čase (RT-qPCR)

Celková RNA byla extrahována z buněčných pelet pomocí metody Trizol. cDNA byla syntetizována pomocí reagenční soupravy PrimeScriptTM RT s gDNA Eraser (Takara, Shiga, Japonsko). PCR primery (tabulka 2) kromě GAPDH s odkazem na předchozí studie [67] byly navrženy pomocí softwaru Primer Express (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) založeného na sekvencích cDNA. qPCR byla provedena pomocí TB Green PCR Mix (Takara, Shiga, Japonsko) na CFX96 Touch Real-time PCR Detection System (Bio-Rad, Richmond, CA, USA). Reakční podmínky byly následující: 95 stupňů po dobu 3 0 s a poté 39 cyklů po 95 stupních po 5 s a 60 stupňů po 30 s. Analýza křivky tání byla prováděna počínaje při 95 stupních po dobu 10 s, poté v rozmezí od 65 do 95 stupňů, se zvýšením o 0,5 stupně v každém cyklu. GAPDH byl použit jako vnitřní kontrola pro normalizaci všech dat a relativní exprese byla vypočítána pomocí srovnávací metody Cycle Threshold (Ct).

4.11. Sledování lusosomálního UI pomocí LysoTracker

Lyso-Tracker Red (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Čína) byl použit ke sledování lysozomů, které mohou vykazovat zvýšenou intenzitu fluorescence po okyselení lysozomů. Nasadili jsme cBMSC do 12-jamkových destiček a ošetřili jsme je Cur po dobu 24 hodin, poté byly buňky ošetřeny Lyso-Tracker (60 nM) a Hoechst 33,342 (2 ug/ml) po dobu 20 minut. Fluorescence byla pozorována pomocí inverzního fluorescenčního mikroskopu po promytí PBS.

4.12. Imunofluorescence

cBMSC (2x104 buňky/sklíčko) byly naočkovány na sklíčka a fixovány 4% paraformaldehydem po dobu 30 minut. Po společné inkubaci s 0,5% Tritonem X-100 po dobu 5 minut (Solarbio, Peking, Čína) byly řezy ponořeny do blokovacího roztoku na 30 minut. Uzavřená kapalina byla odstraněna a buňky byly inkubovány s anti-LC3B protilátkami (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA) přes noc při 4 stupních, poté inkubovány se sekundárními protilátkami konjugovanými s fluorochromem (Abcam, Cambridge, MA, USA) po dobu 50 minut při 37 °C. Nakonec byly buňky kontrastně obarveny DAPI (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Čína) a monitorovány pod konfokálním mikroskopem.

4.13 Analýza Western blotting

Vzorky buněk byly lyžovány tkáňovým a buněčným lyzátem (Solarbio, Peking, Čína) obsahujícím inhibitor proteázy po promytí ledově chladným PBS. Buněčné lyzáty obsahující 15 ug proteinu na vzorek byly vloženy do sodno-dodecylsulfát-polyakrylamidových (SDS-PA) (Solarbio, Peking, Čína) gelů a separovány elektroforézou. Po přenesení proteinů na polyvinylidenfluoridovou (PVDF) membránu byla tato membrána nespecificky blokována 5% odtučněným sušeným mlékem (Solarbio, Peking, Čína) po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Membrány byly přes noc inkubovány s primárními protilátkami anti-LC3B (1:2000, Abcam, Cambridge, MA, USA), anti-p62/SQSTM1 (1:4000, Novus Biologicals, Littleton, NH, USA a anti- -aktin (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA) při 4 stupních a bloty byly promyty TBST (Solarbio, Peking, Čína) před inkubací se sekundární protilátkou (1 :2000, Abcam, Cambridge, MA, USA) při 37 stupních po dobu 1 hodiny. Následně byly membrány vyvinuty vystavením chemiluminiscenčním činidlům (Millipore, Billerica, MA, USA) a vizualizovány pomocí ChemiDocTM Imaging Systems (Tanon-5200, Shanghai, Čína). Hustota pásů byla kvantifikována pomocí softwaru Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Silver Spring, MD, USA) pro každou skupinu a normalizována pomocí -aktinu.

4.14. Transmisní elektronová mikroskopie (TEM)

Buněčná peleta byla štěpena a shromážděna do 1,5ml centrifugační zkumavky, poté fixována 2,5% glutaraldehydem (Solarbio, Peking, Čína) po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Vzorky byly dodatečně fixovány 1 procentem oxidu osmičelého po dobu 1 hodiny po promytí PBS, poté jsme postupně zvýšili dehydrataci v roztocích acetonu a zalili je do 812 epoxidové pryskyřice (Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd., Bejing, Čína). Následně byly získány 50 nm řezy z ultramikrotomu (EM UC7, Leica Microsystems Co., Ltd., Heidelberg, Německo). Řezy byly obarveny octanem uranylu (Zhongjingkevi, Bejing, Čína) po dobu 10-15 min a citrátem olovnatým (Zhongjingkei, Peking, Čína) po dobu 2 min. Všechny vzorky byly pozorovány na TEM (EM-1400PLUS, JEOL, Akishima, Tokio, Japonsko).

4.15. Statistická analýza

Výsledky byly získány ze tří nezávislých experimentů a všechna data byla ukázána jako průměr ± standardní odchylky (SD). Statistické hodnoty byly analyzovány pomocí IBM SPSs Statistics 25 a znázorněny pomocí GraphPad Prism 9.0(GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Statisticky významné rozdíly byly stanoveny pomocí jednocestné analýzy rozptylu (ANOVA) a Studentova t-testu. p hodnoty<0.05 were="" considered="" to="" be="" significant="">

5. Závěry

Naše zjištění vrhají světlo na vztah mezi Cur, cBMSC senescence a autofagie. Údaje z naší studie naznačují, že Cur může zmírnit stav stárnutí cBMSC při aktivaci autofagie a podpoře lysozomální acidifikace. Kromě toho další důkazy ukázaly, že autofagie indukovaná Cur je potenciálním mechanismem pro zlepšení stárnutí cBMSC. Cur by mohl být slibným aktivátorem a konzervátorem pro zlepšení funkce MSC. Dle našeho názoru nelze opomenout pozitivní účinky Cur na stárnutí. Budoucí studie by se měly zaměřit na účinek regulace Cur na osud MSC, aby se zvýšil terapeutický potenciál MSC u různých onemocnění, jako je poškození tkání a degenerativní a zánětlivá onemocnění.

Tento článek je převzat z Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 11356. https://doi.org/10.3390/ijms222111356 https://www.mdpi.com/journal/ijms