Posílení protirakovinné aktivity taxolu „endofyt jojoby“ Aspergillus Favus prostřednictvím konjugace s nanočásticemi zlata zprostředkované ozářením Ⅱ

Chemická identita a protirakovinná aktivita taxolu A. favus

Předpokládané TLC skvrnyA. favusTaxol byl sešrotován a rozpuštěn v methanolu,a chemické vlastnosti sloučeniny byly rozlišeny z různých HPLC,HNMR a FT-IR chromatografické a spektroskopické analýzy. Protonové nukleární magnetickérezonanční signály (1 H NMR) zA. favusextrahovaný taxol byl distribuován mezi 1.0a 8.0 ppm, se třemi rozlišenými protonovými signály na 1.0–3.0 ppm odpovídající methylu,acetátové a acetylenové skupiny, zatímco protonové signály na úrovni 6,5–9.0 ppm odpovídajícíaromatické části (obr.3). Vzor a distribuce protonů signálůA. favusTaxol ověřuje strukturální identitu a podobnost vzorku se standardemTaxol (obr.3). Navíc Taxol zA. favusmá stejná FTIR spektra autentického Taxolu.Vrchol 3393,3 cm−1byl přiřazen pro hydroxyl (OH), zatímco pík při 2923,5 bylpřiřazeno alifatickému úseku CH, vrcholy na 1661.0 cm−1odpovídají C=Ofrekvence protahování. Pozorované vrcholy jsou 1452.0 cm−1a 1404.0NH natahovací frekvence, zatímco vrchol je 1109,0 cm−1se týká karbonylové skupinyfrekvence napínání kyslíku. Vrcholy v rozsahu mezi 1020,0 a 979,77 cm−1byliodkazuje na přítomnost aromatických C a H ohybů. Nesporně, spektrální vzorFTIR týkající se funkčních skupinA. favusTaxol byl identický s autentickýmTaxol (obr.3). Z chromatografické a spektrální analýzy vyplývá, že domnělývzorek byl vyřešen a ověřen jako taxolové sloučeniny ve srovnání s autentickýmsloučenina.

Klikněte sem a zjistěte čínské bylinky CistancheAntiproliferativní aktivita

Vliv různých typů médií na produkci taxolu A. favus

Vliv složení média na produkci TaxoluA. favusbyla vyhodnocenapěstováním na PDB, M1D, Czapek's-Dox a sladovém extraktu. Po kulturní inkubaciTaxol byl extrahován a kvantifikován, jak je popsáno v části Materiály a metody. zvýsledky na Obr.4, nejvyšší výtěžek Taxolu oA. favusse získával pěstováním na sladuextrakt (170 µg/l) a Czapek's-Dox (166 µg/l), ve srovnání s růstovým médiem PDB jako kontrolou(89 ug/l). Tedy výtěžek Taxolu podleA. favusse zvýšil přibližně 2krátpěstováním na médiu Czapek's-Dox a sladovém extraktu oproti kontrolnímu médiu.Takže další optimalizační studie pro maximalizaci výtěžku taxoluA. favuspodle odezvybyl implementován statistický přístup metodologie povrchu.

Optimalizace bioprocesních proměnných pomocí metodologie povrchu odezvyPlackett–Burman Design Screening pro kritické faktory

Výtěžek Taxolu podleA. favusbyl optimalizován statistickým experimentálním designemPlackett–Burman [18, 28]. Minimální a maximální rozsahy vybraných parametrůvybrané podle návrhu Plackett-Burman byly shrnuty v tabulce2. Koncentrace taxolu bylastanoveno pomocí TLC a HPLC. Všechny experimenty byly

byla uvažována průměrná koncentrace taxolu. Statistická analýza tohoto návrhu ilustrujethat the model F-value of 5.98 implies the model is significant and values of "Prob>F" méněprovedeny v trojím provedení anež 0.0500, jak je uvedeno v tabulce3. Skutečný a předpokládaný výtěžek Taxolu v reakci naexperimentální parametry, jak byly odhaleny z návrhu Plackett-Burman, byly ukázány zmatice v tabulce4. "Pred R-Squared" z 0.3061 není tak blízko "Adj R-Squared"z 0.5760, jak by se dalo normálně očekávat. Maximální aktuální (255,35 µg/l) a předpokládané(280,4 ug/l) výtěžek Taxolu podleA. favusna faktoriálním návrhu Plackett-Burman designbyla získána při běhu č. 8. Ze získaných dat (obr.4), nejvyšší výtěžek Taxolu oA. favus(225 ug/l) byl získán za použití sladového extraktu (20 g/l), peptonu (2 g/l), sacharózy (20 g/l), soytonu(2 g/l), cystein (0,5 g/l), glutamin (0,5 g/l), extrakt z hovězího masa (1 g/l), při teplotě inkubace30 stupně, počáteční pH 6,0 a po 12 dnech inkubace při rychlosti třepání (150 ot./min.). V této kulturníběh (12), výtěžek Taxolu podleA. favusse výrazně zvýšil asi 1,4krát,ve srovnání s kontrolním médiem (170 ug/l). Redukce modelu, transformace odezvy,a Adeq Precision měří poměr signálu k šumu a je žádoucí poměr větší než 4[46]. Na základě odhadnutého parametru a použitím vícenásobné regresní analýzy naexperimentální data, testovací proměnné a proměnná odezvy byly spojeny následujícím způsobemmodelová rovnice: rovnice prvního řádu z hlediska kódovaných faktorů — Taxol Con.= plus 11,51 plus 1,91E plus 2,92 J plus 0,81 K. Skutečné a předpokládané hladiny taxolu podleA. favusna Plackett-Burbioproces optimalizace člověka jsou shrnuty v tabulce4a Obr.4. Maximální skutečné(255,35 µg/l) a předpokládaný (280,4 µg/l) výtěžek Taxolu podleA. favuspodle faktoriálního návrhuPlackett-Burmanův návrh byl získán při běhu č. 8 se střední složkou. Účinek indivizuální parametry, jak byly odhaleny z designu Plackett-Burman, byly zastoupeny v ParetuGraf znázorňující pořadí významnosti proměnných podílejících se na produkci Taxolu Obr.4. Tedy nejvýznamnější proměnné ovlivňující produktivitu Taxolu tímA. favusbyly cystein,pH a inkubační doba, jak vyplývá z návrhu Plackett-Burman.

Design centrálního kompozitu s čelní plochou byl přijat pro další optimalizační studie pomocívýznamná proměnná oproti designu Plackett–Burman. Výsledky 20 běhů po třechproměnné s pozitivními účinky ukázaly, že produkce Taxolu se výrazně diverzifikovalas podmínkou byly testovány v rozmezí 96,5–302,7 µg/l. Maximální výtěžnostTaxol odA. favus(302,7 µg/l) bylo pozorováno s použitím cysteinu (0,50 g/l) při pH 6,0 a inkubovánopo dobu 15 dnů, jak je uvedeno v tabulce5. Minimální produkce taxolu byla zaznamenána přiběh číslo 15, kde cystein (1.0 g/l) při pH 7.0 a inkubováno po dobu 7 dnů. Statistickéanalýza návrhu lineárního modelu ukazuje, že F-hodnota je 87,08, což znamenásignificance of the model, and the values of "Prob>F" menší než 0.050 označuje tento modeltermíny jsou významné (tab6). Proto je významný cystein, pH a inkubační dobavzorové podmínky. Analýza odhalila, že "Pred. R-Squared" 0.8972 je v rozumné mířesouhlas s "Adj. R-Squared" z 0.9315. Poměr "Adeq. Precision" 30 800 opatřenípoměr signálu k šumu, protože je žádoucí poměr větší než čtyři, Adeq.Výsledky získané z CCD experimentu byly analyzovány ANOVA, která poskytlanásledující regresní rovnice na úrovni produkce Taxolu: model prvního řádu ekvpodmínky kódovaných faktorů — Taxol Conc.{{0}} plus 11,47 plus 1,60A plus 2,43B plus 0,67C. Trojrozměrnýkřivky povrchu odezvy znázorňující vliv interakcí nejvýznamnějšíchParametry převýšení, cystein, pH a inkubační doba jsou uvedeny na Obr.4.

Tabulka 2Minimum a maximumrozsahy zvolených parametrův P-BD pro optimalizaciProdukce taxolu

Tabulka 4Plackett-Burman design pro vyhodnocení faktorů ovlivňujících produkci TaxoluA. favus

proměnné s pozitivními účinky ukázaly, že produkce Taxolu se výrazně diverzifikovalas testovaným stavem v rozmezí 96,5–302,7 µg/l. Maximální výtěžnostTaxol odA. favus(302,7 µg/l) bylo pozorováno s použitím cysteinu (0,50 g/l) při pH 6,0 a inkubovánopo dobu 15 dnů, jak je uvedeno v tabulce5. Minimální produkce taxolu byla zaznamenána přiběh číslo 15, kde cystein (1.0 g/l) při pH 7.0 a inkubováno po dobu 7 dnů. Statistickéanalýza návrhu lineárního modelu ukazuje, že F-hodnota je 87,08, což znamenásignificance of the model, and the values of "Prob>F" menší než 0.050 označuje tento modeltermíny jsou významné (tab6). Proto je významný cystein, pH a inkubační dobavzorové podmínky. Analýza odhalila, že "Pred. R-Squared" 0.8972 je v rozumné mířesouhlas s "Adj. R-Squared" z 0.9315. Poměr "Adeq. Precision" 30 800 opatřenípoměr signálu k šumu, protože je žádoucí poměr větší než čtyři, Adeq.Výsledky získané z CCD experimentu byly analyzovány ANOVA, která poskytlanásledující regresní rovnice na úrovni produkce Taxolu: modelová rovnice prvního řádupodmínky kódovaných faktorů — Taxol Conc.{{0}} plus 11,47 plus 1,60A plus 2,43B plus 0,67C. Trojrozměrnýkřivky povrchu odezvy ukazující vliv interakcí nejvýznamnějšíchparametry, cystein, pH a inkubační doba, jsou uvedeny na Obr.4.