Trénovaná imunita indukovaná BCG zlepšuje odezvy na acelulární vakcinaci proti černému kašli v průzkumné randomizované klinické studii

ÚVOD

Černý kašel je vysoce přenosné akutní respirační onemocnění způsobené bakterií Bordetella pertussis a navzdory vysokému pokrytí očkováním se znovu objevilo jako závažný problém veřejného zdraví1. Po léta byla nemoc v průmyslových zemích kontrolována očkováním celobuněčnými vakcínami proti černému kašli (wP), které byly zavedeny ve 40. letech-1950. Tyto vakcíny byly vysoce účinné a vyvolávaly dlouhodobou ochranu.

Vysoká reaktogenita a obavy o bezpečnost však vedly k jejich nahrazení v 90.–2000 letech acelulárními vakcínami proti černému kašli (aPs). Krátce poté byly zavedeny aP booster vakcíny, včetně kombinovaných vakcín, které obsahují tetanový a difterický toxoid (Tdap) buď s nebo bez inaktivovaného polioviru (IPV) (Tdap-IPV). aP vakcíny jsou nyní široce používány k posílení imunity u předškolních dětí, dospívajících a dospělých. Navzdory těmto opatřením a jejich zlepšenému bezpečnostnímu profilu četné studie prokázaly, že indukovaná imunita zůstává suboptimální2 a postupem času slábne3. Kromě toho se doba trvání ochrany po opakovaných dávkách aP progresivně zkracuje4–6. Rostoucí potřeba nových a vylepšených očkovacích strategií vedla ke zkoumání nových adjuvans, které se zaměřují na vrozenou imunitu a zvyšují specifickou imunitu vůči aPs7–9.

Kombinované vakcíny mohou posílit imunitu. Kombinované vakcíny jsou kombinací několika různých vakcín zabraňujících onemocnění, které poskytují vícenásobnou ochranu pacientům současně a snižují stres a bolest při podávání více injekcí. Současně může kombinovaná vakcína také zlepšit imunitu očkovaných, protože může stimulovat více imunitních reakcí a produkovat více protilátek a imunitních buněk, čímž účinně zlepšuje schopnost předcházet mnoha různým onemocněním. Zlepšení imunity je v našem každodenním životě velmi důležité. Cistanche může posílit imunitu. Polysacharidy v mase mohou regulovat imunitní odpověď lidského imunitního systému, zlepšovat stresovou schopnost imunitních buněk a posilovat sterilizační účinek imunitních buněk.

Kliknutím se dozvíte, co je cistanche

Vakcína Bacille Calmette-Guérin (BCG) chrání před mykobakteriálními infekcemi, jako je tuberkulóza10, a také chrání před sekundárními infekcemi nepříbuznými patogeny u myších modelů1. U lidí byly tyto nespecifické příznivé účinky spojeny se sníženou kojeneckou úmrtností11,12 a byly ověřeny v randomizovaných klinických studiích10,13. BCG indukuje dlouhodobé změny v buňkách vrozené imunity, které zvyšují jejich schopnost reagovat na stimulaci nepříbuznými patogeny. Tento proces zvaný trénovaná imunita zahrnuje epigenetické přeprogramování monocytů a přetrvává až rok po vakcinaci BCG14. Klinický význam trénované imunity byl prokázán u lidí prostřednictvím studií, které používají BCG jako prototyp pro indukci trénované imunity a vakcinaci nebo experimentální lidské infekce jako sekundární imunitní poruchu15–17. Hromadí se důkazy, že BCG vakcinace moduluje adaptivní imunitní reakce na vakcíny. Z osmi studií, které byly hodnoceny v nedávném přehledu, pět prokázalo zvýšenou humorální odpověď specifickou pro vakcínu18.

Snahy o vymezení interagujících účinků BCG a pertusových vakcín naznačují, že BCG-indukovaná trénovaná imunita může mít pozitivní vliv na imunitní odpověď na pertusi. U myší předchozí vakcinace BCG zvýšila Th1 a humorální imunitní reakce po aP, ale ne vakcinaci wP19. U lidí jedna populační studie ukázala, že současné podávání BCG s očkováním proti černému kašli snižuje úmrtnost kojenců20 ve srovnání s postupným podáváním vakcín. Pokud je nám známo, žádná studie dosud v randomizované kontrolované studii nezkoumala, zda trénovaná imunita moduluje imunitní odpovědi na vakcíny proti černému kašli, nebo porovnávala načasování podání BCG vakcinace ve vztahu k druhé vakcinaci nebo čelenži.

Zde jsme testovali, zda vakcinace BCG ovlivňuje adaptivní imunitní odpověď na očkování a zda je s těmito reakcemi spojena trénovaná imunita. Ukázali jsme, že BCG-indukovaná trénovaná imunita zvyšuje aP-specifickou protilátku, aP-specifické Th1 buněčné reakce a celkové paměťové B buněčné reakce 2 týdny po imunizaci Tdap-IPV. Tato zvýšení pozitivně korelovala se zvýšenými trénovanými biomarkery imunity, včetně IL-1 a IL-6. Naše zjištění zdůrazňují roli trénované imunity indukované BCG vakcinací při potencování imunity proti pertusi vakcínám.

VÝSLEDEK

Studovat design

Seventy-five healthy female volunteers were randomized to one of three cohorts to receive BCG and Tdap-IPV vaccines in different orders21. We chose to enroll only women since gender-specific effects of pertussis vaccines have been reported 22. The median age of the volunteers was 23, with no significant difference in age between cohorts (Kruskal–Wallis test; P = 0.6), as previously reported21. Two subjects were excluded from analysis for having a high anti-pertussis toxin IgG concentration before Tdap-IPV vaccination (>100 IU/ml), svědčící o nedávné infekci pertusí23,24 (obr. 1a).

K identifikaci změn v odpovědi na TdapIPV vakcínu, které jsou spojeny s trénovanou imunitou, byla „BCG-trénovaná“ kohorta podána BCG 3 měsíce před TdapIPV. Zahrnuli jsme také dvě kontrolní kohorty, abychom zohlednili načasování BCG vakcinace. Skupina „BCG plus Tdap“ dostala obě vakcinace do opačných končetin současně a kohorta „Tdap-IPV“ obdržela nejprve Tdap-IPV a BCG o 3 měsíce později (obr. 1b). Krev byla odebrána v několika časových bodech před a po očkování. Časová razítka jsou definována vzhledem k výchozí linii očkování Tdap-IPV (-M3=3 měsíců před, -M3 plus W2 = 3 měsíců před plus 2 týdny, D0=výchozí hodnotě Tdap-IPV nebo souběžné očkování BCG a Tdap-IPV, W2=2 týdnů poté, M3 plus W2=3 měsíců plus 2 týdny poté, Y1=1 rok poté). Primární výsledky byly specifikovány jako zvýšení adaptivních imunitních odpovědí 2 týdny nebo 1 rok po Tdap-IPV vakcinaci.

Celkem jsme hodnotili 31 imunologických výsledků ve třech očkovacích kohortách. K měření koncentrací protilátek IgG proti pertusovým antigenům pertusovému toxinu (PT), vláknitému hemaglutininu (FHA), pertaktinu (PRN) a také difterickému toxoidu (DIPH) a tetanovému toxinu (TET) jsme použili multiplexní imunotest na bázi kuliček. Celkové B-buňky a PRN-specifické B-buňky byly měřeny přímo v plné krvi průtokovou cytometrií s použitím fluorescenčně značené PRN (doplňkový obr. 1). Odpovědi Th1 a Th17 T-buněk proti pertusovým antigenům byly měřeny stimulací mononukleárních buněk periferní krve (PBMC) buď PRN, PT nebo FHA po dobu 7 dnů a měřením secernovaného IFN, IL22 a IL-17 pomocí ELISA26.

BCG vakcinace zvyšuje cytokinové reakce imunitních buněk na nesouvisející stimuly, což je jev, který byl vysvětlen dvěma různými biologickými mechanismy. První proces se nazývá heterologní imunita a závisí na nespecifické aktivaci T buněk27,28. Druhý proces zvaný trénovaná imunita má za následek zvýšenou produkci prozánětlivých cytokinů buňkami vrozené imunity14. Definovali jsme sekundární výsledky pro kohortu trénovanou BCG jako změny v produkci cytokinů PBMC po stimulaci teplem usmrcenými Candida albicans (C_alb), Staphylococcus aureus (S_aur), Bordetella pertussis (Bp) nebo lipopolysacharid (LPS). Stejně jako v předchozích studiích16,21 jsme kvantifikovali Th1/17 cytokiny IFN, IL-22 nebo IL-17 po 7 dnech jako výsledek pro heterologní imunitu nebo cytokiny odvozené od monocytů IL-10 , IL-6, IL-1 nebo TNF po 24 hodinách jako výsledek pro trénovanou imunitu (obr. 1b). Pro kvantifikaci antimykobakteriální imunity byla měřena produkce cytokinů v reakci na sonikované Mycobacterium tuberculosis (Mtb).

Předchozí BCG vakcinace zvyšuje Tdap-IPV-indukované adaptivní imunitní reakce

Abychom kvantifikovali účinky trénované imunity na vakcinaci Tdap-IPV, pro každý primární cílový bod jsme zkonstruovali lineární model smíšených účinků s časem vzorku, členstvím v kohortě a také interakcí času a kohorty jako kovariát. Zkoumali jsme dva kontrasty: (i) rozdíly ve srovnání s výchozí hodnotou (D0) v rámci každé kohorty (postvakcinační účinky, doplňková tabulka 1) a (ii) rozdíly mezi kohortami ve velikosti těchto změn (rozdíl účinky, doplňková tabulka 2). Všechny kohorty zaznamenaly po imunizaci Tdap-IPV významný nárůst protilátkových odpovědí na pět antigenů. Koncentrace protilátek zůstávaly vyšší než výchozí hodnoty až do jednoho roku po vakcinaci (Y1), s výjimkou TET, který ubýval v kohortách BCGtrained a BCG plus Tdap (doplňkový obrázek 2a).

Všechny kohorty měly významně zvýšený počet cirkulujících PRN plus B buněk 2 týdny po imunizaci, což byly hlavně paměťové B buňky (MBC) (doplňkový obr. 3a). Nepozorovali jsme rozdíly mezi kohortami (doplňková tabulka 2 a doplňkový obrázek 3b). Ve srovnání s kohortou Tdap-IPV vykazovala kohorta trénovaná na BCG zlepšené log1{{1{17}}}}násobné změny (W2/D0) normalizované výchozí hodnoty pro odpovědi IgG na PT, FHA a PRN. Podobný vzorec byl pozorován při srovnání těchto odpovědí s kohortou BCG plus Tdap (obr. 2a). Také jsme pozorovali zvýšené koncentrace IgG specifických pro černý kašel v kohortě vyškolené BCG 2 týdny po vakcinaci (doplňkový obr. 2b), ačkoli rozdíl v absolutních hodnotách byl méně výrazný než rozdíl ve zvýšeních, která jsou vzhledem k výchozí hodnotě při D0.

Kromě toho subjekty v kohortě trénované BCG vykazovaly významně zvýšené celkové odpovědi MBC, včetně MBC se změněnou třídou IgG (obr. 2b a doplňkový obr. 4). Subjekty v BCG-trénované kohortě také vykazovaly zvýšenou sekreci IFN v reakci na stimulaci všemi třemi pertusovými antigeny. Naopak, významné zvýšení bylo pozorováno pro jeden pertusový antigen v kohortě Tdap-IPV (PT) a dva pertusové antigeny v kohortě BCG plus Tdap (PT a FHA, obr. 2c a doplňkový obr. 5). Pozorovali jsme také trend, kdy zvýšení produkce IFNg bylo vyšší v kohortě trénované BCG než v ostatních kohortách, i když to nedosáhlo statistické významnosti (doplňková tabulka 2 a doplňkový obrázek 5b). Odpovědi na IL-22 a IL{13}} specifické pro černý kašel byly slabé pro všechny kohorty (doplňková tabulka 1). Celkově tato zjištění poukazují na zesílené odpovědi specifických protilátek proti černému kašli, zesílené celkové IgG-switched MBC odpovědi a širší odpovědi IFN specifické pro černý kašel v kohortě trénované BCG ve srovnání s ostatními dvěma kohortami.

Zkoumali jsme vztahy mezi nárůsty primárních výsledků, které byly zlepšeny v kohortě s BCG. Pro tuto průzkumnou analýzu byly pro každou kohortu vypočítány korelace mezi protilátkami, B-buňkami a cytokiny. BCG-trénovaná kohorta vykazovala mnoho významných a kvantitativně silnějších pozitivních korelací mezi těmito odpověďmi, zatímco kohorty Tdap-IPV a BCG plus Tdap vykazovaly slabší nebo inverzní korelace, přičemž nejsilnější vzor odpovídal změnám v odpovědích IFN (obr. 3a). Korelační koeficienty mezi reakcemi v BCG trénovaných byly významně vyšší než v kontrolních kohortách, což dohromady ukazuje na indukci více koordinované adaptivní imunitní reakce specifické pro černý kašel v BCG trénované kohortě (obr. 3b).

Produkce cytokinů IL-1 a IL{1}} je spojena s adaptivními imunitními reakcemi specifickými pro pertusi

BCG-trénovaná kohorta vykazovala zvýšené celkové IgG-switched MBC a pertussis-specifické IFN odpovědi. Kromě toho, ve srovnání s kohortami Tdap-IPV a BCG plus Tdap, kohorta vyškolená na BCG také vykazovala vyšší odpovědi protilátek proti černému kašli. Vzhledem k tomu, že BCG vakcinace u lidí může zvýšit produkci cytokinů cirkulujících imunitních buněk v reakci na heterologní stimulaci, týdny až měsíce po vakcinaci27, hodnotili jsme, zda tyto cytokinové reakce indukované BCG byly spojeny se změnami v imunitních reakcích specifických pro pertussis po vakcinaci Tdap-IPV. Dva týdny a 3 měsíce po BCG vakcinaci byla významně zvýšená antimykobakteriální odpověď charakterizovaná zvýšenou produkcí IL-22 a IFN ve srovnání se základní linií BCG vakcinace (doplňkový obr. 6a, b).

Celkově skupina trénovaná BCG nevykazovala zvýšenou produkci heterologní imunity nebo trénovaných cytokinů spojených s imunitou, jak bylo dříve pozorováno (doplňkové obrázky 6 a 8)21. Protože se však indukce produkce cytokinů mezi jednotlivci lišila, vypočítali jsme změny mezi 2 týdny po BCG a 3 měsíci po BCG ve srovnání s výchozí hodnotou BCG (doplňkové obrázky 7 a 9). Pearsonovy korelace byly vypočteny pro stanovení síly asociace mezi těmito měřeními v každém časovém bodě. Tři měsíce po vakcinaci BCG, tj. na výchozí hodnotě Tdap-IPV, byly cytokinové odpovědi na stimulaci in vitro vysoce korelované. Heterologní cytokinové odpovědi spojené s imunitou negativně korelovaly s trénovanými cytokinovými odpověďmi spojenými s imunitou a mezi nimi byly korelace mezi IL-6 a IL-1 nejsilnější (obr. 4), jak již bylo popsáno dříve16. Vzorce korelace 2 týdny po vakcinaci BCG byly podobné pro heterologní cytokiny spojené s imunitou, ale korelace mezi trénovanými cytokiny spojenými s imunitou byly mnohem slabší, s výjimkou odpovědí IL-10. Celkově vzato tyto výsledky ukazují na koordinovanou vrozenou imunitní aktivaci 3 měsíce, ale ne 2 týdny po BCG imunizaci v kohortě trénované BCG.

Dále jsme zkoumali, zda variace v cytokinových odpovědích kohorty trénované BCG byly spojeny se změnami v koncových bodech adaptivní imunity TdapIPV. Zkoumali jsme změny v produkci cytokinů 2 týdny a 3 měsíce po BCG vakcinaci. Zjistili jsme, že zvýšení cytokinů spojených s heterologní imunitou mělo tendenci slabě a negativně korelovat s primárními cílovými body jak 2 týdny (doplňkový obr. 10), tak 3 měsíce po BCG vakcinaci (obr. 5a). Naproti tomu zvýšení trénovaných cytokinů spojených s imunitou 3 měsíce po vakcinaci BCG, zejména IL-1/IL-6 v reakci na stimulaci LPS, významně pozitivně korelovalo s protilátkovými odpověďmi PRN a FHA, produkcí IFN v reakce na PT stimulaci a celkové IgG-switched MBC reakce (obr. 5b, c).

V souladu s tím jsme nepozorovali změny v relativním množství počtu periferních krvinek (doplňkový obrázek 11a), ani změny v buněčném množství 3 měsíce po vakcinaci BCG pozitivně nekorelovaly s koncovými body pertussis (doplňkový obrázek 11b). Zvýšení produkce IL-1 v reakci na stimulaci LPS (IL1b. LPS) 3 měsíce po vakcinaci BCG ukázalo silnou souvislost s vícenásobnými odpověďmi Tdap-IPV a bylo vybráno, aby se určilo, jak velkou variaci každé odpovědi mohou vysvětlit . Vysvětlený celkový rozptyl (předpovězený Rsq) pro každý výsledek byl vypočten a změny v IL-1 mohly vysvětlit až 60 procent variace odpovědi (obr. 5d). Celkově tyto výsledky zdůrazňují, že trénované cytokinové odpovědi spojené s imunitou 3 měsíce po BCG vakcinaci korelují se zvýšením odpovědí specifických protilátek proti černému kašli a produkcí IFN, stejně jako s celkovými IgG-switched MBC odpověďmi.

DISKUSE

K indukci trénované imunity u lidí dochází týdny až měsíce po BCG vakcinaci14 a může ovlivnit odpověď na následnou imunizaci u lidí16,17. Zde ukazujeme, že trénovaná imunita, která je indukována BCG vakcinací 3 měsíce před, ale nikoli souběžně s posilovací dávkou Tdap-IPV, zvyšuje odpovědi IgG proti černému kašli a moduluje buněčné odpovědi specifické pro černý kašel. Několik studií zkoumalo vzájemně se ovlivňující účinky BCG a dalších vakcín, přičemž většina z těchto studií uvádí pozitivní účinek BCG na imunitní reakce proti černému kašli20,21,29,30. Podle našich nejlepších znalostí však žádná studie dosud nezkoumala načasování BCG vakcinace na odpověď na pertusi ani nestudovala, které rysy BCG indukované trénované imunitní odpovědi korelují se zvýšenou odezvou na vakcínu.

Subjekty ve všech třech kohortách zaznamenaly antipertusovou humorální a PRN plus B buněčnou odpověď 2 týdny po vakcinaci TdapIPV. I když byly odpovědi protilátek proti PRN mnohem vyšší ve skupině cvičené BCG, nepozorovali jsme podobný vzorec v odpovědích B buněk specifických pro PRN. To by se dalo vysvětlit rychlejší indukcí protilátek v kohortě trénované BCG, které se v průběhu času hromadí kvůli jejich dlouhému poločasu.

Protože však koncentrace protilátek nebyly měřeny před 2 týdny po vakcinaci, nebylo možné odhadnout rozdíly v kinetice mezi kohortami. Kromě zvýšených odpovědí protilátek proti PRN jsme také zjistili, že odpovědi protilátek FHA a PT byly vyšší v kohortě trénované BCG. Bohužel jsme nebyli schopni změřit PT- a FHA-specifické odpovědi B buněk kvůli vysoké nespecifické vazbě FHA a PT na B buňky. Přesto je slibné, že celkové IgG MBC odpovědi byly zvýšeny ve skupině cvičené BCG a že tato zvýšení korelovala se zvýšením protilátkových odpovědí. Také jsme zjistili, že reakce IFN v reakci na restimulaci pertussis antigenem byly zesíleny v kohortě trénované BCG. Ačkoli tyto změny byly relativně malé, pozorovali jsme trend, kdy byly změny W2–D0 vyšší než v ostatních kohortách. Další studie s více subjekty mohou pomoci ověřit tento vzorec, který byl potvrzen ve studii na myších19. Podobně se také ukázalo, že neonatální BCG vakcinace zesiluje Th1 reakce na tetanový toxoid31.

Zvýšení protilátek proti černému kašli, celkových odpovědí IgG MBC a odpovědí IFNg černého kašle spolu silně korelovalo ve skupině cvičené BCG, což naznačuje koordinovanou aktivaci efektorových a paměťových funkcí. Kromě toho zvýšení protilátek proti černému kašli, celkových IgG-switched MBC odpovědí a IFN v odpovědi na PT restimulaci v BCG-trénované kohortě bylo spojeno s vrozenými odpověďmi, zejména IL-1 a IL-6. Tyto výsledky jsou v souladu s předchozí studií na lidech z naší skupiny, kde jsme studovali účinek BCG na očkování proti chřipce17. Důležitost dráhy IL-1/IL-6 jako biomarkeru trénované imunity byla také zdůrazněna v modelu experimentální virové infekce po očkování proti žluté zimnici16. Celkově jsme nepozorovali korelace mezi konkrétními mikrobiálními stimuly a primárními výsledky, což naznačuje, že celkové změny v drahách cytokinové odezvy a nikoli jakýkoli konkrétní stimulační stav jsou spojeny se zvýšenou citlivostí na očkování proti pertusi. I když očekáváme, že převládající reakce IL-6 a IL{10}} na mikrobiální stimulaci bude odvozena od monocytů a dendritických buněk16, B buňky mohou také přispívat k produkci cytokinů32 a nemůžeme vyloučit jejich potenciální příspěvek.
Klíčovou otázkou bylo, jak dlouho po vakcinaci přetrvává trénovaná imunita vyvolaná BCG. In vitro byly známky BCG-indukované trénované imunity u lidí identifikovány již 2 týdny a až 1-rok po očkování14. Klinické studie na lidech, které měly za cíl převést tato zjištění na schopnost reakce in vivo, omezily pozorovací okno až na 5 týdnů po vakcinaci BCG15–17. Pozorovali jsme slabší indukci trénovaných s imunitou spojených cytokinů IL-6 a IL-1 než v předchozích studiích16, jak již bylo dříve uvedeno21. Variace šarže ve výrobě BCG vakcíny mohou ovlivnit indukci trénované imunity a mohou vysvětlit účinek, který jsme pozorovali v této studii 33.

Kromě toho byly také pozorovány variace mezi kmeny BCG, které ovlivňují jejich imunogenicitu a klinickou účinnost34–36. Navzdory tomu však prokazujeme, že heterologní reakce IL-1 a IL-6 3 měsíce po vakcinaci BCG, tj. v okamžiku vakcinace Tdap-IPV, ale ne 2 týdny po vakcinaci BCG, je spojena se zvýšenou pertusí humorální a buněčná imunita. Tato zjištění naznačují, že trénovaná imunita se nadále vyvíjí poslední 2 týdny po vakcinaci BCG a zdůrazňují, že základní funkční „responzivita“ cirkulujících vrozených imunitních buněk může být kritická pro vývoj silnější reakce na vakcínu.

Tato studie ukazuje, že předchozí vakcinace BCG může zvýšit citlivost na antigeny aP vakcíny. Tento efekt jsme překvapivě nepozorovali u TET a DIPH. To lze vysvětlit skutečností, že všichni dospělí podstoupili předchozí přeočkování Td-IPV, ale ne aP ve věku 9 let, jak je doporučeno v národním imunizačním programu. V souladu s tím jsme zjistili, že výchozí koncentrace protilátek aP antigenů vysoce korelovaly mezi subjekty v naší studii, ale nekorelovaly s DIPH a TET, což naznačuje, že humorální imunita vůči těmto složkám není synchronizována s aP antigeny (doplňková Obr. 12). Výchozí hladiny DIPH a TET protilátek byly vysoce vzájemně korelované, což je v souladu s jejich společným podáváním ve vakcínách. Variace v již existující imunitě proti různým složkám vakcíny tedy mohou hrát roli ve schopnosti BCG vakcinace a trénované imunity ovlivnit odpověď na Tdap-IPV.

Although our study was not designed to investigate vaccine efficacy, a major question is whether the enhanced antibody response that we observed in the BCG-trained cohort may translate into better clinical protection. There is much debate about the correlates of protection against pertussis37. Nonetheless, PT antibodies have previously been used to correlate with clinical protection against disease (>25 IU/ml)29. Pomocí tohoto prahu bylo dosaženo téměř úplné séroprotekce 2 týdny po TdapIPV v kohortách s BCG a BCG plus Tdap, zatímco část subjektů v kohortě Tdap-IPV nebyla séroprotekována (doplňkový obrázek 13).

Kromě protilátek byla také zdůrazněna T-buněčná imunita a zejména reakce Th1 a Th17 jako důležité pro ochranu proti pertusi na zvířecích modelech2,38. Zjistili jsme, že BCG-trénovaná kohorta vykazovala zvýšený IFN v reakci na restimulaci pertussis antigenem, což je výstup pro Th1 imunitu, a proto může naznačovat zlepšenou klinickou ochranu proti pertusi. A konečně, současné imunologické koncové body zaměřené na kvantifikaci adaptivní imunity specifické pro černý kašel, jako jsou odpovědi T-buněk, B-buněk nebo humorální reakce, dosud nebyly ověřeny jako imunologické koreláty ochrany. Existuje několik možností, jak tuto mezeru ve znalostech překlenout, například provedením epidemiologických studií nebo použitím nedávno zavedeného modelu kontrolované lidské infekce pro B. pertussis39.

Omezením naší explorativní studie je, že studovaná populace se skládala z dospělých, kteří byli v dětství imunizováni celobuněčnou DTP vakcínou, o níž je známo, že ovlivňuje adaptivní odpověď na pertussis desítky let po primární imunizaci a ovlivňuje indukci imunity T lymfocytů v reakce na přeočkování40. Bude tedy důležité určit, zda se naše zjištění přenesou na děti narozené v éře rutinního pediatrického očkování proti aP. Navíc, protože jsme zahrnuli pouze ženy, bude důležité určit, zda existují rozdíly s muži. V této explorativní studii jsme měřili koncové body imunogenicity proti černému kašli, včetně protilátkových odpovědí, celkové a PRN plus B buněčné odpovědi a antigen-specifické T-buněčné odpovědi. P-hodnoty nebyly korigovány pro vícenásobné testování kvůli cílené povaze hodnocených imunitních odpovědí. Důležité je, že tato studie byla provedena na dobrovolnících západoevropského (nizozemského) původu a budoucí studie by měly zkoumat, zda lze podobné účinky nalézt u populací s odlišným genetickým pozadím. Dalším omezením je, že byla měřena pouze podskupina cytokinů. I když to bylo vhodné pro konkrétní hypotézy, které jsme chtěli testovat, komplexnější, nezaujaté profilování cytokinových a dalších odpovědí může přinést nové poznatky.

Na závěr v této studii uvádíme, že BCG vakcinace podaná 3 měsíce před vakcinací Tdap-IPV významně zvyšuje imunitu proti černému kašli a že biomarkery trénované imunity jsou nejspolehlivějšími koreláty těchto zesílených vakcinačních odpovědí. K vyhodnocení těchto nálezů napříč různými studijními populacemi budou nutné další validační studie a další imunologické a genetické studie jsou nutné k mechanickému ověření role IL-1 a IL-6 drah. Celkově bude vymezení základní vrozené imunitní funkce, kterou lze modulovat pomocí BCG, nezbytné pro pochopení toho, jak vést vakcínou indukované adaptivní imunitní reakce směrem k vynikající imunogenicitě a ochraně proti onemocnění.

METODY

Klinická studie

Tato jednocentrová, randomizovaná otevřená studie byla provedena v Radboud University Medical Center (Nijmegen, Nizozemsko) od 2. března015 do 2. července01621. Protokol studie je registrován v klinických studiích. gov (NCT02771782) a byla schválena lékařskou etickou komisí Arnhem-Nijmegen. Dobrovolníci byli rekrutováni pomocí nástěnek a na Radboud University v Nijmegenu a obdrželi mírnou odměnu. Byli zahrnuti dobrovolníci, kteří dříve nebyli očkováni BCG nebo nedávno vakcínami proti černému kašli. Kritéria vyloučení byla (i) předchozí BCG vakcinace nebo nedávné očkování vakcínami obsahujícími pertusi, (ii) alergie na neomycin, polymyxin nebo alergická reakce na předchozí očkování vakcínami proti záškrtu, tetanu, černému kašli nebo obrně, (iii) použití systémových léky jiné než perorální antikoncepční léky a (iv) těhotenství nebo anamnéza onemocnění vyplývajících z imunodeficience. Velikost kohorty byla stanovena na základě předchozích studií provedených naší skupinou, ve kterých jsme zkoumali účinky BCG vakcinace na vrozené imunitní reakce16. Randomizace napříč rameny studie byla provedena pomocí softwarového algoritmu. Všichni jedinci měli v prvním roce života v anamnéze primární pertusi s celobuněčným černým kašlem. Bylo zahrnuto 75 dobrovolnic. Po obdržení písemného informovaného souhlasu byla krev odebrána do zkumavek s kyselinou ethylendiamintetraoctovou (EDTA) nebo lithium heparinem (LiHep) a byla provedena vakcinace. Kompletní krevní obraz byl získán pomocí hematologického analyzátoru Sysmex XN{11}}. Subjekty dostaly BCG Danish 1331 (Staten Serum Institut, Kodaň, Dánsko; 0,1 ml intradermálně) a Tdap-IPV (Boostrix Polio, GlaxoSmithKline; 0,5 ml intramuskulárně). Séra byla skladována při -20 stupních až do analýzy a celá krev byla zpracována pro další analýzu, jak je popsáno níže. K přípravě tohoto rukopisu byly použity pokyny Consolidated Standards of Reporting Trials (CONSORT) (doplňkový obr. 14).

Sérologická analýza

Séra byla analyzována na koncentrace IgG protilátek specifických pro PT, FHA, PRN, TET a DIPH pomocí multiplexního imunotestu na bázi fluorescenčních kuliček25. Antigeny byly kovalentně navázány na odlišné barevně kódované aktivované karboxylované mikrokuličky MicroPlex (kuličky) (Luminex, Austin, Texas, USA). Ke spojení byly použity následující antigeny: vysoce purifikovaný PT (Netherlands Vaccine Institute), FHA (Kaketsuken, Kumamoto, Japonsko), P.69 PRN exprimovaný a purifikovaný z konstruktu E. coli41, difterický toxoid (Netherlands Vaccine Institute) a tetanus toxin (T3194, Sigma-Aldrich, Saint Louis, Missouri, USA). Po promývacím kroku v PBS bylo 12,5 × 106 karboxylovaných kuliček/ml aktivováno v PBS obsahujícím 2,5 mg 1-ethyl3-({{20}} dimethylaminopropyl)-karbodiimid hydrochlorid (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA) a 2,5 mg N-hydroxysulfosukcinimidu (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA). Antigeny pro kopulaci byly zředěny v PBS na koncentraci 10 ug PT, FHA nebo PRN, 100 ug DT nebo 25 ug TET na 12,5 x 106 aktivovaných kuliček a inkubovány po dobu 2 hodin při teplotě místnosti ve tmě. konstantní rotace. Po třech promývacích krocích byly kuličky spojené s antigenem skladovány ve tmě v PBS obsahujícím 0,03 procenta (hmotnost/objem) azidu sodného a 1 procento (hmotnost/objem) hovězího sérového albuminu při 4 stupních až do použití. Séra naředěná 1/200 a 1/4000 v PBS obsahujícím 0,1 procenta (objem/objem) Tween 20 a 3 procenta (hmotnost/objem) BSA byla inkubována s kuličkami spojenými s antigenem v 96-jamkové filtrační destičce po dobu 45 minut při pokojové teplotě v 750 pm ve tmě. Na každé destičce byla zahrnuta referenční séra v sérii ředění, séra kontroly kvality a slepé vzorky.

Interní referenční standard pro černý kašel byl kalibrován podle WHO 1st IS Part 06/140 a sériově naředěn 4-násobně přes 6 jamek (1/200 až 1/204800). Interní referenční standard pro DIPH a TET byl kalibrován proti WHO NIBSC DI-3 a TE-3 a sériově naředěn 4-násobně přes 8 jamek (1/50 až 1/819200). Po inkubaci byly jamky 3krát promyty PBS, inkubovány s R-fykoerythrinem-značenou kozí anti-lidskou IgG protilátkou (Jackson Immunoresearch Laboratories, West-Grove, PA, USA) po dobu 30 minut a promyty. Kuličky byly zahrnuty do PBS a střední intenzita fluorescence (MFI) byla získána na Bio-Plex LX200. MFI byl převeden na IU/ml interpolací z 5-parametrové logistické standardní křivky pomocí softwaru Bioplex Manager 6.2 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, Kalifornie, USA) a exportován do Microsoft Excel.

PBMC izolace, stimulace a detekce cytokinů

PBMC byly izolovány centrifugací s hustotním gradientem Ficoll a resuspendovány na 5 x 106/ml v kultivačním médiu RPMI (médium Roswell Park Memorial Institute; Invitrogen, CA, USA) doplněném gentamycinem, Glutamaxem (GIBCO) a pyruvátem. Celkem bylo 100 ul rozděleno na alikvoty na jamku na destičkách s kulatým dnem 96-jamkových destiček (Corning) a stimulováno jedním z RPMI (negativní kontrola), lipopolysacharidem Escherichia coli (LPS; 10 ng/ml, Sigma-Aldrich), Sonikované Mycobacterium tuberculosis H37Rv (5 ug/ml), teplem usmrcený Staphylococcus aureus (1 × 106 /ml, klinický izolát), teplem usmrcený Candida albicans (1 × 106 /ml, kmen UC820) a teplem usmrcený Bordetella pertussis ( 1 ug/ml, kmen B1917), PT (2 ug/ml), PRN (4 ug/ml, ReagentProteins, PFE-031) a FHA (2 ug/ml). PT a FHA laskavě poskytl AM Buisman z Národního institutu pro veřejné zdraví a životní prostředí (RIVM, Bilthoven, Nizozemsko). Buňky byly inkubovány při 37 stupních a 5 procentech CO2 po dobu 24 hodin pro detekci IL-1, IL-6, IL-10 a TNF nebo 7 dní pro IFN, IL{{31} } a IL-17. Supernatanty byly skladovány při -20 °C. Cytokiny byly měřeny v supernatantech kultury PBMC pomocí souprav ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) od R&D systems (IL-1, TNF, IL17, IL-22) nebo Sanquin (IL-6, IL -10, IFN ) podle pokynů výrobce.

B-buněčná průtoková cytometrie

Barvení B buněk bylo prováděno přímo na celé krvi pomocí panelu barvení protilátek (doplňková tabulka 3) včetně fluorescenčně značeného PRN pro detekci antigen-specifických B buněk. Pro značení PRN-specifických B buněk byl PRN (ReagentProteins, PFE-031) konjugován s fluoresceinem (FITC Antibody labelling kit, Pierce) podle protokolu výrobce (PRN-FITC). Celkem bylo 1–2 ml čerstvě odebrané plné krve odebrané do zkumavek LiHep naředěno v pufru FACS (PBS plus 0.{{10}}9 procent NaN3 plus 0,2 procenta hovězího sérového albuminu, Calbiochem) a buňky byly peletovány a poté dvakrát promyty FACS pufrem. Buňky byly resuspendovány v pufru FACS a poté barveny koktejlem B buněčných fenotypizačních protilátek po dobu 15 minut, fixovány (FACSLysing, BD Biosciences) a po dalším promytí pufrem FACS byly analyzovány do 1 hodiny od barvení. Průtoková cytometrie PRN-antigen-specifických B buněk v plné krvi byla provedena na průtokovém cytometru LSRII (BD Biosciences) se standardizovaným nastavením přístroje42. Data průtokové cytometrie byla analyzována pomocí Infinityte (verze 2.0, Cytognos). Na vzorek bylo získáno 2 x 106 buněk v lymfocytární bráně (doplňkový obrázek 1a). Lymfocyty byly uzavřeny po odstranění dubletů a debris. B buňky byly identifikovány jako CD45 plus CD19 plus a byly identifikovány B buňky specifické pro PRN-FITC. Podskupiny B lymfocytů byly identifikovány pomocí přizpůsobené strategie hradlování43. Pokusili jsme se detekovat PT-specifické B buňky průtokovou cytometrií, ale nebyli jsme úspěšní kvůli vysokému pozadí způsobenému nespecifickým barvením.

Statistika

Hodnoty cytokinů a protilátek byly log{0}}transformovány, aby se zohlednila jejich zkreslená distribuce. Analýza primárních nebo sekundárních výsledných odpovědí byla analyzována v regresním modelu se smíšenými efekty pomocí balíčku „lme4“ 44 R. Pro každý výsledek je vzorec pro model (v zápisu R):

Porovnání byla vypočtena s „průměrným“ balíčkem 45 R a zkoumali jsme dva kontrasty. Nejprve jsme zkoumali, zda se primární cílové parametry významně lišily ve srovnání s výchozí hodnotou očkování Tdap-IPV v každé kohortě (postvakcinační účinky byly definovány jako W2–D0 v každé kohortě, doplňková tabulka 1). Dále jsme zkoumali rozdíly mezi kohortami ve velikosti těchto změn (rozdílové efekty, doplňková tabulka 2, definované jako (W2c1 – D{{1{14}}}}c1) – ​​(W2c2 – D0 c2) kde c1 a c2 odkazují na různé kohorty pro dané srovnání). Změny v heterologních nebo trénovaných imunitních cytokinech v BCG trénované kohortě byly analyzovány podobně. P-hodnoty jsou hlášeny pomocí Kenward-Rogerovy metody stupňů volnosti. Statistické parametry jsou uvedeny přímo v obrázcích a legendách obrázků. Vzhledem k designu explorativní studie a hodnoceným cíleným imunitním odpovědím nebyla provedena žádná korekce vícenásobného testování. Byly provedeny párové korelace s hodnotami log10-násobné změny oproti výchozí hodnotě. Odhad rozptylu vysvětlený měřením cytokinů na primárních výstupních proměnných byl proveden pomocí balíčku R 'caret'46. Aby se zohlednilo potenciální nadměrné vybavení, byla provedena 10krát opakovaná 4-násobná křížová validace. Analyzovali jsme titry séroprotektivních protilátek proti PT, TET nebo DIPH pomocí Fisherova exaktního testu. Asociace mezi stavem séroprotekce a kohortou byly stanoveny zkoumáním reziduí chí-kvadrát testu. Prahové hodnoty pro séroprotekci vůči PT byly 25 IU/ml18 a 0,1 IU/ml pro DIPH a TET37).

Shrnutí hlášení

Další informace o designu výzkumu jsou k dispozici v Nature Research Reporting Summary propojeném s tímto článkem.

DOSTUPNOST DAT

Údaje, které podporují zjištění této studie, jsou na přiměřenou žádost k dispozici od odpovídajícího autora.

DOSTUPNOST KÓDU

R-kód, který podporuje zjištění této studie, je na přiměřenou žádost k dispozici od odpovídajícího autora.

REFERENCE

1. Tan, T. a kol. Pertussis po celém světě: nedávné epidemiologické trendy od roku 2000 do roku 2013. Pediatr. Infikovat. Dis. J. 34, e222–e232 (2015).

2. Warfel, JM, Zimmerman, LI & Merkel, TJ Acelulární vakcíny proti černému kašli chrání před onemocněním, ale nedokážou zabránit infekci a přenosu v modelu primátů jiného než lidského původu. Proč. Natl Acad. Sci. USA 111, 787–792 (2014).

3. Huang, LM a kol. Reakce na primární a posilovací dávku acelulární, komponentní a celobuněčné vakcíny proti černému kašli zahájené ve 2 měsících věku. Vaccine 14, 916-922 (1996).

4. Klein, NP, Bartlett, J., Rowhani-Rahbar, A., Fireman, B. & Baxter, R. Slábnoucí ochrana po páté dávce acelulární vakcíny proti černému kašli u dětí. New Engl. J. Med. 367, 1012–1019 (2012).

5. Misegades, LK a kol. Asociace dětského pertuse s přijetím 5 dávek vakcíny proti černému kašli podle času od poslední dávky vakcíny, Kalifornie, 2010. JAMA 308, 2126–2132 (2012).

6. Hendrikx, LH, Berbers, GA, Veenhoven, RH, Sanders, EA & Buisman, AM Odpovědi IgG po přeočkování různými vakcínami proti černému kašli u holandských dětí ve věku 4 let: vliv obsahu antigenu ve vakcíně. Vaccine 27, 6530-6536 (2009).

7. Misiak, A. a kol. Přidání agonisty TLR7 k acelulární vakcíně proti černému kašli zvyšuje Th1 a Th17 reakce a ochrannou imunitu v myším modelu. Vaccine 35, 5256–5263 (2017).

8. Dunne, A. a kol. Nový agonista TLR2 z Bordetella pertussis je účinné adjuvans, které podporuje ochrannou imunitu pomocí acelulární vakcíny proti černému kašli. Mucosal Immunol. 8, 607–617 (2015).

9. Sugai, T. a kol. Oligodeoxynukleotid obsahující CpG jako účinné adjuvans vyvažující imunitní odpověď Th1/Th2 ve vakcíně proti záškrtu, tetanu a černému kašli. Vaccine 23, 5450-5456 (2005).

10. Colditz, GA a kol. Účinnost BCG vakcíny v prevenci tuberkulózy. Metaanalýza publikované literatury. JAMA 271, 698–702 (1994).

11. Kristensen, I., Aaby, P. & Jensen, H. Rutinní očkování a přežití dětí: následná studie v Guinea-Bissau, západní Afrika. BMJ 321, 1435–1438 (2000).

12. Hirve, S. a kol. Nespecifické a pohlavně rozdílné účinky očkování na přežití dětí na venkově v západní Indii. Vaccine 30, 7300–7308 (2012).

13. Aaby, P. a kol. Randomizovaná studie BCG vakcinace při narození dětí s nízkou porodní hmotností: příznivé nespecifické účinky v novorozeneckém období? J. Infect. Dis. 204, 245–252 (2011).

14. Netea, MG a kol. Trénovaná imunita: program vrozené imunitní paměti ve zdraví a nemoci. Science 352, aaf1098 (2016).

15. Procházka, J. et al. Výsledky kontrolované lidské malárie po BCG vakcinaci. Nat. Commun. 10, 874 (2019).

16. Arts, RJW a kol. BCG vakcinace chrání před experimentální virovou infekcí u lidí prostřednictvím indukce cytokinů spojených se zrnitou imunitou. Cell Host Microbe 23, 89–100 e105 (2018).

17. Leentjens, J. a kol. BCG vakcinace zvyšuje imunogenicitu následné vakcinace proti chřipce u zdravých dobrovolníků: randomizovaná, placebem kontrolovaná pilotní studie. J. Infect. Dis. 212, 1930–1938 (2015).

18. Zimmermann, P. & Curtis, N. Vliv BCG na odpovědi na vakcínu - systematický přehled. Expert Rev. Vaccines 17, 547–554 (2018).

19. Broset, E. a kol. BCG vakcinace zlepšuje imunitní reakce DTaP u myší a je spojena s nižší incidencí černého kašle v ekologických epidemiologických studiích. EBioMedicine 65, 103254 (2021).

20. Aaby, P., Andersen, A., Ravn, H. & Zaman, K. Současné podávání BCG a očkování proti záškrtu, tetanu a černému kašli (DTP) může snížit dětskou úmrtnost více, než uvádí WHO nejprve a pak DTP. Re-analýza dat demografického dohledu z bangladéšského venkova. EBioMedicine 22, 173–180 (2017).

21. Blok, BA a kol. Interakční, nespecifické, imunologické účinky inaktivovaného očkování proti dětské obrně Bacillus Calalette-guerin a tetanus-záškrt-pertussis: explorativní, randomizovaná studie. Clin. Infikovat. Dis. 70, 455–463 (2020).

22. Aaby, P., Ravn, H., Fisker, AB, Rodrigues, A. & Benn, CS Je záškrt-tetanus-pertussis (DTP) spojen se zvýšenou úmrtností žen? Metaanalýza testující hypotézy pohlavně diferencovaných nespecifických účinků DTP vakcíny. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 110, 570–581 (2016).

23. van der Lee, S. a kol. Zvýšená míra akvizice Bordetella pertussis u dospívajících během epidemie v roce 2012 v Nizozemsku a důkazy o prodloužené perzistenci protilátek po infekci. Euro Surveill. https://doi.org/10.2807/1560-7917. ES.2017.22.47.17-00011 (2017).

24. Berbers, G. a kol. Cirkulace černého kašle a špatná ochrana proti záškrtu mezi dospělými středního věku v 18 evropských zemích. Nat. Commun. 12, 2871 (2021). 25. van Gageldonk, PG, van Schaijk, FG, van der Klis, FR & Berbers, GA Vývoj a validace multiplexního imunotestu pro současné stanovení sérových protilátek proti Bordetella pertussis, záškrtu a tetanu. J. Immunol. Methods 335, 79–89 (2008).

26. Schure, RM a kol. Reakce T-buněk před a po pátém po sobě jdoucím acelulárním očkování proti pertusi u 4-letých holandských dětí. Clin. Vaccine Immunol. 19, 1879–1886 (2012).

27. Mathurin, KS, Martens, GW, Kornfeld, H. & Welsh, RM CD4 T-buňkami zprostředkovaná heterologní imunita mezi mykobakteriemi a poxviry. J. Virol. 83, 3528–3539 (2009).

28. Lertmemongkolchai, G., Cai, G., Hunter, CA & Bancroft, GJ Přihlížející aktivace CD8 plus T buněk přispívá k rychlé produkci IFN-gama v reakci na bakteriální patogeny. J. Immunol. 166, 1097-1105 (2001).

29. Zimmermann, P. a kol. Vliv novorozenecké imunizace Bacille Calmette-Guerin (BCG) na odpovědi heterologní vakcíny u kojenců. Vaccine 37, 3735–3744 (2019).

30. Ritz, N., Mui, M., Balloch, A. & Curtis, N. Nespecifický účinek vakcíny Bacille CalmetteGuerin na imunitní odpověď na rutinní imunizace. Vaccine 31, 3098–3103 (2013).

31. Libraty, DH a kol. Neonatální BCG vakcinace je spojena se zvýšenou imunitní odpovědí T-helper 1 na heterologní kojenecké vakcíny. Pokusy Vaccinol. 3, 1–5 (2014). 32. du Plessis, WJ a kol. Funkční odpověď B buněk na antigenní stimulaci: předběžná zpráva o latentní tuberkulóze. PLoS ONE 11, e0152710 (2016).

33. Biering-Sorensen, S. a kol. Variace růstu v produkci BCG vakcíny a souvislost s imunitní odpovědí. Observační studie v rámci randomizované studie. Vaccine 33, 2056–2065 (2015).

34. Ru, H. a kol. Vliv genomové oblasti rozdílu 4 (RD4) na mykobakteriální virulenci a účinnost BCG. Přední. Buňka. Infikovat. Microbiol. 7, 239 (2017). 35. Cho, T. a kol. Přehled BCG vakcíny a dalších přístupů k eradikaci tuberkulózy. Hučení. Vakcína. Imunother. 17, 2454–2470 (2021).

36. Brosch, R. a kol. Plasticita genomu BCG a vliv na účinnost vakcíny. Proč. Natl Acad. Sci. USA 104, 5596–5601 (2007).

37. Plotkin, SA Koreláty ochrany vyvolané očkováním. Clin. Vaccin. Immunol. 17, 1055–1065 (2010).

38. Ross, PJ a kol. Relativní příspěvek buněk Th1 a Th17 v adaptivní imunitě vůči Bordetella pertussis: k racionálnímu návrhu vylepšené acelulární vakcíny proti černému kašli. PLoS Pathog. 9, e1003264 (2013).

39. de Graaf, H. a kol. Zkoumání kolonizace a imunity Bordetella pertussis: protokol pro model nemocniční kontrolované lidské infekce. BMJ Open 7, e018594 (2017).

40. da Silva Antunes, R. a kol. Polarizace Th1/Th17 přetrvává po celobuněčné vakcinaci proti černému kašli navzdory opakovaným acelulárním boosterům. J. Clin. Vyšetřování. 128, 3853–3865 (2018).

41. Hijnen, M., van Gageldonk, PG, Berbers, GA, van Woerkom, T. & Mooi, FR Faktor virulence Bordetella pertussis P.69 pertaktin si zachovává své imunologické vlastnosti po nadprodukci v Escherichia coli. Protein Expr. Purif. 41, 106-112 (2005).

42. Kalina, T. a kol. EuroFlow standardizace nastavení průtokového cytometru a protokolů imunofenotypizace. Leukémie 26, 1986–2010 (2012).

43. Blanco, E. a kol. Věkem spojená distribuce podskupin normálních B-buněk a plazmatických buněk v periferní krvi. J. Allergy Clin. Immunol. 141, 2208–2219. e2216 (2018).

44. Bates, D., Machler, M., Bolker, BM & Walker, SC Montáž lineárních modelů se smíšenými efekty pomocí lme4. J. Stat. Softw. 67, 1–48 (2015).

45. Lenth, R. Emmeans: odhadovaný mezní průměr, neboli nejmenších čtverců, průměr (2018).

46. ​​Kuhn, M. Tvorba prediktivních modelů v R pomocí stříšky Package. J. Stat. Softw. 28, 1–26 (2008).

PODĚKOVÁNÍ

Rádi bychom poděkovali Anne-Marie Buisman (RIVM) za dodání antigenů PT a FHA, které byly použity pro experimenty s restimulací PBMC. Děkujeme všem dobrovolníkům, kteří se zúčastnili zkoušky. Tato práce byla podpořena Národním ústavem veřejného zdraví a životního prostředí (RIVM), Nizozemsko (SPR projekt S112200). MGN byla podpořena grantem ERC Advanced Grant (#833247) a grantem Spinoza od Nizozemské organizace pro vědecký výzkum.

AUTORSKÉ PŘÍSPĚVKY

Konceptualizace: BAB, MGN, RvC a DAD; metodika: ES, MJE, GAMB, PGMvG, BAB a LCJdB; vyšetřování: ES, MJE, GAMB, PGMvG, BAB, LCJdB a JG; formální analýza: JG; psaní-originální předloha: JG a DAD; psaní recenze a úpravy: vše.

KONKURENČNÍ ZÁJMY

MGN má patent v Nanobiologics k inhibici trénované imunity licencovaný k TTxD a patent v nanobiologii ke stimulaci trénované imunity licencovaný k TTxD. Všichni ostatní autoři neuvádějí žádné potenciální konflikty. Všichni autoři zaslali formulář ICMJE pro zveřejnění potenciálního střetu zájmů.

DODATEČNÉ INFORMACE

Doplňkové informace Online verze obsahuje doplňkový materiál dostupný na https://doi.org/10.1038/s41541-022-00438-4.

Korespondence a žádosti o materiály by měly být adresovány Dimitri A. Diavatopoulosovi.

Dotisky a informace o povolení jsou k dispozici na http://www.nature.com/reprints

Poznámka vydavatele Springer Nature zůstává neutrální ohledně jurisdikčních nároků ve zveřejněných mapách a institucionálních přidruženích.

Otevřený přístup

Tento článek je licencován podle Creative Commons Attribution 4.{1}} Mezinárodní licence, která umožňuje použití, sdílení, adaptaci, distribuci a reprodukci na jakémkoli médiu nebo formátu, pokud uvedete příslušné jméno původního autora (autorů) ) a zdroj, uveďte odkaz na licenci Creative Commons a uveďte, zda byly provedeny změny. Obrázky nebo jiný materiál třetích stran v tomto článku jsou zahrnuty v licenci Creative Commons k článku, pokud není uvedeno jinak v kreditní hranici k materiálu. Pokud materiál není zahrnut v licenci Creative Commons článku a vaše zamýšlené použití není povoleno zákonnými předpisy nebo překračuje povolené použití, budete muset získat povolení přímo od držitele autorských práv.

For more information:1950477648nn@gmail.com