Abnormality B lymfocytů a T lymfocytů u pacientů se selektivním deficitem IgA

Abstraktní

Pozadí

Selektivní deficit IgA (SIgAD) je nejčastější vrozenou poruchou imunity s téměř neznámou etiologií. Cílem této studie bylo prozkoumat klinické diagnostické a prognostické hodnoty podskupin a funkce lymfocytů u symptomatických pacientů se SIgAD.

Metody

Do této studie bylo zahrnuto celkem 30 dostupných pacientů se SIgAD z íránského registru a 30 zdravých kontrol s odpovídajícím věkem a pohlavím. Analyzovali jsme periferní podskupiny B a T buněk a test proliferace T buněk průtokovou cytometrií u pacientů se SIgAD s mírnými a těžkými klinickými fenotypy.

Výsledek

Naše výsledky ukázaly významný nárůst naivních a přechodných B-buněk a silný pokles B-buněk podobných marginální zóně a přepínaných paměťových B-buněk u pacientů se SIgAD. Zjistili jsme, že naivní a centrální paměťové podskupiny CD4+ T buněk, stejně jako Th1, Th2 a regulační T buňky, se významně snížily. Na druhé straně došlo k významnému snížení podskupin centrálních a efektorových paměťových CD8+ T buněk, zatímco podíl obou (CD4+ a CD8+) terminálně diferencovaných efektorových paměťových T buněk (TEMRA) byly u našich pacientů významně zvýšené. Ačkoli některé podskupiny T lymfocytů u těžkého SIgAD byly podobné, snížení B lymfocytů v marginální zóně a přepínaných paměťových B lymfocytů a zvýšení CD21low B lymfocytů u pacientů se závažným SIgAD bylo mírně výrazné. Kromě toho byla proliferační aktivita CD{10}} T buněk silně narušena u pacientů se SIgAD se závažným fenotypem.

Závěr

Pacienti se SIgAD mají různé buněčné a humorální deficity. Hodnocení T lymfocytů a B lymfocytů by proto mohlo pomoci lépe porozumět heterogenní patogenezi a odhadu prognózy onemocnění.

Klíčová slova

Vrozené chyby imunity, Primární imunodeficience, Selektivní deficit IgA, Podskupiny B buněk, Podskupiny T buněk, Průtoková cytometrie, Proliferacetest

cistanche tubulosa-zlepšuje imunitní systém

extrakt z cistanche

Úvod

Selektivní deficit IgA (SIgAD) je nejčastější primární porucha imunity (PID) nebo vrozená porucha imunity (IEI), identifikovaná sérovou koncentrací IgA pod 7 mg/dl a normálními koncentracemi IgG a IgM u pacientů starších čtyř let. . Většina pacientů se SIgAD je asymptomatická, i když někteří z nich vykazují různé klinické projevy, včetně infekcí gastrointestinálního a respiračního traktu, alergických onemocnění a autoimunitních poruch. Byla popsána progrese onemocnění do běžné variabilní imunodeficience (CVID) u vybrané skupiny pacientů se SIgAD s deficitem podtříd IgG nebo autoimunitními poruchami [1]. Dosud nebyly popsány žádné specifické příčiny patogeneze SIgAD. V nevyřešených případech však byly identifikovány defekty v procesu rekombinace IgA class switch recombination (CSR), produkce a sekrece IgA, jakož i dlouhodobého přežití IgA, změněných paměťových B buněk a plazmatických buněk pacientů se SIgAD [2 ]. Defekty těchto imunologických procesů jsou spojeny s abnormalitami v lymfocytech pacientů se SIgAD. Proto by hodnocení lymfocytů, zejména podskupin B buněk a T buněk, mohlo být cenné a užitečné. Několik studií prokázalo abnormality B lymfocytů a T lymfocytů u některých skupin pacientů se SIgAD [3, 4]. Pokud jde o podskupiny B lymfocytů, byl popsán pokles počtu přepnutých paměťových B lymfocytů, IgA plazmatických buněk a přechodných IL-10+ regulačních B lymfocytů u pacientů se SIgAD [5–8]. Na druhé straně byl popsán defekt v některých podskupinách T lymfocytů případů SIgAD, který je spojen s nedostatečnými B lymfocyty produkujícími IgA [5, 8, 9]. Imunofenotypizace průtokovou cytometrií může hrát důležitou roli v diagnostice, prognóze, klasifikaci a léčbě pacientů se SIgAD. Proto jsme se poprvé zaměřili na zkoumání hlavních subpopulací B a T lymfocytů spolu s hodnocením funkce T buněk, abychom objasnili korelaci mezi imunologickými charakteristikami a klinickými projevy u symptomatických pacientů se SIgAD.

materiály a metody

Pacienti

Do této studie bylo zahrnuto celkem 30 dostupných symptomatických pacientů se SIgAD (z íránského registru IEI [10, 11]) a 30 zdravých kontrol (HC) se shodným věkem. Po klinických a laboratorních vyšetřeních bylo potvrzeno, že HCs nemají žádnou imunodeficienci nebo jakékoli základní onemocnění. Pacienti byli odesláni do Dětského lékařského centra (Pediatrické centrum excelence přidružené k Teheránské univerzitě lékařských věd, Teherán, Írán). Všem pacientům byla diagnostikována SIgAD podle European Society for Immunodeficiencies [12]. Studii schválila Etická komise Teheránské lékařské univerzity a od všech jednotlivců byl získán písemný informovaný souhlas (IR.TUMS.VCR.REC.1396.2018). Demografické, klinické projevy a imunologické údaje pacientů byly dokumentovány formou dotazníku.

Klasifikace pacientů

Pro srovnání demografických, klinických a imunologických dat byli pacienti rozděleni do dvou skupin těžké a mírné (na základě klinických projevů) a také skupiny příbuzní a nepříbuzní (na základě příbuznosti rodičů). Minimálními kritérii pro zařazení pacienta, aby byl považován za symptomatického, bylo deset varovných příznaků Nadace Jeffreyho Modella. Pacienti byli rozděleni do dvou skupin mírné a těžké, protože pacienti s těžkými infekcemi (např. krevního řečiště, centrálního nervového systému a hluboko uloženými infekcemi, jako je osteomyelitida a artritida), autoimunitou nebo malignitou byli zařazeni do skupiny těžkých a dalších komplikací. byly považovány za mírnou skupinu. Vzhledem k tomu, že pneumonie a jiné respirační infekce jsou u pacientů se SIgAD běžné a chtěli jsme je zkontrolovat jako parametr mezi těžkými a lehkými skupinami, nezařadili jsme je do těžké skupiny.

Výhody doplňku cistanche-jak posílit imunitní systém

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Enhance Immunity

【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Test podskupin lymfocytů

Mononukleární buňky periferní krve (PBMC) byly odděleny z 8 ml krevních vzorků odebraných do zkumavek s heparinem sodným za použití centrifugace s hustotním gradientem Ficoll-Hypaque při 600 g po dobu 25 minut při 22 stupních. Pro extracelulární barvení byly PBMC rozděleny do 5-panelových frakcí a barveny po dobu 20 minut při 2–8 stupních na tmavém místě, přičemž každý koktejl obsahoval monoklonální protilátky v optimálních koncentracích. Panel Te B1 byl použit k určení naivní (CD19+CD27−IgM+IgD+), paměti pouze IgM (CD19+CD27+ IgM++IgD−), přepínané paměť (CD19+CD27+IgM−IgD−) a B buňky podobné okrajové zóně (CD19+CD27+IgM++IgD+). Panel Te B2 byl použit k identifikaci CD21low B buněk (CD19+CD21−/lowCD38−/lowIgM+++), plazmablastů (CD19+CD21−/lowCD38++/{ {34}}IgM−) a přechodné B buňky (CD19+CD21+CD38++IgM+). Panel T1 byl použit ke klasifikaci naivních (CD4+ nebo CD8+ a CD45RA+CCR7+), efektorové paměti (CD4+ nebo CD8+ a CD45RA−CCR7−), centrální paměť (CD4+ nebo CD8+a CD45RA−CCR7+) a TEMRA (terminálně diferencovaná efektorová paměť), T buňky (CD4+ nebo CD8+ a CD45RA+CCR7−). Panel Te T2 byl použit ke klasifikaci regulačních T buněk (TregsCD4+CD25+FOXP3+CD127−/low). Pro intracelulární barvení byly po barvení povrchových molekul fixovány a permeabilizovány skrz FOXP3/permeabilizační pufr (eBioscience, USA) podle pokynů výrobce pro následující: Anti-Human FOXP3 (PE), Anti-Human IL{{67} } (PE), Anti-Human IL-4 (APC) a Anti-Human IFN- (FITC). Všechny protilátky a izotypové kontroly byly zakoupeny od eBioscience, americké korporace. Pro posouzení pomocných T-buněk (včetně T1, T2 a T17) bylo kultivováno 1×106 (buňka/ml) PBMC v médiu pro kultivaci buněk Roswell Park Memorial Institute (RPMI 1640), po čemž následovala stimulace forbolmyristátacetátem (PMA , 50 ng/ml, Sigma-Aldrich, USA) / ionomycin (1 ug/ml, Sigma-Aldrich), a v přítomnosti brefeldinu (5 ug/ml, eBioscience). Poté byly buňky inkubovány při 37 stupních v inkubátoru s 5% CO2 a 95% vlhkostí po dobu 5 hodin. Stimulované buňky byly promyty fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem (PBS) a bylo provedeno povrchové barvení anti-lidským CD4 (PerCp)-Cy5.5. Byly přidány intracelulární cytokiny barvící protilátky (anti-IFN-FITC, anti-IL-17 PE a anti-IL-4 APC pro hodnocení T podskupin a anti-FoxP3 PE pro hodnocení Treg) a inkubovány při pokojové teplotě po dobu 30 min. Buňky byly promyty permeabilizačním pufrem a resuspendovány ve studeném barvicím pufru a počty byly stanoveny pomocí průtokového cytometru BD FACSCalibur (BD Biosciences) (Dodatečný soubor 1: Tabulka S1). Strategie hradlování je podobná naší předchozí studii [13, 14].

Test proliferace T-buněk

Pro hodnocení proliferace T buněk byly PBMC kultivovány s fluorescenčním 5,6-karboxyfluorescein sukcinimidyl esterem (CFSE, Biolegend, USA). Zásobní roztok CFSE byl připraven rozpuštěním CFSE v dimethylsulfoxidu (DMSO) v koncentraci 5 mM/l, na základě pokynů výrobce. Tato zásoba byla zmražena v malých alikvotech, aby se zabránilo nadměrným cyklům zmrazování a rozmrazování. CFSE byl přidán do příčné zkumavky Falcon obsahující 500 μl suspenze PBMC (5 × 106 buněk/ml) v médiu pro kultivaci buněk RPMI 1640 obsahujícím 10 % FBS (fetální bovinní sérum, Biosera, Francie) s konečnou koncentrací 5 μM a 2 mM L-glutamin, 100 U/ml penicilinu a 100 ug/ml streptomycinu (Lymphosep; Biosera, Francie). Zkumavka se rychle otáčela a vortexovala, aby se zajistilo homogenní rozptýlení. Po označení byla buněčná suspenze inkubována po dobu 5 minut při 37 stupních. Poté bylo k buněčné suspenzi přidáno 9 ml RPMI1640 obsahujícího 10% FBS a centrifugována při 500 g po dobu 5 minut. Buňky byly třikrát promyty a byl přidán 1 ml RPMI1640 s 10% FBS. Pokud jde o specifickou stimulaci a proliferaci T buněk, protilátka anti-CD3 (1 ug/ml) byla přidána do 500 ul sterilního PBS a destička byla inkubována při 37 °C po dobu 2 hodin. Potažená destička byla dvakrát promyta sterilním PBS a značené buňky byly přidány přímo a nakonec byla přidána anti-CD28 protilátka (2 ug/ml) jako stimulant pro T buňky. Destička byla inkubována při 37 °C v inkubátoru s 5% CO2 a 95% vlhkostí po dobu 96 hodin [15–17]. Nestimulovaná jamka byla považována za kontrolu pro neproliferativní buňky. Po 96 hodinách byly buňky sklizeny a promyty. Po obarvení Anti Human CD4 (PerCPCy5.5) byly buňky nakonec analyzovány průtokovým cytometrem BD FACSCalibur™ a softwarem CellQuest Pro (BD, Biosciences, San Jose, CA, USA). Proliferační analýza byla provedena srovnáním tří kritérií, včetně procenta rozdělených buněk (% děleno), průměrného počtu buněčných dělení, kterým buňka projde (Division Index) a průměrného počtu buněčných dělení, ke kterým dochází v celé primární buněčné populaci. (Proliferation Index) softwarem FlowJo 7.6.

Statistická analýza

Pro statistickou analýzu byl použit software SPSS (Windows verze 16.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). K odhadu, zda byla data normálně distribuována, jsme použili Kolmogorovův–Smirnovův test. Nálezy byly prezentovány jako hodnoty mediánu (interkvartilní rozmezí [IQR], prezentované jako rozmezí s 25.–75. percentily). Pro srovnání byl použit chí-kvadrát test nebo Fisherův exaktní test. Pro srovnání více než dvou skupin, pokud distribuce dat byla normální, byla použita ANOVA, a pokud distribuce dat byla nenormální, byl použit Kruskal Wallisův test. Te rozdíly byly považovány za statisticky významné pro P-hodnoty, které byly<0.05.

cistanche výhody pro muže-posilují imunitní systém

Výsledek

Demografické, imunologické a klinické nálezy

Ze všech registrovaných íránských pacientů se SIgAD bylo do této studie zařazeno 30 dostupných pacientů (23 mužů a sedm žen). Medián věku (IQR) pacientů byl v době studie 11 (7,3–16) let. Rodičovská konangvinita byla přítomna u 16 (53,3 %) pacientů. Pneumonie (42,3 %) byla nejčastějším klinickým projevem u sledovaných pacientů a malignita nebyla v této kohortě diagnostikována. Demografické, klinické a imunologické charakteristiky pacientů jsou shrnuty v tabulce 1. Po kategorizaci pacientů na základě těžkých a mírných fenotypů byly porovnány demografické, klinické a imunologické údaje (tabulka 1, obr. 1). U pacientů s těžkými fenotypy se projevilo více respiračních komplikací než u mírné skupiny. Ostatní parametry neprokázaly významný rozdíl. Stejná srovnání byla provedena u pacientů s konangvinitou a bez ní a žádný z nich neměl významný rozdíl. Naproti tomu pacienti s mírnými fenotypy vykazovali mírně vyšší výskyt alergií a gastrointestinálních projevů se zvýšenou hladinou IgE v séru, což naznačuje zvýšený přechod směrem k produkci IgE.

Tabulka 1 Srovnání demografických, klinických a imunologických dat pacientů se SIgAD s těžkým a mírným fenotypem

Obr. 1 Porovnání klinických projevů mezi těžkým a mírným SIgAD

Podmnožiny B-buněk

Pacienti se SIgAD vykazovali významně zvýšenou frekvenci CD{{0}} B-buněk [11,2 % (9,4–13.07 %) vs. 7,2 % (6–8,6 %), p < 0.001], se zvýšeným počtem naivních B-buněk [71 % (63,7–80 %) vs. 66,5 % (56,2–71,1 %), p=0,036] a přechodnými B-buňkami [ 8 % (3,6–13,5 %) vs. 4,8 % (2,6–9,5 %), p=0,032] ve srovnání s HC. Naproti tomu procento B-buněk podobných okrajové zóně [2,3 % (2–3,5 %) vs. 3,4 % (2,3–4,8 %), p=0,022) a přepínaných paměťových B-buněk [3,5 % (1,9 –5,5 %) vs. 6 % (3,5–8,4 %), p=0,006] byly významně nižší než HC. Snížená paměť pouze IgM a plazmablasty a zvýšené CD21low B-buňky u pacientů než u HC nebyly významné (obr. 2). Je zajímavé, že některá srovnání byla významná mezi klinickými skupinami pacientů. Procento CD19+ B buněk u mírných i těžkých fenotypů bylo významně vyšší než u HC [11,6 % (8,7–13) vs. 7,2 % (6–8,6), p < 0,0001, 10,8 % (9,6–13,2 ) vs. 7,2 % (6–8,6), p < 0,0001]. Pacienti s těžkou SIgAD prokázali významné zvýšení procenta CD21low B-buněk [1,5 % (1–2,2) vs. 2,7 % (1,6–5,6), p=0,025] a významné snížení procenta podskupiny B buněk okrajové zóny i přepínané paměti [3,4 % (2,3–4,8) vs. 2,2 % [2, 3], p=0,040, 6 % (3,5–8,4) vs. 2,7 % ( 1,7–4,7), p=0.003]. Procento přechodných B buněk u pacientů s mírným SIgAD bylo vyšší než HC [10,7 % (3,9–13,8) vs. 4,8 % (2,6–9,5), p=0,047] (obr. 3). Procento paměti pouze IgM bylo významně vyšší u pacientů s konangvinitou než u pacientů bez příbuznosti. Také jsme kategorizovali frekvenci podskupin B buněk pacientů se SIgAD do tří kategorií: normální, snížená a zvýšená na základě normálního rozmezí HC (tabulka 2). Na základě této analýzy se největší pokles v podskupinách B lymfocytů týká B lymfocytů s přepnutou pamětí (23 %), zatímco největší nárůst souvisí s naivními B lymfocyty (27 %) u pacientů se SIgAD. S výjimkou zvýšených CD21low B-buněk u pacientů s těžkou SIgAD ve srovnání s pacienty s mírnou SIgAD.

Obr. 2 Kvantitativní analýza procenta podskupiny B buněk a T buněk u pacientů se SIgAD a zdravých kontrol. Medián je znázorněn vodorovnou čarou. Data byla analyzována pomocí Mann–Whitney U testu. *str<0.05, statistical significance between patients and HCs. HC Healthy control

Podmnožiny T-buněk

Separace podskupiny CD4+ T buněk odhalila významné snížení celkového počtu CD4+ T buněk [36,5 % (30,8–41,2 %) vs. 40,1 % (37,3–47,2 %), p{{14 }}.038)], centrální paměťové buňky [11 % (7,3–13,1 %) vs. 24,5 % (16–29 %), p<0.0001), T1 [7.7% (5.2–9.9%) vs. 12% (7.8–16%), p=0.002], T2 [0.3% (0.2–0.4%) vs. 0.6% (0.4–1.3%), p<0.0001] and Tregs [0.3% (0.03–0.7%) vs. 1.4% (1.1– 1.6%), p<0.0001] in patients compared with HCs. Oppositely, the percentage of TEMRA [9.5% (5.7–16.4%) vs. 2% (1.3–6.2%), p<0.0001] was meaningfully higher than HCs. Moreover, decreased effector memory and T17, and increased naïve helper T cells in patients in comparison with HCs were not significant (Fig.  2). Regarding the percentage of CD8+ T cell subsets, central memory [0.6% (0.3–0.8%) vs. 3% (2–6%), p<0.0001] and effector memory [12.3% (7.6–22.1%) vs. 23.9% (19.5– 27.2%), p<0.0001] were markedly diminished in patients compared with HCs. On the other hand, the percentage of cytotoxic TEMRA [44.1% (28.4–55.7%) vs. 24.4% (20– 31%), p<0.0001] was significantly higher than HCs. However, increased total CD8+ T cells and decreased naïve CD8+ T cells were not significant in patients compared to those in HCs (Fig. 2). Regarding the comparison of the percentage of CD8+ T cells subsets between severe SIgAD patients with HCs, naïve T cells, effector, and central memory cells demonstrated a significant reduction. Also, there was a significant decrease in the percentage of total CD4+ T-cells, central memory, T1, T2, and regulatory T cells, whereas TEMRA in both CD4+ and CD8+ T cells demonstrated an increase. On the other hand, the percentage of effector and central memory cells within CD8+ T cells, as well as central memory, TEMRA, T1, and regulatory T cells within CD4+ T cell subsets demonstrated a significant decrease in mild forms of SIgAD compared to HCs. In contrast, we found an increase in TEMRA CD8+ T cells and T2 CD4+ T cells in mild patients compared to controls (Fig.  3). Comparisons of the percentages of all T cell subsets between SIgAD patients with and without consanguinity have not indicated any significant difference. We also categorized the frequency of T cell subsets of SIgAD patients into three categories: normal, decreased, and increased based on a normal range of HCs (Table  2). Based on this analysis, the most decrease in T cell subsets is related to Tregs (67%), while the most increase is related to CD8+ TEMRA (37%) in SIgAD patients. Flow cytometry results of B cell and T cell subsets in 30 SIgAD patients have shown separately in Additional file 1: Tables S2 and S3. To evaluate the impact of the T cell subset on the switching process of B cells and the production of different Ig subtypes we performed a correlation analysis. Surprisingly only IgG but not IgM and IgE were significantly associated with specific T cell subsets (negative association with naïve CD4 and naïve CD8 T cells and positive association with CD4+ TEM and T17 cells, Additional file 1: Table S4) indicating the independent association of IgM to IgE from co-stimulation of T cell subsets in our patient cohorts. Moreover, correlation analysis of absolute counts and percentage of subsets should significant direct correlation in all measured parameters (Additional file 1: Table S5).

Obr. 3 Kvantitativní analýza procenta podskupin B buněk a T buněk u pacientů s těžkou a mírnou SIgAD. Medián je znázorněn vodorovnou čarou. Data byla analyzována pomocí Mann–Whitney U testu. *str<0.05, statistical signifcance between severe and mild patien

Tabulka 2 Distribuce normálních, zvýšených a snížených podílů podskupin T buněk a B buněk u všech pacientů se SIgAD. N=30

proliferace T buněk

Data generovaná kulturami značenými CFSE byla analyzována pro kvantifikaci proliferace CD4+ T buněk. Nebyl žádný významný rozdíl v indexu dělení (DI), indexu proliferace (PI) a procentuálního rozdělení (PD) mezi pacienty se SIgAD a HC (obr. 4). Je zajímavé, že když jsme porovnali tyto indexy mezi pacienty se SIgAD s těžkým a mírným fenotypem, zjistili jsme, že medián DI a PD u pacientů s těžkým SIgAD ve srovnání s mírnými případy byl významně zrušen [0.1 (0} .08–0,4) vs. 0,5 (0,3–0,8), p=0,019 a 12,2 (8,4– 26,4) vs. 42,5 (26,8–52,6), p=0,009, v tomto pořadí]. Mezi těžkými a mírnými skupinami však nebyl významný rozdíl v PI (obr. 4). Na druhou stranu srovnání DI, PI a PD mezi pacienty se SIgAD s konangvinitou a bez ní nebyla významná.

Obr. 4 Porovnání indexů proliferace T lymfocytů u pacientů s těžkou a mírnou SIgAD. Medián je znázorněn vodorovnou čarou. *str<0.05, statistical significance between severe and mild patients

Diskuse

SIgAD je nejrozšířenější IEI s různými klinickými projevy. Tito pacienti mají odlišné spektrum klinických projevů. V souladu s tím je užitečné imunologické vyšetření u pacientů s různým spektrem klinických projevů. Nejčastější klinickou manifestací u IEI, zejména u SIgAD, jsou recidivující respirační infekce [18–20]. U našich registrovaných symptomatických pacientů jsme jako nejčastější komplikaci zjistili pneumonii. Recidivující respirační infekce se běžně projevují ve formě infekcí horních cest dýchacích a mohou zůstat nediagnostikované po několik let; u některých pacientů se SIgAD se však projevují závažnější fenotypy, jako je bronchiektázie nebo obliterovaná bronchiolitida, což u těchto pacientů vyžaduje imunologické vyšetření [21]. Vzhledem k tomu, že rekurentní respirační infekce byly uváděny jako nejdůležitější příčina morbidity a úmrtí u dětí s IEI, zejména primární deficit protilátek [22, 23], je velmi důležitá včasná diagnostika a léčba respiračních poruch spojených se SIgAD [24, 25]. . Bylo ukázáno, že u některých pacientů se SIgAD jsou pozorovány abnormality v podskupinách B buněk [3, 4]. Naše výsledky ukázaly významný nárůst naivních a přechodných B-buněk a silný pokles B-buněk podobných marginální zóně a přepínaných paměťových B-buněk. Tento abnormální vzorec B-buněk naznačuje defekty v terminálních stádiích diferenciace B-buněk, podobně jako u pacientů s CVID [26]. Vzhledem k tomu, že CVID a SIgAD sdílejí téměř podobné genetické pozadí a mohou se hromadit jako více případů v rodině, je tato podobnost předvídatelná. Obecně platí, že více než polovina pacientů s IEI registrovaných v íránském registru má rodičovskou příbuznost, ale tato míra je stále méně častá u pacientů se SIgAD. U íránských pacientů se SIgAD ve srovnání se západními pacienty převládá konangvinita. Ačkoli mohou existovat monogenetické příčiny, nebyly dosud identifikovány navzdory sekvenování nové generace u několika pacientů [27]. Zjistili jsme snížení počtu B-buněk podobných marginální zóně a přepínaných paměťových B-buněk, zejména u pacientů s těžkou formou SIgAD, jak již bylo dříve popsáno [28]. Nedávno jsme zaznamenali podobnou redukci B-buněk podobných marginální zóně a přepínaných paměťových B-buněk u pacientů s CVID [14].

cistanche doplněk výhody-zvyšuje imunitu

Na druhé straně, ačkoli jsme pozorovali významný pokles přepínané paměti u pacientů s Ataxií Telangiektázie (AT), byl pozorován prudký nárůst B-buněk podobných marginální zóně [29]. Pacienti se SIgAD, zejména skupina pacientů se závažnými klinickými projevy (rekurentní a intenzivní infekce a autoimunita), mají nižší počet přepínaných paměťových B-buněk [28, 30, 31]. Bylo navrženo, že pokles subpopulace B-buněk s přepínanou pamětí je způsoben defekty v úrovni procesu rekombinace s přepínáním třídy protilátek (CSR) způsobeným enzymatickým deficitem nebo abnormalitami v cytokinových sítích a jejich receptorech [28]. Někteří pacienti se SIgAD s těžkým fenotypem progredují do CVID, což odráží, že tato podskupina SIgAD může sdílet s CVID společnou imunitní patogenezi, zejména ve vývoji kroku CSR. Přepínané paměťové B-buňky jsou tedy u pacientů považovány za diagnostický biomarker [28]. Frekvence přepínaných paměťových B-buněk je však u dětí v naší studované populaci normální a snížení bylo pozorováno spíše u dospělých pacientů; což naznačuje, že stárnutí pravděpodobně vede k progresi SIgAD do CVID, zejména u pacientů se závažnými klinickými projevy (data neuvedena). Na druhou stranu B-buňky marginální zóny jsou specializovanou populací B-buněk, které produkují IgM pro ochranu proti infekcím, zejména zapouzdřeným bakteriím [32]. Přestože předchozí studie ukázaly, že počet B-buněk podobných marginální zóně u pacientů se SIgAD se nelišil ve srovnání s normálními kontrolami [33], přesto jsme v našich případech dosáhli významného snížení B-buněk podobných marginálním zónám, podobně jako předchozí zpráva u pacientů s CVID [34]. Snížení marginálních podskupin B lymfocytů u jiných pacientů s poruchami tvorby protilátek by mohlo být spojeno se zvýšeným rizikem infekce, jako je pneumonie, a snížením sérových hladin IgM, podobně jako u pacientů s CVID [35]. Zjistili jsme zvýšené CD21low B lymfocyty ve srovnání s kontrolou, hlavně u pacientů s těžkou SIgAD. Předchozí studie uváděly nárůst CD21low B lymfocytů u pacientů se SIgAD [3] i CVID [36] a dalších autoimunitních onemocnění [37]. Nedávno bylo také hlášeno zvýšení CD21low u pacientů s AT [29]. Nárůst počtu buněk CD21low přímo souvisí nejen s autoimunitou, ale také s infekcí [36]. Na druhé straně může chronická expozice virové infekci vést ke konverzi antigen-reaktivních B-buněk na CD21low B-buňky, které nereagují [38]. Objasnit příčinu expandovaných CD21low B buněk; je nutné provést další výzkumy pro tuto subpopulaci B buněk. Vzhledem k vysoké subpopulaci CD21low B lymfocytů u pacientů s CVID a progresi některých pacientů se SIgAD do CVID se CVID pravděpodobněji vyvine u skupiny pacientů se závažnou SIgAD se zvýšenými CD21low B lymfocyty. Proto potřebují pravidelnější sledování k posouzení průběhu onemocnění. Přechodné B lymfocyty jsou ve střední fázi vývoje mezi nezralými buňkami kostní dřeně a zralými B lymfocyty ve slezině [39]. V této studii jsme pozorovali signifikantně zvýšený počet přechodných B buněk u našich pacientů se SIgAD, zejména u pacientů s těžkým SIgAD, ačkoli počet přechodných B buněk u dětí se SIgAD byl normální (data neuvedena). Nedávno jsme pozorovali významný pokles přechodných B buněk AT [29]. Na rozdíl od předchozích studií, které prokázaly pokles přechodných B buněk [8, 28, 40], dospělí pacienti indikovali mírně zvýšený počet přechodných B buněk. Navíc Lemarquis a kol. prokázali pokles funkční aktivity přechodných B buněk na základě produkce IL-10 a stimulace CpG [40]. Vzhledem k defektu v terminálních stádiích B lymfocytů u SIgAD se zdá, že nárůst přechodných B lymfocytů a naivních B lymfocytů u našich pacientů je způsoben kompenzačním mechanismem, který zvyšuje časný vývoj B lymfocytů. Pokud jde o rozdílné výsledky mezi naší studií a ostatními, zdá se, že tento rozdíl je způsoben různými procesy výběru, protože všichni naši pacienti byli symptomatickí, zatímco jiní studovali heterogenně asymptomatické a symptomatické pacienty se SIgAD. Pokud jde o podskupiny T buněk, pozorovali jsme snížení celkového počtu CD4+ T buněk, T1, T2 a Treg buněk a zvýšení TEMRA u CD4+ i CD{46}} buněk. V souladu s našimi výsledky předchozí studie prokázaly zvýšení a snížení populace CD8+ a CD4+ T lymfocytů [4]. Také jsme zjistili, že centrální paměť v CD4+ i CD{51}} T buňkách a efektorová paměť v CD8+ T lymfocytech byla u pacientů se SIgAD ve srovnání s HCs snížena. Pozorovali jsme významný nárůst podskupiny buněk TEMRA v populaci CD4+ i CD8+ lymfocytů, zejména u pacientů se závažným SIgAD. TEMRA je třetí podskupina paměti T buněk v periferních zánětlivých tkáních, které exprimují CD45RA, ale postrádají expresi CCR7 nebo CD27. U lidí je akumulace buněk TEMRA ovlivněna chronickými infekcemi, jako je CMV [41, 42]. Zvýšení těchto podskupin ukončených T buněk může být způsobeno chronickou buněčnou odpovědí na infekce u těchto pacientů; je však třeba provést další studie týkající se tohoto jevu. V souladu s našimi výsledky Nechvátalová et al. prokázali expandované CD4+ a CD8+ TEMRA buňky u pacientů se SIgAD, které souvisely s infekcí CMV [43]. U pacientů se SIgAD jsme nezkoumali CMV infekci, ale zvýšení počtu podskupiny TEMRA buněk u našich pacientů by mohlo souviset s chronickými infekcemi. Nedávno jsme hodnotili specifické protilátkové odpovědi na PPSV-23 u pacientů se SIgAD a AT a odhalili jsme, že 18,6 % pacientů se SIgAD a 81,3 % pacientů s AT mělo nedostatečnou odpověď. Počet plazmablastů, B buněk marginální zóny, přechodných B buněk, naivních CD8+ T buněk a procento CD8+ T buněk, IgM paměťových B buněk a změněných paměťových B buněk u pacientů se SIgAD byl významně nižší ve skupině nereagující než ve skupině respondérů. I když deficit specifických protilátek je častější u pacientů s AT než u pacientů se SIgAD [44]. Regulační T buňky hrají důležitou roli v produkci protilátek IgA transformací sekrece růstového faktoru beta (TGF- ) [45–47]. Zjistili jsme signifikantní snížení Treg u našich pacientů v souladu s předchozími publikovanými studiemi [48], ačkoli jedna studie uváděla zvýšení Treg u pacientů se SIgAD [43]. Byla také popsána korelace mezi redukovanými Treg buňkami a závažností onemocnění SIgAD, zejména u jedinců s autoimunitou, a deficitem IgA CSR u pacientů se závažnými klinickými projevy [30, 48]. Nízká frekvence Treg buněk a dalších podskupin T buněk, včetně T1 a T2 u našich pacientů, může být způsobena nízkými emigranty thymu způsobenými defektní thymopoézou nebo zvýšenou apoptózou těchto buněk [49]. Funkční test T-buněk pomocí mitogenní nebo antigenní stimulace je důležitým znakem v diagnostice různých imunitních poruch a imunodeficiencí [50]. Tradičně existuje jeden protokol pro hodnocení funkce T lymfocytů založený na příjmu [3H] thymidinu po stimulaci PHA pomocí radioaktivních složek, které vyžadují specifické laboratorní podmínky, a také není specifický pro T lymfocyty, protože může stimulovat několik dalších imunitních buněk. studna. Na druhou stranu, nejdůležitější slabinou je, že nebylo možné získat žádné informace o konkrétních podskupinách buněk. Test proliferace CFSE je praktickou volbou pro hodnocení odpovědí T buněk na antigen nebo mitogen u pacientů s IEI, zejména SIgAD pro zacílení dalších potenciálních analýz defektů T buněk u těchto pacientů [51]. Dosud existuje jen málo zpráv o defektech odpovědi T-buněk u pacientů se SIgAD. Jak se očekávalo, naše studie neodhalila žádný významný rozdíl v odpovědi T buněk mezi pacienty a kontrolami. Když jsme však kategorizovali pacienty do dvou skupin na základě těžkých a mírných fenotypů, těžcí pacienti indikovali sníženou proliferaci T buněk ve srovnání s mírnými pacienty. Tento výsledek by mohl být důležitým zjištěním pro kategorizaci pacientů se SIgAD pro znalost prognózy pacienta. Nedávno jsme uvedli, že proliferace T buněk byla výrazně narušena ve srovnání se zdravými kontrolami u pacientů s CVID a pacientů s AT [29, 52]. Navíc to naznačuje, že pacienti se SIgAD s defektní proliferací T-buněk by měli být dále sledováni pro přesné lékařské ošetření. Doporučujeme další studie pro hodnocení účinku funkce T buněk u pacientů se SIgAD na základě těžkých a mírných fenotypů v jiných studiích. Omezení experimentu zahrnovalo malý počet symptomatických pacientů, nedostupnost mnoha z nich a e, a dokonce zlepšení některých pacientů.

Závěry

Naše výsledky ukázaly významné malality ve vzorcích B buněk podobných pacientům s CVID. Vzhledem k tomu, že CVID a těžké formy SIgAD sdílejí téměř podobné klinické a imunologické fenotypy a s největší pravděpodobností genetické pozadí, je tento pojem předvídatelný. Na základě fenotypových analýz jsme pozorovali některé další abnormality u pacientů se SIgAD se závažnými fenotypy, jako je vysoká subpopulace CD21low B lymfocytů a defekt proliferace T lymfocytů. V souladu s tím se u těžkých pacientů projevuje vyšší počet respiračních infekcí ve srovnání s mírným SIgAD, přičemž mnoho pacientů trpí sinusitidou, otitidou, pneumonií a bronchiektázií, což naznačuje další sledování a přesnější léčbu u těchto pacientů. Otcové této studie naznačují, že zkoumání podskupin B a T buněk by mohlo být užitečné pro lepší pochopení patogeneze a prognózy onemocnění.

Reference

1. Aghamohammadi A, Mohammadi J, Parvaneh N, Rezaei N, Moin M, Espanol T, a kol. Progrese selektivního deficitu IgA do běžné variabilní imunodeficience. Int Arch Allergy Immunol. 2008;147(2):87–92.

2. Bagheri Y, Sanaei R, Yazdani R, Shekarabi M, Falak R, Mohammadi J, et al. Heterogenní patogeneze selektivního deficitu imunoglobulinů. Int Arch Allergy Immunol. 2019;179(3):232–46.

3. Nechvátalová J, Pikulová Z, Štikarovská D, Pešák S, Vlková M, Litzman J. Subpopulace B-lymfocytů u pacientů se selektivním deficitem IgA. J Clin Immunol. 2012;32(3):441–8.

4. Litzman J, Vlková M, Pikulová Z, Štikarovská D, Lokaj J. Subpopulace T a B lymfocytů a aktivační/diferenciační markery u pacientů se selektivním deficitem IgA. Clin Exp Immunol. 2007;147(2):249–54.

5. Lemarquis AL, Einarsdottir HK, Kristjansdottir RN, Jonsdottir I, Ludviksson BR. Přechodné B buňky a reakce TLR9 jsou defektní při selektivním deficitu IgA. Front Immunol. 2018;9:909.

6. Celiksoy M, Yildiran A. Srovnání podskupin B buněk u primárních imunitních nedostatků postupuje se zdravými dětmi s odpovídajícím deficitem protilátek. Allergol Immunopathol. 2016;44(4):331–40.

7. Marasco E, Farroni C, Cascioli S, Marcellini V, Scarsella M, Giorda E, et al. Aktivace B-buněk pomocí CD40L nebo CpG měří funkci podskupin B-buněk a identifikuje specifické defekty u pacientů s imunodeficiencí. Eur J Immunol. 2017;47(1):131–43.

8. Lemarquis AL, Theodors F, Einarsdottir HK, Ludviksson BR. Mapování signálních drah spojených se sIgAD odhaluje narušenou aktivaci B-buněk STAT3 řízenou IL-21-. Front Immunol. 2019;10:403.

9. Borte S, Pan-Hammarstrom Q, Liu C, Sack U, Borte M, Wagner U a kol. Interleukin-21 obnovuje produkci imunoglobulinů ex vivo u pacientů s běžnou variabilní imunodeficiencí a selektivním deficitem IgA. Krev. 2009;114(19):4089–98.

10. Abolhassani H, Kiaee F, Tavakol M, Chavoshzadeh Z, Mahdaviani SA, Momen T, et al. Čtvrtá aktualizace íránského národního registru primárních imunodeficiencí: integrace molekulární diagnostiky. J Clin Immunol. 2018;38(7):816–32.

11. Aghamohammadi A, Rezaei N, Yazdani R, Delavari S, Kutukculer N, Topyildiz E, et al. Konsensuální registr Středního východu a severní Afriky o vrozených chybách imunity. J Clin Immunol. 2021;41(6):1339–51.

12. Seidel MG, Kindle G, Gathmann B, Quinti I, Buckland M, van Montfrans J, et al. Pracovní definice registru European Society for Immunodeficiencies (ESID) pro klinickou diagnostiku vrozených poruch imunity. J Allergy Clin Immunol Pract. 2019;7(6):1763–70.

13. Shad TM, Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P a kol. Variabilní abnormality v podskupinách T a B buněk u ataxie telangiektázie. J Clin Immunol. 2020: 1–13.

14. TofghiZavareh F, Mirshafey A, Yazdani R, Keshtkar AA, Abolhassani H, Bagheri Y, et al. Podskupiny lymfocytů v korelaci s klinickým profilem u pacientů s CVID bez monogenních defektů. Expert Rev Clin Immunol. 2021;17(9):1041–51.

15. Moeini Shad T, Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P a kol. Variabilní abnormality v podskupinách T a B buněk u ataxie telangiektázie. J Clin Immunol. 2021;41(1):76–88.

16. Azizi G, Mirshafey A, Abolhassani H, Yazdani R, Ghanavatinejad A, Noorbakhsh F, et al. Nerovnováha cirkulujících pomocných podskupin T a regulačních T buněk u pacientů s deficitem LRBA: Korelace se závažností onemocnění. J Cell Physiol. 2018;233(11):8767–77.

17. Azizi G, Mirshafey A, Abolhassani H, Yazdani R, Jafarnezhad-Ansariha F, Shaghaghi M, et al. Cirkulující podskupiny pomocných T-buněk a regulačních T-buněk u pacientů s běžnou variabilní imunodeficiencí bez známého monogenního onemocnění. J Investig Allergol Clin Immunol. 2018;28(3):172–81.

18. Reisi M, Azizi G, Kiaee F, Masiha F, Shirzadi R, Momen T, et al. Hodnocení plicních komplikací u pacientů s primární poruchou imunodeficience. Eur Ann Allergy Clin Immunol. 2017;49(3):122.

19. Cerutti A, Chen K, Chorny A. Imunoglobulinové odpovědi na slizničním rozhraní. Annu Rev Immunol. 2011;29:273–93.

20. Bagheri Y, Babaha F, Falak R, Yazdani R, Azizi G, Sadri M a kol. IL-10 indukuje sekreci TGF-, upregulaci receptoru TGF-II a sekreci IgA v B buňkách. Eur Cytokine Netw. 2019;30(3):107–13.

21. Ozkan H, Atlihan F, Genel F, Targan S, Gunvar T. Deficit podtříd IgA a/nebo IgG u dětí s recidivujícími respiračními infekcemi a jeho vztah k chronickému poškození plic. J Investig Allergol Clin Immunol. 2005;15(1):69–74.

22. Tavakol M, Jamee M, Azizi G, Sadri H, Bagheri Y, Zaki-Dizaji M, et al. Diagnostický přístup k pacientům s podezřením na primární imunodeficienci. Endocr Metab Imunity Disord Drug Targets. 2020;20(2):157–71.

23. Resnick ES, Moshier EL, Godbold JH, Cunningham-Rundles C. Morbidita a mortalita u běžné variabilní imunodeficience v průběhu 4 desetiletí. Krev. 2012;119(7):1650–7.

24. Yazdani R, Abolhassani H, Asgardoon M, Shaghaghi M, Modaresi M, Azizi G, et al. Infekční a neinfekční plicní komplikace u pacientů s primární poruchou imunodeficience. J Investig Allergol Clin Immunol. 2017;27(4):213–24.

25. Ahmadi M, Nouri M, Babaloo Z, Farzadi L, Ghasemzadeh A, Hamdi K a kol. Léčba intravenózním imunoglobulinem (IVIG) moduluje Th17 periferní krve a regulační T buňky u pacientek s opakovaným potratem: nerandomizovaná, otevřená klinická studie. Immunol Lett. 2017;192:12–9.

26. Yazdani R, Seify R, Ganjalikhani-Hakemi M, Abolhassani H, Eskandari N, Golsaz-Shirazi F, et al. Porovnání různých klasifikací pro pacienty s běžnou variabilní imunodeficiencí (CVID) pomocí měření podskupin B-buněk. Allergol Immunopathol (Madr). 2017;45(2):183–92.

27. Aghamohammadi A, Abolhassani H, Rezaei N. Primární imunodeficitní onemocnění v Íránu: minulost, přítomnost a budoucnost. Arch Iran Med. 2021. https://doi. org/10.34172/aim.2021.18.

28. Aghamohammadi A, Abolhassani H, Biglari M, Abolmaali S, Moazzami K, Tabatabaeiyan M, et al. Analýza přepnutých paměťových B buněk u pacientů s deficitem IgA. Int Arch Allergy Immunol. 2011;156(4):462–8.

29. Yousef B, Amirifar P, Delavari S, Rae W, Kokhaei P, Abolhassani H a kol. Variabilní abnormality v podskupinách T a B buněk u ataxie telangiektázie. J Clin Immunol. 2020. https://doi.org/10.1007/s10875-020-00881-9.

30. Abolhassani H, Gharib B, Shahinpour S, Masoom SN, Havaei A, Mirminachi B, et al. Autoimunita u pacientů se selektivním deficitem IgA. J Investig Allergol Clin Immunol. 2015;25(2):112–9.

31. Arkwright PD, Abinun M, Cant AJ. Autoimunita u onemocnění primární imunodeficience člověka. Krev. 2002;99(8):2694–702.

32. Cerutti A, Cols M, Puga I. Buňky B marginální zóny: přednosti lymfocytů produkujících vrozené protilátky. Nat Rev Immunol. 2013;13(2):118–32.

33. Bukowska-Straková K, Kowalczyk D, Baran J, Siedlar M, Kobylarz K, Zembala M. B-buněčný kompartment v periferní krvi dětí s různými typy primární humorální imunodeficience. Pediatr Res. 2009;66(1):28–34.

34. Karaman SBES, Gülez N, Genel F. Význam podskupin B-buněk u pacientů s neklasifikovanou hypogamaglobulinémií a souvislost s požadavkem na nitrožilní substituci imunoglobulinů. Iran J Immunol. 2018;15(1):1–13.

35. Patuzzo G, Mazzi F, Vella A, Ortolani R, Barbieri A, Tinazzi E, et al. Imunofenotypová analýza B lymfocytů u pacientů s běžnou variabilní imunodeficiencí: identifikace CD23 jako užitečného markeru v definici onemocnění. ISRN Immunol. 2013. https://doi.org/10. 1155/2013/512527.

36. Patuzzo G, Barbieri A, Tinazzi E, Veneri D, Argentino G, Moretta F a kol. Autoimunita a infekce při běžné variabilní imunodeficienci (CVID). Autoimmun Rev. 2016;15(9):877–82.

37. Rakhmanov M, Keller B, Gutenberger S, Foerster C, Hoenig M, Driessen G, et al. Cirkulující CD21low B buňky s běžnou variabilní imunodeficiencí připomínají tkáňové navádění, vrozené B buňky. Proč Natl Acad Sci. 2009;106(32):13451–6.

38. Isnardi I, Ng YS, Menard L, Meyers G, Saadoun D, ​​Srdanovic I, et al. Komplementový receptor 2/CD21-lidské naivní B buňky obsahují většinou autoreaktivní nereagující klony. Krev. 2010;115(24):5026–36.

39. Sims GP, Ettinger R, Shirota Y, Yarboro CH, Illei GG, Lipsky PE. Identifikace a charakterizace cirkulujících lidských přechodných B buněk. Krev. 2005;105(11):4390–8.

40. Lemarquis AL, Einarsdottir HK, Kristjansdottir RN, Jonsdottir I, Ludviksson BR. Přechodné B lymfocyty a reakce TLR9 jsou defektní při selektivním deficitu IgA. Front Immunol. 2018. https://doi.org/10.3389/fmmu.2018. 00909.

41. Willinger T, Freeman T, Hasegawa H, McMichael AJ, Callan MF. Molekulární podpisy odlišují lidskou centrální paměť od podskupin CD8 T buněk efektorové paměti. J Immunol. 2005;175(9):5895–903.

42. MUDr. Martin, Badovinac VP. Definování paměťové CD8 T buňky. Front Immunol. 2018;9:2692.

43. Nechvátalová J, Pavlík T, Litzman J, Vlková M. Terminálně diferencované paměťové T buňky jsou zvýšené u pacientů s běžnou variabilní imunodeficiencí a selektivním deficitem IgA. Cent Eur J Immunol. 2017;42(3):244–51.

44. Khanmohammadi S, Shad TM, Delavari S, Shirmast P, Bagheri Y, Azizi G a kol. Hodnocení specifických protilátkových odpovědí u pacientů se selektivním deficitem IgA a ataxií telangiektázie. Endocr Metab Imunity Disord Drug Targets. 2022;22(6):640–9.

45. Cazac BB, Roes J. TGF-receptor řídí odezvu B buněk a indukci IgA in vivo. Imunita. 2000;13(4):443–51.

46. ​​Van Vlasselaer P, Punnonen J, De Vries J. Transformující růstový faktor-beta řídí přepínání IgA v lidských B buňkách. J Immunol. 1992;148(7):2062–7.

47. Cerutti A, Rescigno M. Biologie reakcí střevního imunoglobulinu A. Imunita. 2008;28(6):740–50.

48. Soheili H, Abolhassani H, Arandi N, Khazaei HA, Shahinpour S, Hirbod Mobarakeh A, et al. Hodnocení přirozených regulačních T-buněk u subjektů se selektivním deficitem IgA: od seniorského nápadu k novým příležitostem. Int Arch Allergy Immunol. 2013;160(2):208–14.

49. Yazdani R, Fatholahi M, Ganjalikhani-Hakemi M, Abolhassani H, Azizi G, Hamid KM a kol. Role apoptózy u běžné variabilní imunodeficience a selektivního deficitu imunoglobulinu A. Mol Immunol. 2016;71:1–9.

50. McCusker C, Warrington R. Primární imunodeficience. All Asth Clin Immun. 2011;7(Suppl 1):S11.

51. Marits P, Wikström AC, Popadic D, Winqvist O, Thunberg S. Hodnocení funkce T a B lymfocytů v klinické praxi pomocí proliferačního testu založeného na průtokové cytometrii. Clin Immunol. 2014;153(2):332–42.

52. TofghiZavareh F, Mirshafey A, Yazdani R, Keshtkar AA, Abolhassani H, Mahdaviani SA, et al. Imunofenotypová a funkční analýza podskupin lymfocytů u pacientů s běžnou variabilní imunodeficiencí bez monogenních defektů. Scand J Immunol. 2022;96(1):e13164.