Aplikace extraktu z listů Hibiscus Cannabinus L. (kenaf) jako činidla pro bělení pokožky a proti stárnutí v přírodním kosmetickém prototypu
Mar 26, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Yan Yi Sim a Kar Lin Nyam
ABSTRAKTNÍ
V Malajsii se průmyslové odpady zHibiscus cannabinusL. (kenaf) průmysl, zejména dovolená, způsobuje problémy v udržitelnosti. Biologická aktivita listů kenafu byla popsána v několika předchozích studiích, je tedy uvěřitelné, že extrakt z listů kenafu (KLE) lze použít jako funkční složku v kosmetických přípravcích. Cílem této studie tedy bylo vyvinout přírodní kosmetický přípravek obsahující KLE a vyhodnotit jeho fyzikálně-chemické vlastnosti, mikrobiologické vlastnosti, stabilitu při skladování, biologické aktivity (antioxidant, antityrosináza aproti stárnutí), in vitro cytotoxicita (na normálních lidských dermálních fibroblastech a melanomových buňkách B16F10) a test melanogeneze (intracelulární aktivita tyrosinázy a snížení produkce melaninu). Výsledky ukázaly, že KLE lotion (KLEL) připravený z 15% oleje ze semen kenaf (KSO) (F2) s 0,1 % w/w KLE poskytuje nejlepší fyzikální a mikrobiologickou stabilitu, bez toxicity na lidské buňky. KLEL také představoval obsah antioxidantů až 1,84 ± 0.{20}}7 mg ekvivalentu kyseliny kávové (CAE)/ga 21,62 ± 0,76 mg ekvivalentu hydrátu katechinu (CHE)/g pro celkový obsah fenolů (TPC ) a celkový obsah flavonoidů (TFC). Kromě toho KLEL prezentoval antityrosinázovou kapacitu při inhibici tvorby mykofenolátu (30,28 ± 3,90 procenta) a difenolů (11,40 ± 0,29 procenta) a poprvé odhalil,proti stárnutívlastnosti inhibicí aktivit kolagenázy (36,41 ± 0,54 procent) a elastázy (23,13 ± 1,56 procenta). Pokud jde o inhibiční aktivitu melanogeneze, KLEL vykazoval vysokou účinnost při potlačování aktivity buněčné tyrosinázy a obsahu melaninu na buňkách B16F10. Celkově jsou výsledky této studie velmi slibné pro vývoj prototypů přírodní kosmetiky využívající listy kenafu.
pouštní cistanche dračí byliny: proti stárnutí
1. Úvod
V poslední době získal veřejný zájem cirkulární ekonomický model, který může zlepšit udržitelnost nakládání s odpady minimalizací produkce odpadů a zachováním dlouhodobé hodnoty při současném snižování negativních důsledků nedostatku zdrojů a zhoršování životního prostředí (Morseletto, 2020). Obecně lze říci, že průmysl průmyslových plodin každoročně vytváří značné množství vedlejších produktů s nízkou ekonomickou hodnotou.Hibiscus cannabinusPrůmysl L. KR9 (kenaf), je jedním ze zemědělských sektorů, které přispívají k HDP Malajsie (hrubý domácí produkt), přičemž hmotnost produkce suchých stonků kenafu vzrostla ze 7,1 (000 tuny) v roce 2013 na 7,6 ({{7} } tun) v roce 2014 a předpokládá se, že celosvětový trh s kenafem překročí 854 milionů USD do roku 2025 (Abdelrhman et al., 2016). Vzniká však velké množství vedlejších produktů, jako jsou semena a listy kenafu, které přispívají k problémům s udržitelností.
Listy Kenaf, které tvoří značné množství celkových vedlejších produktů, jsou nejméně charakterizované a ceněné ze všech vytvořených vedlejších produktů. Kvůli kruhovému přístupu je důležité znovu použít nebo získat listy kenafu do produktů s přidanou hodnotou, protože nabízí mnoho výhod v oblasti ekonomické, environmentální a sociální (Coderoni a Perito, 2019). Listy Kenaf se skládají z bohatých zdrojů bioaktivních sloučenin, jako je kyselina chlorogenová, kávová pomocná látka, kaempferol a hydrát katechinu, jak prokázaly studie provedené Kho et al. (2019); Sim a Nyam (2019) a Haw a kol. (2020). Obvykle je však určen k výrobě produktů s nízkou ekonomickou hodnotou: dietní vlákniny a krmiva pro zvířata (Lim et al., 2020).
Termín „návrat k přírodě“ byl široce používán ve výzkumu a vývoji kosmetického průmyslu, protože použití extraktů botanického původu vedlo k dobrému přijetí spotřebiteli. Podle studie provedené Simem et al. (2019), extrakt z listů kenaf (KLE) prokázal slibné antioxidační a antityrosinázové vlastnosti, měl potenciál být použit jako přísady s přidanou hodnotou při vývoji kosmetických produktů. Je důležité vyvinout stabilní a bezpečné formulace obsahující KLE, protože obsahuje mnoho polyfenolových sloučenin, které prokázaly kůžiběleníaproti stárnutívlastnosti. Při vývoji nových kosmetických formulací je třeba vzít v úvahu několik požadavků, jako je typ formulace, záměr použití a potenciální interakce mezi složkami použitými ve formulacích, což jako celek přispívá k potřebě studií stability a bezpečnosti. (Garbossa a Maia Campos, 2016).
Studie stability, které zahrnují studium fyzikálních, chemických a mikrobiálních vlastností, jsou nezbytné pro kosmetické formulace po procesu vývoje. Kromě toho, aby se zabránilo jakémukoli nepříznivému účinku nebo alergické reakci, měly by být kosmetické výrobky také testovány pomocí testu cytotoxicity in vitro na linii normálních lidských kožních buněk. Cílem této práce je tedy vyvinout přírodní kosmetický přípravek obsahující KLE (KLE lotion – KLEL). Poté byl KLEL hodnocen z hlediska jeho fyzikálně-chemických charakteristik, mikrobiologických vlastností, stability při skladování, in vitro cytotoxicity (na normálních lidských dermálních fibroblastech a melanomových buňkách B16F10) a testu melanogeneze (intracelulární tyrosinázová aktivita a snížení produkce melaninu). Tato studie nám také umožnila poprvé stanovit nejen antioxidační a antityrosinázovou aktivitu KLEL, ale také jejich inhibiční aktivitu na kolagenázu a elastázu.
2. Materiály a metody
2.1. Rostlinné materiály a chemikálie
ČerstvýHibiscus cannabinusListy L. KR9 (kenaf) 90 dní po vysetí a semena byly získány od Lembaga Kenaf & Tembakau Negara (LKTN, Malajsie). Span 20 a Tween 80 byly zakoupeny od Sigma Aldrich (Mnichov, Německo), Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG a Emulgade® SE-PF byly získány od BASF (Malajsie) a glycerin byl zakoupen od Croda International Plc. (Spojené království). Normální buněčná linie lidských dermálních fibroblastů (NHDF) byla získána z Lonza (Basilej, Švýcarsko) a myší melanom (B16F10) byl zakoupen od ATCC (Manassas, VA, USA). Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) bylo zakoupeno od Nacalai Tesque (Japonsko). Všechny ostatní použité chemikálie byly čistoty pro analytická činidla (Belgie, Německo, Malajsie). Během analýzy byla použita ultračistá voda (Millipore, USA).
2.2. Metody
2.2.1. Sušení listů kenafu
Listy kenafu byly vyčištěny ultračistou vodou, vysušeny a poté přes noc udržovány při -80 ◦C. Poté byl vzorek sušen v lyofilizační sušárně (Christ, Německo), pod 0,0004 bar po dobu 48 hodin, rozemlet, vakuově zabalen a skladován při -20 stupních.
2.2.2. Příprava částečně čištěného extraktu z listů kenafu (KLE)
Pulzní ultrazvuková extrakce (PUAE) KLE byla provedena podle Sim et al. (2019). Vzorky byly zváženy extrakčními rozpouštědly (ethanolem) v poměru 1:10. Poté byla směs podrobena pulzní ultrazvukové extrakci (Sartorius, Německo) při 50% amplitudě sonikace, 1 minutě trvání pulsu a 1 minutové periodě pulzního intervalu s teplotou udržovanou na 18–22 ± 3 stupních (tři cykly ). Poté byl extrakt zfiltrován a zakoncentrován ve vakuové rotační odparce (Buchi, Švýcarsko). Částečné čištění KLE bylo provedeno podle Seabra et al. (2010) s mírnou úpravou. Surový extrakt byl nanesen na kolonu naplněnou silikagelem a eluován gradientovým rozpouštědlem n-hexan-ethylacetát (100:00, 90:10, 80:20, 50:50 , 20:80, 10:90, 00:100) a ethylacetát methanol (100:00, 90:10, 80:20, 50:50, 20:80, 10:90 , 00:100). Částečně vyčištěný KLE byl koncentrován do sucha pomocí rotační odparky a skladován při -20 stupních pro budoucí použití.
2.2.3. Extrakce oleje ze semen kenaf (KSO) rozpouštědlem
KSO byl extrahován podle Chew et al. (2015). Semena Kenaf byla rozdrcena na jemný prášek pomocí mlýnku (Panasonic, Japonsko) a přidán hexan v poměru 1:5. Oleje byly extrahovány pomocí Soxhletova extraktoru při 60 °C po dobu 3 hodin a hexan byl odstraněn pomocí rotační odparky. Po propláchnutí dusíkem byl KSO skladován při -20 stupních pro budoucí použití (Chew et al., 2015).
2.2.4. Experimentální vývoj složení lotion obsahujícího KLE
Nejprve bylo složení základu lotion (bez KLE) optimalizováno použitím 4 různých koncentrací oleje ze semen kenaf (KSO) (10 procento, 15 procent, 20 procenta a 25 procent). Základ pleťové vody byl poté komparativním způsobem vyhodnocen z hlediska různých parametrů: fyzikální vzhled, vůně, homogenita, pH, viskozita, centrifugace a vyhodnocení zmrazení-rozmrazení, aby se vybrala nejlepší formulace základu pleťové vody pro další studium. S ohledem na výsledky z výše uvedených parametrů byla pro začlenění s KLE (0,1 procenta hmotn.) (KLEL) vybrána nejvhodnější formulace základu lotion (15 procent KSO). Stručně řečeno, složky nepolární fáze (Emulgade® SE PF, Span 20 a KSO) a polární fáze (voda, Tween 80 a glycerin) byly zahřáté na 75 ± 2 stupně. Poté byla nepolární fáze přidávána po kapkách k polární fázi za rychlého míchání pomocí magnetického míchadla (Thermo Fisher Scientific, USA) při 350 ot./min. za vzniku primární emulze, po které následovala vysokosmyková homogenizace pomocí IKA T25 digital ULTRA -TURRAX® (IKA Laboratory Equipment, Německo) při 3200 otáčkách za minutu po dobu 3 minut a ultrazvuková homogenizace při 40procentní amplitudě po dobu 3 minut. Byly přidány Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG a KLE a smíchány v emulzi O/W při teplotě místnosti. Báze pleťové vody KSO bez KLE slouží jako kontrola (KSOL). Zatímco základ lotion přidaný s kyselinou kojovou (0,1 procenta hmotn./hmotn.) (KAL) sloužil jako pozitivní kontrola pro antityrosinázovou aktivitu a test melanogeneze. Základ pleťové vody s přídavkem hydrátu katechinu (0,1 procenta hm./hm.) (CHL) sloužil jako pozitivní kontrola pro antikolagenázovou a antielastázovou aktivitu.
2.2.5. Fyzikálně-chemická analýza
2.2.5.1. Vzhled, vůně a homogenita.
Podle Hanifah a Jufri (2018) byly formulace lotion kontrolovány na jejich barvu, vůni a homogenitu a separaci fází.
2.2.5.2. pH. Standardní roztoky byly použity ke kalibraci elektrody pH metru před měřením.
pH vzorků bylo stanoveno pH metrem (Mettler Toledo, Švýcarsko) při teplotě místnosti.
2.2.5.3. Barva.
Barva bude vyhodnocena pomocí kolorimetru (Hunter Lab, Spojené státy americké). Výsledky budou vyjádřeny podle barevného prostoru L* (světlost), a* (zelená), b* (žlutá) a celkového barevného rozdílu (ΔE). Celkový barevný diferenciál (ΔE) pro všechny vzorky byl vypočítán pomocí rovnice takto: ΔE = ̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅ (l ∗ - L ∗ 0) 2 plus (a ∗ - a ∗ 0) 2 plus (b ∗ - b ∗ 0) 2√
2.2.5.4. Viskozita.
Viskozita vzorků byla hodnocena v Brook field viskozimetru pomocí LV-64 vřetena podle Gyawali et al. (2016) s mírnou úpravou. Vzorek byl přímo ponořen do vřetena s rychlostí otáčení 100 ot./min a byla měřena viskozita (cP).
2.2.5.5. Roztíratelnost.
Roztíratelnost vzorků byla stanovena metodou paralelních desek (Gyawali et al., 2016). Vzorek byl přesně zvážen (1 g) a umístěn na jedno ze sklíček (20 × 20 cm2). Poté bylo druhé sklíčko umístěno na horní část vzorku a na horní sklíčko bylo umístěno 100 g závaží, aby se zajistilo, že vzorek bude přitlačen rovnoměrně. Po 1 minutě bylo závaží odstraněno a byl změřen průměr rozprostření (cm).
2.2.5.6. Hodnocení centrifugace.
Vzorek byl vložen do centrifugační zkumavky a poté centrifugován při 3750 otáčkách za minutu po dobu 30 minut (Eppendorf 5417R, USA). Tento centrifugační test (rovný 1-roční gravitaci) určuje stabilitu vzorku (Hiola et al., 2018).
2.2.5.7. Hodnocení zmrazení-rozmrazení.
Studie zmrazování a rozmrazování byly provedeny podle předchozích metod s několika modifikacemi (Krongrawa et al., 2018). Každý vzorek byl střídavě udržován při nízké teplotě, 4 ± 1 ◦C (24 h) a horké teplotě, 45 ± 1 ◦C (24 h) se 75 procenty ± 2 procenty RH (relativní vlhkost) po 6 cyklů ve vzduchotěsných skleněných nádobách. Viskozita vzorků byla stanovena po cyklu teplotního namáhání.
2.2.6. Determinant obsahu antioxidantů
2.2.6.1. Celkový obsah fenolů (TPC).
Celkový obsah fenolů byl stanoven podle Lima et al. (2007). Vzorek (10 mg/ml) byl smíchán s 10 % Folin-Ciocalteuova činidla a 7,5 % (w/w) Na2C03, následovala 30minutová inkubace ve tmě. Absorbance byla měřena při 765 nm pomocí UV-vis spektrofotometru (Secoman, Francie). Kalibrační rovnice pro kyselinu kávovou byla y=0,0269 plus 9,69x (r2=0,999) (Sim et al., 2019). Výsledky byly vyjádřeny jako mg ekvivalentu kyseliny kávové (CAE)/g vzorku.
2.2.6.2. Celkový obsah flavonoidů (TFC).
Celkový obsah flavonoidů byl hodnocen podle Ogbunugafo et al. (2011). Obecně byl vzorek (10 mg/ml) smíchán s 15% NaN02, 10% roztokem AlCl3, ultračistou vodou a 1M NaOH. Absorbance byla měřena okamžitě při 510 nm ve srovnání se standardem připraveným za použití hydrátu katechinu (0,02-0,1 mg/ml). Kalibrační rovnice pro hydrát katechinu byla y=0,004 plus 3,1x (r2=0,999) (Sim et al., 2019). Celkový obsah flavonoidů (TFC) byl vyjádřen jako miligramy ekvivalentů hydrátu katechinu (CHE)/g vzorku.
Výhody extraktu z cistanche: proti stárnutí
2.2.7. Antikolagenázová aktivita
Antikolagenázová aktivita založená na proteolytické degradaci mezi kolagenázou a syntetickým substrátem (FALGPA-N-(3-[2-furyl]-akryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala) při 345 nm v přítomnost inhibitorů kolagenázy byla provedena podle Barrantese a Guiney (20}03) s určitou modifikací. 0,25 jednotek/ml kolagenázy (40 μl) odvozené z Clostridium histolyticum bylo ponecháno reagovat s 10 μl testovaných vzorků a 20 μl 50 mM tricinového pufru (pH 7,5, se 100 mM CaCl2 a 5 mM NaCl) ve tmě po dobu 15 minut. Po preinkubaci bylo do každé jamky přidáno množství 40 ul 2 mM roztoku FALGPA. Každý vzorek byl doprovázen slepým pokusem, který měl všechny složky kromě FALGPA, a absorbance byla stanovena po inkubaci po dobu 20 minut.
2.2.8. Bakteriologická analýza trvanlivosti KLEL
Metody použité pro celkový počet aerobních mikrobů (TAMC) a celkový počet kvasinek a plísní (TYMC) KLEL byly upraveny z bakteriologické analytické příručky FDA (BAM) (Huang et al., 2017). Vzorek (1 g) byl smíchán s 1 ml sterilního Tween 80 a objem byl upraven sterilní peptonovou vodou, aby se získala kompletní série ředění od 10-1 do 10-3. Pro TAMC byly vzorky naočkovány na živný agar pomocí metodou rozprostřené destičky a poté byly destičky inkubovány při 30 ± 2 °C po dobu 48 hodin. V případě TYMC byly vzorky naočkovány na misky s bramborovo-dextrózovým agarem s použitím metody rozprostřené plotny a misky byly následně inkubovány při 30 ± 2 °C po dobu 7 dnů. Destičky byly zkoumány na mikrobiální růst po inkubační době.
2.3. Statistická analýza
Všechny výsledky byly analyzovány pomocí statistického balíčku Minitab 16.2.1 (Minitab Inc., Pennsylvania, USA), byla provedena jednocestná analýza rozptylu (ANOVA) a následně Tukeyho test ke stanovení významného rozdílu (p < 0="" .05).="" pro="" analýzu="" dat="" byly="" uvedeny="" průměry="" ±="" standardní="" odchylka="" (sd)="" (n="">
3. Výsledky a diskuse
3.1. Optimalizace složení základu pleťové vody
Podle Hioly a kol. (2018), optimalizace základu lotion (preformulace) má důležitou roli pro získání dobrého a stabilního složení. Proto byl základ pleťové vody optimalizován použitím 4 různých procent KSO, jak je uvedeno v tabulce 1. Byly hodnoceny podle vzhledu, vůně, homogenity, fyzikální stability, pH, roztíratelnosti, viskozity a analýzy zmrazováním a rozmrazováním (doplňkové materiály - S1 a S2). Všechny formulace základu lotion připravené pomocí KSO měly světle mléčně žlutou až mléčně žlutou barvu s dobrým zápachem (Chu a Nyam, 2020). Na základě získaných výsledků byly hodnoty pH všech základních formulací lotion v rozmezí pH pokožky (4–6), což je důležité pro minimalizaci alergické reakce a zajištění stability kosmetické formulace po dobu skladování (Chu a Nyam , 2020). Všechny základní formulace lotion vykázaly pokles viskozity po analýze zmrazováním a rozmrazováním, ale stále v rozmezí pro dobré lotion (500–5000 cP) (Kusuma et al., 2017). Pro roztíratelnost platí, že čím vyšší je koncentrace KSO, tím menší je průměr roztíratelnosti v důsledku vysoké viskozity. Čím větší je roztíratelnost, tím snadněji lze kosmetický přípravek aplikovat na povrch kůže. Pro test stability odolností vůči centrifugaci nevykázaly F2 a F3 žádnou fázovou separaci, což naznačuje, že obě formulace byly stabilní po dobu 1 roku. F3 se však nedá snadno nalít a dává vzhled připomínající krémový přípravek, protože má vyšší viskozitu než F2. Proto byl F2 vybrán jako optimalizovaný základ pleťové vody pro začlenění do KLE.
k čemu se cistanche používá: proti stárnutí
3.2. Hodnocení složení pleťové vody KLE (KLEL).
3.2.1. Fyzikálně-chemická analýza
Na základě výsledků v tabulce 2, základ pleťové vody přidaný s KLE vykazoval světle mléčnou barvu s příjemnou vůní a nebylo pozorováno žádné oddělení fází. KLEL vykazoval vyšší hodnotu pH než kontrola, což naznačuje, že přidání KLE do kosmetického přípravku může vést ke zvýšení hodnoty pH. Hodnoty pH vzorků byly všechny kompatibilní s rozsahem pH pokožky a bezpečné pro pokožku. Mezi KLEL a kontrolou nebyly žádné významné rozdíly ve viskozitě a roztíratelnosti, což naznačovalo, že přidání KLE do emulze neovlivnilo viskozitu a roztíratelnost. Významné změny byly pozorovány v hodnotách L*, a* a b* KLEL ve srovnání s kontrolou, což prokázalo, že barva lotionu byla ovlivněna přirozenou zelenou barvou listů kenafu. KLEL má nejzelenější hodnotu pro a* (-2,24 ± 0.03) a nejžlutější pro hodnotu b* (15,54 ± 0.{{13} }1). Celkový barevný rozdíl (AE) KLEL ve srovnání s kontrolou byl statisticky významný p＜0,05 s hodnotou 6,82 ± 0,04 pro KLEL. Předchozí studie považovaly ΔE=2 za práh zrakové diskriminace (Zhou et al., 2009). Výsledky AE tedy prokázaly, že přidání KLE může ovlivnit barvu kosmetického přípravku.
3.2.2. Analýza obsahu antioxidantů
Tabulka 3 uvádí množství celkového obsahu fenolů (TPC) a flavonoidů (TFC). Získané výsledky naznačují, že formulovaný základ pleťové vody s KLE obsahuje výrazně vyšší TPC (1,84 ± 0.07 mgCAE/g) než kontrola (1,64 ± 0.0 6 mgCAE/g). Zatímco u TFC vykazoval KLEL také významně vyšší TFC (21,62 ± 0,76 mgCHE/g) ve srovnání s kontrolou (19,42 ± 0,27 mgCHE/g). Ve stejném rozsahu některých rostlinných vedlejších produktů má zahrnutí KLE na dermatologické bázi stále vysoký obsah antioxidantů, což zdůrazňuje jeho potenciální zdroj polyfenolových sloučenin v kosmetickém průmyslu (Adhikari et al., 2019; Rodrigues et al., 2014 ). Podle studie Hawa et al. (2020), listy kenafu jsou bohaté na různé typy polyfenolových sloučenin, jako je kyselina kávová, kyselina tříslová, katechin a kyselina chlorogenová.
3.2.3. Analýza antioxidační aktivity
Schopnost lotionů pohlcovat volné radikály byla zkoumána pomocí testu DPPH a ABTS. Tabulka 3 ukazuje, že KLEL vykazoval vyšší DPPH (1,16 ± 0,18 mgTEAC/g) a ABTS (0,50 ± 0).{11}} 4 mgTEAC/g) aktivita vychytávání radikálů ve srovnání s kontrolou. Výsledky testů DPPH a ABTS ukázaly podobné vzorce jako u TPC a TFC, kde může výrazně zlepšit antioxidační aktivitu přidáním KLE do základu lotion, tato zjištění naznačují, že KLE obsahuje lapače volných radikálů, které při aplikaci do kosmetických přípravků mohou hrát roli významnou roli jako primární antioxidant při potlačování volných radikálů způsobujících stárnutí pleti. Kromě toho KLEL (0,69 ± 0,20 mgTEAC/g) také prokázal významně nejvyšší schopnost redukce železitých iontů než kontrola (0,46 ± 0,09 mgTEAC/g), v souladu s DPPH a ABTS. Existuje potřeba neustálého přísunu antioxidačních sloučenin z vnějších zdrojů, jako je kosmetika, aby se obnovil individuální antioxidační obranný systém pokožky proti ROS, který způsobil stárnutí kůže (Działo et al., 2016). Kromě toho mohou být jako pleť použity přípravky lotion s aktivitou pohlcující radikály a snižující síluběleníagens down-regulovanou produkcí melaninu indukovanou UV zářením (Działo et al., 2016).
3.2.4. Enzymová inhibiční aktivita
Lotiony byly testovány proti tyrosináze, metaloproteinovému enzymu obsahujícímu měď, který se účastní biosyntézy melaninu, pro hodnocení in vitro antityrosinázové aktivity. Tabulka 5 ukazuje, že KLEL (30,28 ± 3,9{18}} procent) nevykazoval žádné významné rozdíly v anti-tyrosinázové aktivitě s pozitivní kontrolou (34,05 ± 4,60 procent) při použití L-tyrosinu jako substrátu . Nicméně ALL (11,40 ± 0,29 procenta) vykázala nižší antityrosinázovou aktivitu než pozitivní kontrola (15,01 ± 0,84 procenta), při použití L-DOPA jako substrátu. To ukázalo, že KLEL inhiboval hlavně mykofenolát spíše než difenoly. In vitroproti stárnutívlastnosti byly hodnoceny prostřednictvím inhibiční aktivity kolagenázy a elastázy. Enzymy, jako je kolagenáza a elastáza, mohou degradovat kolagen a elastin, které jsou zodpovědné za integritu a elasticitu kůže (Jesumani et al., 2019). Inhibice aktivity elastázy a kolagenázy by tedy snížila degradaci elastinu a kolagenu, čímž by se zabránilo tvorbě vrásek, což je jeden z hlavních příznaků stárnutí. Jak je uvedeno v tabulce 5, KLEL prokázal pozoruhodnou antikolagenázovou (36,41 ± 0,54 procent) a antielastázovou (23,13 ± 1,56 procent) aktivitu ve srovnání s pozitivní kontrolou (CHL). KSOL také prokázal antityrosinázu (18,82 ± 0,17 procenta (L-tyrosin jako substrát); 8,48 ± 0,29 procenta (L-DOPA jako substrát), antikolagenázu (18,84 ± {{26 }} 0,63 procenta) a antielastázovou (5,78 ± 0,59 procenta) aktivitu, ale nižší než ALL. To by mohlo naznačovat, že kombinace KLE a KSO prokázala synergický účinek s lepší inhibiční aktivitou enzymů. To je podpořeno studiemi provedenými Pascoal a kol. (2015) a Chew a kol. (2016), ve kterých je KSO bohatý na tokoferoly, zatímco KLE je bohatý na kvercetin a deriváty kaempferolu.běleníaproti stárnutívlastnosti, se zájmem o snížení hyperpigmentace kůže a tvorby vrásek (Lin et al., 2007; Keen a Hassan, 2016).
3.2.5. Test melanogeneze in vitro
K dalšímu zkoumání kůžebělenívlastnosti KLEL, byl model melanomových buněk B16F10 použit ke studiu inhibičního účinku na melanogenezi. Pokud jde o aktivitu buněčné tyrosinázy, jak je znázorněno na obr. 5a, KLEL (32,35 procent) při 500 ug/ml vykazoval významně silnější inhibici aktivity buněčné tyrosinázy než KAL (14,85 procent) a KSOL (13,64 procent), ve srovnání s a-MSH. ošetřená kontrolní buňka. Pro extracelulární a intracelulární obsah melaninu KLEL v závislosti na dávce snižoval obsah melaninu v buňkách B16F10 (obr. 5b a c). Bylo zjištěno, že ALL (500 ug/ml) má srovnatelný inhibiční účinek na extracelulární obsah melaninu (56,13 procent) (ve srovnání s kontrolní buňkou ošetřenou MSH) s KAL (54,53 procent). Kromě toho KLEL (36,52 procent) také prokázal silnější inhibiční účinek na intracelulární obsah melaninu než KAL (7,98 procent). Zatímco KSOL také vykazoval inhibiční účinek na extracelulární obsah melaninu (17,73 procent), ale žádný účinek na intracelulární obsah melaninu. Ve srovnání s KAL může být silnější inhibiční účinek KLEL na inhibici melanogeneze objasněn synergickou aktivitou mezi KSO a KLE, která může zlepšit bělící vlastnosti KLE v základu lotion. Tyto výsledky dále prokázaly, že KLE lze použít jako účinný prostředek pro bělení pokožky v prototypu přírodní kosmetiky.
3.2.6. In vitro test cytotoxicity
Posouzením biokompatibility KLEL (analýza MTT) byla životaschopnost buněk NHEF (po 24, 48, 72 h) pěstovaných v přítomnosti různých koncentrací KLEL (0.125−2 mg/ml) zachována výše 95 procent (obr. 4a). To ukázalo, že KLEL nezpůsobí toxicitu pro lidi. Zatímco buňky melanomu B1610 jsou široce používány ve studiích na kůžiběleníagenti (Chatatikun et al., 2019; Lee et al., 2019). Před měřením schopnosti KLEL suprimovat melanogenezi v melanomových buňkách B16F10 byla hodnocena cytotoxicita KLEL. Jak je ukázáno na obr. 4b, bylo potvrzeno, že KLEL nebyl toxický pro melanomové buňky B16F10 v koncentraci nižší než 500 ug/ml. Jako takové bylo pro následující experimenty použito 32,5-500 ug/ml KLEL.
4. Závěr
Tato studie se ukázala jako velmi významná v naplněném cirkulárním ekonomickém modelu, protože představuje nové možné aplikace listů kenaf jako přísady s vysokou přidanou hodnotou s vlastnostmi péče o pleť pro kosmetický průmysl, jmenovitě antioxidanty,proti stárnutía antimelanogenní aktivity. Zjištění prezentovaná ve studii také ukázala, že složení lotion připravené 15% KSO (F2) s 0,1% KLE poskytuje nejlepší fyzikální a mikrobiologickou stabilitu, bez toxicity na lidské buňky. V pokračování by se další studie měly zaměřit také na mikrobiální provokační test KLEL a klinickou účinnost.
cistanche doplněk