czJazyk
Domů / Znalost / Obsah

Znalost

Antioxidační a protiúnavové složky Okra

Mar 21, 2022

Fangbo Xia, Yu Zhong, Mengqiu Li, Qi Chang, Yonghong Liao, Xinmin Liu * a Ruile Pan *


Institut vývoje léčivých rostlin, Peking Union Medical College, Čínská lékařská akademieSciences, No 151, North Road Malianwa, Haidian District, Peking 100193


Pro více informací:ali.ma@wecistanche.com



Abstraktní


Okra (Abelmoschus esculentus (L.) Moench), zdravá zelenina, je široce rozšířena v tropických a subtropických oblastech. Předchozí studie prokázaly, že lusky okra majíčinnost proti únavě,a cílem tohoto výzkumu je objasnitproti únavěsložky. Abychom toho dosáhli, rozdělili jsme okry lusky (OPD) na semena (OSD) a slupky (OSK) a porovnali obsah celkových polysacharidů, celkových polyfenolů, celkových flavonoidů, isoquercitrinu a kvercetinu-3-O-gentiobiózy a antioxidantu aktivita in vitro ačinnost proti únavěin vivo mezi OSD a OSK. Obsah celkových polyfenolů a celkových polysacharidů byl 29,5 procent a 14,8 procent v OSD a 1,25 procent a 43,1 procent v OSK, v tomto pořadí. Celkové flavonoidy, isoquercitrin a kvercetin-3-O-gentiobióza (5,35 procenta, 2,067 procenta a 2,741 procenta, v tomto pořadí) byly detekovány pouze v OSD. Antioxidační testy, včetně vychytávání 1-difenyl{17}}pikrylhydrazyl (DPPH), antioxidační síla redukující železo (FRAP) a test redukce energie a test plavání se zátěží ukázaly, že OSD má významný antioxidant aúčinky proti únavě. Biochemické stanovení navíc odhalilo, žečinnost proti únavěOSD je způsobeno snížením hladin krevní kyseliny mléčné (BLA) a močovinového dusíku (BUN), zvýšením ukládání glykogenu v játrech a podporou antioxidační schopnosti snížením hladiny malondialdehydu (MDA) a zvýšením superoxiddismutázy (SOD) a glutathionperoxidázy (GSH- Px) úrovně. Tyto výsledky ukázaly, že to byla semena okraproti únavěčást lusků okra a aktivními složkami byly polyfenoly a flavonoidy.


Klíčová slova: okra; proti únavě; antioxidant; polyfenoly



Cistanche

1. Úvod


Únava je komplexní fyziologický jev, který je definován jako potíže se zahájením nebo udržením dobrovolných aktivit [1]. Kromě toho, že se s věkem zvyšuje a projevuje se u pacientů s rakovinou, depresí, infekcí HIV, roztroušenou sklerózou a Parkinsonovou nemocí, únava se u normálních lidí stává stále častějším příznakem se zvyšujícím se tempem moderního života [2–4]. Velké komunitní průzkumy ukázaly, že více než polovina dospělé populace si stěžuje na únavu [5,6]. Dlouhodobá nahromaděná nebo chronická únava nejen snižuje kvalitu života, ale vede také k chronickému únavovému syndromu a dalším organickým onemocněním, a dokonce vede ke karoshi (abnormální úmrtí na akutní kardiovaskulární onemocnění způsobené přepracováním [7]). Existuje několik teorií o příčinách únavy, jako je teorie vyčerpání, která uvádí, že únava je způsobena nedostatkem dostupného ATP pro kopulaci aktinu a myosinu, pumpováním Na`/K` a vychytáváním Ca2` sarkoplazmatickým retikulem [8–11 ]; teorie poruchy homeostázy, která naznačuje, že únava je způsobena akumulací různých metabolických vedlejších produktů [10,12]; a teorie katastrof, která naznačuje, že únava se může vyvinout v důsledku selhání na jednom nebo několika místech podél dráhy tvorby síly [13]. Mezi nimi se obecně předpokládá, že oxidační stres hraje důležitou roli v etiologii únavy [10,13–16]. Ukázalo se, že antioxidanty z některých bylin mají značné protiúnavové účinky, což naznačuje, že antioxidační léčba může být cenným terapeutickým přístupem proti únavě [17–20]. Spotřebitelé proto ve své stravě hledají více přírodních antioxidačních složek, aby snížili oxidační poškození a bojovali proti únavě. Okra (Abelmoschus esculentus (L.) Moench, Čeleď: Malvaceae), také známá jako dámský prst, bhindi a gumbo, je jednoletá rostlina pocházející z Afriky a byla pěstována v různých zemích po celém světě, zejména v tropických, subtropických, a teplé oblasti mírného pásma.


Lusky okry se odedávna používaly jako zelenina a zdroj dietních léků. V tradiční asijské a africké medicíně se lusky okry používají jako slizovitá potravina v boji proti gastritidě [21]. Farmakologické studie odhalily, že okra má antioxidační, neuroprotektivní, antidiabetické, antihyperlipidemické a protiúnavové účinky [22–26]. Ačkoli protiúnavová aktivita lusků okra byla prokázána již dříve [26], o jejich protiúnavových aktivitách a složkách je známo jen málo. Předchozí literatura uvádí, že lusky okry obsahují vysoký obsah polysacharidů, polyfenolů a flavonoidů [27–34]. V předchozích studiích bylo také prokázáno, že polyfenoly a flavonoidy mají silné antioxidační a protiúnavové účinky [15,18,20,35,36]. Navíc náš předběžný kvalitativní experiment, ve kterém jsme použili roztok chloridu železitého jako činidlo vyvolávající barvu, odhalil, že extrakt ze semen okra vykazoval silnou fenolickou reakci; extrakt z jeho slupky však takovou reakci téměř nevykazoval (doplňkové materiály), což prokázalo, že semena okry obsahovala vyšší obsah polyfenolů a flavonoidů než slupky okry. Proto by se dalo spekulovat o tom, že semena okra mohou být součástí lusků okry proti únavě a aktivními složkami mohou být polyfenoly a flavonoidy. Cílem studie bylo objasnit protiúnavové složky lusků okra. Abychom toho dosáhli, rozdělili jsme čerstvé lusky okry na semena a slupky a porovnali chemické obsahy celkových polysacharidů, celkových polyfenolů, celkových flavonoidů, isoquercitrinu a kvercetin-3-O-gentiobiózy a antioxidační aktivity in vitro a anti- únavové aktivity in vivo mezi semeny okra a slupky. Všechny tyto výsledky odhalily, že semena okry byly součástí lusků okry proti únavě a polyfenoly a flavonoidy byly aktivními složkami. Byly také studovány potenciální mechanismy protiúnavových aktivit v okře.


2. Experimentální část


2.1. Rostlinný materiál a těžba


Čerstvé lusky okry byly zakoupeny na trhu (Sanya, provincie Hainan, Čína) v červenci 2013. Rostlina byla ověřena profesorem Bengang Zhangem, Institutem léčivých rostlin, Čínská akademie lékařských věd a Peking Union Medical College, Peking, Čína, kde jsou exempláře voucherů (č. 20130705) uloženy v herbáři ústavu. Byly připraveny dvě porce 2,5 kg čerstvých okra lusků. Jedna část byla přímo lyofilizována, aby se získaly sušené okra lusky (251,3 g). Druhá část byla rozdělena na semena okry a slupky okry, lyofilizována, aby se získala sušená semena okry (50,1 g) a sušené slupky okry (200,5 g). Lusky okry, semena a slupky byly dobře rozemlety a extrahovány odděleně 1500 ml vroucí vody, každý po dobu 1 hodiny (3krát). Každá přefiltrovaná kapalina byla spojena a zahuštěna ve vakuu, čímž byly získány zbytky lusků okry (OPD, 105,4 g), semen okry (OSD, 20,5 g) a slupek okry (OSK, 84,1 g). Proto je poměr extraktu OPD:OSK:OSD asi 5:4:1. Všechny vzorky byly skladovány při 20 °C až do následné chemické analýzy a pokusů na zvířatech.


Acteoside of Cistanche

2.2. Chemikálie a činidla


Isoquercitrin a quercetin-3-O-gentiobióza byly izolovány z lusků okra naší laboratoří při čistotě přes 98 procent analýzou vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC). Rutin, kyselina gallová a standardy D-glukózy byly zakoupeny od National Institute for Food and Drug Control (Peking, Čína). Pro stanovení fenolů bylo použito Folin–Ciocalteuovo fenolové činidlo (1N, Coolaber Science & Technology, Peking, Čína). Sada Ferric reduction antioxidant power (FRAP) byla zakoupena od Beyotime Biotechnology (Peking, Čína). 1,1-difenyl-2-pikrylhydrazyl (DPPH) a Trolox byly zakoupeny od Sigma-Aldrich Inc. (St. Louis, MO, USA). Fosfátový pufr (PBS, Gibco) byl zakoupen od Thermo Fisher (Waltham, MA, USA). Rozpouštědla, včetně acetonitrilu (Thermo Fisher, MA, USA) a kyseliny mravenčí (CNW, Dusseldorf, Německo), byla čistoty pro HPLC a voda byla získána ze systému pro čištění vody Milli-Q (Millipore, MA, USA). Testovací soupravy pro stanovení krevního laktátu (BLA), močovinového dusíku v séru (BUN), jaterního glykogenu (HG), glutathionperoxidázy (GSH-Px), kyseliny thiobarbiturové (TBA) a superoxiddismutázy (SOD) byly zakoupeny od Nanjing Jiancheng Biotechnology institutu (Nanjing, Čína). Všechna ostatní činidla a chemikálie použité v této studii byly analytické čistoty.


2.3. Zvířata


Samci myší ICR (20–22 g) byli zakoupeni od Vital River Laboratories (kvalifikované číslo: SCXK 2012-0001, Peking, Čína). Myši byly umístěny ve skupinách po 6 zvířatech v kleci při konstantní teplotě (23 ˝C ˘ 2 ˝C) a vlhkosti (50 procent ˘ 10 procent) v cyklu světlo/tma 12/12-h (světla zapnutá od 8:{11}} do 20:{13}} odpoledne). Zvířata měla volný přístup ke standardní potravě a sterilizované pitné vodě ve stáji pro zvířata SPF (Specific Patogen Free). Všechny experimentální postupy byly prováděny pod dohledem a schválením Centra Akademie experimentálních zvířat Ústavu vývoje léčivých rostlin a v přísném souladu s Příručkou NIH pro péči a použití laboratorních zvířat (osmé vydání)[37].



2.4. Chemická analýza OSD a OSK


2.4.1. Stanovení celkového obsahu flavonoidů (TF).


Obsah TF byl měřen kolorimetrickým stanovením NaNO{{0}}}Al(NO)3 podle Technických standardů pro testování a hodnocení funkčních potravin, které vydala Národní komise pro zdraví a rodinné plánování ČLR. v 2{{20}}03, s drobnými úpravami. Stručně, 50 mg vzorku bylo rozpuštěno ve 40 ml destilované vody a roztok vzorku byl třikrát extrahován 50 ml chloroformu. Potom byl vodný roztok zředěn na 50 ml a 2 ml zředěného roztoku byly adsorbovány 5 g polyamidové pryskyřice a eluovány 20 ml 70% ethanolu. Eluce 70 procent ethanolu byla zakoncentrována na 10 ml ve vakuu. Tři mililitry koncentrovaného eluátu byly umístěny do 10ml odměrné baňky a poté byly přidány 2 ml 70% ethanolu, 0,3 ml NaN02 (5%) a 0,3 ml Al(NO)3. Po 5 minutách se ke směsnému roztoku přidaly 2 ml roztoku NaOH (1,0 M) a nechaly se stát 6 minut. Nakonec bylo přidáno 2,4 ml 30% ethanolu. Absorbance byla měřena proti slepému pokusu při 510 nm pomocí spektrofotometru UNICO-2012 UV-VIS (Shanghai, Čína). Celkový obsah flavonoidů byl vypočten z kalibrační křivky za použití rutinu jako standardu (20–100 mg/l). Výsledky byly uvedeny jako mg ekvivalentu rutinu na mg vzorků.


Echinacoside of Cistanche

2.4.2. Stanovení obsahu celkového polyfenolu (TP).


Obsah TP byl stanoven metodou Folin – Ciocaiteu s mírnou modifikací [38]. Stručně řečeno, 50 mg vzorek byl smíchán s 25 ml 50procentního roztoku methanolu, poté bylo dostatečně 0,5 ml roztoku vzorku, 0,3 ml Folin-Ciocaiteuova činidla a 10 ml uhličitanu sodného (10 procent). promíchat a poté byl objem upraven na 25 ml destilovanou vodou. Směs byla ponechána stát při 50 °C ve tmě po dobu 1 hodiny. Absorbance byla měřena při 765 nm. Byla připravena kalibrační křivka kyseliny gallové. Výsledky byly vyjádřeny jako mg ekvivalentů kyseliny gallové na mg vzorků.


2.4.3. Stanovení isoquercitrinu a kvercetin-3-O-gentiobiózy


Kvantifikace isoquercitrinu a kvercetinu{{0}}O-gentiobiózy byla provedena pomocí HPLC-UV s použitím pětibodové kalibrační křivky (r2=0.999) v rozsahu 5–5{{23 }}0 µg/ml. Isoquercitrin a quercetin-3-O-gentiobióza (5 mg, v tomto pořadí) a vzorky (10 mg) byly rozpuštěny v 10 ml methanolu, v daném pořadí. Všechny roztoky byly před analýzou HPLC přefiltrovány přes 0,{14}}um polytetrafluorethylenové fifiltry. HPLC pumpa Waters 600 s UV/Visible detektorem Waters 2489 byla použita k separaci sloučenin přes kolonu s reverzní fází (Thermo synchronize aQ, 4,6 mm ˆ 250 mm, 5 um) při rychlosti 1 ml/min. Mobilní fáze sestávala z acetonitrilu (A) a 0,1 % kyseliny octové ve vodě (B). Program gradientové eluce byl následující: 10 procent A v 0 minutách a lineárně až do 40 procent za 40 minut, 90 procent za 41 až 50 minut a 10 procent za 51 až 65 minut. Vlnová délka pro UV detekci byla 354 nm a teplota kolony byla nastavena na 25 ˝C. Sloučeniny byly identifikovány porovnáním s retenčním časem standardů a kvantifikovány výpočtem plochy pod křivkou s externími standardy.


2.4.4. Stanovení obsahu celkových polysacharidů (TPS).


Obsah TPS byl stanoven metodou fenol–kyselina sírová [39,40]. Stručně řečeno, vzorek 80 mg byl rozpuštěn v 50 ml destilované vody a poté byl protein odstraněn divokou metodou (roztok vzorku:chloroform:N-butylalkohol=20:4:1). Poté bylo k výslednému viskóznímu roztoku přidáno čtyřnásobné množství ethanolu, aby se vysrážel surový polysacharidový extrakt. Ethanolový roztok byl centrifugován při 617,4 ˆg po dobu 30 minut, aby se získala sraženina. Sraženina byla postupně promyta ethanolem, acetonem a etherem a rozpuštěna ve 250 ml destilované vody. Poté bylo 0,1 ml roztoku polysacharidu smícháno s 0,9 ml destilované vody, 1 ml 5% roztoku fenolu a 5 ml kyseliny sírové ve zkumavce a udržováno při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Absorbance byla měřena při 490 nm spektrofotometrem UNICO-2012 UV-VIS (Shanghai, Čína). Byla stanovena kalibrační křivka glukózy a obsah TPS byl stanoven z regresní rovnice kalibrační křivky. Výsledky byly vyjádřeny jako mg ekvivalentů glukózy na mg vzorků.


2.5. Antioxidační testy in vitro


Antioxidační kapacita OPD, OSK a OSD byla detekována třemi metodami, včetně {{0}}}difenyl-2-pikrylhydrazyl (DPPH) pohlcování, železité redukující antioxidační síly (FRAP) a redukční síly, dle literatury [19,41] s mírnou úpravou. Trolox byl použit jako pozitivní kontrola a výsledky byly vyjádřeny jako ekvivalentní antioxidační kapacita Troloxu. Protože OPD se skládal z OSK a OSD, pro osvětlení aktivních složek okra lusku byly koncentrace OSK a OSD použity jako ekvivalent OPD. Podle předběžných testů byly rozsahy koncentrací OPD, ODS, OSK 0.0{{10}}4–0,8, {{17 }}.0{{20}}32–0.64 a 0.0008 –{{40}}.16 mg/ml pro test DPPH; 1.0–4.0, 0.8–3.2 a {{50}}}.2–0.8 mg/ml pro test FRAP; a 0,1–4, 0,08–3,2 a 0,02–0,8 mg/ml pro test snížení výkonu, v tomto pořadí Pro test DPPH roztok vzorku (50 µL) s proporcionálním rozsahem (0,004–0,8 mg OPD/ml, 0,0032–0,64 mg OSK/ ml a 0,0008–0,16 mg OSD/ml) byl smíchán s roztokem DPPH (100 µL, 1,28 ˆ 10´4 mol/L) pro měření aktivity vychytávání volných radikálů (A1) a 95% ethanolem (100 µL) pro kontrolu (A2). Destilovaná voda (50 ul) byla smíchána s roztokem DPPH (100 ul) pro slepý pokus (A0). Absorbance byla měřena při 517 nm poté, co byly roztoky smíchány a udržovány při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Schopnost vychytávat radikál DPPH byla vypočtena pomocí následující rovnice:


Flavonoids of Cistanche

Aktivita úklidu ( procenta ){{0}}[ 1-(A1-A2/{A0]* 100 procent . (1)


FRAP tří roztoků vzorků (1.0–4.{3}} mg OPD/ml, 0,8–3,2 mg OSK/ml a 0,2– {{10}}.8 mg OSD/ml) byly detekovány podle pokynů Beyotime Institute of Biotechnology. Zředěný roztok vzorku (5 µL) byl smíchán s pracovním roztokem FRAP (180 µL) a udržován po dobu 5 minut při 37 ˝C. Absorbance reakční směsi byla poté zaznamenána při 593 nm. Standardní křivka byla připravena s použitím FeSO4 v rozsahu od 0,15 do 1,5 mm. Při stanovení redukčního výkonu použijte roztok vzorku (0,5 ml pro 0,1–4 mg OPD/ml, 0.08–3,2 mg OSK/mL a 0.02–{{50}},8 mg OSD/ml) bylo smícháno se stejným objemem PBS (0,2 mol/l , pH 6,6) a roztok ferrikyanidu draselného (1 procento, w/v) a inkubace byla prováděna po dobu 20 minut při 50 °C. Ke směsi byla přidána kyselina trichloroctová (0,5 ml, 10 procent, w/v) a směs byla centrifugována při 201,6 ˆg po dobu 10 minut. Poté byla horní vrstva roztoku (0,5 ml) zředěna destilovanou vodou (0,5 ml) a poté k ní byl přidán chlorid železitý (0,1 ml, 0,1 procenta, w/v). Absorbance byla měřena při 700 nm.



2.6. Protiúnavové účinky OPD, OSK a OSD a biochemická analýza


Na základě stejného důvodu jako antioxidační testy in vitro byly dávky OPD, OSK a OSD proti únavě navrženy jako skupiny OPD (0.75, 1.50 a 3.{{{{101} 6}} g/kg tělesné hmotnosti), skupiny OSK (0,60, 1,20 a 2,40 g/kg tělesné hmotnosti) a skupiny OSD (0,15, 0,30 a 0,60 g/kg tělesné hmotnosti). Myši byly před experimenty krmeny základní stravou v experimentálním prostředí. Po 3 dnech adaptace bylo 120 myší náhodně rozděleno do deseti skupin: kontrolní skupina (CG), každá 3 OPD, OSK a OSD skupiny. Každá skupina měla 12 myší. Kontrolní skupina (CG) byla ošetřena sterilní vodou, zatímco ostatní skupiny byly ošetřeny odpovídajícím extraktem. Voda/extrakty byly podávány perorálně (8:00 ráno) myším jednou denně po dobu 21 dnů a test na otevřeném poli a test plavání se zátěží (WLST) byly provedeny 20. a 21. den. Po WLST byly myši vyjmuty z bazénu, vysušeny papírovými ručníky a umístěny zpět do svých původních klecí. Experimentátoři WLST a testu v otevřeném poli byli zaslepeni k experimentálním podmínkám a zvířata byla randomizována před účastí v experimentech. Aby se objasnil účinek OSD proti únavě během zotavování, byly myši anestetizovány etherem a vzorky krve byly odebrány z každé skupiny po 24 hodinách WLST. Vzorky séra byly získány centrifugací (896 ˆg, 15 min, 4 ˝C). Játra byla rychle vypreparována a promyta v ledově chladném fyziologickém roztoku. Všechny vzorky byly zmraženy v kapalném dusíku a uchovávány při 80 °C pro další analýzu.


2.6.1. Test v otevřeném poli


Pro ověření účinků OPD, OSK a OSD na lokomotorické aktivity byly myši hodnoceny automaticky pomocí otevřeného počítačem podporovaného řídicího systému, který jsme vyvinuli [42,43]. Zařízení se skládá ze čtyř kovových nádrží (30 cm v průměru, 40 cm na výšku) s videokamerou upevněnou nahoře. Experimenty byly prováděny v tiché místnosti a zařízení bylo osvětleno světelným zdrojem 120 luxů na stropě. Jednu hodinu po dávkování byla každá myš umístěna do středu kovové nádrže a ponechána volně zkoumat po dobu 2 minut a pomocí softwaru byla vypočtena vzdálenost ujetá za 4 minuty, což je index lokomotorické aktivity. Současně byly testovány čtyři myši.


Cistanche can relieve chronic fatigue syndrome symptoms

2.6.2. Test plavání se zátěží (WLST)


WLST byla provedena k vyvolání únavy podle dříve popsané metodiky s mírnou modifikací [19,44,45]. Jednu hodinu po dávkování byly myši naloženy olověnými pláty, které byly připevněny ke stejné poloze jejich ocasu a vážily přibližně 3 procenta jejich tělesné hmotnosti. Poté byly zatížené myši jednotlivě nuceny plavat ve válcových nádobách (průměr 40 cm), které byly naplněny vodou (25 ˘ 1 ˝C) do hloubky 30 cm. Vyčerpání bylo klasifikováno jako ztráta koordinovaných pohybů a nevynoření se na hladinu do 10 s a doba plavání byla okamžitě zaznamenána. Voda v bazénu byla vyměněna po každém sezení.



2.6.3. Analýza biochemických parametrů souvisejících s únavou


Sérum bylo připraveno pro stanovení krevního močovinového dusíku (BUN) a krevní kyseliny mléčné (BLA). Játra byla připravena pro stanovení ekvivalentů malondialdehydu (MDA), celkové superoxiddismutázy (SOD), glutathionperoxidázy (GSH-Px) a jaterního glykogenu (HG). Všechny biochemické parametry byly stanoveny pomocí komerčně dostupných kitů a všechny postupy byly v souladu s pokyny výrobce. Stručně, obsah HG byl stanoven pomocí anthronového činidla při 620 nm, zatímco BLA byl stanoven pomocí nitrotetrazoliové modři chloridového činidla při 530 nm. BUN byl hodnocen ureázou s glutamát dehydrogenázou spřaženým enzymem při 640 nm. Aktivita GSH-PX byla měřena ve spojeném systému měřením poklesu trifosfopyridinového nukleotidu (NADPH) při 340 nm. Stanovení aktivity SOD bylo založeno na jeho schopnosti inhibovat oxidaci O2 produkovaným systémem xanthin-xanthinoxidázy. Jedna jednotka aktivity SOD byla definována jako množství, které snížilo absorbanci při 450 nm o 50 procent. Obsah ekvivalentů MDA byl stanoven při 532 nm reakcí s TBA za vzniku stabilního chromoforního produktu.


2.7. Statistická analýza


Chemická stanovení byla provedena trojmo a výsledky jsou vyjádřeny jako střední hodnoty. Antioxidační testy byly provedeny trojmo a výsledky byly vyjádřeny jako střední hodnoty ˘ standardní odchylky. Údaje o chování a biochemické údaje byly analyzovány statistickým softwarem SPSS (SPSS 19.0 Inc., Chicago, IL, USA). Pro srovnání mezi skupinami byla použita jednosměrná analýza rozptylu (One-way ANOVA) s testem nejméně významného rozdílu (LSD). Hodnoty P menší než 0,05 byly považovány za statisticky významné. Výsledky byly vyjádřeny jako průměr ˘ standardní chyba průměru (SEM).


3. Výsledky


3.1. Chemická analýza OSK a OSD


Jak ukazuje tabulka 1, obsahy TF a TP v OSD byly mnohem vyšší než v OSK, mezitím byl obsah TPS v OSD mnohem nižší než v OSK. Sloučeniny isoquercitrin a quercetin-3-O-gentiobióza byly detekovány pouze v OSD pomocí HPLC (zobrazeno na obrázku 1).


image

image

3.2. Antioxidační aktivita in vitro OPD, OSK a OSD


Jak je uvedeno v tabulce 2, antioxidační aktivita OPD a OSD byla prokázána pomocí DPPH, FRAP a testů na snížení výkonu a OSD vykazovala mnohem lepší antioxidační aktivitu než OPD. OSK však vykázal slabý účinek v testu snížení výkonu a žádný účinek v testech DPPH a FRAP. Proto byla OSD aktivní součástí okra lusku pro antioxidační aktivitu



image


3.3. Účinky OPD, OSK a OSD na pohybovou aktivitu


Lokomotorické aktivity myší byly testovány 20. den po léčbě OSD. Jak je znázorněno na obrázku 2, vysoká dávka OSD skupin (0,6 g/kg) významně snížila celkovou vzdálenost myší v novém prostředí ve srovnání s kontrolní skupinou (p=0. 04). U ostatních skupin však nebyly pozorovány žádné významné účinky na celkovou vzdálenost. Tyto výsledky ukázaly, že lusky a semena okry neměly žádný excitační účinek na centrální nervový systém. Navíc lze odvodit, že OSD může mít mírný sedativní účinek při vysoké dávce (0,6 g/kg).



image


3.4. Účinky na vyčerpávající čas plavání OPD, OSK a OSD (WLST)


Jak je znázorněno na obrázku 3, po doplnění OPD, OSK a OSD po dobu 21 dnů by léčba OPD (3 g/kg) a OSD (0,3 a 0,6 g/kg) mohla výrazně prodloužil čas plavání myší, který se protáhl až na 57,84 ˘ 12,37, 46,51 ˘ 5,82 a 70.05 ˘ 12.07 min (p < 0="" .05,="" p="">< 0.05="" a="" p="">< 0.{{70}}1),="" v="" tomto="" pořadí,="" mnohem="" delší="" v="" kontrolní="" skupině="" (15,20="" ˘="" 1,49="" min).="" mezitím="" léčba="" opd="" (0,75="" a="" 1,5="" g/kg),="" osd="" (0,15="" g/kg)="" a="" osk="" (0,6,="" 1,2="" a="" 2,4="" g/kg)="" neprokázala="" významné="" zvýšení="" doby="" plavání="" u="" myší="" (="" 14,73="" ˘="" 1,28,="" 23,96="" ˘="" 3,70="" a="" 27,34="" ˘="" 5,72="" min)="" ve="" srovnání="" s="" kontrolní="" skupinou="" (p="0,897," p="0,398" a="" p="0,268," v="" tomto="" pořadí="" ),="" ale="" osd="" (0,15="" g/kg)="" vykazovala="" trend="" zvyšující="" se="" doby="" plavání,="" ale="" neodhalila="" významný="" rozdíl="" (p="0,225)." jednocestné="" anova="" navíc="" vykazovaly="" významné="" rozdíly="" v="" vyčerpávající="" době="" plavání="" myší="" mezi="" skupinami="" (f="" (3,="" 40)="12,839," p="">< 0,001).="" doba="" plavání="" ve="" skupině="" s="" vysokou="" dávkou="" osd="" (0,6="" g/kg)="" vykazovala="" výrazný="" rozdíl="" ve="" srovnání="" se="" skupinou="" se="" střední="" dávkou="" (0,3="" g/kg)="" (p="0,019)" a="" byl="" pozorován="" stejný="" výsledek="" mezi="" 0.3-g/kg="" a="" 0.{79}}g/kg="" skupiny="" (p="0.034)," což="" ukazuje,="" že="" osd="" může="" prodloužit="" vyčerpávající="" čas="" plavání="" v="" závislosti="" na="">

image

3.5. Vliv OSD na biochemické parametry u myší po testu plavání se zátěží


Jak ukázal výsledek testu plavání se zátěží, OSD mohla výrazně prodloužit vyčerpávající čas plavání myší; léčba OSK však neukázala významné zvýšení doby plavání u myší. Biochemické parametry byly proto stanoveny pouze na myších léčených OSD.


3.5.1. Vliv OSD na BLA, BUN a HG


Rozdíl v obsahu BLA, BUN a HG mezi skupinami byl významný (BLA: F (3, 40)=8.257, p < {{10}}.{{{{101}="" 20}}01;="" bun:="" f="" (3,="" 40)="8.596," p="">< 0.{{3{{32="" }}}}01;="" hg:="" f="" (3,="" 36)="6.960," p="">< 0.{{40}}="" 01).="" jak="" ukazuje="" tabulka="" 3,="" hladiny="" bla="" a="" bun="" ve="" skupinách="" osd="" byly="" významně="" nižší="" než="" v="" kontrolní="" skupině="" 24="" hodin="" po="" testu="" plavání="" se="" zátěží="" (bla:="" p="">< 0.05,="" p="">< 0,05="" a="" p="">< 0,01="" pro="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg,="" v="" daném="" pořadí;="" bun:="" p="">< 0,01="" pro="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg).="" hladiny="" hg="" v="" osd="" skupinách="" byly="" významně="" vyšší="" ve="" srovnání="" s="" kontrolní="" skupinou="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01="" a="" p="">< 0,01="" pro="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg,="" v="" daném="">


image


3.5.2. Vliv OSD na GSH-PX, MDA a SOD


Rozdíly v aktivitách SOD, GSH-PX a ekvivalentu MDA mezi skupinami byly významné (MDA: F (3, 40)=8.355, p < 0.{{18}="" }01;="" sod:="" f="" (3,="" 42)="9,876," p="">< 0.001;="" gsh-px:="" f="" (="" 3,="" 40)="7.959," p="">< 0.001).="" jak="" ukazuje="" tabulka="" 4,="" ekvivalent="" mda="" ve="" skupinách="" osd="" byl="" významně="" nižší="" než="" u="" kontrolní="" skupiny="" po="" testu="" plavání="" se="" zátěží="" (p="">< 0.01,="" p="">< 0.{101}="" {45}}1="" a="" p="">< 0.01="" pro="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg).="" kromě="" toho="" byly="" hladiny="" sod="" a="" gsh-px="" ve="" skupinách="" osd="" významně="" vyšší="" ve="" srovnání="" s="" kontrolní="" skupinou="" (sod:="" p="">< 0,01,="" p="">< 0,01="" a="" p="">< 0,01;="" gsh-px:="" p="">< 0,05,="" p="">< 0,01="" a="" p="">< 0,01="" pro="" 0,15,="" 0,3="" a="" 0,6="" g/kg,="" v="" daném="">


image



4. Diskuze


Nezralý lusk okry je zdravá zelenina, která se konzumuje ve většině oblastí světa. Předchozí studie uváděly, že nezralé lusky okry měly antioxidační a protiúnavové účinky [25,46], ale jejich aktivní složky a potenciální mechanismy nebyly jasné. Abychom prozkoumali antioxidační a protiúnavové aktivity lusků okry, rozdělili jsme čerstvé lusky okry na semena a slupky a získali OSD, OSK a OPD extrakčním procesem, poté antioxidační aktivitu in vitro OSD, OSK a OPD byla detekována pomocí DPPH, FRAP a redukčního výkonu a protiúnavový účinek in vivo OSD, OSK a OPD byl studován pomocí testu plavání se zátěží. Naše výsledky ukázaly, že OSD má nejen dobrou antioxidační aktivitu in vitro, ale také významně prodlužuje dobu plavání myší ve srovnání s kontrolní skupinou, zatímco OSK nevykazuje žádný účinek u obou. Vyčerpávající čas plavání je přímým měřením objektivně odrážejícím zátěžovou vytrvalost těla [47] a podpora zátěžové vytrvalosti koreluje s delšími dobami plavání. Antioxidační a protiúnavová část OPD by proto měla být odvozena jako její semena. Navíc v této studii by OSD (0.3{{10}}, 0,60 g/kg) mohla výrazně prodloužit dobu plavání myší a ekvivalentní dávky pro člověka mohou být 0,9 ~1,8 g/kg (4,5~8,9 g/kg pro okra lusky) podle plochy povrchu těla [48]. Tyto dávky lze dosáhnout lidskou porcí zeleniny. Aktivní složky okry jsou však stále nejasné. Výsledky chemické analýzy v této studii ukázaly, že obsah polyfenolů v OSD je asi 24krát vyšší než v OSK, ale obsah polysacharidů v OSD je mnohem nižší než v OSK (tabulka 1).


Moreover, total flavonoids content and two compounds of isoquercitrin and quercetin-3-O-gentiobiose were only detected in OSD and were not detected in OSK (Table 1). It has been proven that okra seeds contained epigallocatechin oligomers, catechin, and its oligomers, isoquercitrin, quercetin-3-O-gentiobiose, and other catechin and quercetin derivatives [27–29]. Furthermore, previous studies have reported that polyphenols like catechin and flavonoids like quercetin possess anti-fatigue activity due to their antioxidant activity [35,36,49–51]. Therefore, we deduced that polyphenols and flavonoids of OSD might be the antioxidant and anti-fatigue constituents. As for the reason that the effect of OPD was less than the effect of OSD, it might be that the high content of mucilaginous polysaccharides can affect the assimilation of polyphenols and flavonoids in OPD, which needs to be researched in the future. When it comes to the anti-fatigue mechanism of OSD, an open-field test showed that OSD had no central nerve stimulation in mice, which proved that the anti-fatigue of OSD was not through central excitation. Apart from this, it was likely that OSD possessed a slight sedative effect in high doses (>0,6 g/kg). K prokázání toho je zapotřebí více údajů, protože malé snížení lokomoce by mohlo být také výsledkem snížené motivace k průzkumu nebo možného anxiogenního účinku. V tomto výzkumu byl však test na otevřeném poli použit k vyloučení možnosti, že OSD působí proti únavě excitačním účinkem na centrální nervový systém, a více údajů k prokázání sedativního účinku OSD nebylo k dispozici. Kromě toho bylo prokázáno, že hlavní složkou fyzické únavy je nadměrné množství reaktivních oxidů (ROS) produkované během vyčerpávajícího cvičení. Nadměrné ROS může ovlivnit různé metabolické a enzymatické procesy napadením polynenasycených mastných kyselin za vzniku MDA a vést k dysfunkci biofilmů [13,52].


Z tohoto důvodu ROS nejen přímo ovlivňuje enzymatickou aktivitu během dodávání energie a procesů vazby excitace-kontrakce, ale také urychluje akumulaci odpadu včetně BLA a BUN. Zvyšující se hladina BLA je navíc důležitou příčinou únavy kvůli snížení pH ve tkáních a vyšší obsah BUN ukazuje na nižší vytrvalost při cvičení. Mohl by tedy nejen zvýšit vytrvalost při cvičení, ale také zmírnit fyzickou únavu a podpořit regeneraci podporou aktivity enzymatických antioxidačních systémů včetně SOD a GSH-PX, nebo přímo doplnit antioxidanty. V této studii stanovení biochemických parametrů, které bylo provedeno 24 hodin po plaveckém testu, ukazuje, že léčba OSD významně snížila hladiny BLA a BUN v krvi, MDA v játrech a zvýšila hladiny HG, SOD a GSH v játra během zotavení z únavy, což prokázalo, že OSD může zmírnit fyzickou únavu a podpořit zotavení. S ohledem na výsledky antioxidačních testů in vitro v našem výzkumu lze odvodit, že OSD hrálo protiúnavový účinek nejen přímým vychytáváním volných radikálů, ale také podporou aktivit antioxidačních enzymů včetně SOD a GSH-PX.


23

Kliknutím na obrázek zobrazíte Cistanche Uk proti únavě

5. Závěry


Na závěr tato studie ukázala, že OSD je součástí okry proti únavě a polyfenoly a flavonoidy jsou pravděpodobně aktivními složkami OSD kvůli jejich antioxidační aktivitě. Únava je však komplexní jev a současná studie o mechanismech proti únavě okry je velmi předběžná. Více podrobností je ještě třeba osvětlit v budoucnu.



Reference


1. Chaudhuri, A.; Behan, PO Únava u neurologických poruch. Lancet 2004, 363, 978–988. [CrossRef]

2. Belluardo, N.; Westerblad, H.; Mudó, G.; Casabona, A.; Bruton, J.; Caniglia, G.; Pastoris, O.; Grassi, F.; Ibáñez, CF Rozbor neuromuskulárního spojení a svalová únava u myší bez neurotrofinu-4. Mol. Buňka. Neurosci. 2001, 18, 56–67. [CrossRef] [PubMed]

3. Tharakan, B.; Dhanasekaran, M.; Brown-Borg, HM; Manyam, BV Trichopus zeylanicus bojuje proti únavě bez amfetamin-mimetické aktivity. Phytother. Res. PTR 2006, 20, 165–168. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, L.-Z.; Huang, B.-K.; Ano, Q.; Qin, L.-P. Bioaktivitou řízená frakcionace pro antiúnavovou vlastnost acanthopanax senticosus. J. Ethnopharmacol. 2011, 133, 213–219. [CrossRef] [PubMed]

5. Pawlikowska, T.; Chalder, T.; Hirsch, SR; Wallace, P.; Wright, DJ; Wessely, SC Populační studie únavy a psychické úzkosti. BMJ 1994, 308, 763–766. [CrossRef] [PubMed]

6. Li, G. Únavová situace 2823 zdravých lidí ke kontrole a její korelace s fyzickými indikátory; Pekingská univerzita čínské medicíny: Peking, Čína, 2013.

7. Uehata, T. Karoshi, smrt přepracováním. Nippon Rinsho Jpn. J. Clin. Med. 2005, 63, 1249–1253.

8. Layzer, RB Svalový metabolismus při únavě a práci. Baillierův Clin. Endocrinol. Metab. 1990, 4, 441–459. [CrossRef]

9. Hultman, E.; Bergstrom, M.; Spriet, LL; Söderlund, K. Energetický metabolismus a únava; Human Kinetics: Champaign, IL, USA, 1990.

10. Glaister, M. Vícenásobná sprintová práce: Fyziologické odezvy, mechanismy únavy a vliv aerobní zdatnosti. Sports Med. 2005, 35, 757–777. [CrossRef] [PubMed]

11. Nozaki, S.; Mizuma, H.; Tanaka, M.; Jin, G.; Tahara, T.; Mizuno, K.; Yamato, M.; Okuyama, K.; Eguchi, A.; Akimoto, K.; a kol. Thiamin tetrahydrofuran disulfid zlepšuje energetický metabolismus a fyzickou výkonnost při fyzické únavě u potkanů. Nutr. Res. 2009, 29, 867–872. [CrossRef] [PubMed]

12. McCully, KK; Authier, B.; Olive, J.; Clark, BJ, 3. Svalová únava: Role metabolismu. Umět. J. Appl. Physiol. 2002, 27, 70–82. [CrossRef] [PubMed]

13. Carter, GT únava. In Encyklopedie neurologických věd, 2. vyd.; Aminoff, MJ, Daroff, RB, Eds.; Academic Press: Oxford, UK, 2014; s. 276–280.

14. Filler, K.; Lyon, D.; Bennett, J.; McCain, N.; Elswick, R.; Lukkahatai, N.; Saligan, LN Asociace mitochondriální dysfunkce a únavy: Přehled literatury. BBA Clin. 2014, 1, 12–23. [CrossRef] [PubMed]

15. Lin, Y.; Liu, H.-L.; Fang, J.; Yu, C.-H.; Xiong, Y.-K.; Yuan, K. Protiúnavové a vasoprotektivní účinky quercetin-3-O-gentiobiózy na oxidační stres a vaskulární endoteliální dysfunkci vyvolanou vytrvalostním plaváním u potkanů. Food Chem. Toxicol. 2014, 68, 290–296. [CrossRef] [PubMed]

16. Edwards, RH Funkce a únava lidských svalů. Ciba nalezen. Symp. 1981, 82, 1–18. [PubMed]

17. Gupta, A.; Vij, G.; Sharma, S.; Tirkey, N.; Rishi, P.; Chopra, K. Kurkumin, polyfenolický antioxidant, zmírňuje chronický únavový syndrom v modelu stresu z ponoření myší do vody. Imunobiologie 2009, 214, 33–39. [CrossRef] [PubMed]

18. Wu, CY; Chen, R.; Wang, XS; Shen, B.; Yue, W.; Wu, Q. Antioxidační a protiúnavové aktivity fenolového extraktu z obalu semen Euryale Ferox salisb. A identifikace tří fenolických sloučenin pomocí lc-esi-ms/ms. Molekuly 2013, 18, 11003–11021. [CrossRef] [PubMed]

19. Jiang, D.-Q.; Guo, Y.; Xu, D.-H.; Huang, Y.-S.; Yuan, K.; Lv, Z.-Q. Antioxidační a protiúnavové účinky anthokyanů čištění morušové šťávy (MJP) a čištění morušových výlisků (MMP) z různých odrůd plodů moruše v Číně. Food Chem. Toxicol. 2013, 59, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

20. Swamy, MSL; Naveen, S.; Singsit, D.; Naika, M.; Khanum, F. Účinky proti únavě polyfenolů extrahovaných ze slupky granátového jablka. Int. J. Integr. Biol. 2011, 11, 69–72.

21. Messing, J.; Thole, C.; Niehues, M.; Shevtsova, A.; Glocker, E.; Boren, T.; Hensel, A. Antiadhezivní vlastnosti extraktu z nezralého ovoce Abelmoschus esculentus (Okra) proti přilnutí Helicobacter pylori. PLoS ONE 2014, 9, e84836. [CrossRef] [PubMed]

22. Tongjaroenbuangam, W.; Ruksee, N.; Chantiratikul, P.; Pakdeenarong, N.; Kongbuntad, W.; Govitrapong, P. Neuroprotektivní účinky kvercetinu, rutinu a okry (Abelmoschus esculentus Linn.) u myší léčených dexametazonem. Neurochem. Int. 2011, 59, 677–685. [CrossRef] [PubMed]

23. Fan, S.; Zhang, Y.; Sun, Q.; Yu, L.; Li, M.; Zheng, B.; Wu, X.; Yang, B.; Li, Y.; Huang, C. Extract of Okra snižuje hladinu glukózy v krvi a sérové ​​lipidy u obézních myší C57Bl/6 vyvolaných dietou s vysokým obsahem tuku. J. Nutr. Biochem. 2014, 25, 702–709. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, H.; Chen, G.; Ren, D.; Yang, ST Hypolipidemická aktivita Okry je zprostředkována inhibicí lipogeneze a upregulací degradace cholesterolu. Phytother. Res. PTR 2014, 28, 268–273. [CrossRef] [PubMed]

25. Hu, L.; Yu, W.; Li, Y.; Prasad, N.; Tang, Z. Antioxidační aktivita extraktu a jeho hlavních složek ze semen okry na hepatocytech potkanů ​​poraněných tetrachlormethanem. BioMed Res. Int. 2014, 2014, 341291. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, Y.; Jin, Z.; Mao, P.; Jin, J.; Huang, J.; Yang, M. Studie o protiúnavovém účinku výtažků z okry. Brada. J. Mod. Appl. Pharm. 2012, 29, 4. [CrossRef]

27. Arapitsas, P. Identifikace a kvantifikace polyfenolických sloučenin ze semen a slupek okry. Food Chem. 2008, 110, 1041–1045. [CrossRef] [PubMed].

28. Sengkhamparn, N.; Sagis, LMC; de Vries, R.; Schols, HA; Sajjaanantakul, T.; Voragen, AGJ Fyzikálně-chemické vlastnosti pektinů z okry (Abelmoschus esculentus (L.) Moench). Food Hydrocoll. 2010, 24, 35–41. [CrossRef]

29. Karakoltsidis, PA; Constantinides, semena SM Okra: Nový zdroj bílkovin. J. Agric. Food Chem. 1975, 23, 1204–1207. [CrossRef] [PubMed]

30. Zhou, Y.; Jia, X.; Shi, J.; Xu, Y.; Jing, L.; Jia, L. Dva nové pentacyklické triterpeny z Abelmoschus esculentus. Helv. Chim. Acta 2013, 96, 533–537. [CrossRef]

31. Jia, L.; Zhong, LJ; Li, HF; Jing, LL Chemické složky ve vodní frakci Abelmoschus esculentus. Brada. Tradice. Bylina. Drogy 2011, 42, 2186–2188.

32. Jia, L.; Guo, M.; Li, D.; Jing, L. Chemické složky z petroletherové části Abelmoschus esculentus II. Zhongguo Zhong Yao Zazhi 2011, 36, 891–895. [CrossRef] [PubMed]

33. Jia, L.; Li, HF; Jing, LL Chemické složky v N-butanolovém extraktu z Abelmoschus esculentus L. Chin. Tradice. Bylina. Drogy 2010, 41, 1771–1773.

34. Jia, L.; Li, D.; Jing, LL; Guo, MM Studie o chemických složkách z petroletherové části Abelmoschus esculentus. J. Chin. Med. Mater. 2010, 33, 1262–1265.

35. Kobori, M.; Takahashi, Y.; Akimoto, Y.; Sakurai, M.; Matsunaga, I.; Nishimura, H.; Ippoushi, K.; Oike, H.; Ohnishi-Kameyama, M. Chronický vysoký příjem kvercetinu snižuje oxidační stres a indukuje expresi antioxidačních enzymů v játrech a viscerálních tukových tkáních u myší. J. Funct. Potraviny 2015, 15, 551–560. [CrossRef]

36. Nogueira, L.; Ramirez-Sanchez, I.; Perkins, GA; Murphy, A.; Taub, PR; Ceballos, G.; Villarreal, FJ; Hogan, MC; Malek, MH (-)-epikatechin zvyšuje odolnost proti únavě a oxidační kapacitu myšího svalu. J. Physiol. 2011, 589, 4615–4631. [CrossRef] [PubMed] .

37. Výbor pro aktualizaci Příručky pro péči a používání laboratorních zvířat. Průvodce pro péči a využití laboratorních zvířat, 8. vydání; The National Academies Press: Washington, DC, USA, 2011.

38. Liao, H.; Dong, W.; Shi, X.; Liu, H.; Yuan, K. Analýza a srovnání aktivních složek a antioxidačních aktivit extraktů z Abelmoschus esculentus L. Pharmacogn. Mag. 2012, 8, 156–161. [PubMed]

39. Zhu, Z.; Li, N. Studie o metodě stanovení obsahu polysacharidu okra. Jiangsu Agric. Sci. 2012, 40, 2. [CrossRef]

40. Dubois, M.; Gilles, KA; Hamilton, JK; Rebers, PA; Smith, F. Kolorimetrická metoda pro stanovení cukrů a příbuzných látek. Anální. Chem. 1956, 28, 350–356. [CrossRef]

41. Luo, J.; Li, L.; Kong, L. Preparativní separace fenylpropanoidních glyceridů z cibulek Lilium lancifolium vysokorychlostní protiproudovou chromatografií a hodnocení jejich antioxidačních aktivit. Food Chem. 2012, 131, 1056–1062. [CrossRef]

42. Dang, H.; Chen, Y.; Liu, X.; Wang, Q.; Wang, L.; Jia, W.; Wang, Y. Lůžkové jádro stria terminalis: Anatomie, fyziologie, funkce lůžkového jádra. Prog. Neuro-Psychopharmacol. Biol. Psychiatrie 2009, 33, 1417–1424. [CrossRef] [PubMed]

43. Wang, Q.; Mai, WL; Li, YH; Chen, SG; Wang, LW; Feng, ZQ; Zhu, YF; Liu, XM Zavedení počítačového systému pro zpracování obrazu pro pohybovou aktivitu zvířat a sedativní ověření pomocí kaixinového prášku. Brada. Tradice. Bylina. Drogy 2009, 40, 1773–1779.

44. Qi, B.; Liu, L.; Zhang, H.; Zhou, G.-X.; Wang, S.; Duan, X.-Z.; Bai, X.-Y.; Wang, S.-M.; Zhao, D.-Q. Protiúnavové účinky proteinů izolovaných z Panax quinquefolium. J. Ethnopharmacol. 2014, 153, 430–434. [CrossRef] [PubMed]

45. Tan, W.; Yu, KQ; Liu, YY; Ouyang, MZ; Yan, MH; Luo, R.; Zhao, XS Protiúnavová aktivita polysacharidů extrahovaných z radix Rehmannia preparata. Int. J. Biol. Macromol. 2012, 50, 59–62. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, J.; Zhou, J.; Tang, G. Studie o účinku proti únavě Okry. Brada. J. Mod. Appl. Pharm. 2003, 20, 2. [CrossRef]

47. Contarteze, RV; Manchado Fde, B.; Gobatto, CA; de Mello, MA Stresové biomarkery u potkanů ​​podrobených plavání a běhu na běžícím pásu. Comp. Biochem. Physiol. A Mol. Integrovat. Physiol. 2008, 151, 415–422. [CrossRef] [PubMed]

48. Xu, SY Experimentální metodologie farmakologie; Lidové lékařské nakladatelství: Peking, Čína, 2002.

49. Zanwar, AA; Badole, SL; Shende, PS; Hegde, MV; Bodhankar, SL Antioxidační role katechinu ve zdraví a nemoci. In Polyfenoly v lidském zdraví a nemoci; Watson, RR, Preedy, VR, Eds.; Academic Press: San Diego, CA, USA, 2014; s. 267–271.

50. Jadhav, SB; Singhal, RS Konjugát Laccase–arabská guma pro přípravu ve vodě rozpustného oligomeru katechinu se zvýšenou antioxidační aktivitou. Food Chem. 2014, 150, 9–16. [CrossRef] [PubMed]

51. Liudong, F.; Feng, Z.; Daoxing, S.; Xiufang, Q.; Xiaolong, F.; Haipeng, L. Hodnocení antioxidačních vlastností a protiúnavového účinku polyfenolů zeleného čaje. Sci. Res. Eseje 2011, 6, 2624–2629.

52. Ty, L.; Zhao, M.; Regenstein, JM; Ren, J. In vitro antioxidační aktivita a in vivo protiúnavový účinek loach (misgurnus anguillicaudatus) peptidů připravených štěpením papainem. Food Chem. 2011, 124, 188–194. [CrossRef]


Mohlo by se Vám také líbit