Antinociceptivní a protizánětlivá aktivita způsobená Cistanche Deserticola u hlodavců

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Li-Wei Lin a kol

Abstraktní

V této studii jsou oddenkyCistanchedeserticola(Orobanchaceae, zkráceně CD) byly extrahovány 50% ethanolem a řádně izolovány ethylacetátem, n-butanolem a vodou. Analgetikum aproti-zánětlivéúčinky CD extraktu a tří vrstev byly hodnoceny na několika zvířecích modelech. CD(Cistanchedeserticola)extrakty účinně inhibovaly svíjející se reakci vyvolanou 1% kyselinou octovou a dvoufázové olizování způsobené 1% formalínem a také redukovaly edém vyvolaný 1% karagenanem, ale ne zymosanem. Dále butanová a vodná vrstva CD(Cistanchedeserticola)extrakt nejen snížil bolest způsobenou kyselinou octovou a formalínem, ale také snížil otok vyvolaný karagenanem. Účinky butanové vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extraktu jsou lepší než u vodné vrstvy. Navíc efekt butanové vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt nebyl naloxonem zrušen. Tyto výsledky ukázaly, že má analgetikum aproti-zánětlivéúčinky a butanová a vodná vrstva jsou hlavně aktivními složkami. Dále analgetikum aproti-zánětlivéúčinky butanové vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extraktu nesouvisely s opioidními receptory a imunitním systémem.

klíčová slova:Cistanche deserticola; Analgetická aktivita; Protizánětlivá aktivita

1. Úvod

CistanchedeserticolaMa. (Orobanchaceae, zkráceně CD), původní bylina v Číně je široce používána v tradiční medicíně pro různé terapeutické léčby včetně sedativních, analgetických a imunitních indikací (Lee, 1986). Moderní farmakologické studie poukázaly na CD(Cistanchedeserticola)extrakt měl posílení imunity (Chin a Su, 1993), účinek pohlcování volných radikálů (Hsu et al., 1995) a zvýšení aktivity SOD (Chang et al., 1995). V nedávné studii hrála reakce volných radikálů významnou roli v zánětlivých procesech (Arrigoni-Martelli, 1985). Proto se tato studie pokusila prozkoumat domnělé analgetické účinky CD(Cistanchedeserticola)extrakt u myší pomocí testu svíjení vyvolaného kyselinou octovou (Taber a kol., 1969) a testu olizování vyvolaného formalínem (Shibata a kol., 1989). Za druhé jsme také studovali možnéproti-zánětlivéčinnost CD(Cistanchedeserticola)extrakt na klasický zánětlivý proces s testem otoku vyvolaného karagenanem (Winter et al., 1962) a alternativním zánětlivým procesem s testem na edém indukovaný zymosanem (Tarayre et al., 1989). Nakonec jsme zkoumali aktivní vrstvy CD extraktu oddělené různými rozpouštědly. '

2. Materiály a metody

2.1. Rostlinný materiál a extrakty

Oddenky CD(Cistanchedeserticola)byly zakoupeny z tchajwanského trhu a potvrzeny profesorem MT Hsiehem. Vzorek voucheru (č. CMC-ICPS-000626) byl uchován v herbáři Institutu čínských farmaceutických věd, China Medical College pro budoucí použití. Extrakce a izolace CD(Cistanchedeserticola)byly následovány jako předchozí zprávy (Lu, 1998). CD(Cistanchedeserticola)extrakt (výtěžek 34,2 procenta) a tři vrstvy*/vrstva ethylacetátu, butanolová vrstva a vodná vrstva (jejich výtěžky 3,4, 10,2, 30,6 procenta) (zkráceně CDE, CDB, respektive CDW)*/ byly použity pro příprava extraktů.

2.2. Příprava extraktů a drogy

CD(Cistanchedeserticola)extrakt ({{0}}.1, 0,3, 1 g/kg) a tři vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakty ({{0}}.03, 0.1, 0,3 g/kg) byly rozpuštěny v 0,5% karboxymethylcelulóze a podávány perorálně 60 minut předem k injekci induktoru. Kyselina acetylsalicylová (ASA) (100, 300 mg/kg) a indomethacin (IN DOL) (10 mg/kg) byly připraveny jako suspenze s 0,5 % karboxymethylcelulózy a podávány intraperitoneálně před injekcí induktoru. Naloxon (1 mg/kg) byl rozpuštěn v normálním fyziologickém roztoku.

2.3. Zvířata

Pro studii byli použiti samci krys Sprague-Dawley (200-250 g).proti-zánětlivéčinnosti. Pro testování analgetických účinků byli použiti samci myší ICR (20-25 g). Všechna zvířata byla použita v experimentech podle pokynů pro péči a používání laboratorních zvířat. Před zahájením experimentu byly umístěny alespoň 1 týden v prostředí s regulovanou teplotou 239/1 8C a 60% vlhkostí s volným přístupem ke standardnímu krmivu v peletách (dodává a navrhuje Fwusow Industry Co. LTD., Taiwan ) a vodovodní vody, přičemž byl zachován cyklus 12-12 h světlo/tma (fáze světla: 08:00-20:00 h). Poté byly podávány léky a analgetikaproti-zánětlivétesty byly prováděny metodou dvojitě zaslepené. Po měření chování byla všechna zvířata usmrcena oxidem uhličitým.

2.4. Antinociceptivní studie

2.4.1. Kyselina octová indukovaná reakce břicha u myší

Myši byly náhodně rozděleny do několika skupin. Každé myši byl intraperitoneálně podán 1% roztok kyseliny octové (10 ml/kg tělesné hmotnosti). Myši byly umístěny do jednotlivých pozorovacích boxů. Symptomy svíjení břicha vyvolaného kyselinou octovou byly podobné těm, které popsal Taber et al. (1969). Kontrolní zvířata dostávala ve stejných experimentech roztoky vehikula. Pět minut po injekci kyseliny octové byl počítán počet svíjejících se reakcí na myš po dobu 10 minut během svíjení břicha vyvolaného kyselinou octovou. A konečně, počet svíjejících se reakcí nám umožnil vyjádřit procento ochrany pomocí následujícího poměru: (kontrolní průměr ošetřený průměr) /100/ kontrolní průměr.

2.4.2. Formalinem indukovaná reakce olizování u myší

Tato metoda představuje modifikaci metody popsané Shibatou et al. (1989). Každá myš byla umístěna do pozorovací komory na akrylátové průhledné dno destičky na 5 minut před injekcí formalínu. Pod podlahou bylo velké zrcadlo nakloněno v úhlu 458, aby bylo možné jasně pozorovat tlapky zvířete. Zvířatům bylo podáno 25 ml 1% formalínu do pravého subplantáru. Poté bylo každé zvíře vráceno do komory a byla pozorována dvě odlišná období intenzivní odezvy na olizování. První perioda (časná fáze) byla zaznamenána 0/5 min po injekci formalínu a druhá perioda (pozdní fáze) byla zaznamenána 10/35 min po injekci. Čas(y) strávený olizováním tlapky injikované byl měřen jako indikátor reakce na bolest.

2.5. Protizánětlivá studie na potkanech

Theproti-zánětlivéaktivita byla stanovena u krys měřením průměrného zvýšení objemu zadní tlapky po subplantární injekci zánětlivých činidel, jako je karagenan (Winter et al., 1962) nebo zymosan (Tarayre et al., 1989). Zvířatům bylo injikováno 0,1 ml 1% karagenanu nebo 2% zymosanu do pravé zadní nohy pod plantární aponeurózu. Zánět byl kvantifikován v mililitrech pomocí pletysmometru (7150 Ugo Basile), který zaznamenal malé rozdíly v hladině vody způsobené objemovým posunem. Před jakýmkoliv ošetřením byl stanoven průměrný objem zadních tlapek každého zvířete (Vo) pomocí tří měření, která se nelišila o více než 4 procenta (přesnost přístroje). Poté 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 minut po injekci zánětlivých činidel byl stanoven průměrný objem zadních tlapek každého zvířete (Vt) pomocí tří měření, která se nelišila od více než 4 procenta.

Procenta edému u každého záznamu byla vypočtena porovnáním průměrného objemu zadních tlapek každého zvířete (Vt) po injekci zánětlivých činidel s průměrným objemem zadních tlapek každého zvířete (Vo) před jakýmkoliv ošetřením (Palanichamy a Nagarajan, 1990). Procenta inhibice byla získána pro každou skupinu použitím následujícího poměru: [(Vt-Vo)kontrola /(Vt-Vo)ošetřená]-100/ (Vt-Vo)kontrola.

2.6. Statistická analýza

Všechny údaje získané během analgetik aproti-zánětlivéaktivita byla vyjádřena jako průměr a standardní chyby a dále analyzována pomocí ANOVA jednosměrné analýzy rozptylu, po které následoval Scheffův test. Když byla pravděpodobnost (P) menší než 0,05, rozdíl byl považován za významný.

3. Výsledky a diskuse

Předběžná léčba zvířat orálními dávkami CD(Cistanchedeserticola)extrakt (0.1-1 g/kg) vedl k na dávce závislé a významné inhibici svíjení vyvolané kyselinou octovou (Tabulka 1) a dvoufázových fází olizování vyvolaných formalínem u myší ( Obr. 1(A)). Inhibice způsobená CD(Cistanchedeserticola)extraktu v dávce 1 g/kg na reakci svíjení vyvolanou kyselinou octovou a reakce na olizování vyvolané formalínem byly asi 54 a 45 procent, v daném pořadí. Pozitivní kontrola kyselina acetylsalicylová při 0.1-0,3 g/kg také snížila reakci svíjení vyvolanou kyselinou octovou s inhibicí o 45-64 procent (tabulka 1). Avšak druhá pozitivní kontrola indomethacin v dávce 10 mg/kg pouze inhibovala pozdní, ale ne ranou fázi formalinem indukované olizovací reakce u myší s maximální inhibicí 32 procent (obr. 1(A)). Dále pouze butanolová a vodná vrstva mezi třemi vrstvami CD(Cistanchedeserticola)extrakt při 0.1-0.3 g/kg také vyvolalo významnou antinocicepci a tyto analgetické účinky butanolové vrstvy byly lepší než účinky vodné vrstvy (tabulka 1 a obr. 1(B)) . Za druhé jsme hodnotiliproti-zánětlivéčinnost CD(Cistanchedeserticola)extrakt a tři vrstvy proti klasickému (vyvolanému karagenanem) a alternativnímu (vyvolané zymosanem) tvorbě edému. Našli jsme to CD(Cistanchedeserticola)extrakt v 0.1-1g/kg také významně inhiboval tvorbu edému vyvolaného karagenanem v závislosti na dávce a indomethacin v dávce 10 mg/kg také účinně inhiboval tvorbu edému vyvolaného karagenanem u potkanů ​​(obr. 2). Tvorba edému vyvolaná zymosanem však nebyla inhibována CD(Cistanchedeserticola)extrakt při 0.1-1 g/kg u potkanů ​​(data nejsou uvedena). Dále pouze butanolová vrstva mezi třemi vrstvami CD(Cistanchedeserticola)extrakt při 0.1-0.3 g/kg také významně inhibovalo tvorbu edému vyvolaného karagenanem u potkanů ​​(obr. 2). Podle fytochemických zpráv, akteosid a kyselina jantarová, patřící mezi složky butanolové vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt (Hsu et al., 1994, 1995), vlastnilproti-zánětlivéaktivita na chemicky indukovanou tvorbu edému (Murai et al., 1995; Kabachnyi et al., 1987). Z našich současných údajů a dalších předchozích zpráv jsme navrhli oddenky CD(Cistanchedeserticola)vlastnil analgetikum aproti-zánětlivéaktivitu u hlodavců a aktivní složky vystupují hlavně v butanolové vrstvě CD(Cistanchedeserticola)výpis. Zda jsou akteosid a kyselina jantarová aktivními složkami CD(Cistanchedeserticola)izolujeme a vyhodnotíme jejich analgetická aproti-zánětlivéčinnost v budoucnu.

Obr. 1. Vliv CD(Cistanchedeserticola)extrakt ({{0}},1, 0,3 a 1 g/kg), ethylacetát, butanolová a vodná vrstva CD(Cistanchedeserticola)extrakt (CDE, CDB a CDW) ({{0}}.03, 0,1 a 0,3 g/kg) a indometacin (INDOL, 10 mg/kg) v časné (0/5 min) a pozdní fázi (10/35 min) formalínem indukované olizovací reakce u myší. Každá hodnota je reprezentována jako průměr9/SE (N/7). *PB/0,05, *** PB/0,001 ve srovnání se skupinou VEH.

Obr. 2. Vliv CD(Cistanchedeserticola)extrakt ({{0}},1, 0,3 a 1 g/kg), ethylacetát, butanolová a vodná vrstva CD(Cistanchedeserticola)extrakt (CDE, CDB a CDW) ({{0}}.03, {{10}}.1 a 0,3 g/kg) a indometacin (INDOL, 10 mg/kg) na edém tlapky vyvolaný karagenanem u potkanů. Každá hodnota je reprezentována jako průměr9/SE (N/6). *PB/0,05, ** PB/0,01 ve srovnání se skupinou VEH

Dále Shibata et al. (1989) naznačují, že časná fáze formalínem indukované reakce na olizování souvisela s bradykininem a látkou P a pozdní fáze souvisela s bradykininem, autokrinem a prostaglandinem. Naše aktuální údaje poukazují na to, že naloxon nezrušilproti-zánětlivéaktivita butanolové vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt na obě fáze formalínem indukované olizovací reakce (obr. 3) a analgetický účinek na svíjení indukovanou kyselinou octovou (tabulka 1). Proto analgetikum aproti-zánětlivéúčinky butanolové vrstvy CD extraktu nemusí souviset s opioidními receptory. Navíc CD(Cistanchedeserticola)Extrakt a jeho butanolová vrstva pouze inhibovaly tvorbu edému vyvolaného karagenanem u krys. Karagenanem indukovaný edém prostřednictvím infiltrace polymorfonukleárními leukocyty a aktivovaného kininového systému, zejména bradykinin, se liší od edému indukovaného zymosanem prostřednictvím influxu monocytů a aktivovaného imunitního systému (Damas a kol., 1990; Dawson a kol., 1991). Kyselina jantarová, složka butanolové vrstvy CD extraktu, inhibovala funkci polymorfonukleárních leukocytů (Rotstein et al., 1985). Tyto výsledky ukázaly, že analgetikum aproti-zánětlivéúčinky butanolové vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt může souviset s kininovým systémem, ale ne s opioidními receptory a imunitním systémem, i když CD(Cistanchedeserticola)měl imunoposilující účinek (Chin a Su, 1993). Pro podrobný mechanismus analgetik aproti-zánětlivéaktivita, budeme dále zkoumat s aktivními vrstvami nebo přísadami CD extraktu.

Cistanchetubulosamá mnoho efektů, klikněte sem a dozvíte se více

Reference

Arrigoni-Martelli, E., 1985. Farmakologie vychytávání volných radikálů při zánětu. International Journal of Tissue Reactions 7, 513/ 519.
Chang, Y., Wu, H., Wang, SN, Cheng, HC, 1995. Studie o silných účincíchCistanchedeserticolaMa., Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck a Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight. China Journal of Chinese Materials and Medicine 26, 143/146.
Chin, HL, Su, YC, 1993. Studie o farmakologických účincíchCistanchedeserticolaMa. China Journal of Chinese Materials and Medicine 19, 143/146.
Damas, J., Bourdon, V., Remacle-Volon, G., Adam, A., 1990. Kininy a peritoneální exsudáty indukované karageninem a zymosanem u krys. British Journal of Pharmacology 101, 418/422.

Dawson, J., Sedgwick, AD, Edwards, JC, Lees, P., 1991. Srovnávací studie buněčných, exsudativních a histologických odpovědí na karagenan, dextran a zymosan u myši. International Journal of Tissue Reactions 13, 171/185.

Hsu, WH, Chu, SH, Chao, CH, Hsu, Y., Yuan, KW, Yen, CH, Chi, CY, Chan, C., 1994. Studie o chemických složkáchCistanchedeserticolaMa. China Journal of Chinese Materials and Medicine 25, 509/513.
Hsu, WH, Chu, SH, Sheng, LC, Yuan, KW, Mao, CN, 1995. Studie o chemických složkách a farmakologických účincíchCistanchedeserticolaMa. a Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Čínské tradiční bylinné drogy 26, 143/146.
Kabachnyi, VI, Chernykh, VP, Drogovoz, SM, Golubenko, Iu.A., Bogutskaia, EE, 1987. Hledatproti-zánětlivépřípravky mezi deriváty heteroylamidů kyseliny jantarové. Farmakologii a Toksikologii 50, 94/97.
Lee, SL, 1986. Pen-Tsao-Kun-Mu. National Research Institute of Chinese Medicine Publications, Taipei, s. 20.
Lu, MC, 1998. Studie o sedativním účinkuCistanchedeserticola. Journal of Ethnopharmacology 59, 161/165.
Murai, M., Tamayama, Y., Nishibe, S., 1995. Fenylethanoidy v bylině Plantago lanceolata a inhibiční účinek na edém myšího ucha vyvolaný kyselinou arachidonovou. Planta Medica 61, 479/480.
Palanichamy, S., Nagarajan, S., 1990. Analgetická aktivita extraktu z Cassia alata a kemp Eerol 3-0-Sophoroside. Journal of Ethnopharmacology 29, 73/78.
Rotstein, OD, Pruett, TL, Fiegel, VD, Nelson, RD, Simmons, RL, 1985. Kyselina jantarová, metabolický vedlejší produkt druhů Bacteroides, inhibuje funkci polymorfonukleárních leukocytů. Infekce a imunita 48, 402/408.
Shibata, M., Ohkubo, T., Takahashi, H., Inoki, R., 1989. Modifikovaný formalínový test: charakteristická bifázická reakce na bolest. Bolest 38, 347/ 352.
Taber, RI, Greenhouse, DD, Rendell, JK, Irwin, S., 1969. Agonistické a antagonistické interakce opioidů na protahování břicha u myší vyvolané kyselinou octovou. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 169, 29/38.
Tarayre, JP, Delhon, A., Aliaga, M., Barbara, M., Bruniquel, F., Caillol, V., Puech, L., Consul, N., Tisne-Versailles, J., 1989.
Farmakologické studie zánětu zymosanu u potkanů ​​a myší. 1: Zymosanem indukovaný edém tlapky u potkanů ​​a myší. Farmakologický výzkum 21, 375/384.
Winter, CA, Risley, EA, Nuss, GW, 1962. Karagenanem indukovaný edém zadní tlapky krysy jako testproti-zánětlivédrogy. Sborník Společnosti experimentální biologie a medicíny 111, 544/547.