3.3. In-Vitro studie

3.3.1. Hodnocení cytotoxicity u lidských keratinocytů

Podle relevantních studiícistancheje obyčejná bylina, která je známá jako "zázračná bylina, která prodlužuje život". Jeho hlavní složkou jecistanosid, která má různé účinky jako napřantioxidant, protizánětlivé,apodpora imunitních funkcí. Mechanismus mezi cistanche abělení kůžespočívá v antioxidačním účinkucistanche glykosidy. Melanin v lidské kůži je produkován oxidací tyrosinu katalyzovanoutyrosinázaa oxidační reakce vyžaduje účast kyslíku, takže se volné radikály v těle stávají důležitým faktorem ovlivňujícím produkci melaninu. Cistanche obsahuje cistanosid, což je antioxidant a může tak snížit tvorbu volných radikálů v těleinhibující produkci melaninu.

Klikněte na Cistanche Powder Bulk

Další informace:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Test MTT byl použit k testování, zda PPEE, PPEE-SLN a KDPAG mohou ovlivnit životaschopnost buněk pomocí lidských keratinocytů. Různé koncentrace PPEE, PPEE-SLN, SLN bez extraktu a KDPAG při 0.{{10}}625–1 mg/ml bylo inkubováno po dobu 24 hodin s buněčnou linií lidských keratinocytů (Obrázek 2). Během 24 hodin nebylo pozorováno žádné významné snížení životaschopnosti buněk lidských keratinocytů v rozmezí koncentrací 0.0625–0,5 mg/ml (p < 0,05). Avšak po ošetření 1 mg/ml PPEE, PPEE-SLNS, SLN bez extraktu a KDPAG během 24 hodin bylo pozorováno významné snížení buněčné životaschopnosti lidských keratinocytů, 93 procent, 90 procent, 95 procent a 89 procent buněk přežilo, resp. Pro následné studie byly tedy použity koncentrace PPEE, PPEE-SLN a KDPAG rovné nebo nižší než 0,5 mg/ml.

Antioxidační aktivita byla hodnocena pomocí DPPH, ABTS systémů a -karotenového bělícího testu. U všech testovaných vzorků byl zjištěn způsob závislý na koncentraci. V testu DPPH vykazoval KDPAG nejvyšší vychytávací aktivitu následovaný PPEE-SLN a poté PPEE. Hodnoty IC50 byly 6,35 ± 3,4{{30}} µg/ml, 8,79 ± 2,70 µg/ml a 10,5 ± 1,81 µg/ml v tomto pořadí ve srovnání s vitaminem C použit jako standard s IC50 2 ± 0,01 ug/ml. Tento trend byl pozorován také proti radikálům ABTS s hodnotou 3,91 ± 1,43 µg/ml, 4,29 ± 1,12 µg/ml a 6,10 ± 0,62 µg/ml, v tomto pořadí, ve srovnání se standardem Vit. C s IC50 0,96 ± 0,02 ug/ml, což potvrzuje výsledky testu DPPH. Taková vychytávací aktivita pro extrakty z listů PP a jejich frakce již byla zdůrazněna u obou testů, ale s vyššími hodnotami než získané [14,49]. Tato zjištění naznačují, že aktivitu antioxidantů ovlivňují podmínky prostředí, části rostlin, stádium zralosti, způsob sklizně a rozpouštědla použitá pro extrakci. Tyto výsledky jsou v souladu s literaturou, protože v obou testech bylo zjištěno, že extrakt z listů PP má lepší antioxidační kapacitu než extrakty ze semen, slupek, dužiny a ovoce [14,20,50]. Také uváděný vysoký obsah flavonoidů v listech PP, zejména flavonoly, byl považován za odpovědný za antioxidační aktivitu [20].

PPEE, PPEE-SLN a KDPAG vykazovaly antielastázovou, antikolagenázovou a antityrosinázovou aktivitu s vysokým procentem inhibice při 300 ug/ml a relativně nízkými hodnotami IC50 (tabulka 3) ve srovnání s jejich příslušnými pozitivními kontrolami.

3.4. Hodnocení PPEE-SLNs a PPEE-SLNs Cream

Připravené formulace PPEE-SLNs vykazovaly velikosti částic 170 nm až 176 nm; to ukazuje, že přidání povrchově aktivní látky k systémům pevných lipidových nanočástic způsobí kondenzaci a stabilizaci mezifázového filmu. Formulace vykazují nízké hodnoty indexu polydisperzity (0,23{{10}}–0,450), což ukazuje na homogenitu distribuce velikosti částic se ZP mezi -21,8 a -22,0 zajišťující vysokou stabilitu produktů (obrázek 3a, b). Zaznamenaných 70–77 procent účinnosti zapouzdření PPEE-SLN je způsobeno typem lipidu (glycerol monostearát), který je schopen uzavřít povrchové póry v kuličkách. Mikrofotografie TEM a SEM odhalily tvorbu nanočástic s úzkou distribucí velikosti částic, hladkých, kulovitých a homogenních nanovezikulí (obrázek 3c,d). V FTIR vykazuje PPEE charakteristické píky při 3352 cm-1 odpovídající natažení aromatického sekundárního aminu NH, 2974,23 cm-1 odpovídající natažení aromatického CH, 1735,93 cm-1 odpovídající natažení C=O a 1257,59 cm- 1 odpovídající protažení CN alifatického aminu, jak se objevilo na (obr. 4). FTIR spektra PPEE a fyzikální směsi lipidů vykazují stejné charakteristické píky v důsledku natažení aromatického sekundárního aminu NH při 3348,42 cm-1, C=O natažení při 1735,93 cm-1 a CN alifatického aminu natažení při 1257,59 cm −1. Je tedy zřejmé, že všechny charakteristické píky, které byly přítomny ve spektrech PPEE, se replikovaly téměř ve stejné oblasti ve spektrech fyzikální směsi PPEE-SLN, což ukazuje, že neexistuje žádná významná interakce mezi léčivy a lipidy. Krémy PPEE-SLNs (2 procenta a 5 procent) byly nažloutlé s hladkým vzhledem, hladkým povrchem a vhodným pH v rozmezí 5–5,8 ± 0,15, což potvrzuje kompatibilitu přípravků s kožními sekrety, nedráždivé pro lidskou pokožku, ne přítomnost zarudnutí nebo edému, snadno omyvatelný vodou a dobrá roztíratelnost v rozmezí 10–13 g cm/s, s viskozitou v rozmezí 500 ± 6,24 až 600 ± 7,52 CPS při 10 ot./min., bez známek separace fází a dobrá konzistence během studijního období. Celkové množství bakterií a plísní bylo nižší než 100 CFU/ml a v rozmezí přijatelnosti pro produkty péče o pleť. Dvouprocentní krém vykazoval počáteční nárazové uvolnění PPEE-SLN asi 15,21 ± 1,44 procenta během první 1 hodiny; následně byly PPEE-SLN zachycené v krému postupně uvolňovány; 60,32 ± 2,54 procenta bylo uvolněno po 12 a 62 ± 1,44 procenta téměř po 24 hodinách. Na druhou stranu 5procentní krém vykazoval počáteční nárazové uvolnění PPEE-SLN asi 20,21 ± 2,70 procent během první 1 hodiny; následně se PPEE-SLN zachycené v krému postupně uvolňovaly, 77,12 ± 2,88 procenta se uvolnilo po 12 a 80 ± 2,91 procenta téměř po 24 hodinách. Obě receptury krému vykazovaly prodloužené uvolňování PPEE po dobu 24 hodin (obrázek 5). Naše výzkumná studie navíc ukázala, že složení smetany (2 procenta a 5 procent) jsou stabilní po dobu dvou měsíců.

3.5. Studie in vivo

Po dvaceti dnech léčby krémem bylo hodnoceno skóre proti vráskám. Účinek krému PPEE-SLN proti vráskám byl závislý na dávce a účinek pozorovaný ve skupině s 5% krémem PPEE-SLNs (G5) byl srovnatelný s výsledkem ve skupině s pozitivní kontrolou (G3), která byla léčena tržní produkt (obrázek 6) a vykázaly výrazně lepší skóre proti vráskám ve srovnání se standardním krémem proti vráskám. Fotografie jsou uvedeny na obrázku 7. Skupiny (G3–G5) vykazovaly velmi hladký a zlepšený povrch kůže. U zvířat G1 nebyly žádné kožní změny. Naproti tomu G2 vykazovala silné a hluboké vrásky.

Elastická vlákna byla významně snížena UV zářením ve srovnání s normálními vlákny. Obrazy kůže neléčených a léčených myší byly pozorovány mikroskopem (obrázek 8). G1 měl normální tloušťku kůže dermis i epidermis a kromě normální tloušťky elastických vláken bez fragmentace obsahoval fibroblasty. Ve srovnání s G1 kůže z myší ozářených UV zářením (G2) vykazovala významné zvýšení ztluštění jak epidermis, tak dermis, jakož i snížení tvorby fibroblastů a elastických vláken UV zářením. Lokální aplikace 5% (G5) a 2% (G4) PPEE SLNs krému byla srovnatelná s aplikací G3, která dostala komerční produkt. Všechny G4 a G5 významně snížily tloušťku dermis a epidermis a zvýšily obsah fibroblastů, protože jejich počet určuje obsah kolagenových vláken, a tak pomáhají opravit poškozenou pokožku a snížit účinek stárnutí na kůži (obrázek 9a,b) . Také obě skupiny vykazovaly preventivní účinky proti degradaci elastických vláken UV zářením, takže můžeme konstatovat, že ošetření oběma dávkami krému PPEE-SLNs prokázalo ochranný účinek proti UV záření.

Další informace: david.deng@wecistanche.com WhatApp:{0}}