4.6. Látky reaktivní s kyselinou thiobarbiturovou (TBAR)

Obsah TBAR byl použit jako index lipoperoxidace. Do mozkové tkáně byl přidán 50 mM fosfátový pufr (pH 7,4) do koncentrace 25 mg/ml (w/v) a suspenze byla homogenizována sonikací po dobu 10 sekund. Ke 30 ul homogenátu bylo přidáno 250 ul 1% kyseliny fosforečné a 75 ul 0,6% kyseliny thiobarbiturové (TBA). Směs činidel byla inkubována při 100 ◦C ve vodní lázni po dobu 45 minut, poté byla ochlazena v ledové lázni a poté centrifugována při 3000 x g po dobu 10 minut při 4 ◦C. Z každého vzorku byl odebrán objem 150 ul supernatantu. Fluorescence byla měřena pomocí čtečky mikrodestiček FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, Bádensko-Württembersko, Německo) s excitačním filtrem nastaveným na 485 nm (šířka pásma 5 nm) a emisním filtrem nastaveným na 530 nm (šířka pásma 5 nm). Kalibrační křivka byla připravena s použitím malondialdehydu (MDA) jako standardu. Výsledky byly vyjádřeny v pmol MDA/mg proteinu.

Glykosid cistanche může také zvýšit aktivitu SOD v srdeční a jaterní tkáni a významně snížit obsah lipofuscinu a MDA v každé tkáni, účinně zachycovat různé reaktivní kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atd.) a chránit před způsobeným poškozením DNA. OH-radikály. Cystanche fenylethanoidové glykosidy mají silnou schopnost vychytávání volných radikálů, vyšší redukční schopnost než vitamín C, zlepšují aktivitu SOD v suspenzi spermií, snižují obsah MDA a mají určitý ochranný účinek na funkci membrány spermií. Polysacharidy Cistanche mohou zvýšit aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytech a plicních tkáních experimentálně senescentních myší způsobených D-galaktózou, stejně jako snížit obsah MDA a kolagenu v plicích a plazmě a zvýšit obsah elastinu. dobrý čisticí účinek na DPPH, prodlužuje dobu hypoxie u senescentních myší, zlepšuje aktivitu SOD v séru a oddaluje fyziologickou degeneraci plic u experimentálně senescentních myší Experimenty prokázaly, že Cistanche má dobrou antioxidační schopnost s buněčnou morfologickou degenerací a má potenciál být lékem k prevenci a léčbě nemocí stárnutí kůže. Zároveň má echinakosid v Cistanche významnou schopnost vychytávat volné radikály DPPH a má schopnost vychytávat reaktivní formy kyslíku a bránit volnými radikály indukované degradaci kolagenu a má také dobrý opravný účinek na poškození aniontů volnými radikály thyminu.

Klikněte na Kde mohu koupit Cistanche

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

4.7. Enzymatická aktivita hlavních antioxidačních enzymů

Pro stanovení enzymové aktivity v mozkové tkáni byl k koncentrace 50 mg/ml (w/v). Poté byla suspenze sonikována po dobu 30 s v ledové lázni a homogenát byl centrifugován při 10,000× g po dobu 15 minut při 4 °C. Supernatanty byly odebrány pro stanovení enzymatické aktivity antioxidačních enzymů.

Aktivita superoxiddismutázy (SOD) byla měřena po inhibici autooxidace pyrogalolu při 420 nm [69]. Jedna jednotka enzymu byla definována jako množství enzymu potřebné k inhibici rychlosti autooxidace pyrogallolu o 50 procent. Enzymatická aktivita SOD byla vyjádřena jako mezinárodní jednotky (IU)/mg proteinu. Aktivita katalázy (CAT) byla měřena v supernatantech ošetřených Tritonem-X-100 (1 procento, v/v) po vymizení peroxidu vodíku (H2O2) při 240 nm [70] a enzymová aktivita byla uvedena jako substrát ( µmol H2O2) transformovaného/min · mg proteinu. Celková glutathionperoxidáza (GPx) byla stanovena po oxidaci NADPH při 340 nm v přítomnosti přebytku GR, GSH a kumenhydroperoxidu [71]. Aktivita GPx byla vyjádřena jako substrát (nmol NADPH) transformovaný/min mg proteinu. Aktivita glutathionreduktázy (GR) byla analyzována po oxidaci NADPH při 340 nm v přítomnosti GSSG [72] a vyjádřena jako substrát (nmol NADPH) transformovaný/min · mg proteinu. GR a obě aktivity GPx byly korigovány na spontánní reakci v nepřítomnosti biologických vzorků (v nepřítomnosti enzymu).

4.8. Test aktivity BACE1

Protokol testu BACE1 zahrnuje použití sekretázově specifického substrátu (peptidu), který je konjugován se dvěma reportérovými molekulami, jmenovitě EDANS a DABCYL, což vede k uvolnění fluorescenčního signálu [73,74]. Aktivita BACE1 byla měřena jak v kortexu, tak v lyzátech hippocampu. Reakce byla prováděna při 37 °C po dobu 1 hodiny s použitím 10 uM substrátu v 50 mM pufru octanu sodného (pH 4,5). Měření intenzity fluorescence byla provedena pomocí čtečky mikrodestiček FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, BadenWürttemberg, Německo) s excitačním filtrem nastaveným na 360 nm (šířka pásma 5 nm) a emisním filtrem nastaveným na 530 nm (šířka pásma 5 nm). Úroveň enzymatické aktivity sekretázy je úměrná fluorometrické reakci a data jsou vyjádřena jako x-násobné zvýšení fluorescence oproti kontrole pozadí (reakce v nepřítomnosti substrátu nebo tkáně). Aktivita BACE1 byla normalizována koncentrací proteinu. Aktivita BACE1 myší, léčených kvercetinem nebo rutinem, byla vyjádřena jako procento aktivity aktivity kontrolních myší TgAPP.

4.9. RT-PCR genová exprese hlavních antioxidačních enzymů, APP, BACE1, ADAM10, kaspázy-3 a kaspázy-6 a zánětlivých cytokinů

4.9.1. Extrakce a čištění celkové RNA

Analyzovali jsme různé oblasti mozku, jmenovitě kůru a hipokampus, uložené při -80 ◦C. Ke známému množství mozkové tkáně byl přidán lyzační pufr Triomol® v poměru 1:10 (w/v). Vzorky byly homogenizovány po dobu 30 s použitím Cordless motoru (Pellet palička, Sigma-Aldrich) a inkubovány po dobu 5 minut při 25 °C, aby byla umožněna úplná disociace nukleoproteinových komplexů. Poté bylo přidáno 0,2 ml chloroformu na každý ml použitého lyzačního pufru Triomol®. Zkumavky byly intenzivně třepány po dobu 15 s a inkubovány při 25 °C po dobu 3 minut. Poté byly centrifugovány při 11,000× g po dobu 15 minut při 4 °C. Po centrifugaci byly získány tři fáze, s RNA v horní fázi.

K izolaci RNA byla horní fáze přenesena do jiné zkumavky a vysrážena přidáním 0,5 ml isopropanolu. Po důkladném promíchání isopropanolu a vodného roztoku inverzí byla směs inkubována při teplotě místnosti po dobu 10 minut, aby se podpořilo srážení, a centrifugována při 12,000× g po dobu 10 minut při 4 °C. Supernatanty byly odstraněny a pelety byly promyty 75% ethanolem a centrifugovány při 7500 x g po dobu 5 minut při 4 °C. Pelety byly sušeny při teplotě místnosti a rozpuštěny v 50 ul vody ošetřené DEPC. Pro odstranění stop DNA bylo přidáno 2,5 ul DNázy (bez RNázy) a inkubováno při 37 °C po dobu 30 minut. Nakonec byly vzorky inkubovány při 64 °C po dobu 5 minut, aby se inaktivovala DNáza.

Následně byly měřeny koncentrace RNA na UV-VIS spektrofotometru (BMG LABTECH, Ortenberg, Bádensko-Württembersko, Německo) při 260 nm a čistota byla hodnocena s ohledem na poměr absorbance při 260 a 280 nm (A260/A280).

Stanovení integrity a čistoty RNA bylo provedeno elektroforézou v 1% agarózovém gelu obarveném GelRed a vizualizovaném pod UV světlem, kde, pokud byla RNA intaktní, dva horní pruhy odpovídající ribozomální RNA (28S a 18S) a dva spodní pruhy musely být pozorovány odpovídající transferové RNA (tRNA) a 5S ribozomální RNA.

4.9.2. Syntéza komplementární DNA (cDNA).

cDNA je mnohem stabilnější než RNA, a proto umožňuje pohodlnější a bezpečnější manipulaci se vzorky. cDNA byla syntetizována z mRNA retrotranskripcí za použití soupravy First Strand cDNA Synthesis Kit pro RT-qPCR (Fermentas Life Sciences).

K provedení retrotranskripce pro syntézu cDNA na 2 ug RNA bylo přidáno 11 ul vody ošetřené DEPC a 1 ul 10X náhodných primerů. Poté byla směs inkubována při 65 °C po dobu 10 minut, aby se denaturovala RNA. Po této době byly zkumavky okamžitě přivedeny na 5 minut na 4 °C, aby se zabránilo renaturaci RNA. Směs činidel pro syntézu cDNA je uvedena v tabulce S1 (doplňková data).

Ke každému vzorku bylo přidáno 8 ul reakční směsi. Celý objem byl přenesen na dno zkumavek a inkubován při 42 °C po dobu 60 minut. Nakonec byla reakce zastavena inaktivací reverzní transkriptázy jejím zahřátím na 70 °C po dobu 10 minut.

4.9.3. PCR v reálném čase

Hlavním rysem real-time PCR je, že analýza produktů probíhá během amplifikačního procesu stanovením fluorescence. Tímto způsobem probíhají procesy amplifikace a detekce současně ve stejné zkumavce nebo lahvičce bez potřeby jakékoli další akce. Pro real-time PCR se používají termální cykléry, které dokážou amplifikovat a detekovat fluorescenci současně. Použili jsme termocykler v reálném čase LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Německo).

Tabulka S2 (Doplňková data) uvádí reagencie požadované pro PCR v reálném čase s použitím sekvenčně specifických primerů a barviva vázajícího DNA (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Rotkreuz, Švýcarsko) jako detekčního systému.

Pro návrh primerů pro různé kvantifikované markery byl použit bioinformatický program Primer3Plus, pro který jsme převzali cDNA sekvence genů zájmu z databáze Medline s otevřeným přístupem. Primery dodala společnost Merck (Sigma-Aldrich). Teplota hybridizace a sekvence různých použitých primerů jsou uvedeny v tabulce S3 (doplňková data).

Reakční podmínky pro amplifikaci požadovaných genů jsou uvedeny v tabulce S4 (doplňková data).

Nakonec byly vzorky podrobeny programu tání: 95 ◦C po dobu 15 s, 65 ◦C po dobu 30 s a až 98 ◦C při rychlosti 0,1 ◦C/s s kontinuálním fluorescenčním záznamem.

Pro kvantifikaci hladin cDNA byla použita srovnávací metoda prahu cyklu (Ct) [75] s využitím GADPH jako hospodyně. Amplifikace housekeepera byla provedena paralelně s analyzovaným genem. Hodnoty Ct byly vypočteny pomocí softwaru 4.{2}} poskytnutého společností LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Německo). Software umožňuje rozlišovat mezi fluorescencí způsobenou amplifikací vzorku a pozadím. Rovněž byly zaznamenány křivky tání. Stanovení teploty tání amplifikovaného fragmentu umožnilo charakterizaci amplifikovaného produktu. Velikost pásů byla kontrolována na 1,5% agarózovém gelu.

Variace exprese studovaného genu s léčbou kvercetinem nebo rutinem byla vyjádřena jako funkce kontrolního TgAPP (myši bez léčby) a normalizace této exprese s hladinami GADPH. Záhyb změny (2−∆∆Ct) představuje, kolikrát byl požadovaný gen modifikován při konkrétní léčbě týkající se kontrolních myší.

4.10. Statistické analýzy

Všechny testy byly provedeny alespoň v duplikátech a ve třech různých experimentech. Získané výsledky jsou vyjádřeny jako průměr ± standardní chyba. Jednosměrná analýza rozptylu (ANOVA) byla provedena poté, co byla data testována a demonstrována, že odpovídají normální distribuci. Byly provedeny Newman-Keulsovy vícenásobné srovnávací post-hoc testy, které zkoumaly průměrné rozdíly mezi skupinami. Hodnoty p < 0.05 byly považovány za významné. Pro statistické analýzy byl použit software SigmaPlot 11.0.

5. Závěry

Dietní návyky a suplementace mohou ovlivnit buněčný redoxní stav. Na tomto základě jsme se zaměřili na zlepšení buněčné redoxní homeostázy u AD myšího modelu pomocí flavonoidní diety obsahující kvercetin nebo rutin ke zmírnění amyloidní patologie, s ohledem na souhru mezi buněčným redoxním stavem a proteazomově závislými amyloidovými rysy u asymptomatické AD. Naše datové soubory jsou relevantní, protože flavonoidní účinky zobrazené na myším modelu TgAPP jsou konzistentní s těmi, které byly uvedeny dříve v našich modelech in vitro a ex vivo.

Závěrem lze říci, že naše zjištění ukazují, že zahájení dietní léčby v asymptomatické fázi nebo nástupu symptomů podobných AD by mohlo obnovit buněčný redoxní stav a fyziologické zpracování APP prostřednictvím současné regularizace exprese APP a aktivity BACE1.

Ačkoli je obtížné extrapolovat naše zjištění na stav člověka, mohou mít široké důsledky pro lidskou odpověď na budoucí terapeutika. Ze dvou flavonoidů se rutin, s celkově výraznějšími účinky in vivo, jeví jako nejvhodnější pro zařazení do každodenní stravy jako adjuvantní terapie u AD, založená na augmentaci intracelulární redoxní homeostázy mozku.

Doplňkové materiály:Následující podpůrné informace lze stáhnout na webových stránkách. Odkaz [76] je uveden v doplňkových materiálech.

Příspěvky autora:PB-B. a SM-A. vymyslel myšlenku a experimentální design, pomohl při experimentech, interpretoval získané výsledky a napsal rukopis. KLJ-A. provedli experimenty, provedli analýzy dat a interpretovali získané výsledky. JB pomáhal s analýzami dat a revizí rukopisu. Všechna data byla vytvořena interně a nebyla použita žádná papírna. Všichni autoři souhlasí s tím, že budou odpovědní za všechny aspekty práce zajišťující integritu a přesnost. Všichni autoři si přečetli publikovanou verzi rukopisu a souhlasí s ní.

Financování:Tento výzkum byl financován nadací pro lékařský výzkum «Mutua Madrileña» (čtvrté vydání grantů pro projekty lékařského výzkumu), španělským ministerstvem školství a vědy (ref. AGL2008-04892-C03-02) a Španělské ministerstvo vědy a inovací (Ref. CTQ2010-16170).

Prohlášení institucionální revizní komise:Protokoly zvířat byly schváleny Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) na Complutense University v Madridu a byly plně v souladu s evropskou směrnicí 2010/63/o ochraně zvířat používaných pro vědecké účely a španělskou legislativou o dobrých životních podmínkách zvířat ( Královský dekret 53/2013, 1. února 2013).

Prohlášení o informovaném souhlasu:Nelze použít.

Prohlášení o dostupnosti dat:Údaje, které podporují zjištění této studie, jsou na přiměřenou žádost k dispozici od odpovídajícího autora.

Poděkování:Děkujeme Foundation Folch za předdoktorský grant KLJA.

Střet zájmů:Autoři prohlašují, že nedochází ke střetu zájmů.

Zkratky

AD, Alzheimerova choroba; ADAM-10, protein A disintegrin a metaloproteinázová doména obsahující protein 10; APP, amyloidní prekurzorový protein; APPswe, švédská mutace amyloidního prekurzorového proteinu; A, amyloid-; BACE1, enzym štěpící místo APP 1; CAT, Catalase; GPx, glutathionperoxidáza; GR, glutathion reduktáza; GSH, redukovaný glutathion; GSSG, oxidovaný glutathion; SOD, superoxiddismutáza.

Reference

1. Ebenau, JL; Pelkmans, W.; Verberk, IMW; Verfaillie, SCJ; van den Bosch, KA; van Leeuwenstijn, M.; Collij, LE; Scheltens, P.; Prins, ND; Barkhof, F.; a kol. Asociace CSF, plazmy a zobrazovacích markerů neurodegenerace s klinickou progresí u lidí se subjektivním kognitivním poklesem. Neurologie 2022, 98, e1315–e1326. [CrossRef] [PubMed]

2. Dominguez, LJ; Veronese, N.; Vernuccio, L.; Catanese, G.; Inzerillo, F.; Salemi, G.; Barbagallo, M. Výživa, fyzická aktivita a další faktory životního stylu v prevenci kognitivního úpadku a demence. Živiny 2021, 13, 4080. [CrossRef]

3. Tsarbopoulos, A. Alzheimerova choroba: Zkoumání „lékařské truhly“ přírody pro nová terapeutická činidla. Biomol. Koncepce 2020, 11, 201–208. [CrossRef] [PubMed]

4. Ashe, KH; Zahs, KR Zkoumání biologie Alzheimerovy choroby u myší. Neuron 2010, 66, 631–645. [CrossRef] [PubMed]

5. Zahs, KR; Ashe, KH „Příliš mnoho dobrých zpráv“ – Snaží se nám modely myší Alzheimerovy choroby sdělit, jak předcházet Alzheimerově chorobě, nikoli ji léčit? Trendy Neurosci. 2010, 33, 381–389. [CrossRef]

6. Foley, AM; Ammar, ZM; Lee, RH; Mitchell, CS Systematický přehled vztahu mezi hladinami amyloidu a mírami kognitivního deficitu transgenních myší u Alzheimerovy choroby. J. Alzheimer's Dis. 2015, 44, 787–795. [CrossRef]

7. Anand David, A.; Arulmoli, R.; Parasuraman, S. Přehledy biologického významu kvercetinu: Bioaktivní flavonoid. Pharm. Rev. 2016, 10, 84–89.

8. Habtemariam, S. Rutin jako přírodní terapie Alzheimerovy choroby: pohledy do jejích mechanismů účinku. Curr. Med. Chem. 2016, 23, 860–873. [CrossRef]

9. Martín-Aragón, S.; Jiménez-Aliaga, K.; Benedí, J.; Bermejo-Bescós, P. Neurohormetické odezvy kvercetinu a rutinu v buněčné linii nadměrně exprimující amyloidní prekurzorový protein (buňky APPswe). Fytomedicína 2016, 23, 1285–1294. [CrossRef]

10. Zhou, W.; Qing, H.; Tong, Y.; Song, W. Genová exprese BACE1 a degradace proteinů. Ann. NY Acad. Sci. 2004, 1035, 49–67. [CrossRef]

11. Gutbier, S.; Spreng, AS; Delp, J.; Schildknecht, S.; Karreman, C.; Suciu, I.; Brunner, T.; Groettrup, M.; Leist, M. Prevence neuronální apoptózy astrocyty prostřednictvím modulace stresové reakce zprostředkované thiolem a urychleného zotavení z proteotoxického stresu. Cell Death Differ. 2018, 25, 101–117. [CrossRef] [PubMed]

12. Aoyama, K. Glutathion v mozku. Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 5010. [CrossRef] [PubMed]

13. Scholey, A. Živiny pro neurokognici ve zdraví a nemoci: Opatření, metodiky a mechanismy. Proč. Nutr. Soc. 2018, 77, 73–83. [CrossRef] [PubMed]

14. Apelt, J.; Bigl, M.; Wunderlich, P.; Schliebsm, R. Zvýšení oxidačního stresu související se stárnutím koreluje s vývojovým vzorem aktivity beta-sekretázy a tvorbou beta-amyloidních plaků u transgenních myší Tg2576 s patologií podobnou Alzheimerově chorobě. Int. J. Dev. Neurosci. 2004, 22, 475–484. [CrossRef] [PubMed]

15. Howlett, DR; Richardson, JC Patologie APP transgenních myší: model Alzheimerovy choroby nebo jednoduše nadměrná exprese APP? Histol. Histopathol. 2009, 24, 83–100. [PubMed]

16. Ccioni, C.; Spallotta, F.; Martelli, F.; Valente, S.; Mai, A.; Zeiher, AM; Gaetano, C. Oxidační stres a epigenetická regulace u stárnutí a nemocí souvisejících s věkem. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 17643–17663. [CrossRef]

17. Tsang, AH; Chung, KK Oxidační a nitrosativní stres u Parkinsonovy choroby. Biochim. Biophys. Acta 2009, 1792, 643–650. [CrossRef]

18. Mandal, PK; Saharan, S.; Tripathi, M.; Murari, G. Hladiny glutathionu v mozku – nový biomarker pro mírné kognitivní poruchy a Alzheimerovu chorobu. Biol. Psychiatrie 2015, 78, 702–710. [CrossRef]

19. Chen, JJ; Thiyagarajah, M.; Song, J.; Chen, C.; Herrmann, N.; Gallagher, D.; Rapoport, MJ; Černá, SE; Ramirez, J.; Andreazza, AC; a kol. Změněný centrální a krevní glutathion u Alzheimerovy choroby a mírné kognitivní poruchy: metaanalýza. Alzheimer's Res. Ther. 2022, 14, 23. [CrossRef]

20. Počernich, CB; Butterfield, DA Elevace glutathionu jako terapeutická strategie u Alzheimerovy choroby. Biochim. Biophys. Acta (BBA)-Mol. Basis Dis. 2012, 1822, 625–630. [CrossRef]

21. Raza, A.; Xie, W.; Kim, KH; Dronamraju, VR; Williams, J.; Vince, R.; Více, SS dipeptid ψ-GSH inhibuje oxidační stres a neurozánět u myšího modelu s Alzheimerovou chorobou. Antioxidanty 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Yang, H.; Xie, Z.; Wei, L.; Ding, M.; Wang, P.; Bi, J. Glutathion-mimetikum D609 zmírňuje deficity paměti a snižuje ukládání amyloidu v A PP/PS1 transgenním myším modelu. Neuroreport 2018, 29, 833–838. [CrossRef] [PubMed]

23. Guerrero-Gómez, D.; Mora-Lorca, JA; Sáenz-Narciso, B.; Naranjo-Galindo, FJ; Muñoz-Lobato, F.; Parrado-Fernández, C.; Goikolea, J.; Cedazo-Minguez, Á.; Odkaz, CD; Neri, C.; a kol. Ztráta glutathionové redoxní homeostázy zhoršuje proteostázu inhibicí degradace proteinů závislé na autofagii. Cell Death Differ. 2019, 26, 1545–1565. [CrossRef] [PubMed]

24. Lefaki, M.; Papaevgeniou, N.; Chondrogianni, N. Redoxní regulace funkce proteazomu. Redox Biol. 2017, 13, 452–458. [CrossRef] [PubMed]

25. Bonet-Costa, V.; Pomatto, LC; Davies, KJ Proteazom a oxidační stres u Alzheimerovy choroby. Antioxid. Redoxní signál. 2016, 25, 886–901. [CrossRef]

26. Belkacemi, A.; Ramassamy, C. Časová sekvence oxidačního stresu v mozku z transgenních myších modelů Alzheimerovy choroby související s amyloidní kaskádou. Volný Radic. Biol. Med. 2012, 52, 593–600. [CrossRef]

27. Tanigawa, S.; Fujii, M.; Hou, DX Působení Nrf2 a Keap1 v expresi NQO1 zprostředkované ARE kvercetinem. Volný Radic. Biol. Med. 2007, 42, 1690–1703. [CrossRef]

28. Chondrogianni, N.; Kapeta, S.; Chinou, I.; Vassilatou, K.; Papassideri, I.; Gonos, ES Anti-ageing a omlazující účinky kvercetinu. Exp. Gerontol. 2010, 45, 763–771. [CrossRef]

29. Bodendorf, U.; Danner, S.; Fischer, F.; Stefani, M.; Sturchler-Pierrat, C.; Wiederhold, KH; Staufenbiel, M.; Paganetti, P. Exprese lidské beta-sekretázy v mozku myši zvyšuje hladinu beta-amyloidu v ustáleném stavu. J. Neurochem. 2002, 80, 799-806. [CrossRef]

30. Yamakawa, H.; Yagishita, S.; Futai, E.; Ishiura, S. S. beta-sekretázová účinnost inhibitoru je snížena aberantním umístěním beta-štěpení "švédského mutantního" amyloidního prekurzorového proteinu. J. Biol. Chem. 2010, 285, 1634–1642. [CrossRef]

31. Keller, D.; Eró, C.; Markram, H. Cell Densities in the Mouse Brain: A Systematic Review. Přední. Neuroanat. 2018, 12, 83. [CrossRef] [PubMed]

32. Mladenovic Djordjevic, AN; Kapetanou, M.; Loncarevic-Vasiljkovic, N.; Todorovič, S.; Athanasopoulou, S.; Jovič, M.; Prvulovič, M.; Taoufik, E.; Matsas, R.; Kanazir, S.; a kol. Farmakologická intervence v modelu transgenní myši zlepšuje patologický fenotyp spojený s Alzheimerovou chorobou: Zapojení aktivace proteazomu. Volný Radic. Biol. Med. 2021, 162, 88–103. [CrossRef] [PubMed]

33. Tamagno, E.; Bardini, P.; Guglielmotto, M.; Danni, O.; Tabaton, M. Různé stavy agregace beta-amyloidu 1-42 zprostředkovávají různé účinky na oxidační stres, neurodegeneraci a expresi BACE-1. Volný Radic. Biol. Med. 2006, 41, 202–212. [CrossRef] [PubMed]

34. Jorissen, E.; Prox, J.; Bernreuther, C.; Weber, S.; Schwanbeck, R.; Serneels, L.; Snellinx, A.; Craessaerts, K.; Thathiah, A.; Tesseur, I.; a kol. Disintegrin/metaloproteináza ADAM10 je nezbytná pro vytvoření mozkové kůry. J. Neurosci. 2010, 30, 4833–4844. [CrossRef]

35. Kuhn, PH; Wang, H.; Dislich, B.; Colombo, A.; Zeitschel, U.; Ellwart, JW; Kremmer, E.; Roßner, S.; Lichtenthaler, SF ADAM10 je fyziologicky relevantní, konstitutivní -sekretáza amyloidního prekurzorového proteinu v primárních neuronech. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [CrossRef]

36. Postina, R.; Schroeder, A.; Dewachter, I.; Bohl, J.; Schmitt, U.; Kojro, E.; Prinzen, C.; Endres, K.; Hiemke, C.; Požehnání, M.; a kol. Disintegrin-metaloproteináza zabraňuje tvorbě amyloidních plaků a hipokampálním defektům u myšího modelu s Alzheimerovou chorobou. J. Clin. Vyšetřování. 2004, 113, 1456–1464. [CrossRef]

37. Elfiky, AM; Mahmoud, AA; Elreedy, HA; Ibrahim, KS; Ghazy, MA Quercetin stimuluje neamyloidogenní dráhu prostřednictvím aktivace exprese genů ADAM10 a ADAM17 v krysím modelu Alzheimerovy choroby vyvolané chloridem hlinitým. Life Sci. 2021, 285, 119964. [CrossRef]

38. Copanaki, E.; Chang, S.; Vlachos, A.; Tschäpe, JA; Müller, UC; Kögel, D.; Deller, T. sAPPalpha antagonizuje dendritickou degeneraci a smrt neuronů spouštěnou proteasomálním stresem. Mol. Cell Neurosci. 2010, 44, 386–393. [CrossRef]

39. Renziehausen, J.; Hiebel, C.; Nagel, H.; Kundu, A.; Kins, S.; Kogel, D.; Behl, C.; Hajieva, P. Produkt štěpení prekurzoru proteinu amyloid-beta sAbetaPPalpha moduluje tvorbu agresivu závislou na BAG{2}} a zvyšuje buněčnou proteasomální aktivitu. J. Alzheimer's Dis. 2015, 44, 879–896. [CrossRef]

40. Livingstone, RW; starší, MK; Singh, A.; Westlake, CM; Tate, WP; Abraham, WC; Williams, JM Vylučovaný amyloidní prekurzorový protein-alfa zvyšuje LTP prostřednictvím syntézy a obchodování s Ca2 plus -permeabilními AMPA receptory. Přední. Mol. Neurosci. 2021, 14, 660208. [CrossRef]

41. Crawford, HC; Dempsey, PJ; Brown, G.; Adam, L.; Moss, ML ADAM10 jako terapeutický cíl pro rakovinu a zánět. Curr. Pharm. Des. 2009, 15, 2288–2299. [CrossRef] [PubMed]

42. Saftig, P.; Lichtenthaler, SF Alfa sekretáza ADAM10: Metaloproteáza s mnoha funkcemi v mozku. Prog. Neurobiol. 2015, 135, 1–20. [CrossRef] [PubMed]

43. Borreca, A.; Gironi, K.; Amadoro, G.; Ammassari-Teule, M. Opačná dysregulace fragilního-X mentálního retardačního proteinu a heteronukleárního ribonukleoproteinového C proteinu asociovaného s vylepšenou translací APP u Alzheimerovy choroby. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 3227–3234. [CrossRef] [PubMed]

44. Augustin, S.; Rimbach, G.; Augustin, K.; Schliebs, R.; Wolffram, S.; Cermak, R. Vliv krátkodobé a dlouhodobé léčby extraktem z Ginkgo biloba na hladiny amyloidního prekurzorového proteinu v modelu transgenních myší relevantních pro Alzheimerovu chorobu. Oblouk. Biochem. Biophys. 2009, 481, 177–182. [CrossRef] [PubMed]

45. Borreca, A.; Valeri, F.; De Luca, M.; Ernst, L.; Russo, A.; Nobili, A.; Cordella, A.; Corsetti, V.; Amadoro, G.; Mercuri, NB; a kol. Přechodná upregulace translační účinnosti u prodromálních a časných symptomatických myší Tg2576 přispívá k A patologii. Neurobiol. Dis. 2020, 139, 104787. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​D'Amelio, M.; Sheng, M.; Cecconi, F. Caspase-3 v centrálním nervovém systému: Beyond apoptosis. Trendy Neurosci. 2012, 35, 700–709. [CrossRef]

47. Ertürk, A.; Wang, Y.; Sheng, M. Lokální prořezávání dendritů a trnů kaspázovými-3-závislými a proteazomově omezenými mechanismy. J. Neurosci. 2014, 34, 1672–1688. [CrossRef]

48. D'Amelio, M.; Cavallucci, V.; Middei, S.; Marchetti, C.; Pacioni, S.; Ferri, A.; Diamantini, A.; De Zio, D.; Carrara, P.; Battistini, L.; a kol. Kaspáza-3 spouští časnou synaptickou dysfunkci u myšího modelu Alzheimerovy choroby. Nat. Neurosci. 2011, 14, 69–76. [CrossRef]

49. Gervais, FG; Xu, D.; Robertson, GS; Vaillancourt, JP; Zhu, Y.; Huang, J.; LeBlanc, A.; Smith, D.; Rigby, M.; Shearman, MS; a kol. Zapojení kaspáz do proteolytického štěpení prekurzorového proteinu amyloid-beta Alzheimerovy choroby a tvorby amyloidogenního peptidu A beta. Cell 1999, 97, 395–406. [CrossRef]

50. Park, G.; Nhan, HS; Tyan, SH; Kawakatsu, Y.; Zhang, C.; Navarro, M.; Koo, EH aktivace kaspázy a kaspázou zprostředkované štěpení APP je spojeno se ztrátou synapse indukovanou amyloidem - proteinem u Alzheimerovy choroby. Cell Rep. 2020, 31, 107839. [CrossRef]

51. Lu, DC; Rabizadeh, S.; Chandra, S.; Shayya, RF; Ellerby, LM; Ano, X.; Salvesen, GS; Koo, EH; Bredesen, DE Druhý cytotoxický proteolytický peptid odvozený z amyloidního beta-proteinového prekurzoru. Nat. Med. 2000, 6, 397–404. [CrossRef] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Caspase-6 jako nový časný cíl v léčbě Alzheimerovy choroby. Eur. J. Neurosci. 2013, 37, 2005–2018. [CrossRef]

53. Albrecht, S.; Bogdanovič, N.; Ghetti, B.; Winblad, B.; LeBlanc, aktivace AC kaspázy-6 v mozcích s familiární Alzheimerovou chorobou nesoucích amyloidní prekurzorový protein nebo mutace presenilin I nebo presenilin II. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2009, 68, 1282–1293. [CrossRef] [PubMed]

54. Morihara, T.; Teter, B.; Yang, F.; Lim, praktický lékař; Boudinot, S.; Boudinot, FD; Frautschy, SA; Cole, GM ibuprofen potlačuje interleukin-1beta indukci pro-amyloidogenního alfa1-antichymotrypsinu, aby se zlepšila patologie beta-amyloidu (Abeta) u modelů Alzheimerovy choroby. Neuropsychofarmakologie 2005, 30, 1111–1120. [CrossRef] [PubMed]

55. Niu, YL; Zhang, WJ; Wu, P.; Liu, B.; Slunce, GT; Yu, DM; Deng, JB Exprese proteinů souvisejících s apoptózou kaspázy-3 a NF-kappaB v hipokampu myší Tg2576. Neurosci. Býk. 2010, 26, 37–46. [CrossRef]

56. Fuller, S.; Steele, M.; Munch, G. Aktivované astroglie během chronického zánětu u Alzheimerovy choroby – zanedbávají své neuropodpůrné role? Mutat. Res. 2010, 690, 40–49. [CrossRef]

57. Lee, M.; Cho, T.; Jantaratnotai, N.; Wang, YT; McGeer, E.; McGeer, PL Deplece GSH v gliových buňkách indukuje neurotoxicitu: Význam pro stárnutí a degenerativní neurologická onemocnění. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [CrossRef]

58. Hensley, K. Neuroinflammation u Alzheimerovy choroby: Mechanismy, patologické důsledky a potenciál pro terapeutickou manipulaci. J. Alzheimer's Dis. 2010, 21, 1–14. [CrossRef]

59. Lu, J.; Wu, DM; Zheng, YL; Rozbočovač.; Zhang, ZF; Shan, Q.; Zheng, ZH; Liu, CM; Wang, YJ Quercetin aktivuje protein kinázu aktivovanou AMP snížením exprese PP2C, čímž chrání mozek starých myší proti neurotoxicitě vyvolané vysokým cholesterolem. J. Pathol. 2010, 222, 199–212. [CrossRef]

60. Chen, JC; Ho, FM; Chao, PDL; Chen, CP; Jeng, KC; Hsu, HB; Lee, ST; Wen Tung, W.; Lin, WW Inhibice exprese genu iNOS kvercetinem je zprostředkována inhibicí kinázy IkappaB, nukleárního faktoru-kappa B a STAT1 a závisí na indukci hemoxygenázy-1 v mikrogliích myší BV-2. Eur. J. Pharmacol. 2005, 521, 9–20. [CrossRef]

61. Dwivedi, D.; Megha, K.; Mishra, R.; Mandal, PK Glutathion v mozku: Přehled jeho konformací, funkcí, biochemických charakteristik, kvantifikace a potenciální terapeutické role u poruch mozku. Neurochem. Res. 2020, 45, 1461–1480. [CrossRef] [PubMed]

62. Rossner, S.; Šastre, M.; Bourne, K.; Lichtenthaler, SF Transkripční a translační regulace exprese BACE1 – důsledky pro Alzheimerovu chorobu. Prog. Neurobiol. 2006, 79, 95–111. [CrossRef] [PubMed]

63. Westerman, MA; Cooper-Blacketer, D.; Mariash, A.; Kotilínek, L.; Kawarabayashi, T.; Younkin, LH; Carlson, GA; Younkin, SG; Ashe, KH Vztah mezi Abeta a pamětí u myšího modelu Tg2576 Alzheimerovy choroby. J. Neurosci. 2002, 22, 1858–1867. [CrossRef] [PubMed]

64. Irizarry, MC; Locascio, JJ; Hyman, BT Exprese mRNA enzymu štěpícího APP v beta místě u APP transgenních myší: Anatomické překrývání s expresí transgenu a statické úrovně se stárnutím. Dopoledne. J. Pathol. 2001, 158, 173–177. [CrossRef] [PubMed]

65. Hsiao, K.; Chapman, P.; Nilsen, S.; Eckman, C.; Harigaya, Y.; Younkin, S.; Yang, F.; Cole, G. Korelativní paměťové deficity, elevace Abeta a amyloidní plaky u transgenních myší. Science 1996, 274, 99–102. [CrossRef] [PubMed]

66. Hsiao, K. Transgenní myši exprimující Alzheimerovy amyloidní prekurzorové proteiny. Exp. Gerontol. 1998, 33, 883-889. [CrossRef]

67. Simón, AM; Schiaparelli, L.; Salazar-Colocho, P.; Cuadrado-Tejedor, M.; Escribano, L.; López de Maturana, R.; Del Río, J.; Pérez-Mediavilla, A.; Frechilla, D. Nadměrná exprese lidského APP divokého typu u myší způsobuje kognitivní deficity a patologické rysy nesouvisející s hladinami Abeta. Neurobiol. Dis. 2009, 33, 369–378. [CrossRef]

68. Senft, AP; Dalton, TP; Shertzer, HG Stanovení glutathionu a glutathiondisulfidu pomocí fluorescenční sondy oftalaldehyd. Anální. Biochem. 2000, 280, 80–86. [CrossRef]

69. Marklund, S.; Marklund, G. Zapojení superoxidového aniontového radikálu do autooxidace pyrogallolu a vhodný test na superoxiddismutázu. Eur. J. Biochem. 1974, 47, 469–474. [CrossRef]

70. Aebi, H. Catalase in vitro. Metody Enzymol. 1984, 105, 121–126.

71. Barja de Quiroga, G.; Perez-Campo, R.; Lopez Torres, M. Antioxidační obrana a peroxidace v játrech a mozku starých krys. Biochem. J. 1990, 272, 247-250. [CrossRef] [PubMed]

72. Massey, V.; Williams, CH, Jr. O reakčním mechanismu kvasinkové glutathionreduktázy. J. Biol. Chem. 1965, 240, 4470–4480. [CrossRef]

73. Jash, K.; Gondaliya, P.; Sunkaria, A.; Kalia, K. MicroRNA-29b Modulates -Secretase Activity in SH-SY5Y Cell Line and Diabetic Mouse Brain. Cell Mol. Neurobiol. 2020, 40, 1367–1381. [CrossRef] [PubMed]

74. Jimenez-Aliaga, K.; Bermejo-Bescos, P.; Benedi, J.; Martin-Aragon, S. Quercetin a rutin vykazují antiamyloidogenní a fibril disagregační účinky in vitro a silnou antioxidační aktivitu v buňkách APPswe. Life Sci. 2011, 89, 939–945. [CrossRef] [PubMed]

75. Ramos, CA; Bowman, TA; Boles, NC; obchodník, AA; Zheng, Y.; Parra, I.; Fuqua, SA; Shaw, CA; Goodell, MA Důkazy pro diverzitu v transkripčních profilech jednotlivých hematopoetických kmenových buněk. PLoS Genet. 2006, 2, e159.

76. Schmued, LC; Stowers, CC; Scallet, AC; Xu, L. Fluoro-Jade C má za následek ultravysoké rozlišení a kontrastní značení degenerujících neuronů. Brain Res. 2005, 1035, 24–31. [CrossRef] [PubMed]

Zřeknutí se odpovědnosti / Poznámka vydavatele:Prohlášení, názory a údaje obsažené ve všech publikacích jsou výhradně výroky jednotlivých autorů a přispěvatelů, nikoli MDPI a/nebo editorů. MDPI a/nebo redaktoři se zříkají odpovědnosti za jakékoli zranění osob nebo majetku vyplývající z jakýchkoli nápadů, metod, pokynů nebo produktů uvedených v obsahu.

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】