Srovnávací studie vlastností a mechanismu proti stárnutí: Resveratrol a kalorické omezení Ⅱ

Vliv resveratrolu a CR na expresi mRNA SIRT1, p53 a Foxo3a v tkáních stárnoucích potkanů

Podmínky oxidačního stresučasto indukují expresi a aktivitu SIRT1. SIRT1 moduluje funkce klíčových faktorů přežití včetně p53 a Foxo3a [9]. Pro stanovení účinku resveratrolu a CR na hladiny mRNA SIRT1, p53 a Foxo3a u D-Gal-indukovaného stárnutí potkanů ​​byly provedeny kvantitativní testy RT-PCR. Ve srovnání s odpovídající negativní kontrolní skupinou byly hladiny exprese mRNA SIRT1 a Foxo3a významně sníženy, ale hladina p53 byla významně zvýšena ve skupině D-Gal (P < 0.01; Obrázek 9A a 9B). Kromě toho současná léčba resveratrolem nebo CR s D-gal u potkanů ​​způsobila zvýšení hladin exprese mRNA SIRT1 a Foxo3a, ale snížila hladiny p53 ve srovnání s modelovou kontrolní skupinou (P < 0,05). Ve srovnání s léčbou CR však byla hladina exprese mRNA SIRT1 významně zvýšena v játrech skupiny s vysokou dávkou resveratrolu plus D-gal, hladina exprese mRNA p53 byla významně snížena v játrech a mozcích vysoké dávky resveratrolu plus D- skupina gal (P < 0,05).

Kliknutím sem získáte doplňky proti stárnutí Cistanche

Účinek resveratrolu a CR na expresi hlavního proteinu asociovaného se SIRT1-v mozkových tkáních stárnoucích potkanů

FOXO3a a p53, které jsou regulovány SIRT1, jsou downstream molekuly SIRT1. Současně je aktivita SIRT1 regulována jeho upstream molekulami, například DBC1 (také známý jako KIAA1967), AROS (také známý jako RPS19BP1) a tumor supresor HuR (také známý jako ELAVL1) [9, 10] . Pro stanovení účinku resveratrolu a CR na proteinové hladiny p53, FOXO3a, HuR, AROS a DBC1 u stárnoucích potkanů ​​vyvolaných D-Gal byly provedeny testy western blot. Ve srovnání s odpovídající negativní kontrolní skupinou byly hladiny exprese proteinů FOXO3a, AROS a HuR významně sníženy, ale hladiny p53 a DBC1 byly významně zvýšeny ve skupině D-gal (P < 0.01 Obrázek 10). Kromě toho současná léčba resveratrolem nebo CR s D-gal u potkanů ​​způsobila zvýšení proteinové exprese FOXO3a, AROS a HuR, ale snížila hladiny p53 a DBC1 ve srovnání s modelovou kontrolní skupinou (P < 0,05). Ve srovnání s léčbou CR však byla hladina exprese proteinu HuR významně zvýšena, ale hladina DBC1 byla významně snížena v mozcích skupiny s vysokou dávkou resveratrolu a D-gal (P < 0,05). Mezi skupinou resveratrol plus D-gal a skupinou CR plus D-gal nebyly žádné rozdíly v hladinách exprese proteinu p53, FOXO3a a AROS (P > 0,05).

Exprese FOXO3a a p53 v mozkových a jaterních tkáních

Stav exprese FOXO3a a p53 byl stanoven v mozkových a jaterních tkáních imunohistochemicky. Imunohistochemická analýza FOXO3a a p53 odhalila, že exprese FOXO3a v mozkových a jaterních tkáních byla významně snížena a exprese p53 byla významně zvýšena ve skupině D-Gal ve srovnání s negativní kontrolní skupinou (P < 0.{{13} }5, obrázek 11). Kromě toho současná léčba resveratrolem nebo CR s D-gal u potkanů ​​způsobila zvýšení exprese FOXO3a, ale snížila expresi p53 ve srovnání s modelovou kontrolní skupinou (P < 0,05). Nebyly však žádné rozdíly mezi skupinou resveratrol plus D-gal a skupinou CR plus D-gal v expresi p53 a FOXO3a (P > 0,05).

DISKUSE

Základní chemický proces stárnutí byl nejprve pokročilýteorie volných radikálů stárnutí[11] aoxidační stresje považován za primární faktor v normálním procesu stárnutí.Iniciátor volných radikálů AAPHbyl zvyklývyvolat oxidační stresa vytvořit model oxidacestresem vyvolané stárnutí buněkv lidských IMR-90 buňkách [12, 13]. Výhodou této metody je, že se AAPH tepelně rozkládá nagenerovat radikálybez biotransformací nebo enzymů a rychlostradikální generacelze snadno ovládat úpravou koncentrace iniciátoru [12]. Bylo zjištěno, že AAPHbrzdí množení lidíIMR- 90 buněk způsobem závislým na koncentraci a čase. Výsledky ukázaly, že 2d inkubace s AAPH (1 mM) významně zvýšila procento SA-Gal pozitivního poměru, populaci apoptotických buněk, snížila expresi mRNA SIRT1 a vyvolala zvětšenou a zploštělou morfologii. Ty naznačovaly, že oxidační stres způsobený AAPH vedl buňky IMR-90 ke stárnutí. Na základě tohoto modelu buněčného stárnutí, léčba 10 μM resveratrolem účinněji inhibovala senescenci a apoptózu indukovanou AAPH než léčba CR.

Zvířecí model D-gal je mezinárodně uznávaný model stárnutí zvířat a je široce používán v oblastiléky proti stárnutí. D-gal je fyziologická živina, která je u zvířat normálně metabolizována D-galaktokinázou a galaktózo-1-fosfátem. Nadměrný přísun D-gal, který není metabolizován výše uvedenými enzymy, ale hromadí se v buňkách, vede k oxidativnímu stresu a poškození buněk [14]. Dlouhodobé podávání D-gal tedy vyvolává změny, které se podobají přirozenému stárnutí u zvířat, jako je zkrácení délky života, kognitivní dysfunkce, neurodegenerace, oxidační stres, snížené imunitní reakce a tvorba pokročilého glykačního konečného produktu (AGE) [15]. Tato studie naznačila úspěšné zavedení mimetického modelu stárnutí, doloženého pozoruhodným poškozením učení a paměti, produkcí MDA, akumulací lipofuscinu, poklesem T-AOC a SOD a down-regulací aktivity telomerázy v mozku. Mezitím léčba resveratrolem nebo CR chránila krysy vyvolané D-gal před oxidačním stresem zvýšením aktivity antioxidačních enzymů, snížením hladin produktů peroxidace lipidů a udržením rovnováhy oxidačních a antioxidačních systémů. V behaviorálních testech a testech aktivity telomerázy by léčba resveratrolem nebo CR mohla zvrátit kognitivní poruchu vyvolanou D-gal a aktivitu telomerázy. Navíc stárnoucí krysy léčené vysokými dávkami resveratrolu vykazovaly relativně významnější vliv na chování než krysy léčené CR.

Obrázek 11: Imunohistochemická analýza exprese p53 (A, B) a FOXO3a (C, D) v jaterní (A, C) a mozkové (B, D) tkáni stárnoucích potkanů. Zvětšení bylo 20×. NG, negativní kontrolní skupina; MG, modelová kontrolní skupina; RESL, skupina s nízkou dávkou resveratrolu; RESH, skupina s vysokou dávkou resveratrolu; CR, kalorická restrikční skupina

Studie prokázaly, že CR, snížení příjmu výživné stravy o 10–40 procent, by mohlozpomalit stárnutí a prodloužit životnostV této studii byla tedy u krys skupiny CR aplikována jedna běžně používaná úroveň CR (40procentní snížení příjmu potravy). Některá šetření však odhalila, že CR nemá žádný příznivý účinek na dlouhověkost u přirozeně starých primátů [16]. Podobně, ačkoli bylo prokázáno, že léčba resveratrolem vyvolává účinky podobné CRenergetický metabolismusa metabolický profil u obézních lidí [17], nezlepšila metabolické funkce u neobézních žen s normální glukózovou tolerancí [18]. Důvod rozdílů mezi těmito studiemi není jasný, ale může to být tím, že CR a resveratrol pracují na obnovení homeostázy u metabolicky narušených jedinců, a méně pak u zdravých jedinců, což je možnost konzistentní se známými funkcemi SIRT1 ve studiích na zvířatech [19]. Proto byly pro srovnání anti-aging aktivit resveratrolu nebo CR použity modely stárnutí vyvolané D-gal spíše než model přirozeně stárnoucích potkanů.

SIRT1, (NAD plus)-dependentní deacetyláza, si získala velkou pozornost kvůli svým četným rolím v prodloužení délky života, odolnosti vůči stresu a redukci apoptózy [20, 21]. Hromadné studie silně naznačily, že SIRT1 byl klíčovým cílem resveratrolu a CR [22]. Existuje obrovské množství downstream molekul SIRT1, včetně p53, Foxo1, Foxo3, Foxo4 a E2F1, které jsou regulovány SIRT1. Aktivita SIRT1 je zároveň regulována jeho upstream molekulami, například p53, HIC1, E2F1, DBC1, HuR a AROS. Akutní odebrání živin aktivuje transkripční program na promotoru SIRT1, který je řízen transkripčními faktory Foxo3a a p53. Protože p53 potlačuje expresi genu SIRT1, jeho odstranění pomocí Foxo3a aktivuje transkripci SIRT1 [23]. DBC1 a AROS byly nedávno popsány jako přímé negativní a pozitivní regulátory aktivity SIRT1, v tomto pořadí, HuR ukazuje účinek snížení hladiny exprese SIRT1 ve stárnoucích senescentních buňkách [9, 10].

ČRzpomaluje stárnutí a prodlužuje střední a maximální délku životau různých druhů, včetně krys, myší, ryb, much, červů a kvasinek. Nicméně takové přísné dietní programy u volně žijících osob vyvolaly etické a metodologické problémy [24]. V současnosti může být prodloužení délky zdraví důležitější než pouhé prodloužení délky života. Nedávné výzkumy naznačují, že resveratrol je jedním z nejúčinnějších stimulátorů aktivity SIR2 mezi všemi rostlinnými polyfenoly [25] a ovlivňuje dlouhověkost prostřednictvím podobných mechanismů, jaké lze pozorovat u omezení kalorií. Tyto výsledky ukázaly, že CR a resveratrol měly podobné aktivity při obnově hladin exprese mRNA SIRT1, zvýšení proteinových expresí FOXO3a, AROS a HuR a snížení hladin p53 a DBC1. Mezitím řada přesvědčivých důkazů naznačuje příznivé účinky resveratrolu na neurologický, jaterní a kardiovaskulární systém.

MATERIÁLY A METODY

Buněčná kultura, stres a léčba

Lidský diploidní fibroblast kmen IMR-90 byl získán od ATCC. Buňky byly pěstovány v minimálním základním médiu (MEM) (Gibco, UK) doplněném 10 procenty fetálního bovinního séra (FBS) (Gibco) při 37 stupních v 5 procentech CO2. Po dosažení konfluence byly buňky nasazeny do 6-jamkových kultivačních destiček. O den později byly buňky ošetřeny po dobu 48 hodin 1 mM 2,2'-azobis (2-amidinopropan) dihydrochloridem (AAPH) (Sigma, USA) zředěným v MEM plus 10 procent FBS. 48 hodinová inkubace s iniciátorem volných radikálů AAPH vytváří model buněčné stárnutí vyvolané oxidačním stresem [12, 13]. Kontrolní buňky byly inkubovány v samotném kultivačním médiu. Po ošetření AAPH byly IMR-90 promyty studeným fyziologickým roztokem s fosfátovým pufrem (PBS) pH 7,4 a inkubovány s čerstvým kultivačním médiem nebo kultivačním médiem obsahujícím resveratrol (skupina resveratrolu) nebo MEM doplněné 3% FBS (skupina CR) po dobu dalších 48 hodin před sklizní.

Aktivita barvení SA -gal

Byl kontrolován výskyt biomarkerů stárnutí (snížení proliferačního potenciálu a zvýšení SA-gal-barvení) [26] ode dne po léčbě. Poté byly buňky obarveny podle pokynů výrobce SA-gal Stained Kit (CST, USA). Po barvení bylo zkoumáno alespoň 300 buněk v několika polích a byly spočítány SA-gal pozitivní buňky. Tyto experimenty byly opakovány třikrát a výsledky byly prezentovány jako průměrné hodnoty se standardními odchylkami (SD). Aby se zabránilo nespecifickému barvení, pravděpodobně v důsledku konfluence buněk, bylo histochemické barvení SA-gal provedeno se subkonfluentními buňkami.

Analýza rastrovací elektronovou mikroskopií

Buňky byly pěstovány na krycích sklíčkách v 6-jamkových kultivačních destičkách, jak je popsáno výše. Po ošetření resveratrolem a CR byla z destiček odstraněna krycí sklíčka, poté byly buňky fixovány ve 2,5 procentech fosfátem pufrovaného glutaraldehydu a následně fixovány v 1 procentu pufrovaném oxidu osmičelém. Fixované vzorky byly po dehydrataci pomocí stupňované série ethanolu ponořeny do t-butylalkoholu. Vzorky byly lyofilizovány z t-butylalkoholu, poté byly odpařením potaženy zlatem pomocí automatického jemného potahování (JFC-1600, JEOC, Japonsko) a zkoumány pomocí rastrovacího elektronového mikroskopu (JEOL, JSM{{11} }LV, Japonsko).

Apoptotická analýza

Po inkubaci s resveratrolem nebo CR byly všechny buňky sklizeny trypsinem a dvakrát promyty PBS, poté resuspendovány ve 400 ul vazebného pufru pro Annexin V. Poté byly buňky obarveny podle pokynů výrobce soupravy pro detekci apoptózy buněk Annexin V-FITC (BestBio, Čína). K detekci fluorescence byl použit průtokový cytometr FACSCalibur (Becton-Dickinson, San Jose, CA) a pomocí interního softwarového systému FACSCalibur bylo vypočteno procento apoptotických buněk. Pro každou stopu bylo analyzováno přibližně 104 buněk.

Postupy na zvířatech

Samci albínských potkanů ​​Wistar, vážící přibližně 200 ± 10 g, byli získáni z Experimental Animal Center of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology (SCXK 2010-0009). Zvířata byla aklimatizována po dobu 2 týdnů před podáním dávky v experimentálním centru pro zvířata na Univerzitě čínské medicíny Hubei, během této doby měla volný přístup k potravě a vodě ad libitum. Po aklimatizaci bylo vybráno 50 krys a rozděleno do pěti skupin po deseti. Zvířata byla chována podle národních směrnic a protokolů schválených Institutional Animal Ethical Committee (IAEC).

Krysy skupiny I (negativní kontrolní skupina) dostávaly samotné vehikulum (1 ml/kg tělesné hmotnosti 0,9 procenta fyziologického roztoku) po dobu 6 týdnů. Skupina II (modelová kontrolní skupina) krysy dostávaly D-gal (200 mg/kg tělesné hmotnosti, Sigma Chemical, St. Louis, MO) po dobu 6 týdnů. Skupina III (skupina s nízkou dávkou resveratrolu) krysy dostávaly D-gal a resveratrol (50 mg/kg tělesné hmotnosti) rozpuštěné v 5% dimethylsulfoxidu (DMSO) po dobu 6 týdnů. Skupina IV (skupina s vysokou dávkou resveratrolu) potkani dostávali D-gal a resveratrol (100 mg/kg tělesné hmotnosti). Krysy skupiny V (skupina CR) dostávaly D-gal a CR (krmené stravou, která měla o 40 procent nižší obsah kalorií než potkani krmení ad libitum [27]) po dobu 6 týdnů. D-gal byly podávány intraperitoneálně, zatímco resveratrol byl podáván orálně po celou dobu trvání experimentu. Krysy byly usmrceny poslední den léčby, poté byla krev, sérum a orgány okamžitě odebrány pro biologický test nebo uloženy při -80 stupních pro pozdější použití.

Behaviorální testy

Morrisův test ve vodním bludišti byl navržen tak, aby vyhodnotil schopnost krys prostorového učení a paměti po 6 týdnech po poranění [28]. Morrisův test ve vodním bludišti sestával z 4-denního učení a tréninku paměti a testu sondy v den 5. Zvířata byla trénována v kruhovém bazénu (155 cm v průměru) s vizuálními podněty. Úniková plošina (9.0 cm v průměru) byla ponořena 1.0 cm pod hladinou bazénové vody, která byla udržována na 25 ± 2 stupně. Umístění platformy zůstalo ve středu severozápadního kvadrantu během 4-denního tréninkového období. Každý den byly krysy trénovány na jeden dopolední blok a jeden odpolední blok. Krysa volně plavala, dokud nenašla plošinu během 120 sekund. Pokud selhal, byl umístěn na plošinu na 10 sekund. Byla zaznamenána úniková latence (nalezení ponořené únikové plošiny) a rychlost plavání. Test sondy byl proveden odstraněním plošiny a ponecháním každé krysy volně plavat po dobu 120 s uvnitř bazénu. Počet přejezdů nástupiště v trénovaném kvadrantu (kde bylo nástupiště odstraněno) byl zaznamenáván počítačovým video systémem. Verze vodního bludiště na viditelné plošině nebyla provedena poté, co byl pozorován významný rozdíl v rychlosti plavání mezi krysami léčenými D-gal a vehikulem.

Detekce biologických indikátorů spojených s oxidačním stresem

Hladiny MDA, SOD a T-AOC v krvi a tkáních byly stanoveny fotometricky v souladu s protokolem výrobce za použití komerčně dostupných enzymatických testovacích souprav (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing City, PR Čína). Všechny experimenty popsané v této části byly provedeny trojmo, aby se získal průměr a SD.

Hladina lipofuscinu byla stanovena Sohalovou metodou [29]. Stručně řečeno, navážili jsme 200 mg mozkové kůry, přidali 2 ml extraktu chloroform-methanol (2:1), homogenizovali a zfiltrovali, poté promyli zbytek extraktem, spojili filtráty, přidali extrakt do 5 ml a měřila intenzitu fluorescence na fluorescenčním spektrometru. Emisní vlnová délka byla 435 nm a excitační vlnová délka byla 365 nm. Spektrofluorometr byl standardizován tak, aby poskytl výchylku 50 při výše uvedených vlnových délkách pomocí 1 ug/ml roztoku chininbisulfátu v 0,1 M H2S04. Výsledky byly vyjádřeny jako relativní fluorescenční jednotky/ml chloroformu/g hmotnosti vlhké tkáně.

Detekce aktivity TE

Pro extrakci telomerasou byly přibližně 30 mg tkáně dvakrát promyty v ledově chladném PBS a nakonec homogenizovány v přibližně 150 ml PBS. Aktivita TE byla měřena pomocí souprav TE ELISA podle pokynů výrobce (Nanjing Sen Beijia Biological Technology Co., Ltd., Nanjing, Čína). Limity citlivosti testů byly 0,8 IU/l pro TE.

RT-PCR analýza

Hladiny exprese mRNA SIRT1, Foxo3 a p53 v jaterních a mozkových tkáních byly analyzovány pomocí RT PCR analýzy. Celková RNA byla extrahována pomocí Trizolu a jejich množství a čistota byly hodnoceny ultramikrospektrofotometrem (Thermo Fisher Scientific, USA) na základě měření absorbance při 260 a 280 nm. Po kvantifikaci byla cDNA syntetizována pomocí soupravy FastQuant RT (Tiangen Biotech, Beijing, Čína) podle pokynů výrobce. Hladiny exprese mRNA SIRT1, Foxo3, p53 byly měřeny pomocí RT-PCR s použitím TIANGEN SuperReal PreMix Plus (Tiangen Biotech, Peking, Čína) se specifickými primery (tabulka 2). Kvantitativní PCR v reálném čase byla provedena pomocí systému LightCycler 480 stupňového PCR (Roche, Basel, Švýcarsko) s použitím 20 μl jako celkového objemu každé reakce. PCR amplifikace byla zahájena 15 minutovou denaturací při 95 stupních a poté následovalo 40 cyklů 95 stupňů po dobu 10 s, 59–63 stupňů (teplota nasedání) po dobu 20 s a 72 stupňů po dobu 30 s a konečná inkubace při 72 stupně po dobu 5 min. Získané prahové číslo cyklu každého genu (hodnota Ct) bylo normalizováno na násobek relativních změn podle rovnice metody 2-∆∆CT [30].

Tabulka 2: Seznam primerů

Western blot analýza

Hladiny proteinové exprese p53, FOXO3a, HuR, RPS19BP1 a DBC1 v mozkových tkáních byly analyzovány pomocí analýzy westernovým přenosem. Celkový protein mozkových tkání byl extrahován pomocí RIPA Lysis Buffer (Beyotime, Čína) podle pokynů výrobce. Koncentrace proteinů byly stanoveny pomocí soupravy BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Čína). 5 mg proteinů bylo separováno pomocí 12% SDS-polyakrylamidových gelů a přeneseno na PVDF membránu (0,45 μm, Millipore, USA). Bloty byly blokovány 5% odtučněným mlékem v TBS, poté inkubovány přes noc při 4 stupních s vhodným ředěním primárních protilátek: anti-p53 (SC- 6243, Santa Cruz Biotechnology), anti-FOXO3a (#12829, Cell Signaling Technology), anti-HuR (#12582, Cell Signaling Technology), anti-AROS (Ab201091, abcam), anti-DBC1 (#5857, Cell Signaling Technology), anti{25}} akce (AC004, ABClonal Technology) . Po promytí membrán, aby se odstranil přebytek primárních protilátek, byly membrány inkubovány po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti s vhodnými sekundárními protilátkami v ředění 1:2000-1:5000 (AC004 nebo AS003, ABClonal Technology). Membrány byly 3krát promyty a poté vizualizovány pomocí Pierce ECL Western blotting Substrate (Thermo Scientific). -akce byla použita jako vnitřní kontrola.

Imunohistochemie

Vzorky tkáně byly fixovány v 10% neutrálně pufrovaném formalínu do 1 hodiny po chirurgickém odstranění a zality do parafínu za použití standardních postupů. Poté byly fixované vzorky zalité v parafínu nařezány na řezy o tloušťce 5-μm, které byly zbaveny parafinu v xylenu, rehydratovány v ethanolu a podrobeny mikrovlnné úpravě pro získání antigenu. Vhodně naředěná primární protilátka, anti-p53 (SC-6243, Santa Cruz Biotechnology) a anti-FOXO3a (#12829, Cell Signaling Technology), byly inkubovány po dobu 60 minut při teplotě místnosti ve vlhké komoře. Sklíčka byla poté opláchnuta v PBS a následně inkubována se sekundární protilátkou proti anti-králičí protilátce a vizualizací HRP (koncentrace 1:300, #074-1506, KPL). Poté byla sklíčka promyta a řezy byly vyvolány v roztoku enzym-substrát diaminobenzidinu (DAB, Sigma). Obrazy imunohistochemicky obarvených řezů byly zachyceny digitálním mikroskopem Olympus (IX-73P1F, Olympus, Japonsko).

Statistická analýza

Výsledky byly vyjádřeny jako průměr ± SD pro alespoň tři nezávislé experimenty a byly analyzovány pomocí softwaru SPSS 18.0. Skupinové rozdíly v únikové latenci a rychlosti plavání v úloze výcviku ve vodním bludišti Morris byly analyzovány pomocí dvoucestné analýzy rozptylu (ANOVA) s opakovanými měřeními, faktory byly léčba a tréninkový den. Ostatní data byla analyzována pomocí jednocestné ANOVA s následným post-hoc Tukey testem. Hodnota P menší než 0,05 byla považována za významnou.

ZÁVĚRY

Resveratrol a CR vykazovaly podobné aktivity proti stárnutí jak in vitro, tak in vivo, o čemž svědčí jejich schopnost inhibovat AAPH-indukovanou senescenci a apoptózu a obnovit kognitivní poruchu související s věkem způsobenou podáváním D-gal. Jejich mechanismy proti stárnutí zahrnovaly up-regulaci aktivity TE, snížení oxidačního poškození a regulaci dráhy SIRT1. Celkově 10 μM resveratrol in vitro a vysoká dávka resveratrolu in vivo vykazovaly relativně silnější aktivity proti stárnutí a stimulaci hladin SIRT1. Tyto výsledky naznačují potenciál resveratrolu jako mimetika CR.

Zkratky

AAPH, 2,2'-azobis (2-amidinopropan) dihydrochlorid; AMPK, adenosinmonofosfátem aktivovaná proteinkináza; ANOVA, analýza rozptylu; AROS, aktivní regulátor SIRT1; CR, kalorické omezení; DBC1, odstraněno u rakoviny prsu 1; D-gal, D-galaktóza; FBS, fetální hovězí sérum; Foxo3a, skříňka vidlice 3a; HuR, Hu antigen R; MEM, minimální základní médium; PBS, fyziologický roztok s fosfátovým pufrem; PGC-1, koaktivátor receptoru G aktivovaný peroxisomovým proliferátorem-1; RES, resveratrol; SA-gal, galaktosidáza spojená se stárnutím; SD, standardní odchylky; SIRT1, regulátor tlumení informací; TE, telomeráza.

Autorské příspěvky

Koncepce a design výzkumu: Gang Chen; získávání, analýza a interpretace dat: Juan Li, Xia Chun Zhang, Yi-Mei Liu; získání financování a kritické revize rukopisu pro intelektuální obsah: Gang Chen, Ke-Li Chen; psaní rukopisu: Juan Li. Všichni autoři si přečetli a schválili zveřejnění tohoto rukopisu. PODĚKOVÁNÍ A FINANCOVÁNÍ

Tato práce byla financována China Postdoctoral Science Foundation (2016M601237), projekt Natural Science Foundation (81373704, 30873292).

STŘET ZÁJMŮ

Žádný střet zájmů všech zúčastněných autorů.

REFERENCE

1. Ramis MR, Esteban S, Miralles A, Tan DX, Reiter RJ. Omezení kalorií, resveratrol a melatonin: Role SIRT1 a důsledky pro stárnutí a související nemoci. Mech Aging Dev. 2015; 146–148:28–41.

2. Colman RJ, Beasley TM, Kemnitz JW, Johnson SC, Weindruch R, Anderson RM. Kalorické omezení snižuje úmrtnost související s věkem a ze všech příčin u opic rhesus. Nat Commun. 2014; 5:3557.

3. Sohal RS, Weindruch R. Oxidační stres, kalorická restrikce a stárnutí. Věda. 1996; 273:59–63.

4. Testa G, Biasi F, Poli G, Chiarpotto E. Mimetika s omezením kalorií a dietou: strategie pro zlepšení zdravého stárnutí a dlouhověkosti. Curr Pharm Des. 2014; 20:2950–77.

5. Lane MA, Roth GS, Ingram DK. Kalorická restrikční mimetika: nový přístup pro biogerontologii. Metody Mol Biol. 2007; 371:143–9.

6. Baur JA, Pearson KJ, Price NL, Jamieson HA, Lerin C, Kalra A, Prabhu VV, Allard JS, Lopez-Lluch G, Lewis K, Pistell PJ, Poosala S, Becker KG, et al. Resveratrol zlepšuje zdraví a přežití myší na vysoce kalorické dietě. Příroda. 2006; 444:337–42.

7. Lagouge M, Argmann C, Gerhart-Hines Z, Meziane H, Lerin C, Daussin F, Messadeq N, Milne J, Lambert P, Elliott P, Geny B, Laakso M, Puigserver P a kol. Resveratrol zlepšuje mitochondriální funkce a chrání před metabolickým onemocněním aktivací SIRT1 a PGC-1alfa. Buňka. 2006; 127:1109–22.

8. Howitz KT, Bitterman KJ, Cohen HY, Lamming DW, Lavu S, Wood JG, Zipkin RE, Chung P, Kisielewski A, Zhang LL, Scherer B, Sinclair DA. Malé molekulové aktivátory sirtuinů prodlužují životnost Saccharomyces cerevisiae. Příroda. 2003; 425:191–6.

9. Kwon HS, Ott M. Vzestupy a pády SIRT1. Trends Biochem Sci. 2008; 33:517–25.

10. Brooks CL, Gu W. Jak SIRT1 ovlivňuje metabolismus, stárnutí a rakovinu? Nat Rev Cancer. 2009; 9:123–8.

11. Harman D. Teorie volných radikálů stárnutí. Mutat Re. 1992; 275:257–66.

12. Mayo JC, Tan DX, Sainz RM, Lopez-Burillo S, Reiter RJ. Oxidační poškození katalázy vyvolané peroxylovými radikály: funkční ochrana melatoninem a dalšími antioxidanty. Free Radic Res. 2003; 37:543–53.

13. Hubacková S, Krejčíková K, Bartek J, Hodný Z. IL1- a signalizace TGF-Nox4, oxidativní stres a reakce na poškození DNA jsou sdílené rysy replikativní, onkogenem indukované a léky indukované parakrinní 'Bystander senescence '. Stárnutí (Albany NY). 2012; 4:932–51. https://doi.org/10.18632/aging.100520.

14. Cui X, Zuo P, Zhang Q, Li X, Hu Y, Long J, Packer L, Liu J. Chronická systémová expozice D-galaktóze vyvolává u myší ztrátu paměti, neurodegeneraci a oxidační poškození: Ochranné účinky R{{ kyselina lipoová. J Neurosci Res. 2006; 84:647–54.

Požádat o víc:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950