Vakcíny vyvolávají vysoce zkříženě reaktivní buněčnou imunitu vůči SARS-CoV-2 Omikronové variantě
Mar 24, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Jinyan Liu1*, Abishek Chandrashekar1*, Daniel Sellers1*, Julia Barrett1, Michelle Lifton1, Katherine McMahan1, Michaela Sciacca1,
Haley VanWyk1, Cindy Wu1, Jingyou Yu1, Ai-ris Y. Collier1, Dan H. Barouch1,2*
1 Beth Israel Deaconess Medical Center, Boston, MA, USA;
2 Ragon Institute of MGH, MIT a Harvard, Cambridge, MA, USA
Bylo prokázáno, že vysoce mutovaná varianta SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) se vyhýbá podstatné části neutralizačních protilátek vyvolaných současnými vakcínami, které kódují WA1/2020 Spike imunogen1, což vede ke zvýšenému počtu průlomových infekcí a snížená účinnost vakcíny. Buněčné imunitní odpovědi, zejména odpovědi CD8 plus T buněk, jsou pravděpodobně rozhodující pro ochranu před závažným onemocněním SARS-CoV-22-6. Zde ukazujeme, že buněčná imunita vyvolaná současnými vakcínami SARS-CoV-2 je vysoce zkříženě reaktivní s variantou SARS-CoV-2 Omicron. Jedinci, kteří dostali vakcíny Ad26.COV2.S nebo BNT162b2, vykazovali trvalé odpovědi CD8 plus a CD4 plus T buněk, které vykazovaly rozsáhlou zkříženou reaktivitu proti variantám Delta i Omicron, včetně subpopulací centrálních a efektorových paměťových buněk. Medián odpovědí CD8 plus T buněk specifických pro Omicron byl 82-84 procent WA1/2020- specifických odpovědí CD8 plus T buněk. Tyto údaje naznačují, že současné vakcíny mohou poskytnout značnou ochranu proti závažnému onemocnění s variantou SARS-CoV-2 Omicron navzdory podstatnému snížení reakcí neutralizačních protilátek.
cistanche zdravotní přínosy: zlepšení imunity
Nedávné studie ukázaly, že vakcínou vyvolané neutralizační protilátky (NAbs) jsou podstatně redukovány na vysoce mutovanou variantu SARS-CoV-2 Omicron, což má za následek rychlé globální šíření, včetně průlomových infekcí u plně očkovaných jedinců1. Abychom vyhodnotili zkříženou reaktivitu buněčných imunitních odpovědí vyvolaných vakcínou proti variantě SARS-CoV-2 Omicron, hodnotili jsme odpovědi CD8 plus a CD4 plus T buněk u 51 jedinců, kteří byli očkováni Ad26 na bázi adenovirového vektoru. Vakcína COV2.S7 (Johnson & Johnson; N=20) nebo vakcína BNT162b2 založená na mRNA8 (Pfizer; N=31).
Po vakcinaci BNT162b2 jsme pozorovali vysoké WA1/2020-specifické NAb odpovědi v měsíci 1, následované prudkým poklesem v měsíci 8, jak se očekávalo9,10 (obr. 1a). Po vakcinaci Ad26.COV2.S byly podstatně nižší počáteční WA1/2020-specifické NAb odpovědi v měsíci 1, ale tyto odpovědi byly trvalejší a přetrvávaly v měsících 89, 11 (obr. 1a). U obou vakcín však byly pozorovány minimální zkříženě reaktivní Omicron-specifické NAbs (obr. 1a), což je v souladu s nedávnými údaji při absenci dodatečné posilovací dávky1. Odezvy vazebných protilátek specifických pro receptor vázající doménu (RBD) byly hodnoceny metodou ELISA a vykazovaly podobné trendy s minimálními zkříženě reaktivními vazebnými protilátkami specifickými pro Omicron (obr. 1b). Na rozdíl od protilátkových odpovědí byly Spike specifické buněčné imunitní odpovědi hodnoceny testy ELISPOT spojeného peptidu IFN-g ukázaly podstatnou zkříženou reaktivitu s Omicronem (rozšířená data, obr. 1). Dále jsme hodnotili Spike-specifické CD8 plus a CD4 plus T buněčné reakce pomocí intracelulárních cytokinových barvicích testů. Ad26.COV2.S indukoval střední Spike-specifické odpovědi IFN-g CD8 plus T buněk 0.061 procent, 0.062 procent a {0 72}}.051 procent proti WA1/2020, Delta, respektive Omicron, v měsíci 8 po očkování (obr. 2a). BNT162b2 indukoval střední Spike-specifické odpovědi IFN-g CD8 plus T buněk 0,028 procenta a 0,023 procenta proti WA1/2020 a Omicron, v daném pořadí, v měsíci 8 po očkování (obr. 2a). Tato data naznačují, že odpovědi CD8 plus T buněk specifické pro Omicron byly 82-84 procent zkříženě reaktivní s WA1/2020-specifickými odpověďmi CD8 plus T buněk. Spike-specifické odpovědi IFN-g CD4 plus T buněk vyvolané Ad26.COV2.S byly mediánem 0,026 procenta, 0,030 procenta a 0,029 procenta proti WA1/2020, Delta a Omicron, v daném pořadí, a BNT162b2 byly mediánem 0,033 procenta a 0,027 procenta proti WA1/2020 a Omicron, v daném pořadí, což ukazuje na podstatnou zkříženou reaktivitu také odpovědí CD4 plus T buněk (obr. 2b). Podstatná omikronová zkřížená reaktivita byla také pozorována u Spike-specifických TNF-a a IL-2 secernujících CD8 plus a CD4 plus T buněčné odpovědi (rozšířená data, obr. 2).
Lineární regresní analýza ukázala, že Omicron-specifické CD8 plus T lymfocytární reakce korelovaly s WA1/2020-specifickými CD8 plus T lymfocytárními reakcemi pro vakcínu Ad26.COV2.S pro oba časové body (R=0.78, P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">
Naše data ukazují, že Ad26.COV2.S a BNT162b2 vyvolávají široce zkříženě reaktivní buněčnou imunitu proti variantám SARS-CoV-2 včetně Omicron. Konzistence těchto pozorování napříč dvěma různými technologiemi vakcinační platformy (virový vektor a mRNA) naznačuje zobecnitelnost těchto zjištění. Rozsáhlá zkřížená reaktivita Omicron-specifických CD8 plus a CD4 plus T-buněčných odpovědí ostře kontrastuje s výrazně sníženými Omicron-specifickými neutralizačními a vazebnými protilátkovými odpověďmi. Tato data jsou v souladu s předchozími studiemi ukazujícími větší zkříženou reaktivitu buněčných imunitních odpovědí vyvolaných vakcínou ve srovnání s humorálními imunitními odpověďmi proti SARS-CoV-2 Alfa, Beta a Gamma variantám12. 82-84 procento zkřížené reaktivity odpovědí CD8 plus T buněk na Omicron je v souladu s teoretickými předpověďmi založenými na mutacích Omicron6.
Preklinické studie prokázaly, že CD8 plus T buňky přispívají k ochraně proti SARS-CoV-2 u makaků rhesus, zejména pokud jsou protilátkové odpovědi suboptimální5. Po infekci a očkování byly také hlášeny trvalé odpovědi CD8 plus a CD4 plus T buněk2- 4,6,9,11,13,14. Vzhledem k úloze CD8 plus T lymfocytů při odstraňování virových infekcí je pravděpodobné, že buněčná imunita podstatně přispívá k ochraně vakcínou proti závažnému onemocnění SARS-CoV-2. To může být zvláště důležité pro Omicron, který se vyhýbá podstatné části protilátkových odpovědí. Naše data naznačují, že současné vakcíny mohou poskytovat podstatnou ochranu proti závažným onemocněním způsobeným SARS-CoV-2 Omicron variantou navzdory sníženým reakcím neutralizujících protilátek a zvýšenému počtu průlomových infekcí.
cistanche prášek
Metody
Studijní populace
Vzorky od jedinců, kteří dostali vakcínu BNT162b2, byly získány z bioúložiště vzorků Beth Israel Deaconess Medical Center (BIDMC). Vzorky od jedinců, kteří dostali Ad26.COV2.S, byly získány ze studie COV1001 (NCT04436276). Obě studie byly schváleny institucionální revizní komisí BIDMC. Všichni účastníci poskytli informovaný souhlas. Z této studie byli vyloučeni jedinci, kteří měli v anamnéze infekce SARS-CoV- 2, dostávali jiné vakcíny proti COVID-19 nebo dostávali imunosupresivní léky. Test neutralizačních protilátek proti pseudoviru
Pseudoviry SARS-CoV-2 exprimující luciferázový reportérový gen byly použity k měření protilátek neutralizujících pseudovirus. Stručně řečeno, obalové konstrukty psPAX2 (AIDS Resource and Reagent Program), luciferázový reportérový plazmid pLentiCMV Puro-Luc (Addgene) a spike protein exprimující pcDNA3.1-SARS-CoV-2 SΔCT byly společné transfekované do buněk HEK293T (ATCC CRL_3216) lipofektaminem 2000 (ThermoFisher Scientific). Pseudoviry variant SARS-CoV-2 byly vytvořeny pomocí kmene WA1/2020 (Wuhan/WIV04/2019, přístupové ID GISAID: EPI_ISL_402124), varianta B.1.1.7 (Alpha, ID přístupu GISAID: EPI_ISL_601443), varianta B.1.351 (Beta, ID přístupu GISAID: EPI_ISL_712096), B.1.617. 2 (Delta, přístupové ID GISAID: EPI_ISL_2020950) nebo B.1.1.529 (Omicron, ID GISAID: EPI_ISL_7358094.2). Supernatanty obsahující pseudotypové viry byly odebrány 48 hodin po transfekci; pseudotypové viry byly purifikovány filtrací s 0,{43}}μm filtrem. Pro stanovení neutralizační aktivity lidského séra byly buňky HEK293T-hACE2 nasazeny do 96-jamkových destiček pro tkáňové kultury v hustotě 1,75 x 104 buněk na jamku přes noc. Byla připravena trojnásobná sériová ředění tepelně inaktivovaných vzorků séra a smíchána s 50 ul pseudoviru. Směs byla inkubována při 37 stupních po dobu 1 hodiny před přidáním k buňkám HEK293T-hACE2. Po 48 hodinách byly buňky lyžovány v Steady-Glo Luciferase Assay (Promega) podle pokynů výrobce. Neutralizační titry SARS-CoV-2 byly definovány jako ředění vzorku, při kterém bylo pozorováno 50procentní snížení (NT50) v relativních světelných jednotkách vzhledem k průměru kontrolních jamek viru.
Enzymově vázaný imunosorbentní test (ELISA)
Vazebné protilátky specifické pro SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain (RBD) v séru byly hodnoceny metodou ELISA. 96-jamkové destičky byly potaženy 2 ug/ml SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), B.1.351 (Beta), nebo B.1.1.529 (Omicron) RBD protein v 1× Dulbeccově fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku (DPBS) a inkubován při 4 stupních přes noc. Po inkubaci byly destičky jednou promyty promývacím pufrem (0,05 procenta Tween 20 v 1 x DPBS) a blokovány 350 ul kaseinového blokovacího roztoku na jamku po dobu 2 až 3 hodin při teplotě místnosti. Po inkubaci byl blokový roztok vyhozen a destičky byly vysáty do sucha. Sériová ředění teplem inaktivovaného séra naředěného v kaseinovém bloku byla přidána do jamek a destičky byly inkubovány po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě, před dalšími 3 promytími a 1-hodinovou inkubací s 1:4000 ředěním anti- lidská IgG křenová peroxidáza (HRP) (Invitrogen, ThermoFisher Scientific) při pokojové teplotě ve tmě. Destičky byly 3krát promyty a do každé jamky bylo přidáno 100 ul roztoku SeraCare KPL TMB SureBlue Start; vývoj destičky byl zastaven přidáním 100 μl roztoku SeraCare KPL TMB Stop na jamku. Absorbance při 450 nm, s referencí při 650 nm, byla zaznamenána čtečkou mikrodestiček VersaMax (Molecular Devices). Pro každý vzorek byl vypočítán koncový titr ELISA pomocí 4-proložené logistické křivky parametrů pro výpočet recipročního ředění séra, které poskytuje korigovanou hodnotu absorbance (450 nm-650} nm) 0,2. Byly hlášeny interpolované koncové titry.
Extrakt z cistanche deserticola: zlepšuje imunitu
Enzyme-linked immuno-spot (ELISPOT) test.
Destičky ELISPOT byly potaženy myší antihumánní IFN-monoklonální protilátkou od MabTech v množství 1 ug/jamku a inkubovány přes noc při 4 stupních. Destičky byly promyty DPBS a blokovány médiem R1{13}} (RPMI s 10% tepelně inaktivovaným FBS s 1% 100x penicilin-streptomycin, 1M HEPES, 100mM pyruvát sodný, 200mM L-glutamin a 55mM glutaminu 2-Merkaptoethanol) po dobu 2-4 h při 37 stupních. Byly připraveny spojené peptidy S SARS-CoV{20}} ze SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) nebo B.1.1.529 (Omicron) (21st Century Biochemicals) na destičku v koncentraci 2 ug/jamku a na destičku bylo přidáno 100,000 buněk/jamku. Peptidy a buňky byly inkubovány po dobu 15-20 h při 37 stupních. Všechny kroky po této inkubaci byly provedeny při teplotě místnosti. Destičky byly promyty promývacím pufrem ELISPOT a inkubovány po dobu 2-4 h s biotinylovanou myší anti-lidskou IFN-monoklonální protilátkou od MabTech (1 ug/ml). Destičky byly promyty podruhé a inkubovány po dobu 2-3 h s konjugovaným kozím anti-biotinem AP od Rockland, Inc. (1,33 ug/ml). Po závěrečném promytí následovalo přidání roztoku substrátu p-toluidinové soli Nitor-blue Tetrazolium Chloride/5-Brom-4-chloro 3'indolylfosfátové soli (NBT/BCIP chromagen) po dobu 7 minut. Chromagen byl odstraněn a destičky byly promyty vodou a sušeny na tmavém místě po dobu 24 hodin. Destičky byly skenovány a počítány na Cellular Technologies Limited Immunospot Analyzer.
Test intracelulárního barvení cytokinů (ICS).
Odpovědi CD4 plus a CD8 plus T lymfocytů byly kvantifikovány pomocí testů intracelulárního barvení cytokinů stimulovaných sdruženým peptidem (ICS). Peptidové pooly obsahovaly 15 aminokyselinových peptidů překrývajících se 11 aminokyselinami zahrnující SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) nebo B.1.1 .529 (Omicron) Spike proteiny (21st Century Biochemicals). 106 jamek mononukleárních buněk periferní krve bylo resuspendováno v 100 ul média R10 doplněného CD49d monoklonální protilátkou (1 ug/ml) a CD28 monoklonální protilátkou (1 ug/ml). Každý vzorek byl hodnocen pomocí falešných (100 ul R10 plus 0,5 procenta DMSO; kontrola pozadí), peptidů (2 ug/ml) a/nebo 10 pg/ml forbolmyristát acetátu (PMA) a 1 ug/ml ionomycinu (Sigma- Aldrich) (100 ul; pozitivní kontrola) a inkubovány při 37 stupních po dobu 1 hodiny. Po inkubaci bylo do každé jamky přidáno 0,25 ul GolgiStop a 0,25 ul GolgiPlug v 50 ul R10 a inkubováno při 37 stupních po dobu 8 hodin a poté udržováno při 4 stupních přes noc. Následující den byly buňky dvakrát promyty DPBS, barveny aqua živým/mrtvým barvivem po dobu 10 minut a poté obarveny předem stanovenými titry monoklonálních protilátek proti CD279 (klon EH12.1, BB700), CD4 (klon L200, BV711), CD27 (klon M-T271, BUV563), CD8 (klon SK1, BUV805), CD45RA (klon 5H9, APC H7) po dobu 30 min. Buňky byly poté dvakrát promyty 2% pufrem FBS/DPBS a inkubovány po dobu 15 minut s 200 ul roztoku BD CytoFix/CytoPerm Fixation/Permeabilization. Buňky byly dvakrát promyty 1X Perm Wash pufrem (BD Perm/WashTM Buffer 10X v soupravě CytoFix/CytoPerm Fixation/Permeabilization kit zředěné vodou MilliQ a prošly 0,22 um filtrem) a obarveny intracelulárně monoklonálními protilátkami proti IFN- (klon B27; BUV395) a CD3 (klon SP34.2, Alexa 700), po dobu 30 minut. Buňky byly dvakrát promyty pufrem IX Perm Wash a fixovány 250 ul čerstvě připraveného 1,5% formaldehydu. Fixované buňky byly přeneseny do 96-jamkové destičky s kulatým dnem a analyzovány systémem BD FACSymphony™. Data byla analyzována pomocí FlowJo v9.9.
cistanche doplněk:zlepšit imunitu
Reference
1. Cele S, Jackson L, Khan K, a kol. SARS-CoV-2 Omicron má rozsáhlé, ale neúplné úniky Pfizer BNT162b2 vyvolané neutralizace a vyžaduje ACE2 k infekci. medRxiv 2021.
2. Dan JM, Mateus J, Kato Y, et al. Imunologická paměť na SARS-CoV-2 hodnocená po dobu až 8 měsíců po infekci. Věda 2021;371.
3. Sette A, Crotty S. Adaptivní imunita vůči SARS-CoV-2 a COVID-19. Buňka 2021;184:861-80.
4. Goel RR, Painter MM, Apostolidis SA, et al. mRNA vakcíny indukují trvalou imunitní paměť vůči SARS-CoV-2 a variantám, které vyvolávají obavy. Science 2021;374:abm0829.
5. McMahan K, Yu J, Mercado NB, a kol. Koreláty ochrany proti SARS-CoV-2 u makaků rhesus. Příroda 2021;590:630-4.
6. Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI a kol. Cíle odpovědí T buněk na SARS-CoV-2 koronavirus u lidí s onemocněním COVID-19 a neexponovaných jedinců. Buňka 2020;181:1489-501 e15.
7. Sadoff J, Gray G, Vandebosch A, et al. Bezpečnost a účinnost jednodávkové vakcíny Ad26.COV2.S proti Covid-19. N Engl J Med 2021;384:2187-201.
8. Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. Bezpečnost a účinnost vakcíny BNT162b2 mRNA Covid-19. N Engl J Med 2020.
9. Collier AY, Yu J, McMahan K, a kol. Diferenciální kinetika imunitních reakcí vyvolaných vakcínami Covid-19. N Engl J Med 2021;385:2010-2.
10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE, a kol. Neutralizace SARS-CoV-2 vakcínou BNT162b2 dávka 3. N Engl J Med 2021.
11. Barouch DH, Stephenson KE, Sadoff J, et al. Odolné humorální a buněčné imunitní odpovědi 8 měsíců po očkování Ad26.COV2.S. N Engl J Med 2021;385:951-3.
12. Alter G, Yu J, Liu J, et al. Imunogenicita vakcíny Ad26.COV2.S proti variantám SARS-CoV-2 u lidí. Příroda 2021;596:268-72.
13. Poon MML, Rybkina K, Kato Y, et al. Infekce SARS-CoV-2 u lidí vytváří tkáňově lokalizovanou imunologickou paměť. Science immunology 2021;6:eabl9105.
14. Vidal SJ, Collier AY, Yu J, et al. Koreláty neutralizace proti SARS-CoV-2 variantám znepokojení raným pandemickým sérem. J Virol 2021;95:e0040421.
výhody doplňku cistanche:zlepšit imunitu