Účinek snižování kyseliny močové a mechanismus akteosidu a echinakosidu extrahovaného z Cistanche Tubulosa
Mar 03, 2025
Abstraktní:Cílem prozkoumat účinky a mechanismy snižování kyseliny močové (AS) a echinakosidu (ECH) extrahovaných zCistanche Tubulosa.
MetodyHyperurikémie (HUA) potkan byl vytvořen pomocí oxonátu draselného (1,5 g · kg {{2} · d -1) kombinovaný s adeninem (100 mg · kg -1 -1). The HUA model rats were randomly divided into a model control group, an allopurinol group (30 mg·kg-1·d-1 ), AS low and high (50, 100 mg·kg-1·d-1 ) dose groups, and ECH low and high (50, 100 mg · kg -1 · d -1) skupiny dávky. Normální kontrolní skupina byla dříve stanovena. Po čtyřech týdnech podávání byl analyzátor biochemie krve použit k detekci močoviny SUA, Crea, adenosin deaminázy (ADA) a kyselinu močové (UUA) v moči. Enzym spojený imunosorbentový test byl použit k detekci hladin xanthinové oxidázy (XOD) v séru. Byla shromážděna tkáň ledvin a byl zvážen a vypočten koeficient ledvin. K pozorování ledvinových patologických změn bylo použito barvení hematoxylinu (HE). Imunohistochemie (IHC) a PCR v reálném čase byly použity k detekci hladin exprese proteinu a mRNA exprese urátu 1 (Urat1), transportéru glukózy 9 (GLUT9), organický aniontový transportér 1 (OAT1) a organický anion transportér 3 (OAT3) v renální tkáni. Výsledky AS a ECH by mohly zlepšit funkci ledvin u potkanů HUA modelu, snížit hladiny kyseliny močové v krvi, podporovat vylučování kyseliny močové, downregulovat hladiny séra ADA a XOD a upregulovat protein a mRNA expresi URAT1 a GLUT9 v renální tkáni, zatímco upregulují protein a mRNA exprese OAT1 a OAT3.
Závěry Fenyletanoidní glykosidy AS a ECH z CiStanche tubulosa mohou vyvíjet účinky snižování kyseliny močové zlepšením funkce ledvin u potkanů HUA modelu, snižováním hladin ADA a XOD a regulací exprese URAT1, GLUT9, OAT1 a OAT3.
Klíčová slova: Cistanche Tubulosa; Acteoside;; echinacoside; hyperurikémie; snižování kyseliny močové; mechanismus
Extrakt z CiStanche tubulosa s 16% akteosidem
Hyperurikémie (HUA) je metabolické onemocnění způsobené narušeným metabolismem purinu v lidském těle, což vede ke zvýšené hladině kyseliny močové v krvi [1]. Obvykle je diagnostikována, když hladiny kyseliny močové krve přesahují 7. 0 mg · dl⁻⁻ (416. 0 μmol·l⁻) u mužů a 6. 0 mg · Dl⁻⁻ (357. Vývoj hyperurikémie souvisí především s faktory, jako je dieta s vysokým obsahem činu, chronická konzumace alkoholu, užívání léků a hypotyreóza. Zvyšuje nejen riziko kardiovaskulárních onemocnění, cukrovky a hypertenze [3-4], ale také významně ovlivňuje zdraví pacientů.
V současné době zahrnuje klinická léčba hyperurikémie hlavně léčiva, která inhibují produkci kyseliny močové a podporují vylučování kyseliny močové. Tato léčba však mají určitá omezení pro pacienty se zhoršenou funkcí jater nebo ledvin [5-6]. Zkoumání účinných léků s nízkými vedlejšími účinky je proto velký význam pro prevenci a léčbu hyperurikémie.
CiStanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, běžně se používá v tradiční čínské medicíně jako bylina s ledvinou, používá se k léčbě stavů, jako je impotence, neplodnost, nedostatek podstaty a krve, slabost v dolní části zad a kolena, svalová slabost a zácpa v důsledku sucha střeva [7]. Studie to ukázalyCistanche TubulosaMá neuroprotektivní [8], protizánětlivé [9], regulaci metabolismu kostí [10] a účinky zvyšující účinnost u chemoterapie u pacientů s rakovinou [11]. Mezi jeho různé aktivní složky jsou fenyletanoidní glykosidy nejhojnější.
Acteoside (AS) a Echinacosid (ECH), dva fenylethanoidní glykosidy s vysokým obsahem vCistanche Tubulosa, vykazuje silnou biologickou aktivitu a má významný potenciál pro vývoj a aplikaci. V důsledku toho naše výzkumná skupina vybrala AS a ECH pro další studium. Prostřednictvím předpovědí síťových farmakologie a pre-experimentů u myší jsme zjistili, že fenyletanoidní extrakty z glykosidu zCistanche Tubulosamůže mít určitý účinek snižující se kyselinou močovou. Cesty a mechanismy těchto účinků však zůstávají nejasné.
Použitím mechanismů produkce kyseliny močové a jejích primárních vylučovacích cest jako výzkumu jsme zkoumali účinky extraktů fenyletanoidních glykosidů snižujících kyselinu snižující kyselinu močovou. Cílem této studie je objasnit cesty a mechanismy, kterými AS a ECH vykazují své účinky snižující kyselinu močovou.
1 materiály
1.1 Experimentální zvířata
Sedmdesát samců potkanů Sprague-Dawley (SD), vážící 150–180 g, bylo zakoupeno od Experimentálního centra zvířat na Xinjiang Medical University. Číslo licence na zvířata: SCXK (xin) 2023-0001. Tento experiment byl schválen Výborem pro etiku zvířat v autonomním regionu xin-ťiang Uygur Medicine Research Institute s číslem schválení etiky zvířat: Iacuc- (Zhun) -2024-009.
1.2 Drogy a činidla
Extrakty z fenylethanoidních glykosidů (AS a ECH)zCistanche Tubulosa (purity >98%, ověřeno vysoce výkonnou kapalinovou chromatografií) bylo extrahováno, purifikováno a připraveno klíčovou laboratoř Uygur Formulation Science, autonomní region Uygur Medicine Research Institute. Čísla dávek: 20220617 (AS) a 20220526 (ECH).
Allopurinol tablety, Batch Number: 62208726, vyrobená společností Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Oxonát draselnýaadenine, dávková čísla: I2130050 a C2202255, zakoupené od Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Crea (kreatinin), UA (kyselina močová), močovina a ADA (adenosin deamináza) testovací soupravy, Batch Numbers: 141123010, 141223004, 141323008 a 043624005, zakoupené od Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
Kit aktivity XOD (xanthine oxidáza), Batch Number: Y10001219, zakoupeno od Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Protilátky (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), dávková čísla: 3i5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2i44618, zakoupené od afinity Biosciences.
HRP označená kozí anti-králičí IgG, Batch Number: 245440113, zakoupeno od ZSGB-Bio.
Roztok barvení hematoxylinu, Batch Number: 24135741H, zakoupeno od Pekingu Lanjieke Technology Co., Ltd.
DAB chromogenní sada činidlo, Batch Number: 240010512, zakoupeno od ZSGB-Bio.
DEPC (diethyl pyrokarbonát), katalogové číslo: D 60029-500 Ml, zakoupené od Amresco (USA).
M5 Hiclear DL2000 DNA Marker, Katalogové číslo: MF025, zakoupeno od Pekingské genomiky Biotechnology Co., Ltd.
Reagent Trizol ™, Katalogové číslo: 15596026, zakoupeno od Thermo Fisher Scientific (USA).
5x all-in-one RT MastermixaEvagreen Express 2 × QPCR Mastermix-Low Rox, katalogová čísla: G492 a G891, oba zakoupené od Applied Biological Materials Inc. (ABM).
2 metody
2.1 Zřízení a seskupení modelu
Sedmdesát samců potkanů Sprague-Dawley (SD) bylo aklimatizováno a rozděleno do dvou skupin: normální kontrolní skupina (1 0 krys) a modelová kontrolní skupina (60 krys). Normální kontrolní skupina byla podána 0,5% CMC-NA prostřednictvím sondu. Kontrolní skupinu modelu byla podávána oxonát draselný (1,5 g · kg⁻⁻) kombinovaný s adeninem (100 mg · kg⁻⁻) v dávce 10 ml · kg⁻⁻, jednou denně po dobu 14 po sobě jdoucích dnů. Model byl považován za úspěšně stanoven, když se hladiny močoviny, Crea a SUA významně zvýšily, měřeno biochemickým analyzátorem.
Potkáři modelu hyperurikémie byly dále rozděleny do následujících skupin založených na úrovních SUA, močoviny a Crea: Modelová kontrolní skupina, skupina Allopurinol (3 0 mg · kg⁻⁻), nízká dávka jako skupina (50 mg · kg⁻), jako je 100 mg · kg⁻), a vysoká dose ~ kg⁻), a 50 mg⁻), a 50 mg⁻), a 50 mg⁻), a 50 mg⁻), a 50 mg⁻), a 50 mg⁻), a 50 mg⁻), a 50 mg⁻) a vysoká dose⁻) a vysoká dose), a vysoká dose) (50 mg⁻), a vysoká dose) (50 mg⁻), a vysoká dose) (50 mg⁻), a vysoká dodačka (50 mg · kg⁻⁻) (50 mg⁻), a vysoká dodačka (50 mg · kg⁻) jako Skupina ECH (100 mg · kg⁻⁻), s 10 krysy v každé skupině. Pro udržení stabilní hyperurikémie byly všechny skupiny kromě normální kontrolní skupiny podávány oxonát draselný (500 mg · kg⁻⁻) kombinované s adeninem (100 mg · kg⁻) ráno, následované podáváním příslušných léčiv v každé léčebné skupině odpoledne. Normální kontrolní skupina obdržela ranní roztok 0,5% CMC-NA a odpoledne pitné vody v dávce 10 ml · kg⁻⁻, jednou denně po dobu 14 po sobě jdoucích dnů. Poté bylo zastaveno podávání modelovacích látek a příslušné léky byly neustále podávány denně po dobu dalších 14 dní.
2.2 Sběr vzorků
Po konečné dávce se krysy postily přes noc (voda nebyla omezena). Moč z každé skupiny byla shromážděna pro testování kyseliny močové. Tělesná hmotnost byla měřena po půstu a vzorky krve byly odebrány v anestezii. Sérum bylo odděleno centrifugací a uloženo pro budoucí použití. Tkáně ledvin byly shromážděny a zváženy. Jedna ledvina byla fixována ve 4% roztoku paraformaldehydu, zatímco druhá byla pro další analýza zamrzlá v kapalném dusíku.
2.3 Měření kyseliny močové v moči potkana
Vzorky moči z každé skupiny byly odstředěny (3, 000 r · min⁻⁻, 10 min, poloměr odstředivky 14 cm) a byl odebrán supernatant. Vzorky moči byly zředěny 1: 9 fyziologickým roztokem a analyzovány na obsah kyseliny močové pomocí biochemického analyzátoru.
2.4 Měření ADA, močoviny, Crea a SUA v séru potkana
Vzorky krve z každé skupiny byly odstředěny (3, 000 r · min⁻, 10 min, poloměr odstředivky 14 cm) a bylo shromážděno sérum. Hladiny ADA, močoviny, Crea a SUA v séru byly měřeny pomocí biochemického analyzátoru.
2.5 Měření XOD v potkaním séra
Změny hladin XOD v séru potkana byly měřeny pomocí enzymatického testu podle pokynů výrobce. Byla zaznamenána počáteční absorbance (A₁) a konečná absorbance (A₂) při 290 nm a byla vypočtena ΔA (ΔA=a₂ - A₁). ΔA byl nahrazen do vzorce:
XOD (nmol⁻ · min⁻ · Ml⁻⁻)=[ΔA × Reakční systém celkový objem ÷ (molární vyhynutí koeficientu kyseliny močové × Optická dráha Délka) × 10⁹] ÷ Vzorový objem ÷=4262}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}},
Pro výpočet množství kyseliny močové katalyzované za minutu na mililitr séra.
2.6 Měření koeficientů ledvin
Tkáně ledvin byly odebrány, promyty fyziologickým roztokem a přebytečná voda byla odstraněna. Hmotnost orgánů byla přesně měřena a koeficient ledvin byl vypočítán následovně:
Koeficient ledvin=hmotnost ledvin (mg) / tělesná hmotnost (g).
2.7 Histopatologické pozorování ledvinové tkáně barvením
Tkáně ledvin fixované ve 4% roztoku paraformaldehydu byly dehydratovány s odstupňovanými koncentracemi ethanolu, vyčištěny xylenem, zabudovány do parafinu a rozděleny do řezů 4- μm. Řezy byly deparafinizovány s xylenem, hydratovány odstupňovaným ethanolem, obarveny hematoxylinem a eosinem (HE) a utěsněny neutrální gumou. Morfologické změny v ledvinové tkáni byly pozorovány pod světelným mikroskopem a obrazy byly zachyceny při 400 x zvětšení.
2.8 Detekce exprese proteinu URAT1, GLUT9, OAT1 a OAT3 v ledvinové tkáni IHC
Tkáně ledvin fixované ve 4% roztoku paraformaldehydu byly dehydratovány s odstupňovanými koncentracemi ethanolu, vyčištěny xylenem, zabudovány do parafinu a rozděleny. Byly provedeny blokování antigenu a kozí sérové blokování. Primární protilátky (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) byly přidány v ředění 1: 200 a inkubovány přes noc při 4 stupni. Následující den byly řezy promyty PBS, sušeny na vzduchu a inkubovány s kozím anti-králičí IgG značenou biotinem při 37 stupních po dobu 30 minut. Řezy byly promyty PBS a inkubovány s chromogenním činidlem DAB po dobu 10 minut, následovaly oplachování PBS, hematoxylinový barvení po dobu 3 minut, diferenciace roztokem ethanolu kyseliny chlorovodíkové, neutrálním gumou a utěsněním neutrálním gumou.
Pro každou krysu byly vybrány dvě náhodné 4 0 0 × pole ledvinových řezů. Bylo analyzováno pozitivní barvení (hnědé žluté) a integrovaná optická hustota (IOD) každého pole byla měřena pomocí obrazu Plus plus 6.0 pro statistickou analýzu.
