Reakce Toll-like receptoru na infekci virem hepatitidy B a potenciál agonistů TLR jako imunomodulátorů pro léčbu chronické hepatitidy B: Přehled Část 2

3. Inhibice přirozené imunitní odpovědi infekcí HBV

Přesné mechanismy imunitního úniku nebo inhibice HBV zůstávají nejasné. Navíc, zda se HBV vyhýbá nebo inhibuje vrozené rozpoznávání nebo stimuluje vrozenou imunitu, nebylo dosud ověřeno [75]. Hladiny proteinů HBV, včetně HBsAg a HBeAg, jsou však spojeny s perzistencí HBV, což naznačuje roli virových proteinů při supresi imunitní odpovědi hostitele [76–78].

Imunitní únik HBV se týká schopnosti viru hepatitidy B mutovat nebo selektivně potlačit imunitní odpověď hostitele, takže imunitní systém nemůže účinně odstranit virovou infekci. Tento únikový mechanismus je jedním z důležitých důvodů dlouhodobé perzistence, replikace a reprodukce HBV.

Imunita označuje schopnost lidského imunitního systému odolávat patogenům. U lidí infikovaných HBV mohou lidé se silnou imunitou produkovat v těle velké množství protilátek, které mohou podpořit imunitní odpověď a pomoci odstranit virus; lidé se slabou imunitou budou mít vícenásobné infekce virem hepatitidy B a možnost přechodu do chronické hepatitidy B.

Proto imunitní únik HBV úzce souvisí s imunitou. Silná imunita může překonat únikový mechanismus viru, zatímco slabá imunita může být virem zneužita k dalšímu poškození zdraví těla. Zlepšení imunity je proto pro pacienty s hepatitidou B jedním z důležitých prostředků ke zvýšení jejich odolnosti vůči viru. Z tohoto pohledu musíme zlepšit imunitu. Cistanche dokáže výrazně zlepšit imunitu. Polysacharidy v Cistanche mohou regulovat imunitní odpověď lidského imunitního systému, zlepšit stresovou schopnost imunitních buněk a posílit imunitu imunitních buněk. Baktericidní účinek.

Klikněte na zdravotní přínosy cistanche

Několik studií zlepšilo naše chápání modulace přirozené imunitní odpovědi HBV [38,79]. Bylo hlášeno, že HBV potlačuje TLR-zprostředkovanou antivirovou odpověď v jaterních buňkách tím, že interferuje s aktivací IRF-3, nukleárního faktoru kappa B (NF-κB) a kinázy regulované extracelulárním signálem (ERK) 1/2 [ 80]. Bylo prokázáno, že HBV inhibuje odpověď TLR9 inhibicí osy MyD88-IRAK4 v pDC získaných od pacientů [54]. V jiné studii byla exprese TLR9 a funkce B lymfocytů zprostředkované TLR potlačeny ve všech podskupinách periferních B lymfocytů vystavených HBV [81].

Byla také popsána zhoršená exprese TLR4, 8 a 9 v periferních podskupinách DC od pacientů s chronickou infekcí HBV [82], což vyvolalo sníženou vrozenou imunitní funkci. Bylo popsáno, že polymeráza HBV blokuje aktivaci IRF narušením interakce mezi IκB kinázou-ε a RNA helikázou DEAD-boxu a inhibicí produkce IFN [83]. Jiná studie prokázala inhibici aktivace IRF-3 zprostředkované STING a produkce IFN- polymerázou HBV [84]. Bylo popsáno, že HBsAg potlačuje aktivaci NF-κB, IRF-3 a MAPK v myších hepatocytech [85]. Navíc aktivace T-buněk indukovaná TLR3-stimulovanými myšími KC nebo LSEC byla také potlačena HBsAg [85], což naznačuje potenciál HBsAg zeslabit nebo inhibovat imunitní odpověď zprostředkovanou TLR. Za použití RPMI 8226, linie B buněk lidského myelomu, bylo prokázáno, že HBsAg indukoval dysfunkci TLR9 potlačením fosforylace indukované HBsAg, která aktivovala transkripční faktor CREB, a tím zabránila aktivitě promotoru TLR9 [81].

Nedávná studie také uvádí HBsAg zprostředkovanou interferenci NF-κB dráhy interakcí s TAK1 a TAB2, což vede k potlačení imunitní odpovědi [86]. Kromě toho byla také popsána HBc-zprostředkovaná downregulace exprese transmembránového proteinu 1 (IFITM1) indukovaná interferonem [87] a HBeAg zprostředkovaná suprese NF-κB signální dráhy, inhibující vrozenou imunitní odpověď [88,89]. Protein HBV X (HBx) hraje kritickou roli v inhibici přirozené imunitní odpovědi a několik studií naznačilo asociaci HBx při supresi produkce IFN typu I downregulací proteinu MAVS [90–93]. HBx zprostředkovaná downregulace interferonu-beta indukujícího adaptor obsahující doménu TIR (TRIF), klíčové složky vrozené imunitní signalizace, byla také prokázána [43]. HBx může suprimovat transkripci TRIM22 prostřednictvím jediné CpG methylace v jeho 5'-UTR, čímž snižuje vazebnou afinitu IRF-1 a inhibuje IFN-zprostředkovanou anti-HBV odpověď [94]. Nedávno byl popsán klíčový mechanismus přirozeného vyhýbání se imunitě pomocí HBx v hepatocytech, kdy HBx-indukované adenosindeaminázy působící na RNA 1 (ADAR1) deaminují adenosin za vzniku inosinu interakcí s HBV RNA a zabráněním imunitního rozpoznání hostitele [19].

Imunitní únik zeslabením signalizace RIG-I prostřednictvím modifikace N6 methyladenosinem (m6A) HBV RNA byl popsán dříve [95]. Nedávno byla také popsána HBV-indukovaná N6 m6A modifikace fosfatázy a homologu tenzinu (PTEN) ovlivňující vrozenou imunitu se sníženou defosforylací IRF{7}} a syntézou IFN [96]. Zhou a kol. uvedli, že HBV inhiboval RIG-I-indukovanou produkci IFN vytvořením ternárního komplexu zahrnujícího hexokinázu a sekvestraci MAVS z RIG-I [97]. Bylo také popsáno poškození funkce NK buněk HBV [98]. HBV se může vyhnout snímání cGAS v buňkách HepG2-NTCP pomocí plně funkční dráhy cGAS-STING [99]; mechanismus však zůstává neznámý. Navíc průkaz snímání nahé rcDNA HBV, ale nikoli infekčních virionů HBV pomocí cGAS v PHH, ukazuje na zhoršení snímání cGAS během infekce HBV [99,100], ačkoli přesný mechanismus zůstává nejasný.

Z výše uvedených zjištění je rozumné uvažovat o tom, že stanovení infekce HBV a jejích proteinových složek může inhibovat/potlačovat vrozenou imunitní odpověď hostitele (obrázek 2) různými známými a neznámými mechanismy, a proto je třeba podrobně porozumět imunitní inhibici/vyhýbání se je zásadní pro navrhování nových terapeutických a preventivních strategií pro kontrolu infekce HBV.

4. Potenciál agonistů TLR jako imunomodulátorů

Vzhledem k tomu, že imunitní odpověď je u chronické infekce HBV potlačena, obnovení imunitní odpovědi je zásadní pro zlepšení výsledku chronické infekce, čehož lze dosáhnout pomocí imunomodulátorů, jako jsou agonisté TLR, inhibitory kontrolních bodů a terapeutické vakcíny [4,101,102]. V této studii jsme se zaměřili především na použití agonistů TLR jako imunomodulátorů k posílení imunitní odpovědi u chronické infekce. Agonisté TLR hrají významnou roli v modulaci imunoterapeutických účinků [103,104]. Nedávno vyvolali zájem agonisté TLR pro použití jako adjuvancia vakcín nebo imunitní modulátory kvůli jejich schopnosti indukovat produkci IFN, prozánětlivých cytokinů a chemokinů, které mohou vykazovat anti-HBV účinky [105,106]. Agonisté TLR1/2 a TLR3 mohou inhibovat replikaci HBV u PHH [105].

Další studie ukázala, že GS-9620 (vesatolimod), perorální agonista TLR7, spolu s nukleosidovými analogy (NA) pozitivně zesílily imunomodulační účinky zvýšením odpovědí T buněk a NK buněk a snížily schopnost NK buňky k potlačení T buněk u chronicky infikovaných pacientů [107]. Nebyla však zjištěna žádná významná změna hladiny HBsAg po kombinované terapii s NAs a GS-9620 [107]. Nedávná studie prokázala, že duálně působící agonisté TLR7/8 (R848) a TLR2/7 (CL413) jsou při inhibici replikace HBV účinnější než jednoduše působící agonisté TLR7 (CL264) nebo TLR9 (CpG-B) [108], zdůrazňuje vyšší potenciál duálně působících agonistů TLR při indukci širokého repertoáru cytokinů. Několik studií prokázalo schopnost agonistů TLR potlačovat HBV na zvířecích modelech.

V předchozí studii bylo prokázáno, že GS-9620 indukuje imunitní odpověď zvýšením produkce IFN- , dalších cytokinů a chemokinů u chronicky infikovaných šimpanzů. Snížil virovou nálož o více než 2 log a hladiny HBsAg a HBeAg v séru o 50 procent [109], což podtrhlo účinnost agonistů TLR7 v léčbě chronické infekce HBV a podpořilo další výzkum tohoto kandidáta u lidské CHB. V jiné nedávné studii byl zkoumán mechanismus účinku GS-9620 u šimpanzů CHB a bylo hlášeno, že GS-9620 projevuje anti-HBV odpověď spojenou s agregací imunitních buněk v játrech, které mohou buď zabíjí buňky infikované HBV nebo mohou zabránit HBV v infekci nových buněk produkcí protilátek [110].

V modelu CHB ve svišťi podání GS-9620 také vyvolalo významné snížení sérové ​​virové DNA a replikačních meziproduktů DNA viru intrahepatické hepatitidy sviště (WHV), WHV cccDNA a WHV RNA [111], což naznačuje, že Agonista TLR7 je silný imunomodulátor s anti-HBV účinky v modelu sviště lesního. Kromě toho byl výskyt HCC u svišťů lesních léčených GS-9620-výrazně snížen [111]. V jiné studii bylo prokázáno, že perorální podávání jiného agonisty TLR7, APR002, v kombinaci s entekavirem (ETV) zvýšilo expresi ISG a snížilo WHV cccDNA u chronicky infikovaných svišťů s WHV [112]. V klinické studii fáze 1b bylo zjištěno, že perorální podávání GS-9620 je bezpečné a dobře tolerované, což zvyšuje periferní produkci ISG15 bez významných systémových hladin IFN- [113]. AL-034, perorální agonista TLR7, prokázal účinnost proti HBV na myším modelu [114].

Hodnocení terapeutické vakcíny proti HBV, která se skládala z nového agonisty TLR7 (pojmenovaného T7-EA), adjuvans na bázi kamence a rekombinantního proteinu HBsAg, ukázalo, že T7-EA indukuje Th{{3} imunitní odpovědi typu }, stejně jako zvýšená odpověď T-buněk a titr IgG2a specifický pro HBsAg na myším modelu [115]. Dřívější studie uváděla, že agonista TLR8 ssRNA40 mohl selektivně aktivovat vrozené imunitní buňky rezidentní v játrech a invariantní T buňky a NK buňky spojené se sliznicí byly identifikovány jako buňky produkující IFN- -po aktivaci TLR8 [116], což zdůraznilo možnost použití agonisty TLR8 při léčbě CHB. GS-9688 (selgantolimod), perorální agonista TLR8, byl nalezen jako silná anti-HBV molekula v primárních lidských hepatocytech infikovaných HBV [117].

V jiné studii bylo hlášeno, že GS-9688 vykazuje anti-HBV účinek v modelu CHB svišťů [118], kde snižuje virovou zátěž o více než 5 log a potlačuje povrchový antigen svišťové hepatitidy (WHsAg) u 50 procent léčených chronicky infikovaných svišťů lesních [118]. Další nedávná studie také ukázala terapeutický potenciál GS-9688 u CHB, kde GS-9688 indukoval cytokiny v lidských PBMC, které by mohly aktivovat antivirovou efektorovou funkci různými imunitními mediátory, včetně NK buněk, HBV-specifických CD8 plus T buňky, CD4 plus folikulární pomocné T buňky a invariantní T buňky spojené se sliznicí [119]. Anti-HBV aktivita TLR9-ligandu byla popsána již dříve [120,121]. Agonista TLR9, CpG oligodeoxynukleotidy (ODNs), byl také hodnocen na modelu sviště lesního a bylo pozorováno, že hladina WHsAg v séru byla potlačena kombinovaným podáváním CpG a ETV, ale žádný účinek nebyl pozorován u žádného z těchto látek samostatně [122] , což naznačuje synergické efekty. CpG oligonukleotidy zvýšily HBV-specifické IL2 a IFN- reakce v plné krvi stimulované HBsAg nebo HBcAg [123]. Dřívější studie uváděla schopnost AIC649, agonisty TLR9, redukovat WHV DNA a WHsAg v jedinečném dvoufázovém vzoru odezvy [124].

Nedávno se ukázalo, že AIC649 v kombinaci s ETV může účinně potlačit WHV DNA a WHsAg v modelu CHB svišťů [125]. Předchozí studie prokázala použití ligandu TLR3, poly (I:C), jako účinného adjuvans pro terapeutickou vakcínu proti HBV (pojmenovaná pHBV-vakcína), která účinně potlačila replikaci HBV [126]. Nedávná studie také oznámila zlepšení stavu jaterní infekce, když poly (I:C) bylo dodáno nanočásticemi fosforečnanu vápenatého konjugovanými s protilátkou F4/80. Také zvýšil odpovědi T-buněk a produkci intrahepatálních cytokinů a chemokinů, což významně snížilo hladiny HBsAg, HBeAg a HBV DNA u myší [127]. Nedávná studie ukázala, že HBV interagoval se SIGLEC-3 (CD33) a sloužil jako imunitní kontrolní receptor pro infekci HBV a narušoval imunitu hostitele [128].

U PBMC od pacientů s CHB se také ukázalo, že anti-SIGLEC-3 mAb by mohla zvrátit účinek a vyvolat cytokinovou odpověď na agonistu TLR-7, GS-9620 [128]. Agonisté TLR jako adjuvans vakcín jsou v současné době zkoumány pro různé lidské vakcíny, včetně vakcín proti HBV, a ve studiích vakcín se jeví jako slibné [129,130]. Vakcíny obsahující konkrétního agonistu (agonisty) TLR mohou aktivovat specifické TLR a zvýšit účinnost vakcíny bez přímé účasti na ochranné imunitě [131,132].

Při výzkumu terapeutické vakcíny na bázi syntetického dlouhého peptidu (SLP) k léčbě chronického HBV se ukázalo, že konjugace TLR2-ligandu prototypu HBV-core SLP spustila funkční odpovědi T-buněk pacienta ex vivo [133 ], což naznačuje, že agonisté TLR mohou také působit jako potenciální adjuvancia ve vakcínách proti HBV. Nedávná studie také prokázala schopnost PRR ligandů vyvolat vrozenou imunitu vůči kontrole HBV [134]. Proto se použití agonistů TLR v HBV terapeutikách/vakcínách jeví jako slibné a mohlo by být účinným nástrojem při kontrole chronické infekce HBV, což vyžaduje další zkoumání. Agonisté TLR jako imunomodulátory ve vývoji jsou uvedeny v tabulce 1.

5. Závěry

Navzdory dostupnosti účinné vakcíny proti HBV zůstává chronická infekce HBV globálním zdravotním problémem. Nedávné studie zdůraznily HBV jako mazaný virus, což také vyvolává otázky o tajných vlastnostech HBV a ukazuje schopnost viru zasahovat do vrozené imunitní reakce a vyvolat infekci. Z dostupných dat se předpokládá, že chronická infekce HBV indukuje dysregulaci vrozené imunity hostitele, včetně suprese TLR odpovědi a downstream cytokinů.

Vyvolání vrozené imunitní reakce hostitele pomocí agonistů TLR může pomoci lépe porozumět vrozeným imunitním reakcím hostitele, zejména interakci mezi TLR a virovými složkami. Ačkoliv tedy agonisté TLR prokázali slibné výsledky ve zlepšení vrozené imunitní reakce během infekce HBV, jsou zapotřebí další studie, aby se prozkoumaly mechanismy modulace imunitní reakce hostitele a obnovení imunity.

Příspěvky autora:

Konceptualizace, MEHK, MK a KT-K.; psaní-příprava předlohy, MEHK; psaní-recenze a redakce, MEHK, MK a KT-K.; dozor, KT-K. Všichni autoři si přečetli publikovanou verzi rukopisu a souhlasí s ním.

Financování:

Tato studie byla podpořena grantem (síť pro vývoj inovativních léků) od Japonské agentury pro lékařský výzkum a vývoj (AMED).

Prohlášení institucionální revizní komise:

Nelze použít.

Prohlášení o informovaném souhlasu:

Nelze použít.

Poděkování:

Rádi bychom poděkovali Takahiro Sanada a Sayeh Ezzikouri za jejich laskavou spolupráci.

Střet zájmů:

Autoři neprohlašují žádný střet zájmů.

Reference

1. Liang, TJ Hepatitida B: Virus a nemoc. Hepatologie 2009, 49, S13–S21. [CrossRef]

2. Mastrodomenico, M.; Muselli, M.; Providenti, L.; Scatigna, M.; Bianchi, S.; Fabiani, L. Dlouhodobá imunitní ochrana proti HBV: Asociované faktory a determinanty. Hučení. Vakcíny Immunother. 2021, 17, 2268–2272. [CrossRef]

3. Světová zdravotnická organizace. Hepatitida B. Aktualizováno 27. července. Dostupné online: https://www.who.int/news-room/fact-sheets/ detail/hepatitis-b (vstup 28. července 2021).

4. Ezzikouri, S.; Kayesh, MEH; Benjelloun, S.; Kohara, M.; Tsukiyama-Kohara, K. Cílení na vrozenou a adaptivní imunitu hostitele k dosažení funkčního vyléčení chronické hepatitidy B. Vaccines 2020, 8, 216. [CrossRef]

5. Lee, infekce virem hepatitidy B WM. N. Engl. J. Med. 1997, 337, 1733–1745. [CrossRef]

6. Huang, HL; Jeng, KS; Hu, CP; Tsai, CH; Lo, SJ; Chang, C. Identifikace a charakterizace strukturního proteinu viru hepatitidy B: Polymerázový a povrchový fúzní protein kódovaný sestřiženou RNA. Virology 2000, 275, 398–410. [CrossRef]

7. Hu, J.; Seeger, C. Replikace a perzistence genomu hepadnaviru. Studený jarní Harb. Perspektiva. Med. 2015, 5, a021386. [CrossRef]

8. Glebe, D.; Bremer, CM Molekulární virologie viru hepatitidy B. Semin. Liver Dis. 2013, 33, 103–112. [CrossRef]

9. Yan, H.; Zhong, G.; Xu, G.; On, W.; Jing, Z.; Gao, Z.; Huang, Y.; Qi, Y.; Peng, B.; Wang, H.; a kol. Polypeptid transportující taurocholát sodný je funkčním receptorem pro lidské viry hepatitidy B a D. eLife 2012, 1, e00049. [CrossRef] [PubMed]

10. Takeuchi, JS; Fukano, K.; Iwamoto, M.; Tsukuda, S.; Suzuki, R.; Aizaki, H.; Muramatsu, M.; Wakita, T.; Sureau, C.; Watashi, K. Jediná adaptivní mutace v kotransportujícím polypeptidu taurocholátu sodného indukovaného hepadnaviry určuje druhovou specificitu viru. J. Virol. 2019, 93, e01432-18. [CrossRef] [PubMed]

11. Rouse, BT; Sehrawat, S. Imunita a imunopatologie vůči virům: Co rozhoduje o výsledku? Nat. Rev. Immunol. 2010, 10, 514–526. [CrossRef] [PubMed]

12. Zeisel, MB; Lucifora, J.; Mason, WS; Sureau, C.; Beck, J.; Levrero, M.; Kann, M.; Knolle, PA; Benkirane, M.; Durantel, D.; a kol. Směrem k léčbě HBV: Nejmodernější a nevyřešené otázky – zpráva z workshopu ANRS o léčbě HBV. Střevo 2015, 64, 1314–1326. [CrossRef]

13. McMahon, BJ Epidemiologie a přirozená historie hepatitidy B. Semin. Liver Dis. 2005, 25 (Suppl. S1), 3–8. [CrossRef]

14. Wieland, S.; Thimme, R.; Purcell, RH; Chisari, FV Genomická analýza reakce hostitele na infekci virem hepatitidy B. Proč. Natl. Akad. Sci. USA 2004, 101, 6669–6674. [CrossRef] [PubMed]

15. Fletcher, SP; Chin, DJ; Cheng, DT; Ravindran, P.; Bitter, H.; Gruenbaum, L.; Cote, PJ; Ma, H.; Klumpp, K.; Menne, S. Identifikace intrahepatálního transkripčního podpisu spojeného se samolimitující infekcí v modelu hepatitidy B typu svišť lesní. Hepatologie 2013, 57, 13–22. [CrossRef] [PubMed]

16. Dunn, C.; Peppa, D.; Khanna, P.; Nebbia, G.; Jones, M.; Brendish, N.; Lascar, RM; Brown, D.; Gilson, RJ; Obraceč, RJ; a kol. Časová analýza časných imunitních odpovědí u pacientů s akutní infekcí virem hepatitidy B. Gastroenterologie 2009, 137, 1289–1300. [CrossRef] [PubMed]

17. Suslov, A.; Boldanová, T.; Wang, X.; Wieland, S.; Heim, MH Virus hepatitidy B nezasahuje do vrozených imunitních reakcí v lidských játrech. Gastroenterologie 2018, 154, 1778–1790. [CrossRef]

18. Ma, Z.; Zhang, E.; Yang, D.; Lu, M. Příspěvek Toll-like receptorů ke kontrole infekce virem hepatitidy B iniciací antivirových vrozených reakcí a podporou specifických adaptivních imunitních reakcí. Cell Mol. Immunol. 2015, 12, 273–282. [CrossRef] [PubMed]

19. Wang, L.; Sun, Y.; Píseň, X.; Wang, Z.; Zhang, Y.; Zhao, Y.; Peng, X.; Zhang, X.; Li, C.; Gao, C.; a kol. Virus hepatitidy B se vyhýbá imunitnímu rozpoznání prostřednictvím úpravy virové RNA v hepatocytech zprostředkované RNA adenosindeaminázou ADAR1-. Cell Mol. Immunol. 2021, 18, 1871–1882. [CrossRef]

20. Tsuge, M.; Takahashi, S.; Hiraga, N.; Fujimoto, Y.; Zhang, Y.; Mitsui, F.; Abe, H.; Kawaoka, T.; Imamura, M.; Ochi, H.; a kol. Účinky infekce virem hepatitidy B na interferonovou odpověď u imunodeficientních lidských hepatocytových chimérických myší. J. Infect. Dis. 2011, 204, 224–228. [CrossRef]

21. Mutz, P.; Metz, P.; Lempp, FA; Bender, S.; Qu, B.; Schoneweis, K.; Seitz, S.; Tu, T.; Restuccia, A.; Frankish, J.; a kol. HBV obchází vrozenou imunitní odpověď a nechrání HCV před antivirovou aktivitou interferonu. Gastroenterologie 2018, 154, 1791–1804.e1722. [CrossRef]

22. Luangsay, S.; Gruffaz, M.; Isorce, N.; Testoni, B.; Michelet, M.; Faure-Dupuy, S.; Maadadi, S.; Ait-Goughoulte, M.; Parent, R.; Rivoire, M.; a kol. Včasná inhibice vrozených odpovědí hepatocytů virem hepatitidy B. J. Hepatol. 2015, 63, 1314–1322. [CrossRef]

23. Sanada, T.; Tsukiyama-Kohara, K.; Shin, IT; Yamamoto, N.; Kayesh, MEH; Yamane, D.; Takano, JI; Shiogama, Y.; Yasutomi, Y.; Ikeo, K.; a kol. Konstrukce kompletní databáze transkriptomů Tupaia belangeri pomocí celého genomu a komplexního sekvenování RNA. Sci. Rep. 2019, 9, 12372. [CrossRef] [PubMed]

24. Liu, HY; Zhang, XY Vrozené imunitní rozpoznání viru hepatitidy B. World J. Hepatol. 2015, 7, 2319–2322. [CrossRef] [PubMed]

25. Zhang, Z.; Trippler, M.; Real, CI; Werner, M.; Luo, X.; Schefczyk, S.; Kemper, T.; Anastasiou, OE; Ladiges, Y.; Treckmann, J.; a kol. Částice viru hepatitidy B aktivují Toll-like receptor 2 signalizující zpočátku po infekci primárních lidských hepatocytů. Hepatologie 2020, 72, 829–844. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com