Terapeutický účinek Cistanosidu A na kostní metabolismus myší po ovariektomii

1. Úvod

Osteoporóza, systémový kosterní „tichý zabiják“, se v posledních letech stala velkým zdravotním rizikem, které postihuje více než 2000 milionů lidí na celém světě.. Vyznačuje se nízkou hustotou kostní hmoty (BMD) a zhoršením mikroarchitektury, které se odvozují z nadměrné resorpce kosti nad tvorbou kosti a nakonec vede k osteoporotické zlomenině.. V současné době je identifikace látek blokujících osteoklastickou diferenciaci a resorpci běžnou a úspěšnou strategií pro vývoj terapeutických léků na osteoporózu.a skutečně existuje mnoho syntetických činidel, včetně estradiolvalerátu a alendronátu sodného, ​​které by mohlyprevence a léčba osteoporózy. Léky na nemoci však zdaleka nejsou ideální; některé z těchto léků by mohly zvýšit riziko rakoviny endometria a prsu a mít také určitý stupeň vedlejších účinků, jako je hyperkalcémie, hyperkalciurie atd., které omezují jejich klinické aplikace. Po více než tisíciletí se proto tradiční čínská medicína (TCM), zejména jedlá TCM s izolovanými bioaktivními sloučeninami a frakcemi, široce používá v asijských zemích bezpečně a účinně k prevenci a léčbě různých onemocnění, včetně osteoporózy.. 

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PRO LÉČENÍ A PREVENCI ONEMOCNĚNÍ OSTEOPOROZY PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Osteoporóza je charakterizována jako zvýšená kostní resorpce v důsledku zvýšené osteoklastogeneze a tento proces zahrnuje začlenění hematopoetických monocytů do prekurzorů osteoklastů, které se spojí za vzniku mnohojaderných osteoklastů, které se zaměřují na místa kosti procházející remodelací [4]. Aktivátor receptoru pro nukleární faktor-κB ligand (RANKL), klíčový faktor, který je secernován z osteoblastů, stimuluje diferenciaci monocytů na osteoklasty [8,9]. Interakce RANKL s jeho receptorem RANK má za následek kaskádu intracelulárních událostí, včetně NF-KB, PI3K/Akt a kalcium/kalmodulin-dependentní kinázy rekrutováním adaptorového signálního proteinu TNF receptor-associated factor (TRAF6). V důsledku toho je několik markerových genů souvisejících s osteoklasty, včetně TRAP, kathepsinu K a DPD, upregulováno a proces kostní resorpce je urychlen.

Fenylethanoidové glykosidy jsou charakterizovány kyselinou skořicovou a hydroxylfenylethylovými skupinami, které jsou navázány na -glukopyranózu (apióza, galaktóza, rhamnóza, xylóza atd.) prostřednictvím glykosidické vazby, které jsou široce rozšířeny v léčivých rostlinách [10]. Cistanosid A (Cis A) je aktivní látkafenylethanoidní glykosidv Cistanche deserticola YC Ma. Podle záznamu čínského lékopisu se C. deserticola tradičně používala k léčbě deficitu jinu ledvin, svalové slabosti, bederní slabosti atd. a fenylethanoidové glykosidy jsou hlavní bioaktivní složkou této byliny [11]. Na základě „ledvinové“ teorie TCM by ledviny mohly řídit kostní systém, což znamená, že vývoj a funkce kostí závisí na esenci ledvin a tato esence ledvin se může přeměnit v kostní dřeň, aby vyživovala kosti. podporují růst a opravu kostry a posilují kostru [12]. Protože C. deserticola může posilovat ledviny, předpokládali jsme, že Cis A může předcházet a léčit osteoporózu. Tato studie byla proto navržena tak, aby potvrdila potenciálCis A v prevenci osteoporózyza použití modelu myší s ovariektomií a markery tvorby a resorpce kosti, stejně jako související potenciální mechanismy, byly stanoveny pro odhad antiosteoporotické bioaktivity tohoto činidla.

2. Výsledky a diskuse

2.1. Výsledek

2.1.1. Účinky Cis A na testování kostního tříbodového ohybu

Abychom analyzovali, zda léčba Cis A dělá kost silnější, podrobili jsme stehenní kosti tříbodovému ohybovému testu. Jak ukazuje obrázek 1, maximální zátěž aplikovaná při zlomenině kosti byla 21,5 % a 22.0 % vyšší u zvířat léčených 20 mg/kg a 80 mg/ kg Cis A, v daném pořadí, ve srovnání se zvířaty ve skupině s odstraněnými vaječníky (OVX) (p < 0.05). Mezitím léčba Cis A také zvýšila tuhost kostí; všechny myši léčené Cis A vykazovaly významně zvýšenou tuhost s údaji 121.0 ± 12,1 (p < 0,05), 124,1 ± 16,2 (p < 0,05) a 127,7 ± 9,6 (p < 0,01), v tomto pořadí, ve srovnání se 102,2 ± 10,7 OVX myší. Výsledky ukazují, že zvýšená pevnost kostí u OVX myší léčených Cis A byla způsobena zvýšeným množstvím kosti a zlepšením kvality kostí.

2.1.2. Účinky Cis A na kostní mikroarchitekturu

Trojrozměrná mikroarchitektura trabekulární kosti u myší měřená pomocí mikro-CT (obrázek 2 a tabulka 1) intuitivně ukazuje, že myši ve skupině OVX vykazovaly významné snížení trabekulární plochy a počtu trabekulárních kostí ve srovnání s falešnou skupinou, což naznačuje, že ovariektomie mohla vyvolat významný pokles hustoty kostní hmoty (BMD, -46 %), minerálního obsahu v kostech (BMC, -66 %), obsahu tkáňových minerálů (TMC, -85 %), objemové frakce kosti (BVF, -82 %), trabekulární číslo (Tb. N, −76 %) a zvýšení trabekulární separace (Tb. Sp, +80 %) bez jakékoli modifikace celkové hustoty tkáňových minerálů (TMD) a tloušťky trabekulárních trámců (Tb. Th) po provoz 12 týdnů. Nicméně OVX myši léčené Cis A vedly ke zvýšení BMD v závislosti na dávce (+43%~57%), BMC (+65%~73%), TMC (+83%~ 90 %), BVF (+80%~88 %), větší snížení Tb. Sp (-79%~88%) a dále zvýšený Tb. N (+73%~82%) ve srovnání se skupinou OVX. Zdá se, že TMD nebyla ovlivněna ovariektomií, ale byla významně zvýšena léčbou estradiolvalerátem (EV).

2.1.3. Účinky Cis A na markery tvorby kosti a resorpce

Účinky Cis A na markery kostní resorpce, včetně TRAP, DPD, indexu tvorby kosti katepsinu K ALP a kostního Gla-proteinu (BGP), jsou uvedeny na obrázku 3. Po 12 týdnech operace ovariektomie se aktivity TRAP, DPD a katepsin K ve skupině OVX byly významně zvýšeny, zejména DPD, která se zvýšila o téměř 55,6 %; TRAP a katepsin K byly zvýšeny o 43,5 % a 38,1 %, v tomto pořadí, ve srovnání se skupinou se simulací. Cis A podávaný perorálně po dobu 12 týdnů prokázal významný potenciál v prevenci všech výše uvedených markerů kostní resorpce, zejména vysoká dávka (80 mg/kg) vykazující významný účinek na potlačení aktivit DPD o 45.0 %, TRAP o 49.0 % a katepsin K o 44.0 %, v tomto pořadí (p < 0,01) ve srovnání s skupina OVX (obrázek 3). Přestože byl ve skupině OVX prokázán rostoucí trend aktivit ALP a BGP, nebyly pozorovány žádné statisticky významné změny. Významné zlepšení aktivity ALP však bylo pozorováno u skupin léčených nízkým a vysokým obsahem Cis A ve srovnání se skupinou falešné (p < 0,01).

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PRO PREVENCI ONEMOCNĚNÍ OSTEOPOROZYPHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.1.4. Účinky Cis A na hladiny proteinové exprese TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG a RANKL

Analýza Western blot odhalila, že ve srovnání se simulovanou skupinou byly hladiny proteinů TRAF6, NF-κB a RANKL ve skupině OVX významně zvýšeny (p < 0.05), zatímco OPG, PI3K a Akt byly významně sníženy (obrázek 4). Cis A (20 mg/kg nebo 80 mg/kg) významně snížila expresi TRAF6 (p < 0,05), poté se exprese RANKL snížila a OPG se zvýšil, což znamená, že poměr OPG/RANKL byl upregulován. V důsledku toho byly signální kaskády NF-KB downregulovány a PI3K/Akt byly upregulovány léčbou Cis A (p < 0,05).

2.2. Diskuse

Vzhledem k omezením současných možností léčby osteoporózy existuje potřeba alternativ z potravin nebo přírodních jedlých léčivých rostlin. V rámci naší pokračující snahy objevit účinná antiosteoporotická činidla z TCM jsme našli řadu extraktů, frakcí a sloučenin, které mají účinek antiosteoporotických vlastností [13,14]. Cistanche deserticola je důležitou klasickou TČM, u které bylo zjištěno, že má příznivý bezpečnostní profil [15] a široké léčebné funkce při léčbě deficitu ledvin atd. [16]. Podle teorie TČM byly obvykle TČM, které mají účinek na povzbuzení ledvinpoužívá se k léčbě osteoporózy; fenylethanoidové glykosidy jsou hlavními bioaktivními složkami této byliny, což znamená, žefenylethanoidové glykosidyobsažené v C. deserticola mohou mít antiosteoporotické vlastnosti. Bylo prokázáno, že extrakt z C. deserticola může významně inhibovat snížení BMD a zabránit zhoršení trabekulární mikroarchitektury způsobené OVX [17]. V experimentu in vitro také významně zvýšil ALP, kostní morfogenetický protein-2 a mRNA osteopontinu a také kostní mineralizaci kultivovaných osteoblastů [18]. Echinakosid, hlavní bioaktivní složka v C. deserticola oficiálně zaznamenaná v čínském lékopisu [11], vykazovala antiosteoporotický účinek při vysoké dávce 30~270 mg/kg tělesné hmotnosti/den [19] a další výsledky in vitro ukázaly, že by mohl podporovat regeneraci kostí zvýšením poměru OPG/RANKL v buňkách MC3T3-E1 Subklon 14 [20]. Cis A byl jedním z fenylethanolových glykosidů izolovaných z C. deserticola a několik zpráv odhalilo, že tato sloučenina má antioxidační aktivitu [21] a protizánětlivé vlastnosti [22,23]. Nedávno publikovaná práce zjistila, že Cis A vykazuje ochranné účinky na hepatotoxicitu vyvolanou CCl4 a alkoholem u myší a také vykazuje ochrannou vlastnost na poškození vyvolané ethanolem v primárních kultivovaných myších hepatocytech in vitro [24]. V naší současné studii výsledky ukázaly, že Cis A měl antiosteoporotickou aktivitu při nízké dávce (20~80 mg/kg tělesné hmotnosti/den) za použití modelu ovariektomizovaných myší, a tato bioaktivita byla vyvíjena snížením hladiny TRAF6, potlačením exprese RANKL a NF-κB a stimulace OPG, PI3K a Akt, což znamená, že terapeutický účinek Cis A u OVX myší byl prostřednictvím mechanismu TRAF6-zprostředkované inaktivace NF-kappaB a aktivace PI3K/Akt.

Je dobře známo, že ovariektomie může způsobit osteoporózu se zřejmým poklesem BMD, biomechanické síly, kvality kosti a mikroarchitektury trabekulární kosti, přičemž výše uvedené změny jsou částečně způsobeny deficitem estrogenů [25]. Nyní, v tomto experimentu in vivo, naše studie ukazuje, že osteoporóza vyvolaná ovariektomií vedla k významnému snížení biomechanické síly a trabekulárních strukturálních parametrů, včetně BMD, BMC, TMC a Tb. N a zvýšení Tb. Sp; a léčba Cis A významně zlepšila mechanické vlastnosti kosti včetně maximálního zatížení a tuhosti, zlepšila BMD a zlepšila většinu strukturálních parametrů kostní trabekulární mikroarchitektury ve srovnání s myšmi ve skupině OVX, což ukazuje, že Cis A byl účinný při zlepšování kvality kostí a trabekulární mikroarchitektura u OVX myší.

Kromě celkové BMD, tříbodový ohybový test a měření mikroarchitektury trabekulární kosti mohly přímo diagnostikovat osteoporózu, markery tvorby kosti, včetně ALP a BGP, a index kostní resorpce, včetně TRAP, DPD a katepsinu K, byly také použity k objasnit související antiosteoporotické mechanismy Cis A. V naší studii aktivita ALP u myší skupiny OVX vykazovala nesignifikantní rostoucí trend, který indikoval zvýšenou míru kostního obratu [26,27] u postmenopauzální osteoporózy; vysoké (80 mg/kg tělesné hmotnosti/den) a nízké (20 mg/kg tělesné hmotnosti/den) dávky léčby Cis A prokázaly významné zvýšení aktivity ALP ve srovnání se simulovanou skupinou, zatímco aktivita BGP zřejmě nebyla ovlivněna ovariektomie ve všech léčených skupinách; TRAP, DPD a katepsin K byly významně zvýšeny ve skupině OVX a podávání Cis A výrazně snížilo všechny tři markery kostní resorpce. Výše uvedená data naznačují, že Cis A má potenciální antiosteoporotickou aktivitu a tento účinek byl vyvíjen regulací kostního metabolismu, včetně potlačení kostní resorpce a zvýšení tvorby kosti.

Koordinace mezi osteoblasty a osteoklasty je kritickým faktorem při udržování integrity skeletu. Osteoklasty exprimující TRAP se připojují k povrchu kosti prostřednictvím tvorby těsnících zón vázaných na aktin, ve kterých se uvolňují proteolytické enzymy, jako je katepsin K, což vede k tvorbě resorpčních důlků. Modulace osteoklastogeneze nezralými buňkami osteoblastické linie je zprostředkována RANKL a OPG [28]. OPG je návnadový receptor, který inhibuje aktivaci osteoklastogeneze RANKL, a tím snižuje kostní resorpci. RANKL, který poskytuje důležitý signál pro progenitory osteoklastů, je membránově vázaná molekula z rodiny ligandů tumor nekrotizujícího faktoru, která podporuje tvorbu osteoklastů. Poměr exprese OPG/RANKL je považován za klíčový parametr osteoklastogenní aktivity a signální kaskády aktivované RANKL zahrnují dráhy NF-κB a PI3K [29]. Důležitost dráhy NF-κB pro osteoklastogenezi dokládá skutečnost, že delece NF-κB u myší vedla k absenci zralých osteoklastů [30]. TRAF6 se ukázal jako slibný cíl pro nová antiosteoporotická léčiva. TRAF6-deficientní myši vykazující defektní osteoklastogenezi a závažnou osteopetrózu tak prokázaly důležitost TRAF6 v kostním metabolismu. Nové důkazy poukazují na kritickou regulační funkci pro TRAF6 v RANKL/RANK-zprostředkovaných signálních kaskádách [4,31]. Údaje ze současné studie ukázaly, že léčba Cis A na myších OVX vedla ke snížení hladiny exprese proteinu TRAF6, snížení RANKL a zvýšení exprese OPG, čímž se zabránilo aktivaci RANKL downstream NF-κB a aktivaci signálních drah PI3K/Akt, což naznačuje, že Cis A inhibuje diferenciaci osteoklastů inaktivací NF-kappaB zprostředkovanou TRAF{20}} a aktivací PI3K/Akt a zvyšuje poměr OPG/RANKL, následně inhibuje osteoklastogenezi a podporuje tvorbu kosti.

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PROANTIOSTEOPOROTICKÁ ČINNOSTPHGS75% ECH 30% ACT 12%

3. Materiály a metody

3.1. Rostlinné materiály, příprava a stanovení

Stonky Cistanche deserticolaYC Ma, identifikované profesorem Xue-yan Fu z katedry farmacie, Ningxia Medical University, byly odebrány 2. září015 v okrese Yongning, provincie Ningxia, Čína. Vzorek voucheru (#20150901) byl uchován v herbáři oddělení lékáren. Celkem 30,0 kg na vzduchu sušených stonků C. deserticola bylo třikrát extrahováno 70% ethanolem (180 l, 3 x 2 h) pod zpětným chladičem. Filtráty byly spojeny a podrobeny koloně s makroporézní pryskyřicí (AB-8) se stupňovitým gradientovým rozpouštědlovým systémem zvyšujícího se ethanolu ve vodě (0 %, 20 % a 60 %, každý 60 1), čímž byly získány tři frakce, poté 60 % frakce bylo dále purifikováno pomocí Sephadexu LH-20 (Pharmacia Biotech Co., Uppsala, Švédsko) a semipreparativní vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (Agilent 1100, Agilent Technologies, Waldbronn, Německo) za získání světle žluté cistanosid A 4,5 g (Cis A; výtěžek byl 0,015 %). Struktura byla objasněna především analýzou dat NMR (Bruker Avance, 400 MHz, Německo) a MS spekter (Agilent 6540, Agilent Technologies), které byly v souladu s uváděnými údaji [19]. Jeho čistota byla stanovena metodou normalizace plochy HPLC (obrázek 5). V experimentech na zvířatech, na základě našeho předběžného experimentu, byla dávka Cis A 20–80 mg/kg/den.

3.2. Chemikálie a rozpouštědla

Byly použity: souprava pro extrakci celkového proteinu a soupravy pro kvantifikaci proteinu BCA (Ken Gen Biotech. Co. Ltd, Nanjing, Čína), primární protilátky TRAF6, NF-κB, PI3K, Akt, RANKL, OPG, -aktin a tubulin ( Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA), sekundární protilátky kozího anti-králičího IgG konjugovaného s křenovou peroxidázou (ZSGB-BIO, Peking, Čína), estradiol valerát (1 mg, Delpharm Lille SAS, Paříž, Francie), kost Gla -proteinové a deoxypyridinolinové křížové vazby ELISA soupravy (Xinyu Biological Engineering Co. Ltd., Shanghai, Čína) a katepsin K ELISA kit (Biovision, Mountain View, CA, USA). Všechny ostatní použité chemikálie a biochemická činidla byla činidla analytické kvality AR.

3.3. Pokusy na zvířatech

Šedesát samic myší kmene Kunming ve věku 8 týdnů s tělesnou hmotností 26.0 ± 1,62 g bylo zakoupeno od Ningxia Medical University a 10 myš byla chována v jedné kleci se standardní laboratorní stravou a vody z vodovodu za podmínek řízeného vzduchu (24.0 ± 0,5 ◦C, vlhkost 45 %–50 % a cykly osvětlení 12 h/12 ​​h světlo-tma). Po aklimatizaci po dobu 1 týdne byla provedena operace za aseptických podmínek a všechny myši byly anestetizovány chloralhydrátem (100 mg/kg, ip); myši, které byly vystaveny chirurgickému zákroku bez odstranění vaječníků, byly falešnou skupinou (n=10); ostatní byli podrobeni bilaterální ovariektomii jako skupiny OVX (n=50). Výše uvedené pokusy na zvířatech byly provedeny podle příručky pro péči a použití laboratorních zvířat a byly schváleny Bioetickým výborem Lékařské univerzity Ningxia.

Po dalším {{0}}týdenním období zotavení bylo výše uvedených 50 myší OVX náhodně a rovnoměrně rozděleno do 5 skupin: perorálně léčené estradiolvalerátem (1 mg/kg/den) jako pozitivní kontrolou (EV); s 20, 40 a 80 mg/kg/den Cis A jako skupiny s nízkou, střední a vysokou dávkou, v daném pořadí; s vehikulem (0,5% karboxymethylcelulóza()-Na) jako modelová skupina (OVX). Všem myším byl orálně podáván stejný objem 1 ml/100 g tělesné hmotnosti vehikula, EV nebo Cis A, což začalo druhý týden po operaci a trvalo 12 týdnů. Tělesná hmotnost byla měřena jednou za dva týdny, přičemž dávka byla odpovídajícím způsobem upravena. Po posledním orálním podání byly odebrány vzorky krve z femorální tepny anestetizovaných myší, nechaly se srazit a centrifugovaly při 3000 x g po dobu 10 minut, aby se získalo sérum; byla vypreparována pravá femora a tibie. Všechny vzorky byly skladovány při −80 ◦C pro další hodnocení kostní mikroarchitektury a biochemických parametrů séra souvisejícího s osteoporózou.

3.4. Tříbodové ohybové testování

Biomechanické vlastnosti pravé stehenní kosti myši byly stanoveny pomocí tříbodového ohybového uspořádání. Ohýbací přípravek má podpěru ve tvaru V pro zajištění distálního a proximálního konce femuru během testování. Stehenní kost byla umístěna vodorovně přední stranou nahoru a zatížení bylo aplikováno dolů do středu střední části stehenní kosti. Vzdálenost mezi podpěrami byla 8 mm. Kosti byly zatěžovány konstantní rychlostí posunu 0,02 mm/s až do selhání pomocí testovacího stroje BOSE (3220) (Bose Corporation, Endura TEC Systems Group, Minnetonka, MN, USA). Křivky zatížení-posunutí byly získány a použity pro výpočet konstrukčních a materiálových vlastností, včetně maximálního zatížení, špičkového zatížení, modulu pružnosti, pevnosti v ohybu atd.

3.5. Analýza mikropočítačovou tomografií

Pravé stehenní kosti všech myší byly očištěny od přilnutých měkkých tkání a mikroarchitektura trabekulární kosti výše uvedené pravé distální femorální metafyziky byla určena mikro-CT skenerem (eXplore Locus SP, GE Healthcare, Londýn, ON, Kanada) s izotropní rozlišení nastaveno na 8 µm ve všech třech prostorových rozměrech. Oblast zájmu (ROI) byla vybrána pomocí stejných souřadnic v růstové ploténce femuru. Kostní morfometrické parametry, včetně BMD, kostního minerálního obsahu (BMC), tkáňového minerálního obsahu (TMC), tkáňové minerální hustoty (TMD), objemové frakce kosti (BVF), trabekulární separace (Tb. Sp), trabekulárního čísla (Tb. N ) a tloušťka trabekulární (Tb. Th), byly hodnoceny pomocí analýzy ROI pomocí softwaru pro analýzu kosti ABA.

3.6. Analýza biochemických parametrů

Aktivita sérové ​​alkalické fosfatázy (ALP) byla měřena na automatickém analyzátoru (Ciba-Corning 550 Diagnostics, Corp., Oberlin, OH, USA)); hladiny sérového DPD, BGP a kathepsinu K byly stanoveny odpovídajícími reagenčními soupravami a tartrát-rezistentní kyselá fosfatáza (TRAP) byla analyzována podle související literatury [32].

3.7. Analýza Western Blot

Hladiny proteinové exprese TRAF6, NF-KB PI3K, Akt, OPG a RANKL v různých skupinách byly detekovány analýzou Western blot. Stručně, protein byl extrahován z pravé holenní kosti myší pomocí lyzačního pufru obsahujícího 0,5 mM fenylmethylsulfonylfluorid, inhibitory proteázy a fosfatázy. Lyzáty byly centrifugovány po dobu 10 minut při 12,000xg, aby byly získány supernatanty pro další analýzu. Koncentrace proteinu lyzátů byla měřena pomocí kvantifikačního testu s bicinchonovou kyselinou. Proteiny (50–100 µg) byly separovány pomocí 10% SDS-PAGE, přeneseny na polyvinylidendifluoridovou membránu a inkubovány s monoklonálními primárními protilátkami cílícími na TRAF6, NF-κB RANKL, PI3K, Akt, OPG a -aktin (1:500). Stejná membrána byla stripována a znovu testována, přičemž chemiluminiscenční signály byly detekovány softwarem Image Lab. -aktin nebo tubulin sloužil jako vnitřní kontrola.

3.8. Statistická analýza

Všechna data získaná z pokusů na zvířatech byla analyzována pomocí jednosměrné analýzy rozptylu s Dennettovým testem provedeným SPSS (verze 22.0, IBM SPSS Statistics, IBM Corp., Armonk, New York, NY, USA ) software; hodnota p < 0,05 byla považována za statisticky významnou a všechny výsledky byly prezentovány jako průměr ± SD.

4. závěr

Stručně řečeno, Cis A,aktivní fenylethanoidové glykosidyizolovaný z C. deserticola, vykazoval významnou antiosteoporotickou aktivitu u OVX myší a molekulární mechanismus může souviset s TRAF6-zprostředkovanou inaktivací NF-kappaB a aktivací PI3K/Akt, což je pravděpodobně slibný prostředek pro léčbu osteoporózy choroba.

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PROANTIOSTEOPOROTICKÁ ČINNOSTPHGS75% ECH 30% ACT 12%