Studie extraktu Cistanche Deserticola, který reguluje polarizaci M2 podobnou makrofágům, aby se snížila migrace buněk a tvorba kolonií u rakoviny prsu

Abstrakt: Cíl Prozkoumat regulační mechanismus ethanolového extraktu z Cistanche deserticola epimedium brevican na polarizaci makrofágů in vitro a jeho vliv na makrofágy podobné M{{0}} podporující migraci buněk 4T1 a tvorbu kolonií. Metody Metoda CCK-8 byla použita k detekci vlivu různých koncentrací etanolového extraktu z Cistanche deserticola deserticola na aktivitu makrofágů odvozených z kostní dřeně (BMDM) a ke stanovení bezpečné koncentrace etanolového extraktu z Cistanche deserticola deserticola deserticola; Western blotting a qRT PCR byly použity k detekci účinku ethanolového extraktu z Cistanche deserticola deserticola na expresi arginázy-1 (Arg{5}}) a CD163, markerů makrofágů podobných M2; QRT PCR byla použita k detekci účinku alkoholového extraktu z Cistanche deserticola deserticola na zánětlivou zónu 1 (Fizz1) a receptor aktivovaný peroxisomovým proliferátorem (PPAR) genů souvisejících s M2 Tumor-associated macrophage (TAMs) (peroxisome-proliferator-activated receiver, PPAR ）, Účinky exprese mRNA chitinázy 3-jako 3 (Ym1), chemokinu 24 (CCL24), makrofágu galaktózy typu C typu C (MGL2) a regulačního faktoru 4 (IRF4) interferonu; Účinek ethanolového extraktu Cistanche deserticola deserticola na M2 TAM podporující migraci buněk 4T1 byla detekována škrábacím testem; Vliv ethanolového extraktu z Cistanche deserticola deserticola na růst buněk 4T1 stimulovaný M2 TAMs byl detekován experimentem s koloniemi. Výsledky ukázaly, že ethanolový extrakt z Epimedium nemělo žádné toxické ani vedlejší účinky na buňky BMDM v koncentraci 0.015 625 až 2.000 000 mg/ml; Etanolový extrakt z Cistanche deserticola významně inhibuje geny související s M2 TAMs Arg{{{3}. 36}}, CD163, Fizz1, PPAR, Exprese CCL24, Ym1, MGL2 a IRF4 (P<0.05, 0.01, 0.001) inhibited the migration and colony formation ability of M2-TAMs in 4T1 cells (P<0.05, 0.001). Conclusion The ethanol extract of Cistanche deserticola can weaken the promotion of M2-like macrophages on 4T1 Cell migration and colony formation, and its mechanism may be related to the inhibition of M2-type polarization of macrophages.

Klíčová slova: Cistanche deserticola; Makrofágy; polarizace M2; Rakovina prsu; migrace; Tvorba kolonií; kyselina benzoinová; koniferylaldehyd; Emodin; Kyselina vanilová

Účinky Cistanche-Protinádorové

Rakovina prsu je hlavním zhoubným nádorem ohrožujícím zdraví žen a také druhou nejčastější příčinou úmrtí na rakovinu na světě [1-2]. V pozdním stádiu rakoviny prsu jsou metastázy plic a jater. Když dojde k orgánové metastáze, míra přežití a kvalita života pacientů se výrazně sníží [3]. Léčba karcinomu prsu první linie spočívá především na chemoterapii antracyklinem, paklitaxelem a dalšími cytotoxickými léky, ale v průběhu léčby se často vyskytuje léková rezistence. Proto je velmi důležité prozkoumat patologický mechanismus rakoviny prsu a najít účinné léčebné metody. Makrofágy jsou klíčové pro výskyt a rozvoj různých nádorů [4-5] a biomarkery makrofágů mohou sloužit jako prognostické indikátory. Vysoká míra infiltrace makrofágy souvisí se špatnou prognózou rakoviny prsu. Makrofágy spojené s nádorem (TAM) jsou nejtypičtějším typem imunitních buněk infiltrujících nádor. Hrají důležitou roli od časné rakoviny prsu až po progresi, zejména metastázy [6]. TAM se podílejí na metastázování, angiogenezi, remodelaci matrice, invazi a imunosupresi rakoviny prsu. Tradiční čínská medicína hraje důležitou roli v celém léčebném cyklu rakoviny prsu. Tradiční čínská medicína má vlastnosti mnoha složek, cest a cílů, které mohou snížit míru recidivy a metastáz u pacientů s nádorem, zlepšit kvalitu jejich života a prodloužit dobu jejich přežití. Cistanche deserticola deserticornu Maxim. Je to Berberidaceae rostlina Ranunculales. Je sladké a sladké chuti, teplé povahy a sleduje dva kanály jater a ledvin. Má účinky na posílení svalů a kostí, tonizaci jangu ledvin, ochranu kardiovaskulárního systému [7], podporu tvorby kostí [8], regulaci imunitní kapacity [9] a inhibici rakoviny [10]. Výzkum ukazuje, že alkoholový extrakt z Cistanche deserticola může inhibovat proliferaci buněk rakoviny prsu [11], ale výzkum toho, jak alkoholový extrakt z Epimedium ovlivňuje nádorové imunitní mikroprostředí rakoviny prsu, nebyl publikován. Cílem této studie je proto prozkoumat účinek alkoholového extraktu z Cistanche deserticola deserticola na makrofágy podobné M{12}} a jeho regulaci na 4T1 rakovinu prsu Buněčnou migraci a tvorbu kolonií, aby poskytla experimentální základ a teoretické vodítko pro další sledování klinická aplikace Epimedium.

Zdravotní přínosy prášku Cistanche - Protinádorové

Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche

【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Materiál

1.1 Zvíře a buňka

Samice myši C57BL/6 třídy SPF, 8 týdnů stará, zakoupená od Sibeifu (Beijing) Biotechnology Co., Ltd., s číslem zvířecího certifikátu 110324210105240115. Myši byly chovány ve zvířecím experimentálním centru 5. lékařského centra Všeobecné nemocnice v lidově osvobozenecké armády. Během celého experimentálního období dostávaly myši zdarma jídlo a vodu a dostávaly cyklus 12-hodina světlo/12-hodina tma. Pokusy na zvířatech byly prováděny podle pokynů pro péči a použití pokusných zvířat a byly schváleny Pátým lékařským střediskem Všeobecné nemocnice lidové osvobozenecké armády. Etické číslo schválení pro pokusy na zvířatech je IACUC-2021-0007. Buňky 4T1 byly zakoupeny od Shanghai Fuheng Biotechnology Co., Ltd.

Experimentální studie na Cistanche deserticola

1.2 Lék

Cistanche deserticola byla identifikována výzkumníkem Xiao Xiaohe jako Epimedium E., rostlina Berberidaceae Suché listy z Brevicornum Maxim. Listy Cistanche deserticola deserticola vezměte, rozdrťte a propasírujte sítem č. 4, přesně zvažte, přidejte zředěný etanol, proveďte ošetření ultrazvukem (výkon 400 W, frekvence 50 kHz) po dobu 1 hodiny, zchlaďte, znovu zvažte, použijte zředěný etanol k doplnění ztracené hmotnosti, protřepejte, přefiltrujte, odeberte pokračovací filtrát, zmrazte a vysušte, abyste získali extrakt Cistanche deserticola deserticola. 1.3 Léky a činidla argináza-1 (Arg{7}}) protilátka (číslo šarže: 93668) byla zakoupena od CST Company of United States; - Aktinová protilátka (číslo šarže 20536 1-AP) byla zakoupena od společnosti Protentech; HRP značená kozí anti-králičí IgG sekundární protilátka (číslo šarže J111-035-003) byla zakoupena od Jackson Immuno Research; Činidlo Trizol (číslo šarže BSC51M1) bylo zakoupeno od společnosti Biolux; Činidlo CCK-8 (číslo šarže KTA1020-1000T) bylo zakoupeno od společnosti Abbkine Company; Faktor Interleukin 4 (IL-4) (číslo šarže 96-214-14-20) byl zakoupen od společnosti Peprotech.

1.4 Nástroj

QB-9002 Seismic Plate Instrument (Haimen Qilin Bell Company); Epoch enzyme-linked immunosorbent assay a P100 plus analyzátor koncentrace nukleové kyseliny (Bio Tek Company, USA); Fluorescenční kvantitativní PCR přístroj Quantstudio 6 Flex (Thermo Fisher Scientific, USA); Palmová odstředivka MINI6K (Hangzhou Aosheng Company); Vibrátor Vortex-Genie 2 (Scientific Industries, USA).

2 Metody

2.1 Analýza složek lihového extraktu z Cistanche deserticola

2.1.1 Vzorekpříprava Přidejte metanol k alkoholovému extraktu z Cistanche deserticola, abyste připravili suspenzi 5 mg/ml, extrahujte ji ultrazvukem po dobu 40 min, odeberte 1 ml a centrifugujte při 12 000 ot./min po dobu 10 min. , po centrifugaci odeberte supernatant, protáhněte 0,22 μM filtrační membránu, odeberte vzorek do UPLC-MS/MS. Složky Cistanche deserticola byly shromážděny prostřednictvím databáze farmakologie systémů tradiční čínské medicíny a analytické platformy (TCMSP). Výsledky MS byly analyzovány pomocí datové platformy Progression QI (založené na databázích NPATLAS a GNPS) a výsledky byly porovnány s vyhledáváním komponent Cistanche deserticola pro necílenou analýzu komponent.

2.1.2 Chromatografické podmínky:

Akvizice UPLC BEH C18 chromatografická kolona (100 mm × 2,1 mm, 1,7 µm), mobilní fáze je dvakrát destilovaná voda (A) - acetonitril (B), gradientová eluce: 0-3 minut, 5 procent B; 3 až 35 minut, 5 procent až 95 procent B; 35-42 minut, 95 procent -5 procent B. Objemový průtok je 0,3 ml/min; vstřikovací objem je 5 μl; Teplota teplotního boxu kolony je 40 stupňů. 2.1.3 Podmínky hmotnostní spektrometrie: elektrosprejový iontový zdroj (ESI) se používá pro detekci v režimu kladných iontů a kapilární teplota je 275 stupňů; Objemový průtok plynu pláště 20 Arb; Objemový průtok pomocného plynu 5 Arb; Napětí iontového zdroje je 5 kV. 2.2 Buněčná kultura Makrofágy odvozené z kostní dřeně (BMDM) byly izolovány z femorální kostní dřeně 8-týdenních samic myší C57BL/6. Byly kultivovány v médiu DMEM obsahujícím 10 procent fetálního bovinního séra, 1 procento penicilin/streptomycin a myší makrofágový kolonie stimulující faktor M-CSF (50 ng/ml) a umístěny do inkubátoru při 37 stupních a 5 procentech CO2 po dobu 6 dní.

Buňky štěpte 0,25% trypsinem EDTA (2:1) rychlostí 1,2 x Inokulujte hustotu 106/ml do jamkové destičky přes noc. Druhý den, po přidání alkoholového extraktu z Cistanche deserticola po dobu 1 hodiny, byly buňky stimulovány IL-4 (20 ng/ml) po dobu 24 hodin.

2.3 Metoda CCK{{0}} byla použita k detekci cytotoxicity alkoholového extraktu z Cistanche deserticola deserticola vůči buňkám BMDM × Naočkujte hustotu 106/ml do 96jamkových destiček, umístěte přes noc do inkubátoru, ošetřit buňky s různými hmotnostními koncentracemi (0, 0.015 625, {{10}}.031 25, 0.{{{{101} 9}}, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4 mg/ml) alkoholového extraktu z Cistanche deserticola po dobu 24 hodin. Zlikvidujte kultivační médium, přidejte roztok CCK{20}}kultivačního média (1:10), inkubujte v inkubátoru po dobu 1 hodiny, změřte absorbanci (A) při 450 nm pomocí čtečky mikrodestiček a zjistěte toxicitu alkoholového extraktu Cistanche deserticola deserticola do buněk.

2.4Western blotting byl použit k detekci exprese Arg{{0}} proteinu v BMDM buňkách. Byla vytvořena kontrolní skupina, modelová skupina a skupina alkoholového extraktu Cistanche deserticola s různými hmotnostními koncentracemi (0.062 5, 0.125, 0,25 mg/ml). Léčivo bylo podáváno způsobem podle "2.2". Buňky byly shromážděny a k extrakci proteinu byl přidán RIPA lyzát. Vzorek proteinu byl podroben elektroforéze na 10% dodecylsulfátu-polyakrylamidovém gelu, přenesen na PVDF membránu, utěsněn v TBST obsahujícím 5 procent odstředěného mléka na 1 hodinu, přidána primární protilátka a inkubován přes noc při 4 stupních; Po promytí TBST inkubujte se sekundární protilátkou a vyvíjejte s použitím vylepšeného chemiluminiscenčního detekčního činidla.

2.5 qRT PCR byla použita k detekci BMDM buněčného chemotaktického faktoru 24 (CCL24), zánětlivé zóny 1 (Fizz1), chitinázy 3-jako 3 (Ym1), lektinu 2 makrofágové galaktózy typu C (MGL2) a peroxisomového proliferátoru- aktivovaný receptor (peroxisome-proliferator-activated receiver , PPAR）, Interferon regulator factor 4 (IRF4), Arg-1 and CD163 mRNA expressions were set in the control group, model group and different mass Koncentrace ({{17} }.062 5, 0.125, 0.25 mg/ml) alkoholového extraktu z Cistanche deserticola podle „2.2“

2.6Příprava upraveného média Referenční metoda [12]: BMDM byla kultivována podle metody uvedené v "2.2". Po připevnění destičky se zárodky buněk bylo přidáno médium bez séra obsahující alkoholový extrakt Cistanche deserticola (0,25 mg/ml) a IL-4 (20 ng/ml ) byl přidán o 1 hodinu později. Po 24 hodinách odeberte supernatant jako upravené médium. Upravené médium bylo centrifugováno při 2000 ot./min., aby se vysrážely fragmenty, odsáto a skladováno při -80 stupních pro experimenty s migrací buněk. BMDM byl kultivován podle metody uvedené v "2.2" a DMEM médium obsahující alkoholový extrakt z Cistanche deserticola (0,25 mg/ml) bylo přidáno poté, co byla destička se zárodky buněk připevněna ke stěně, a IL-4 (20 ng /ml) se přidal o hodinu později. Po 24 hodinách odeberte supernatant jako upravené médium. Centrifugujte upravené médium 2000, aby se vysrážely fragmenty, odsajte supernatant a uložte jej při -80 stupni pro experimenty s buněčnými koloniemi.2.7 Experiment buněčné migrace Umístěte {{0}}zásuvný modul pro hojení ran do 12-díry s otvory a buňky 4T1 se ošetří 3,6 × 105/ml vakcinací . Poté, co buňky přes noc přilnou ke stěně, odstraňte plugin a omyjte plovoucí mrtvé buňky pomocí PBS. Přidejte médium bez séra obsahující 50 procent upraveného média. Inkubujte v inkubátoru po dobu 24 hodin. V čase 0 a 24 h pořiďte snímky inverzním mikroskopem, analyzujte snímky pomocí snímku J a vypočítejte rychlost migrace buněk. Rychlost migrace buněk=(oblast rány 0 h -24 h oblast rány)/0 h oblast rány

2.8Experiment s buněčnými koloniemi 1000 4T1 buňky byly naočkovány do každé jamky 6jamkových destiček a inkubovány s médiem obsahujícím 50 procent upraveného média po dobu 8 dnů. Zafixujte 2 procenty paraformaldehydu, obarvěte 1 procentem krystalové violeti, pořiďte fotografie a analyzujte snímky pomocí obrázku J.

2.9Statistická analýza byla provedena pomocí softwaru GraphPad Prism 8 s naměřenými daty vyjádřenými jako xs ± a meziskupinovými srovnáními pomocí jednocestné ANOVA.

3 Výsledky

3.1 Analýza složení alkoholového extraktu z Cistanche deserticola deserticola je uvedena na obrázku 1 a v tabulce 2. Alkoholový extrakt z Cistanche deserticola deserticola obsahuje kyselinu benzoovou, koniferylaldehyd, Emodin, kyselinu vanilovou, hyalin a lepirudin A.

Tabulka 1 Sekvence primerů

Obrázek 1 Analýza alkoholových extraktů z Cistanche deserticola deserticola

Tabulka 2 Analýza složek alkoholového extraktu z Cistanche deserticola deserticola

3.2Cytotoxicita alkoholového extraktu Cistanche deserticola na BMDM Výsledky ukázaly, že 0.015 625 - 2 mg/ml alkoholového extraktu Cistanche deserticola neměl žádný toxický účinek na buňky BMDM po ošetření buněk BMDM různými koncentracemi alkoholového extraktu Cistanche deserticola po dobu 24 hodin (obrázek 2).

Obr. 2 Cytotoxicita alkoholového extraktu Cistanche deserticola deserticola na BMDM (xs ±, n=3) Obr.

3.3 Etanolový extrakt z Cistanche deserticola inhibuje M2 polarizaci makrofágů in vitro. U BMDM M0 makrofágů jsou markery Arg-1 a CD163 M2-podobných makrofágů exprimovány málo a exprese je významně zvýšena po indukci IL-4, což naznačuje že BMDM se úspěšně polarizuje na M2-jako makrofágy. Techniky Western blotting a qRT PCR byly použity k ověření, že alkoholový extrakt z Cistanche deserticola může modulovat expresi Arg-1 a CD163 indukovanou IL-4 způsobem závislým na dávce (obrázek 3), což naznačuje že alkoholový extrakt z Cistanche deserticola může přímo inhibovat polarizaci makrofágů podobnou M2. K dalšímu prozkoumání účinku alkoholového extraktu z Cistanche deserticola deserticola na M2 polarizaci makrofágů byla qRT PCR použita ke studiu genů souvisejících s M2 podobnými makrofágy Fizz1 a PPAR. Úrovně transkripce Ym1, CCL24, MGL2 a IRF4 jsou znázorněny na obrázku 4. Ve srovnání s modelovou skupinou byly hladiny exprese mRNA Fizz1, Ym1, CCL24 a ​​IRF4 v alkoholovém extraktu z Cistanche deserticola (0.062 5, 0.125, { {29}},25 mg/ml) skupina významně snížila (P<0.05, 0.01, 0.001), and the PPAR in the alcohol extract of Cistanche deserticola (0.125, 0.25 mg/mL) group γ The mRNA expression level decreased significantly (P<0.01, 0.001), and the MGL2 mRNA expression level in the alcohol extract of Cistanche deserticola deserticola (0.25 mg/mL) group decreased significantly (P<0.001).

3.4 Etanolový extrakt z Cistanche deserticola oslabuje podporu M2-makrofágů při migraci buněk 4T1. Test škrábání byl použit k pozorování účinku supernatantu ethanolového extraktu Cistanche deserticola na migrační schopnost buněk rakoviny prsu. BMDM byl inkubován v médiu bez séra obsahujícím IL-4 a alkoholový extrakt z Cistanche deserticola deserticola po dobu 24 hodin a supernatant byl odebrán jako upravené médium. 4T1 byl kultivován v médiu bez séra obsahujícím 50 procent upraveného média, jak je znázorněno na obrázku 5, upravené médium odebrané pomocí BMDM ošetřeného samotným IL-4 významně podporovalo migraci buněk 4T1 (P<0.05), while the conditioned medium of BMDM treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the migration of 4T1 cells (P<0.05). 3.5 Cistanche deserticola alcohol extract weakens the promotion of M2-like macrophages on 4T1 cell colony formation Use colony formation experiment to evaluate the effect of Cistanche deserticola alcohol extract on M2-like macrophages promoting 4T1 cell colony formation. As shown in Figure 6, the conditioned medium treated with IL-4 significantly promoted the colony formation of 4T1 cells (P<0.05), while the conditioned medium treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the colony formation of cells (P<0.001)

4. Diskuze

Výhody cistanche tubulosa-Antitumor

V současnosti je rakovina prsu stále celosvětovým problémem veřejného zdraví. Incidence karcinomu prsu se rok od roku zvyšuje i u mladých, což vážně ohrožuje zdraví žen [13]. Tradiční čínská medicína věří, že v raných stádiích nádorů, kvůli neschopnosti těla rozptýlit qi kvůli nedostatku jangu, je jinová qi nedostatečná a nemůže tvořit normální akumulaci spermií. Abnormální akumulace však vede k patologickým produktům, jako je zákal hlenu a krevní stáze, což vede k transformaci toxinů na nádory [14]. Cistanche deserticola deserticola jako základní lék na tonizaci jangu má účinky tonizace životní energie a jangu ledvin a dokáže regulovat imunitu. Jde o běžně používanou čínskou medicínu tonizující ledviny v klinické praxi. Nyní se často používá k léčbě rakoviny prsu a často se používá jako vysokofrekvenční složený lék. Jednou z charakteristik rakoviny je imunitní dysfunkce. Imunitní buňky, které by měly bojovat proti nádorům, jsou specificky Sexuální inhibice okolními tkáněmi a nádorovým mikroprostředím, což vede k nekontrolovanému růstu a šíření nádorů [15]. Stále více důkazů ukazuje, že když existuje v mikroprostředí nádoru, vrozené imunitní buňky (makrofágy, neutrofily, dendritické buňky, vrozené lymfoidní buňky, sexuální inhibiční buňky odvozené z kostní dřeně a NK buňky) a adaptivní imunitní buňky (T buňky a B buňky ) přispívají k progresi nádoru [16]. Makrofágy jsou nepostradatelnými mediátory tkáňové homeostázy a jejich polarizace směrem k alternativním aktivovaným makrofágům (typ M2) může podporovat proliferaci rakovinných buněk, angiogenezi a metastázy. Proto se regulace TAM a udržování jejich homeostázy stala středem zájmu léčby nádorů [17]. TAM se podílejí na metastázování, angiogenezi, remodelaci matrice, invazi a imunosupresi rakoviny prsu. TAM se dělí hlavně na dva různé fenotypy, konkrétně na klasické aktivované makrofágy podobné M1-a alternativní aktivované makrofágy podobné M2- [18]. U benigních nebo nefunkčních nádorů je většina TAM klasicky aktivovanými makrofágy podobnými M{11}}, což jsou aktivace interferonu, IFN- nebo lipopolysacharidu (LPS), čímž podporují TAM k produkci prozánětlivých faktorů a fagocytóze nádorových buněk. Makrofágy podobné M2- mohou být aktivovány Th2 cytokiny, jako je IL-4, aby produkovaly velké množství protizánětlivých faktorů, které přímo podporují rozvoj rakoviny prsu [19]. Zvrácení nebo inhibice polarizace M2-like makrofágů je proto strategií imunoterapie rakoviny prsu. Arg{20}} je marker makrofágů podobných M{21}} a jeho nadměrná exprese je spojena se špatnou prognózou u pacientů s rakovinou [20].

Čínská bylina cistanche-Antitumor

CD163 je specifickým markerem makrofágů podobných M2- [21], který je spojován s nádorovými metastázami. CD163 plus TAM indukuje epiteliálně-mezenchymální přechod (EMT) a podporuje migraci rakovinných buněk [22]. Výsledky této studie naznačují, že extrakt z Cistanche deserticola deserticola hraje roli v regulaci imunity do určité míry tím, že inhibuje expresi Arg-1 a CD163, povrchových markerů makrofágů podobných M2-, a inhibici polarizace makrofágů typu M2-. PPAR Je to metabolický senzor, který reguluje homeostázu lipidů prostřednictvím aktivace různých mastných kyselin a derivátů mastných kyselin (jako je kyselina palmitová) [23]. PPAR V souvislosti s M2 polarizací makrofágů, PPAR Stal se hlavním regulátorem M2 polarizace v makrofázích [24]. Bylo prokázáno, že PPAR Ligandy mají silné inhibiční účinky na růst nádoru in vivo [25]. Fizz1 a Ym1 jsou oba makrofágové markerové geny podobné M2- a Fizz1 a Ym1 se podílejí na fibróze během opravy tkáně [26]. Makrofágy podobné M2-produkují velké množství CCL24 in vitro [27] a zvýšená exprese CCL24 může podporovat proliferaci, migraci a invazi nádoru [28]. IRF4 je členem rodiny IRF. Účastní se M2 polarizačního procesu makrofágů a působí jako negativní regulátor signálů Toll-like receptorů tím, že se kombinuje s molekulou adaptéru MyD88 [29]. MGL2 je členem rodiny makrofágů lektinů typu C galaktózy typu C a je také exprimován v makrofázích stimulovaných za alternativních aktivačních podmínek [30]. Výsledky této studie ukazují, že extrakt z Cistanche deserticola deserticola inhibuje M2 podobný gen související s makrofágy PPAR. Exprese Fizz1, Ym1, CCL24, IRF4 a MGL2 inhibuje polarizaci makrofágů typu M2, což naznačuje, že Epimedium může sloužit jako účinný inhibitor makrofágů podobných M2. Stále více důkazů naznačuje, že makrofágy podobné M{41}} mohou podporovat metastázy a růst rakoviny [31]. Kondicionovaná média z makrofágů podobných M2-u mohou simulovat mikroprostředí nádoru a indukovat migraci a růst nádoru, což je podobné makrofágům izolovaným z maligních nádorů [12]. IL-4 může podporovat polarizaci makrofágů směrem k typu M2 a podporovat proliferaci nádoru a angiogenezi [18]. Tato studie prokázala korelaci mezi polarizací makrofágů a protinádorovým účinkem Cistanche deserticola deserticola. Kondicionovaná média z makrofágů aktivovaných IL-4-podporovala migraci a růst buněk 4T1 a po společné intervenci s Cistanche deserticola zvrátila tento M2-aktivovaný účinek na podporu nádorů, což naznačuje, že IL{{55} Aktivovaná polarizace M2 byla eliminována pomocí Cistanche deserticola.

Tato studie prokázala korelaci mezi polarizací makrofágů a protinádorovým účinkem Cistanche deserticola deserticola. Kondicionované médium z IL-4-aktivovaných makrofágů podporovalo migraci a růst buněk 4T1 a po společné intervenci s Cistanche deserticola zvrátilo tento M2-aktivovaný tumor-podporující efekt, což naznačuje, že IL{{7} Aktivovaná polarizace M2 byla eliminována Epimedium. Tato studie zjistila, že extrakt Cistanche deserticola inhibuje migraci buněk a tvorbu kolonií rakoviny prsu regulací polarizace makrofágů in vitro, což naznačuje, že léčba rakoviny prsu Cistanche deserticola může souviset s regulací mikroprostředí tumoru a Epimedium může působit jako regulátor mikroprostředí nádoru v místě metastázy ovlivněním makrofágů, což poskytuje nové poznatky o mechanismech protinádorové funkce Cistanche deserticola, odhaluje nový potenciální mechanismus Cistanche deserticola pro léčbu rakoviny, který může pomoci snížit míru výskytu rakovina a úmrtnost související s rakovinou. V budoucnu bude výzkumný tým dále zkoumat účinek Cistanche deserticola na růst a metastázy rakoviny prsu po inhibici M2 polarizace makrofágů in vivo, aby dále vysvětlil protinádorový mechanismus Cistanche deserticola a poskytl základ pro klinickou aplikaci Cistanche deserticola v léčbě nádorových onemocnění.

Reference

Reference

[1] Spolupracovníci GBD 2019 pro rizikové faktory rakoviny. Globální zátěž rakovinou, kterou lze připsat rizikovým faktorům, 2010-19: Systematická analýza pro studii Global Burden of Disease 2019 [J]. Lancet, 2022, 400(10352): 563-591.

[2] Yin L, Duan JJ, Bian XW a kol. Triple-negativní molekulární subtypování a postup léčby [J]. Breast Cancer Res, 2020, 22(1): 61.

[3] Medeiros B, Allan A L. Molekulární mechanismy metastáz rakoviny prsu do plic: Klinické a experimentální perspektivy [J]. Int J Mol Sci, 2019, 20(9): 2272.

[4] Pathria P, Louis TL, Varner J A. Targeting tumor-associated macrophages in cancer [J]. Trends Immunol, 2019, 40(4): 310-327.

[5] Shen MJ, Chen YB, Xu LJ a kol. Zvýšená infiltrace makrofágů do buněk radiorezistentního karcinomu plic přispívá k rozvoji další rezistence nádorových buněk vůči cytotoxickým účinkům NK buněk [J]. Int J Oncol, 2018, 53(1): 317-328.

[6] Tariq M, Zhang JQ, Liang GK a kol. Polarizace makrofágů: Protirakovinné strategie zaměřené na makrofágy spojené s nádorem u rakoviny prsu [J]. J Cell Biochem, 2017, 118(9): 2484-2501.

[7] Ma Li Účinky glykosidu Cistanche deserticola na faktor odvozený od stromálních buněk-1 (SDF-1) a jeho receptor CXCR-4 u potkanů ​​s akutním infarktem střední mozkové tepny [D] Nanjing : Univerzita čínské medicíny Nanjing, 2014

[8] Hao Fuliang Účinek a mechanismus glykosidu Cistanche deserticola na opravu a hojení defektů králičí lebky [D] Shijiazhuang: Hebei Medical University, 2013

[9] He J, Zang SL, Liu N a kol. Polysacharidy Epimedium zmírňují hematotoxicitu snížením oxidačního stresu a posílením imunitní funkce u myšího modelu selhání kostní dřeně vyvolaného benzenem [J]. Biomed Pharmacother, 2020, 125: 109908.

[10] Hua Ciyi, Shi Youyang, Xie Ying, et al Pokrok ve výzkumu mechanismu Cistanche deserticola Aktivní složka v léčbě rakoviny prsu [J] Chinese herbal medicine, 2022, 53 (20): 6593-6600

[11]Chen Xiaolei, Tang Lijian, Li Qinglin Studie o antiproliferaci buněk rakoviny prsu pomocí Cistanche deserticola a extraktů z frazil in vitro [J] China Pharmacy, 2007, 18 (15): 1124-1127

[12] Xu F, Cui WQ, Wei Y, a kol. Astragalosid IV inhibuje progresi rakoviny plic a metastázy modulací polarizace makrofágů prostřednictvím signalizace AMPK [J]. J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1): 207.

[13] Britt KL, Cuzick J, Phillips KA. Klíčové kroky pro účinnou prevenci rakoviny prsu [J]. Nat Rev Cancer, 2020, 20(8): 417-436.

[14] Hao Feifei, Tian Sisheng Průzkum „následování jinu dominantního jangu“ v metastázách maligních nádorů na základě teorie zplyňování [J] Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2021, 32 (1): 164-166

[15] Denk D, Petrocelli V, Conche C, et al. Expanze T paměťových kmenových buněk s vynikající protinádorovou imunitou mitofágií indukovanou urolitinem A [J]. Imunita, 2022, 55(11): 2059-2073.

[16] Hinshaw DC, Shevde LA. Mikroprostředí nádoru přirozeně moduluje progresi rakoviny [J]. Cancer Res, 2019, 79(18): 4557-4566.

[17] DeNardo DG, Ruffell B. Makrofágy jako regulátory nádorové imunity a imunoterapie [J]. Nat Rev Immunol, 2019, 19(6): 369-382.

[18] Dong R, Gong YL, Meng W a kol. Účast inhibice polarizace makrofágů M2 v chemopreventivních účincích na rakovinu tlustého střeva zprostředkovaných fenretinidem [J]. Cancer Lett, 2017, 388: 43-53. [19] Jiménez-Garcia L, Herránz S, Luque A, et al. Kritická role p38 MAPK v IL-4-indukované alternativní aktivaci peritoneálních makrofágů [J]. Eur J Immunol, 2015, 45(1): 273-286.

[20] Ma ZG, Lian J, Yang M, et al. Nadměrná exprese arginázy-1 je indikátorem špatné prognózy u pacientů s kolorektálním karcinomem [J]. Pathol Res Pract, 2019, 215(6): 152383.

[21] Tao SF, Chen Q, Lin C, a kol. Linc00514 podporuje metastázy rakoviny prsu a M2 polarizaci makrofágů asociovaných s nádorem prostřednictvím Jagged{4}}zprostředkované signální dráhy Notch [J]. J Exp Clin Cancer Res, 2020, 39(1): 191.

[22] Wei C, Yang CG, Wang SY a kol. Pro metastázy kolorektálního karcinomu zprostředkované mezenchymálními cirkulujícími nádorovými buňkami [J] je vyžadován přeslech mezi rakovinnými buňkami a makrofágy asociovanými s nádorem. Mol Cancer, 2019, 18(1): 64.

[23] Francque S, Szabo G, Abdelmalek MF, et al. Nealkoholická steatohepatitida: Úloha receptorů aktivovaných peroxisomovým proliferátorem [J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol, 2021, 18(1): 24-39.

[24] Tian Y, Yang CM, Yao QY a kol. Prokyanidin B2 aktivuje PPAR k indukci polarizace M2 v myších makrofázích [J]. Front Immunol, 2019, 10: 1895.

[25] Takada I, Makishima M. Agonisté a antagonisté receptoru aktivovaného peroxisomovým proliferátorem: Přehled patentů (přítomno 2014-) [J]. Expert Opin Ther Pat, 2020, 30(1): 1-13.

[26] Okuzumi S, Miyata J, Kabata H, et al. Agonista TLR7 potlačuje vrozený zánět zprostředkovaný lymfoidními buňkami skupiny 2 prostřednictvím IL-27-produkující intersticiální makrofágy [J]. Am J Respir Cell Mol Biol, 2021, 65(3): 309-318.

[27] Makita N, Hizukuri Y, Yamashiro K, et al. IL-10 zvyšuje fenotyp makrofágů M2 indukovaných IL-4 a propůjčuje schopnost zvýšit migraci eozinofilů [J]. Int Immunol, 2015, 27(3): 131-141.

[28] Jin L, Liu WR, Tian MX a kol. CCL24 přispívá k malignitě HCC cestou angiogeneze RhoB-VEGFA-VEGFR2 a ukazuje na špatnou prognózu [J]. Oncotarget, 2017, 8(3): 5135-5148.

[29] Satoh T, Takeuchi O, Vandenbon A, et al. Osa Jmjd3-Irf4 reguluje polarizaci makrofágů M2 a reakce hostitele proti helmintové infekci [J]. Nat Immunol, 2010, 11(10): 936-944.

[30] Raes G, Brys L., Dahal BK a kol. Makrofágové lektiny galaktózy typu C jako nové markery pro alternativně aktivované makrofágy vyvolané parazitárními infekcemi a alergickým zánětem dýchacích cest [J]. J Leukoc Biol, 2005, 77(3): 321-327.

[31] Mantovani A, Allavena P, Sica A, et al. Zánět související s rakovinou [J]. Příroda, 2008, 454(7203): 436-444.