Studie řezů Cistanche Deserticola a parou zpracovaného vína z Cistanche Deserticola

Rozdíl mezi chemickými složkami a biologickými aktivitami plátků surových produktů a parou zpracovaných vín od Cistanche

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Ying Zhang,1,2 Yuewu Wang,3 Song Yang,1 Yunfeng Xiao,3 Haibin Guan,2 Xin Yue,2 Xiaoqin Wang,2 a Xiangri Li 1

Abstraktní

Jako známá čínská bylinná medicína jeCistanche deserticolase v Číně používá k léčbě syndromu nedostatku ledvin po tisíce let. Oba surový produktPlátky Cistanche deserticola(RCD) a jehoVíno parou zpracovaný produkt(WSCD) se klinicky používají pro různé účinky. V této studii vlivy procesu napařování s vínem (SPW) zCistanche deserticolana chemické složení a biologické účinky byly zkoumány. Ke studiu rozdílů v chemickém složení byla použita analýza hlavních složek (PCA) a kvantitativní analýza. Byly také zkoumány účinky výživy ledvin, aby se porovnaly rozdíly mezi RCD (plátky Cistanche deserticola)a WSCD (Víno parou zpracovaný produkt). Výsledky PCA ukázaly, že v RCD bylo dosaženo zřejmé separace(plátky Cistanche deserticola)a WSCD (Víno parou zpracovaný produkt). Výsledky kvantitativní analýzy ukázaly, že WSCD má vyšší množství celkových polysacharidů, celkových PhG, isoakteosidů a osmanthusidu B než RCD.(plátky Cistanche deserticola), zatímco obsah 2'-acetylakteosidu a akteosidu se po SPW snížil. Srovnání RCD a WSCD na biologických aktivitách ukázalo, že oba by mohly obnovit hladinu pohlavního hormonu v modelu deficitu ledvin-yang a zlepšit antioxidační účinek. WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byl mnohem lepší ve zvyšování hmotnosti vnitřnostíledvinaa semenný váček. Výsledky ukázaly, že SPW změnil své chemické složky a zvýšil své biologické aktivity.

1. Úvod

Cistanche deserticolaje běžná tradiční čínská medicína a v Číně a Japonsku se po mnoho let obecně používá jako tonikum, běžně známé jako "Pouštní ženšen."Cistanche deserticolabyla poprvé zaznamenána jako nejvyšší stupeň v „Shennong's Herbal Classic of Materia Medica (Shen Nong Ben Cao Jing)“ asi v roce 100 př. n. l. a používala se k léčbě různých nemocí včetně nedostatku ledvin, impotence, ženské neplodnosti, chorobné leukorey, hojné metroragie (bílí) , pocit chladu v bedrech a kolenou a chronická zácpa u starších osob [1]. Dosud bylo izolováno několik hlavních složek, jako jsou polysacharidy [2, 3], fenylethanoidové glykosidy (PhGs) [1, 4], iridoidy [1] a lignanoidy [1, 5]. Mezi nimi se ukázalo, že hlavními biologicky aktivními složkami jsou PhGs a polysacharidyCistanche deserticola[6–9]. Moderní farmakologické experimenty prokázaly, že Cistanche deserticola může zvýšit produkci testosteronu a chránit spermie, stimulovat buněčnou proliferaci a zvýšit míru přežití buněk, vykazuje výrazné aktivity pro sexuální potenci, zlepšuje paměť, působí proti stárnutí, vychytává volné radikály a neuroprotekci [10] –13].

Aby se snížila toxicita a/nebo zvýšily účinky, většina tradičních čínských bylin by měla být zpracována před předpisem. Tradiční kroky procesu zahrnují čištění, vodní proces (mletí ve vodě, napařování a opékání) a proces ohně (zahřívání s vínem, octem, solí nebo medem) [14]. Během procesu se mohou měnit chemické složky: může se měnit relativní obsah určitých složek nebo mohou vznikat nové složky [15]. ProcesCistanche deserticolamá dlouhou historii aCistanche deserticolaby měly být zpracovány namáčením v rýžovém víně, vařením v páře, jak je popsáno v čínském lékopisu (vydání 2015) [16]. Bylo prokázáno, že SPW ovlivňuje jejich účinky na meridián ledvin podle teorie tradiční čínské medicíny (TCM) [17]. WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)je poprvé zdokumentována v „Lei Gongs Traatise on Preparation and Varing of Materia Medica (Lei Gong Pao Zhi Lun)“ v severní a jižní dynastii Číny. WSCD se lépe používá k léčbě nedostatků ledvin a ochraně spermatu, jak je zaznamenáno v „Taiping Shenghui Fang“ v dynastii Song v Číně. Nebyly však provedeny žádné srovnávací studie chemických složek mezi RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)zatím.

Moderní farmakologické výzkumy ukázaly, že WSCD by mohla tonizovat ledviny, aby zajistila esenci stimulací osy hypotalamus-hypofýza-gonáda v různé míře a používá se k léčbě deficitu ledvin, jako je deficit ledvin-yang [18]. Nicméně, až do současnosti, rozdíly v biologických aktivitách mezi RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)nebyly prozkoumány. V poslední době, aby se usnadnil experimentální výzkum, byl zvířecí model s nedostatkem ledvin-yang duplikován injekčním podáním vysoké dávky hydrokortizonu potkanům, kdy potkani vykazovali příznaky velmi podobné těm, které byly popsány u deficitu ledvin-yang TCM [19, 20] . Potkani s nedostatkem jangu ledvin mají vždy nějaké příznaky, jako je úbytek hmotnosti, snížení spotřeby potravy, slabost, zvýšený příjem vody a snížená aktivita. Na základě tohoto zvířecího modelu byly zjištěny rozdíly ve vyživujících účincích na ledviny mezi RCD a WSCD a dokonce odhalily vědeckou podstatu tradičního čínského procesu.

Cistanche deserticola má mnoho funkcí

2. Materiály a metody

2.1. Materiály a chemikálie

Standardní látka, jako je akteosid, isoakteosid, echinakosid, cistanosid A a 2'-acetylakteosid, byla zakoupena od Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (Shanghai, Čína). Cistanosid F, cistanosid C, osmanthusid B a tubulosid B byly zakoupeny od Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (Chengdu, Čína). Čistota všech standardů nebyla nižší než 98 procent. Methanol a acetonitril čistoty pro HPLC byly zakoupeny od Aladdin Chemistry Inc. (Shanghai, Čína). Deionizovaná voda byla získána pomocí systému MilliQ50 SP Reagent Water System (Bedford, MA, USA) pro přípravu vzorků a mobilních roztoků. Všechna ostatní organická rozpouštědla použitá v této studii byla analytické čistoty a byla zakoupena od Shanghai Chemical Co. Ltd (Shanghai, Čína).

2.2. Sbírka vzorků

Všechno syrovéCistanche deserticola(7 šarží vzorků) odebrala Inner Mongolia Medical University z provincií Vnitřní Mongolsko a Ningxia. Všichni byli identifikováni jakocistanche deserticolaYC Ma od Xiao-qin Wanga, profesora katedry farmakognózie na Lékařské univerzitě Vnitřního Mongolska. Vzor voucheru byl uložen na Farmaceutické fakultě Lékařské univerzity ve Vnitřním Mongolsku. Po sběru se květenství zCistanche deserticolabyly odstraněny, stonky byly nakrájeny a sušeny při pokojové teplotě vzduchem a poté byly plátky náhodně rozděleny do dvou skupin v každé dávce: jedna je RCD(plátky Cistanche deserticola)a druhý se používá pro přípravu WSCD(Víno parou zpracovaný produkt).

WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byly připraveny v laboratoři podle čínského lékopisu (vydání 2015) [16], což znamená, že nakrájený RCD(plátky Cistanche deserticola)byly namočeny v rýžovém víně s uzavřenou nádobou po dobu 6 hodin do změknutí, napařeny ve vodní lázni dalších 12 hodin, dokud povrch nezčernal, a sušeny při teplotě místnosti vzduchem.

2.3. Analýza hlavních komponent (PCA)

Analýza hlavních komponent (PCA) je sofistikovaná technika široce používaná pro redukci dimenzí vícerozměrných problémů. Snižuje rozměrnost původního souboru dat tím, že vysvětluje korelaci mezi velkým počtem proměnných ve smyslu menšího počtu základních faktorů bez významné ztráty informací. V této studii jsou rozdíly mezi RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byly provedeny pomocí PCA bez dozoru pomocí softwaru SIMCA 13.0 založeného na relativních plochách píku v HPLC chromatografii. Pomocí PCA byly zjištěny hlavní vlivy chemikálií na klasifikaci mezi různými vzorky.

2.4. Příprava vzorků

2.4.1. Příprava extraktu pro zvířata

RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byly vybrány ze vzorků odebraných a připravených podle popisu v části 2.2.

Vzduchem sušený a nakrájený RCD(plátky Cistanche deserticola)byla rozdrcena na prášek v drtiči (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), přesně zvážena 1.0 kg a namočena v 50% etanolu po dobu 30 minut, přičemž použité poměry rostlina/etanol byly 1/ 10 (w/w). A poté byla extrahována pod refluxem dvakrát pokaždé po dobu 1 hodiny. Dva extrakty byly spojeny a filtrovány a ethanol byl izolován za sníženého tlaku při 60 °C. Celkový surový extrakt PhGs byl sušen ve vakuu při 60 °C a čištěn makroporézní pryskyřicí. Nakonec byl získán a přesně zvážen extrakt PhGs RCD.

PhGs extrakt z WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byl získán podle stejného postupu výše.

Sedimenty z extrakce PhG byly sušeny na vzduchu a odvařeny dvakrát po dobu 1,5 hodiny pokaždé s 20krát vodou. Dva extrakty byly spojeny a odstřeďovány při 4000 otáčkách za minutu po dobu 10 minut a supernatant byl zakoncentrován a vysrážen 95% ethanolem. Po odstředění byla sraženina sušena ve vakuu při 60 stupních. Nakonec polysacharidový extrakt RCD(plátky Cistanche deserticola)byl získán a přesně zvážen.

Polysacharidový extrakt WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byl získán podle stejného postupu výše.

PhGs a polysacharidové extrakty RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byly smíchané suspenze ve vodě, v tomto pořadí, když byly krysy léčeny orálně.

2.4.2. Příprava vzorku pro stanovení PhGs

Extrakty PhGs v části 2.4.1 byly přesně zváženy jako 0,15 g a extrahovány ultrazvukem s 50 ml 50% vodného roztoku methanolu po dobu 40 minut. Po ochlazení byl úbytek hmotnosti doplněn 50% methanolem. Všechny vzorky a rozpouštědla byly před analýzou filtrovány přes 0,45 μm membránu. Obsah čtyř PhG v RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byla stanovena pomocí HPLC a celkové PhG byly stanoveny pomocí UV spektrofotometrie.

2.4.3. Příprava vzorku pro stanovení polysacharidu

Polysacharidové extrakty v části 2.4.1 byly přesně zváženy jako 0,10 g a extrahovány ultrazvukem s 50 ml horké vody po dobu 40 minut; po vychladnutí byl úbytek hmotnosti doplněn vodou. Všechny vzorky a rozpouštědla byly před analýzou filtrovány přes 0,45 μm membránu.

2.5. Chromatografické podmínky HPLC a stanovení čtyř PhG

Chromatografická separace byla provedena v systému UltiMate 300{{40}} HPLC (Thermo Fisher Scientific, USA), vybaveném duálním gradientovým čerpadlem, oddílem pro kolonu a detektor DAD. Data byla shromážděna a zpracována pomocí ChromeLeon Chromatography Data System. Vzorky byly separovány na Agilent Zorbax SB-C18 (250mm×4,6 mm, 5 μm) s ochrannou kolonou C18 (4,6 mm×12,5 mm, 5 μm). Mobilní fáze se skládala z acetonitrilu (A) a 0,1% roztoku kyseliny fosforečné (B) při průtoku 1 ml/min. Gradientová eluce je následující: počáteční 0–13 min, lineární změna od AB (5:95, obj./obj.) až AB (15:85, obj./obj.); 13–25 min, lineární změna na AB (20:80, v/v); 25–43 min, lineární změna na AB (25:75, v/v). Vlnová délka detektoru byla monitorována při 330 nm. Teplota kolony byla nastavena na 30 stupňů a vstřikovaný objem vzorku byl 10 μl [21]. Zásobní roztok obsahující čtyři referenční standardy byl připraven rozpuštěním referenčních standardů v 50% methanolu na konečnou koncentraci 0,20 mg/ml pro 2-acetylakteosid, 0,20 mg/ml pro akteosid, 0,05 mg/ml pro osmanthusid B, a 0,10 mg/ml pro isoakteosid. Roztok byl poté zředěn na pět různých koncentrací se třemi opakováními, aby se vytvořily kalibrační křivky. Obsah vzorku byl vyjádřen v g/kg surové hmotnosti.

Studie plátků Cistanche deserticola a vinný parou zpracovaný produkt z Cistanche deserticola

2.6. Stanovení celkových PhGs

Celkové PhG byly stanoveny pomocí metody UV spektrofotometrie při vlnové délce 330nm ve spektrofotometru UV1000 (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). Zásobní roztok byl připraven rozpuštěním echinakosidových standardů v 50% methanolu na konečnou koncentraci 0,10 mg/ml a poté zředěn na pět různých koncentrací se třemi replikáty, aby se vytvořily kalibrační křivky.

2.7. Stanovení polysacharidů

Stanovení polysacharidů bylo provedeno metodou fenol-kyselina sírová. 1 ml roztoku vzorku byl vložen do 20 ml zkumavky se skleněnou zátkou a byl přidán 1 ml 6% roztoku fenolu a 5 ml koncentrované kyseliny sírové a třepáno po dobu 5 minut. Směs byla přenesena na 10 minut do vroucí vodní lázně a ochlazena na teplotu místnosti pro ultrafialovou detekci. Absorpce ultrafialového záření byla monitorována při 480 nm ve spektrofotometru UV1000. Referenční standard bezvodé D-glukózy byl přesně zvážen a rozpuštěn v destilované vodě na konečnou koncentraci 0,10 mg/ml. Poté byl roztok zředěn na pět různých koncentrací se třemi opakováními, aby se vytvořily kalibrační křivky.

2.8. Pokusy na zvířatech

2.8.1. Zvířata a bydlení

Pohlavně dospělí samci SD potkanů ​​(180-200 g) byli zakoupeni od Xinglong (Beijing) Experimental Animal Farm (stáří: 6 týdnů) a licence pro laboratorní zvířata byla SCXK (Jing):2016-0003. Všechny postupy na zvířatech byly schváleny Výborem pro výzkum zvířat Inner Mongolia Medical University a byly prováděny podle pokynů Národního institutu zdraví týkajících se zásad péče o zvířata (2004). Všechna zvířata byla držena v bariérovém systému s regulovanou teplotou 21–23 stupňů a relativní vlhkostí 40–65 procent a v cyklu tma/světlo 12 hodin. Krysy dostaly ad libitum jídlo a vodu a aklimatizovaly se na výše uvedené prostředí po dobu jednoho týdne.

2.8.2. Dávkování a odběr vzorků

Krysy byly přeneseny do jednotlivých metabolických klecí a náhodně rozděleny do 6 skupin (= 10 v každé skupině). Dostali intramuskulární injekci 15 mg/kg hydrokortison sukcinátu sodného (zakoupeného od Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin, Čína) po dobu 2 týdnů s výjimkou skupiny 1, které byl injikován stejný objem fyziologického roztoku. 14. den byla shromážděna tělesná hmotnost, spotřeba potravy, příjem vody, objem moči a spontánní aktivita během 5 minut, aby se ověřilo, zda byl model deficitu ledvin-yang úspěšně vytvořen. Od 15. dne bylo 6 skupin léčeno následovně: skupina 1 a skupina 2 (modelová skupina, M) byla ošetřena stejným objemem destilované vody, skupina 3 (extrakt PhGs z RCD(plátky Cistanche deserticola)skupina, PR) byly ošetřeny 0,42 g/kg PhGs extraktem RCD, což se rovnalo přibližně 1,8 g/kg surovéhoCistanche deserticolaa ostatní skupiny byly stejné, skupina 4 (PhGs extrakt z WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)skupina, PW) byla ošetřena dávkou 0,49 g/kg PhGs extraktu WSCD(Víno parou zpracovaný produkt), skupina 5 (polysacharidový extrakt RCD(plátky Cistanche deserticola)skupina, SR) byla ošetřena 0,18 g/kg polysacharidového extraktu RCD a skupina 6 byla (polysacharidový extrakt WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)skupina, SW) byla ošetřena dávkou 0,22 g/kg polysacharidového extraktu WSCD. Všechny krysy byly léčeny žaludeční perfuzí za den. Po měsíční léčbě byla krysám odepřena potrava po dobu 12 hodin před odběrem krve. Následující den byly všechny krysy anestetizovány a usmrceny. Během testování byly krysy váženy jednou týdně pro úpravu dávkování a znovu zváženy před utracením. Vzorky krve byly odebrány do zkumavky Eppendorf s 10% roztokem EDTA-2Na. Sérum bylo odděleno centrifugací při 2000 ot./min po dobu 15 minut a skladováno při -80 stupni pro další použití. Kromě toho byly ledviny, varlata, nadvarlata, prostata a semenný váček odstraněny a rychle zváženy. Po zvážení byla varlata zmražena v kapalném dusíku pro stanovení SOD a MDA.

2.9. Analýza hormonů a antioxidačních účinků

Hladina testosteronu (T) a estradiolu (E2) byla stanovena v Qingdao Kechuang Quality Inspection Center radioimunitní a kolorimetrickou metodou. Zmrazená varlata byla zvážena a smíchána s 20krát studeným fyziologickým roztokem (W/W). Homogenát varlat získaný tkáňovým homogenátem v ledové lázni byl centrifugován, aby se získal supernatant. Obsah SOD a MDA varlete byl stanoven pomocí souprav SOD a MDA podle pokynů.

2.10. Statistická analýza

Významnost rozdílů mezi skupinami byla porovnána pomocí jednocestného testu ANOVA následovaného Scheffeovým testem s limitem významnosti 0.05 pomocí softwaru SPSS 25.0. Všechna data byla vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka (SD) (n=3).

3. Výsledky

3.1. Analýza změn PhGs po SPW pomocí PCA

Pro srovnání změn PhGs po SPW bylo vybráno 9 chromatografických píku jako charakteristické píky a byly identifikovány. Jejich struktury byly ukázány na obrázku 1, jejichž relativní plochy píku byly vypočteny pro kvantitativní expresi. HPLC chromatogram znázorněný na obrázku 2, který ukazuje, že relativní obsah hlavních PhG se během SPW měnil. PCA analýza na relativních plochách píku 9 složek byla získána pro rozlišení různých vzorků. RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byly daleko od sebe v grafu skóre (obrázek 3(a)), což ukazuje, že vzorky byly klasifikovány do dvou shluků. Předpokládá se tedy, že obsahy chemických složek byly různé. K dalšímu nalezení potenciálních chemických markerů pro diskriminaci byla provedena rozšířená statistická analýza za účelem vytvoření diagramu zatížení Bi (obrázek 3(b)). Vrcholy 2, 3, 4, 6 a 7 se po SPW sníží, zatímco vrcholy 5, 8 a 9 se zvýší, a všechny byly nejdůležitějšími složkami pro rozlišení RCD.(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt). Relativní obsahy píku 1 se po SPW příliš nemění.

Obrázek 1 Chemické struktury PhGs vCistanche deserticolaYC Ma.

Obrázek 2 HPLC chromatogram standardní látky (a), RCD(plátky Cistanche deserticola)b) a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)(C). Vrcholy: (1) cistanosid F, (2) echinakosid, (3) cistanosid A, (4) akteosid, (5) isoakteosid, (6) cistanosid C, (7) 2'-acetylakteosid, (8) osmanthusid B a (9) tubulosid B.

Obrázek 3 graf skóre PCA (a) a graf zatížení Bi (b) RCD(plátky Cistanche deserticola)(zelený kruh) a WSCD (červený kruh). RCD a WSCD byly klasifikovány do dvou skupin. Píky 2, 3, 4, 6 a 7 jsou nejdůležitější komponenty pro rozlišení RCD a WSCD, které se během SPW sníží; píky 5, 8 a 9 jsou také nejdůležitějšími složkami pro rozdíly mezi RCD a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt), která se bude během SPW zvyšovat.

3.2. Obsah celkových polysacharidů a PhG se po SPW změnil

Jak je znázorněno na obrázku 3(b), 8 složek (5, 8 a 9 se zvýšilo a 2, 3, 4, 6 a 7 se snížilo) se významně změnilo a mělo velký dopad na shlukování vzorků. Mezi nimi se nejvíce zvýšil isoakteosid a Osmanthusid B, zatímco nejvíce poklesly 2'-acetylakteosid a akteosid. Obsah isoakteosidu, Osmanthusidu B, 2'-acetylakteosidu a akteosidu byl tedy stanoven pomocí HPLC. Jak je znázorněno na obrázku 1, pík 4 byl akteosid, pík 5 byl isoakteosid, pík 7 byl 2'-acetylakteosid a pík 8 byl osmanthusid B. Celkové PhGs v RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byly stanoveny pomocí UV metody a celkové polysacharidy byly stanoveny pomocí metody fenol-kyselina sírová, výsledky jsou uvedeny v tabulce 1, isoakteosid, osmanthusid B, celkové polysacharidy a PhG ve WSCD se významně zvýšily ve srovnání s RCD. 2'-acetylakteosid a akteosid se významně snížily.

Tabulka 1 Obsahy polysacharidů a PhG v RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)(mg/g) (n=3).

Poznámka. Významné rozdíly oproti RCD(plátky Cistanche deserticola)byly označeny jako *p < 0.05.

3.3. Byl vytvořen hydrokortisonem indukovaný model ledviny a jangového deficitu

Ve srovnání s normální skupinou se po 2 týdnech intramuskulární injekce 15 mg/kg hydrokortison sukcinátu sodného významně snížila tělesná hmotnost, spotřeba potravy a spontánní aktivita (P<0.05) and="" the="" water="" intake="" and="" urine="" volume="" were="" increased;="" the="" results="" were="" shown="" in="" table="" 2.="" the="" t="" and="" e2="" levels="" in="" the="" serum="" of="" the="" model="" group="" were="" lower="" than="" the="" normal="" group="" as="" shown="" in="" figure="" 4.="" from="" the="" above,="" the="" kidney-yang="" deficiency="" model="" was="" successfully="">

Tabulka 2 Indikátory se změnily po intramuskulární injekci hydrokortison sukcinátu sodného (n=10).

Poznámka. Významné rozdíly se skupinou N byly označeny jako^# p<>

Obrázek 4 Hladiny T a E2: (a) hladina T a (b) hladina E2. Významné rozdíly se skupinou M byly označeny jako^∗p < 0.05.="" významné="" rozdíly="" se="" skupinou="" n="" byly="" označeny="">^#p < 0.05.

3.4. Vliv extraktů na průměrnou hmotnost a index vnitřních orgánů

Všechny krysy a jejich vnitřnosti byly zváženy a poté byl vypočten průměrný index vnitřností.

Ve srovnání se skupinou N skupina M významně snížila hmotnosti vnitřností ledvin, semenných váčků, nadvarlat a varlat, což také naznačovalo, že model nedostatku ledvin a jangu vyvolaný hydrokortisonem byl úspěšně vytvořen. Ve srovnání se skupinou M se hmotnost všech pozorovaných vnitřností zvýšila ve skupině PW a SR, skupina PR měla zvýšenou hmotnost varlete, nadvarlete, semenného váčku a prostaty a skupina SW měla zvýšenou hmotnost ledvin, varlete, nadvarlete, a semenný váček. Ve srovnání se skupinami PR byla skupina PW lepší v oblasti ledvin, semenných váčků a prostaty. Mezi skupinami SR a SW nebyl signifikantní rozdíl v hmotnosti varlete, nadvarlete, semenného váčku a prostaty. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

Tabulka 3 Hmotnost vnitřností (g) (n=10).

Poznámka. Významné rozdíly se skupinou M byly označeny jako^∗p < 0.05.="" významné="" rozdíly="" se="" skupinou="" n="" byly="" označeny="">^#p < 0.05.

Ve srovnání se skupinou N byly ve skupině M sníženy viscerální indexy ledvin, varlete, nadvarlete a semenného váčku. Ve srovnání se skupinou M měly skupiny PW a SR zvýšený index ledvin, varlat, prostaty a semenných váčků, skupiny PR zvýšily index varlat, prostaty a semenných váčků a skupina SW měla zvýšil index ledvin, varlat a semenných váčků. Ve srovnání se skupinami PR byla skupina PW lepší v oblasti ledvin, semenných váčků a prostaty. Skupiny SW a SR měly podobný index ledvin, varlat, semenných váčků a nadvarlat. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.

Tabulka 4 Průměrný index vnitřních orgánů (g/100 g) (n=10).

Poznámka. Významné rozdíly se skupinou M byly označeny jako^∗p < 0.05.="" významné="" rozdíly="" se="" skupinou="" n="" byly="" označeny="">^#p < 0.05.

3.5. Vliv extraktu na hladinu hormonu (T a )

Jak je znázorněno na obrázku 4, ve srovnání se skupinou M se hladiny T a E2 ve všech léčených skupinách (skupina PW, PR, SW a SR) významně zvýšily (P<0.05). however,="" the="" pw="" group="" was="" better="" than="" the="" pr="" group="" at="" levels="" t="" and="" e2.="" the="" sr="" and="" sw="" groups="" had="" no="" significant="">

3.6. Vliv extraktů na antioxidační účinek

SOD je důležitý antioxidační enzym. MDA je produktem peroxidace lipidů, což je indikátor odrážející stupeň poškození oxidanty. Obsah SOD a MDA odráží rozsah oxidačních a antioxidačních schopností. Jak je znázorněno na obrázku 5, ve srovnání se skupinou M byl antioxidační účinek ve všech léčených skupinách (PW, PR, SW a SR) zesílen. Skupina SW měla největšíantioxidantúčinek.

Obrázek 5 Obsah MDA a SOD: (a) obsah MDA a (b) obsah SOD. Významné rozdíly se skupinou M byly označeny jako^∗p< 0.05.="" significant="" differences="" with="" the="" n="" group="" were="" designated="" as=""><>

4. Diskuze

Před klinickou aplikací by měly být surové materiály podrobeny tradičním čínským procesním technikám. Napařování je jedním z tradičních přístupů zpracování některých čínských léčivých bylin, které dává černou barvu produkovanou Maillardovou reakcí [22], čímž se zvyšuje množství některých bioaktivních složek [23] a farmakologické aktivity. WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)jako jeden z procesních produktů je lepší z hlediska výživy ledvin ve srovnání s RCD(plátky Cistanche deserticola)jak je dokumentováno ve vydání čínského lékopisu z roku 2015. V této studii výsledky PCA ukázaly, že SPW změnil chemický profil RCD(plátky Cistanche deserticola). Navíc se výrazně změnilo 8 složek v PhG. Nejvíce se zvýšily celkové PhG, celkové polysacharidy, isoakteosid a Osmanthuside B, zatímco 2'-acetylakteosid a akteosid se po SPW snížily. Výsledky ukázaly, že SPW může změnit chemické složky RCD(plátky Cistanche deserticola). Obsah PhGs s 1,3,4-trisubstituovanými glukopyranosylovými skupinami (jako je akteosid, 2'-acetylakteosid a cistanosid C) se u WSCD snížil(Víno parou zpracovaný produkt)koncentrace jejich izomerů s 1,3,5-trisubstituovanou glukopyranosylovou skupinou (jako je isoakteosid a tubulosid B) se však zvýšila, což naznačuje, že k transformaci chemických složek může dojít během SPW a hydrolytická reakce bude jednou z důvodů. Navrhované transformační cesty jsou znázorněny na obrázku 6. Nárůst polysacharidů po SPW byl také popsán u ženšenu [24].

Obrázek 6 Navrhované transformační dráhy PhGs v Cistanche deserticola YC Ma během SPW.

Cistanche deserticolabylo prokázáno, že povzbuzuje ledviny a zvrátit snížení hladiny testosteronu a má antioxidační účinek a protizánětlivý účinek [25], a PhGs a polysacharidy byly dvě hlavní biologicky aktivní složky v Cistanche deserticola. Jako PhGs měly isoakteosid a Osmanthuside B antioxidační a protizánětlivé účinky [26, 27]. Tedy srovnání farmakologických účinků na hladinu testosteronu a antioxidační účinek RCD a WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)byl studován. V modelu hydrokortisonem indukované deficience ledvin a jangu došlo k narušení endokrinního systému a výraznému snížení hladiny pohlavního hormonu v krvi. V této studii výsledky analýzy pohlavních hormonů ukázaly, že oba RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD mohly významně zvýšit hladinu T a E2 a jak PhG, tak polysacharidy prokázaly zlepšení pohlavních hormonů. WSCD bylo lepší než RCD(plátky Cistanche deserticola)zejména ve skupinách extraktu PhGs. Výsledky indexů vnitřních orgánů ukázaly, že jak PhG, tak polysacharidy mohou zlepšit hmotnosti vnitřních orgánů a jejich indexy hmotnosti. Ve skupinách extraktu PhGs, WSCD(Víno parou zpracovaný produkt)je lepší než RCD ve zvyšování hmotnosti a indexů ledvin a semenných váčků. navícCistanche deserticolamá výrazný antioxidační účinek, zejména skupiny extraktu polysacharidů s WSCD. Jak bylo uvedeno výše, oba RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD by mohly zlepšit syndrom nedostatečnosti ledvin a jangu; nicméně WSCD je lepší než RCD ve zvyšování hladiny T, E2, hmotností a indexů nadvarlat a varlat. Výsledky studie farmakologických účinků ukázaly, že SPW změnil chemické složky PhG a zvýšil obsah polysacharidů, což následně zvýšilo hladinu pohlavních hormonů a zvýšiloantioxidantúčinek.

5. Závěr

Studie měla objevit změnu PhG, celkových polysacharidů a farmakologický účinek u RCD(plátky Cistanche deserticola)a WSCD na potkanech s nedostatkem ledvin a jang, zejména na hormonální hladinu a antioxidační účinek. Tato studie prokázala, že proces tradičních čínských bylin může změnit jejich chemické složky a ovlivnit jejich biologickou aktivitu. Je také podporováno, že surové produkty a zpracované produkty byly na klinice předepisovány odlišně.

Dostupnost dat

Údaje použité k podpoře zjištění této studie jsou na vyžádání k dispozici od odpovídajícího autora.

Střet zájmů

Autoři prohlašují, že nejsou ve střetu zájmů.

Příspěvky autorů

Ying Zhang a Song Yang navrhli experimenty. Ying Zhang, Yuewu Wang a Yunfeng Xiao provedli odběr a přípravu vzorků. Ying Zhang analyzovala data a vypracovala dokument. Xiangri Li a Xiaoqin Wang byli zodpovědní za dohled nad studiem. Všichni autoři se podíleli na psaní a poskytování zpětné vazby k práci. Všichni autoři si přečetli a schválili závěrečnou práci.

Poděkování

Tato práce byla podpořena granty z Postupů zpracování připravených plátků čínských surových drog (č. YP-PZ-2014). Zvláštní poděkování patří Wenjia Qu a Tianying Jia za jejich velkou pomoc při shromažďováníCistanche deserticola.

Reference

1. Y. Jiang a P.-F. Tu, "Analýza chemických složek u druhů Cistanche," Journal of Chromatography A, sv. 1216, č.p. 11, s. 1970–1979, 2009.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

2. W. Zhao, H. Yan, Z.-Y. Liang, Y.-J. Zhang a X.-Q. Jiao, "Strukturální analýza ve vodě rozpustného polysacharidu SPA izolovaného ze stonkuCistanche deserticolaMa," Chemical Journal of Chinese Universities, sv. 26, č. 3, s. 461–463, 2005.

Zobrazit na: Google Scholar

3. Q. Dong, J. Yao, J.-N. Fang a K. Ding, „Strukturální charakterizace a imunologická aktivita dvou polysacharidů extrahovaných studenou vodou zCistanche deserticolaYC Ma," Carbohydrate Research, sv. 342, č. 10, s. 1343–1349, 2007.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

4. X.-M. Wu a P.-F. Tu, "Izolace a charakterizace -(1→6)-glukanů zCistanche deserticola"Journal of Asian Natural Products Research, sv. 7, č. 6, s. 823–828, 2005.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

5. B. Košíková, A. Ebringerová a R. Naran, „Charakterizace lignin-sacharidových frakcí izolovaných z parazita dřevaCistanche deserticolaYC Ma.," Holzforschung, sv. 53, č. 1, s. 33–38, 1999.

Zobrazit na: Google Scholar

6. G. Sheng, X. Pu, L. Lei, P. Tu a C. Li, „Tubulosid B z Cistanche salsa zachraňuje neuronální buňky PC12 před 1-methyl-4-fenylpyridiniovými ionty indukovanými apoptóza a oxidační stres," Planta Medica, sv. 68, č.p. 11, s. 966–970, 2002.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

7. M. Deng, J.-Y. Zhao, X.-D. Ju, P.-F. Tu, Y. Jiang a Z.-B. Li, "Ochranný účinek tubulosidu B na TNF alfa-indukovanou apoptózu v neuronálních buňkách," Acta Pharmacologica Sinica, sv. 25, č. 10, s. 1276–1284, 2004.

Zobrazit na: Google Scholar

8. X. Geng, L. Song, X. Pu a P. Tu, "Neuroprotektivní účinky fenylethanoidových glykosidů z Cistanches salsa proti 1-methyl-4-fenyl-1,2,3 ,6-tetrahydropyridinem (MPTP) indukovaná dopaminergní toxicita u myší C57," Biological & Pharmaceutical Bulletin, sv. 27, č. 6, s. 797–801, 2004.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

9. H. Chen, FC Jing, CL Li, PF Tu, QS Zheng a ZH Wang, „Echinakosid zabraňuje snížení striatálních extracelulárních hladin monoaminových neurotransmiterů u 6-krys s lézí hydroxydopaminu,“ Journal of Ethnopharmacology, sv. . 114, č.p. 3, s. 285–289, 2007.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

10 J. Pan, C. Yuan, C. Lin, Z. Jia a R. Zheng, "Farmakologické aktivity a mechanismy přírodních fenylpropanoidních glykosidů," Die Pharmazie, sv. 58, č.p. 11, s. 767–775, 2003.

Zobrazit na: Google Scholar

11. G. Fu, H. Pang a YH Wong, "Přirozeně se vyskytující fenylethanoidní glykosidy: Potenciální vedení pro nová léčiva," Current Medicinal Chemistry, sv. 15, č. 25, s. 2592–2613, 2008.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

12. X.-W. Wang, X.-F. Wang a L.-Y. Wu, „Zlepšení paměti myší na fenylethanoidní glykosidyCistanche deserticola“, Chinese Pharmacological Bulletin, č. 19, str. 41-42, 2002.

Zobrazit na: Google Scholar

13. J.-X. Xie a C.-F. Wu, "Účinek etanolového extraktu zCistanche deserticolao obsahu monoaminových neurotransmiterů v mozku krys," Čínské tradiční a bylinné drogy, č. 24, str. 417–419, 1993.

Zobrazit na: Google Scholar

14. H. Wu a C.-J. Hu, Čínská medicína Process Discipline, People's Medical Publishing House, Peking, Čína, 2012.

15. ZZ Zhao, ZT Liang, K. Chan a kol., "Jedinečný problém ve standardizaci čínské materia medica: zpracování," Planta Medica, sv. 76, č.p. 17, s. 1975–1986, 2010.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

16. Čínská lékopisná komise, Lékopis Čínské lidové republiky 2015, sv. IV, Lékopis Čínské lidové republiky, Peking, Čína, 2015.

17. J.-M. Chen, Enlightening Primer of Materia Medical, Tradiční čínská medicína Ancient Books Press, Peking, Čína, 2009.

18. B.-R. Li a Y.-C. Ona, "Účinky tonizujících léků na ledviny na osu hypotalamus-hypofýza-gonáda (HPG), Journal of Traditional Chinese Medicine, no. 7, s. 63–65, 1984.

Zobrazit na: Google Scholar

19. M. Chen, L. Zhao a W. Jia, "Metabonomická studie o biochemických profilech zvířecího modelu indukovaného hydrokortisonem," Journal of Proteome Research, sv. 4, č. 6, s. 2391–2396, 2005.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

20. Q. Chen a N.-Y. Yi, "Zvířecí modely a léky pro nedostatek jinu a jang", v Experimentální metodologii farmakologického výzkumu v tradiční čínské medicíně, People's Health Publishing House, Peking, Čína, 1993.

Zobrazit na: Google Scholar

21. Z.-G. Ma, Z.-L. Yang, P. Li a C.-H. Li, "Simultánní stanovení osmi fenylethanoidních glykosidů u různých druhů rodu Cistanche pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie," Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, sv. 31, č. 18, s. 2838–2850, 2008.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

22. Z. Liu, Z. Chao, Y. Liu, Z. Song a A. Lu, "Maillardova reakce zapojená do procesu napařování kořene Polygonum multiflorum," Planta Medica, sv. 75, č.p. 1, s. 84–88, 2009.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

23. W.-T. Chang, YH Choi, R. Van Der Heijden a kol., "Tradiční zpracování silně ovlivňuje složení metabolitů hydrolýzou v kořenech Rehmannia glutinosa," Chemical & Pharmaceutical Bulletin, sv. 59, č.p. 5, s. 546–552, 2011.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

24. Y. Jin, Y.-J. Kim, J.-N. Jeon a kol., "Účinek bílého, červeného a černého ženšenu na fyzikálně chemické vlastnosti a ginsenosidy," Plant Foods for Human Nutrition, sv. 70, č. 2, s. 141–145, 2015.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

25. T. Wang, X.-Y. Zhang a W.-Y. Xie,"Cistanche deserticolaYC Ma, 'desert Ginseng': A review," American Journal of Chinese Medicine, sv. 40, č. 6, s. 1123–1141, 2012.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

26. S.-Y. Nam, H.-Y. Kim, M.-S. Yoou a kol., "Protizánětlivé účinky isoacteosidu z Abelophyllum distichum," Immunopharmacology and Immunotoxicology, sv. 37, č.p. 3, s. 258–264, 2015.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

27. S. Chae, JS Kim, KA Kang a kol., "Antioxidační aktivita isoacteosidu z Clerodendron trichotomum," Journal of Toxicology and Environmental Health, část A. Current Issues, sv. 68, č.p. 5, s. 389–400, 2005.

Zobrazit na: Stránky vydavatele|Google Scholar

From: Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine / 2019 / Článek

Ročník 2019 |ID článku 2167947|https://doi.org/10.1155/2019/2167947