Metody detekce cirkulujícího exosomálního PD-L1

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Stále existuje nedostatek akceptovaných a běžných metod pro detekci cirkulujícího exosomálního PD-L1. K detekci PD-L1 v cirkulujících exozomech lze použít tradiční metody detekce exozomů, jako je ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) a průtoková analýza, přičemž ELISA je v současnosti nejpoužívanější metodou. Metoda ELISA dokáže kvantitativně detekovat obsah PD-L1 v cirkulujících exozomech a je snadno ovladatelná. Průtoková cytometrie může být použita ke kvantitativní detekci cirkulujícího exosomálního PD-L1 ve velkých vzorcích, ale vyžaduje vysoké detekční vybavení. S hloubkovým výzkumem exozomů se obohacují a vyvíjejí také metody detekce exosomálních proteinů a nukleových kyselin a do oblasti detekce PD-L1 v cirkulujících exozomech byly zavedeny některé nové metody (obrázek).

DetekceobíhajícíexosomálníPD-L1

1. Digitální PCR

Vzhledem k malému množství nukleové kyseliny obsažené v exozomech je pro konvenční metody detekce obtížné přesně detekovat počet jejich genových kopií. Digitální PCR technologie je metoda detekce nukleových kyselin s extrémně vysokou citlivostí a absolutní kvantifikací. Jeho citlivost může dosáhnout úrovně jedné molekuly nukleové kyseliny, takže má výhody při detekci obsahu nukleové kyseliny v exozomech. Vědci použili digitální technologii PCR k přesné kvantitativní analýze počtu kopií PD-L1 mRNA v plazmatických exozomech pacientů s melanomem a nemalobuněčným karcinomem plic a odhalili vztah mezi počtem kopií mRNA PD-L1 v plazmě a korelací anti-PD1. mezi účinky léčby. Zavedení digitální technologie PCR výrazně zlepšilo detekční schopnost exosomální PD-L1 mRNA, což má velký význam pro výzkum exosomální PD-L1. Mezi obsahem exosomální PD-L1 mRNA a expresí proteinu PD-L1 však mohou existovat nesrovnalosti. Proto samotná detekce exosomální PD-L1 mRNA může mít určité defekty, které vyžadují další výzkum a objasnění.

Protirakovinné pouštní cistanche těží z extraktu z cistanche

2. ELISA

ELISA je tradiční imunologická analytická metoda, která se často používá k detekci malomolekulárních proteinů v plazmě nebo kultivačním médiu. Má vysokou citlivost a lze jej kvantitativně analyzovat. ELISA lze také použít k detekci exosomálního proteinu PD-L1 a může dosáhnout kvantitativní detekce velkých šarží vzorků. Souprava pro detekci proteinu PD-L1 založená na principu metody ELISA byla také aplikována na kvantitativní detekci plazmatického exosomálního proteinu PD-L1. Chen a kol. zkonstruoval detekční systém exosomálního PD-L1 proteinu založený na principu ELISA, který byl použit pro detekci exosomálního PD-L1 proteinu odvozeného z buněčného kultivačního média nebo plazmy. Lineární rozsah detekce byl {{10}}.2-12.0 ng/mL. ELISA je dobrá metoda pro detekci exosomálního proteinu PD-L1, který je snadno kvantitativně detekovatelný a má dobrou opakovatelnost. Vzhledem k přítomnosti volného proteinu PD-L1 v plazmě však naruší jeho přesnost. Proto tato metoda detekuje cirkulaci. Senzitivita a specificita exosomálního proteinu PD-L1 musí být ještě dále zkoumána.

Herba cistanche kořen: protirakovinné

3. Metoda analýzy proudění

Průtoková cytometrie se často používá k typizaci a počítání buněk nebo jiných biologických částic suspendovaných v kapalině, takže tato metoda byla také zavedena do detekce a počítání exosomů. THEODORAKIS a kol. nejprve použil chromatografii k počáteční separaci exozomů v plazmě pacientů s rakovinou hlavy a krku a poté použil průtokovou analýzu k detekci a počítání PD-L1-pozitivních exozomů. Exprese proteinu PD-L1 byla vyjádřena jako intenzita fluorescence. Výsledky ukazují, že metoda má dobrou reprodukovatelnost při detekci exosomálního proteinu PD-L1 a její intraindividuální variace je 7 procent, když se na jednom vzorku pacienta provádí více paralelních testů. Pro ověření přesnosti metody výzkumníci zároveň použili konfokální fluorescenční analýzu jako referenční metodu pro detekci exosomálního proteinu PD-L1. Paralelně byly testovány tři vzorky a výsledky byly porovnány a bylo zjištěno, že výsledky průtokové cytometrie a konfokální fluorescenční analýzy byly vysoce konzistentní, což ukazuje, že průtoková cytometrie je přesnou metodou pro kvantitativní analýzu exosomálního PD-L1. Kromě toho LUX a spol. také úspěšně detekovala expresi exosomálních proteinů PD-L1 a c-Met v séru pacientů s rakovinou pankreatu pomocí průtokové cytometrie, ale výkonnost detekční metody je třeba dále studovat. V současné době byly také uvedeny na trh průtokové analyzátory speciálně používané pro detekci exosomů, jako je ultracitlivý nano-flow analyzátor Apogee, který je pro detekci exosomových proteinů vhodnější než tradiční průtokové analyzátory.

Přínos doplňku extraktu z cistanche tubulosa: protinádorové a rakovinné

4. Surface-Enhanced Raman Scattering Technology

Surface-enhanced Raman scattering (SERS) je vysoce citlivá technika spektroskopie otisků prstů, která je široce používána v biomedicínských oborech. V současné době vědci používají technologii SERS k detekci exosomálního proteinu PD-L1. Vědci nejprve použili TiO2-modifikované magnetické kuličky k nespecifické adsorbci exozomů v plazmě a poté použili sondy SERS spojené s protilátkami PD-L1 k modifikaci zlatých nanočástic a poté inkubovali vzorky exozomů s nanočásticemi zlata. Tvoří komplexní strukturu magnetické kuličky-exosom-zlaté nanočástice a nakonec využívá magnetické pole k obohacení a separaci komplexu a poté se umístí na laserový konfokální Ramanův spektrometr pro detekci, aby se realizovala detekce PD-L1 pozitivních exozomů. . Detekce obsahu těla. Tato metoda má vysokou citlivost detekce a její nejnižší detekční limit může dosáhnout 1 PD-L1 plus exosom/μl plazmy. Kromě toho vědci použili tuto metodu k detekci skupiny vzorků s různými koncentracemi. Výsledky ukázaly, že intenzita SERS byla lineárně úměrná logaritmu koncentrace exosomových vzorků, což ukazuje, že detekční metoda má dobrou stabilitu a může být přímo použita v plazmě. Detekujte exosomy bez dalšího kroku izolace exozomů. V současné době existuje jen málo studií o přímé aplikaci technologie SERS k detekci exosomálního proteinu PD-L1, ale byl proveden výzkum aplikace technologie SERS k detekci jiných exozomů, který má také důležitou referenci pro detekci exosomální hodnoty proteinu PD-L1.

Desertliving cistanche rostoucí situace

5. HOLMES-ExoPD-L1 metoda

Metoda HOLMES-ExoPD-L1 je nová metoda detekce exosomálního proteinu PD-L1. V této metodě byl navržen nový aptamer MJ5C zacílený na protein PD-L1, který může účinně vázat protein PD-L1 na membráně exosomu a není rušen glykosylací proteinu PD-L1. Při této metodě byly fluorescenčně značený aptamer MJ5C a exozomy nejprve společně inkubovány v tenké kapiláře, aby se na sebe navázaly, a infračervený laser byl zaostřen do tenké kapiláry, aby se vytvořil teplotní gradient v mikronovém měřítku. Rychlosti termoforézy volných komplexů aptameru MJ5C a exosomálních aptamerů MJ5C byly významně odlišné a termoforetické vyčerpání volného aptameru bylo rychlejší než u komplexu exosom-aptamer. oddělené. Při působení excitačního světla lze tedy obsah exosomálního proteinu PD-L1 stanovit detekcí intenzity fluorescence fluorescenčně značených aptamerů. Metoda má vysokou citlivost a detekční limit 17,6 pg/ml. Kromě toho má také výhody menšího objemu vzorku a krátké doby detekce. Jde o vysoce originální metodu detekce exosomálního proteinu PD-L1, která je velmi důležitá pro vývoj nového Metoda detekce exosomálního proteinu PD-L1 má poučný význam.

Protinádorový: doplněk cistanche

Exosomální PD-L1 má široké aplikační vyhlídky v oblasti imunoterapie maligních nádorů a stal se jedním z hotspotů v oblasti výzkumu exosomů. Ve srovnání s detekcí tkáňové exprese PD-L1 je detekce cirkulujícího exosomálního PD-L1 snazší získat vzorky a provést detekci v reálném čase, přičemž se vyhnete problému heterogenity tkáně způsobené patologickým odběrem vzorků; exosomální PD-L1 také vede k nádorové imunitě. Je důležitou příčinou úniku a souvisí s progresí maligních nádorů a může se stát důležitým ukazatelem pro hodnocení onemocnění a predikci prognózy. Kromě toho se očekává, že plazmatické exosomální hladiny PD-L1 budou také použity ke screeningu pacientů vhodných pro imunoterapii anti-PD-L1 a predikci jejich odpovědi na léčbu. Stále však existuje nedostatek uznávaných a účinných metod pro detekci cirkulujících exozomů PD-L1. Je nutné vytvořit ideální cirkulující exosom s jednoduchou nebo žádnou separací, menšími nároky na vzorky, vysokou citlivostí, dobrou opakovatelností a méně citlivými detekčními signály. Způsob detekce PD-L1 in vivo. Metoda detekce cirkulujícího exosomálního PD-L1 ještě potřebuje další hloubkový výzkum, ale předpokládá se, že s rozvojem a aplikací nových detekčních metod v budoucnu bude cirkulující exosomální PD-L1 schopen lépe vést imunoterapii anti-PD1 a použít při diagnostice a léčbě maligních nádorů. hrát důležitější roli.