Interleukin odvozený z T buněk-22 řídí expresi CD155 rakovinnými buňkami k potlačení funkce NK buněk a podpoře metastáz
Oct 10, 2023
SOUHRN
Ačkoli T buňky mohou uplatňovat silnou protinádorovou imunitu, podskupina pomocných T buněk (Th) produkujících interleukin-22 (IL-22) v nádorech prsu a plic je spojena s tristními výsledky pacientů. Zde jsme zkoumali mechanismy, kterými tyto T buňky přispívají k onemocnění. V myších modelech rakoviny plic a prsu redukovala konstituční a T buněčná specifická delece 1122 metastázy bez ovlivnění růstu primárního nádoru. Delece IL-22 receptoru na rakovinných buňkách snižuje metastázy na stupeň podobný tomu, který je pozorován u IL-22-deficientních myší. IL-22 indukoval vysokou expresi CD155, který se vázal na aktivační receptor CD226 na NK buňkách. Nadměrná aktivace vedla ke snížení množství CD226 a funkčně poškozeným NK buňkám, což zvýšilo metastatickou zátěž. Signalizace IL-22 byla také spojena s expresí CD155 v souborech lidských dat a se špatnými výsledky pacientů. Celkově naše zjištění odhalují imunosupresivní okruh aktivovaný IL-22 odvozeným od T buněk, který podporuje plicní metastázy.
Výhody cistanche tubulosa-Antitumor
ÚVOD
Hlavním charakteristickým znakem neoplastické progrese a primární příčinou úmrtnosti související s rakovinou je schopnost rakovinných buněk šířit se do sekundárních míst a vytvářet metastázy.1,2 Tvorbě metastáz lze zabránit imunosurveillance zahrnující přirozené zabíječe (NK), cytotoxické a T pomocné (Th) 1 buňky.3,4 Naproti tomu regulační T buňky (Treg), cirkulující monocyty a IL-17A pocházející z Th buněk tvoří imunosupresivní mikroprostředí, které umožňuje imunitní únik a podporuje metastázy. 4–6 Proto je zásadní identifikovat signální kaskády, které definují funkci pro-vs. protinádorových imunitních buněk.7,8 Interleukin-22 (IL-22) je cytokin produkovaný Th17 a u lidí také podskupinou Th1, o které je známo, že podporuje růst rakovinných buněk, zvyšuje migraci, chrání před apoptózou, indukuje přechod z epitelu na mezenchym a udržuje kmenové buňky maligních buněk.9–13 Také podporuje časnou karcinogenezi, působí na prekurzorových lézích nebo nezralých rakovinných kmenových buňkách.14–18 IL-22-produkující buňky, zejména Th buňky, ale také gama delta (gd) T buňky, invariantní přirozené zabíječe T (iNKT) buňky a vrozené lymfoidní buňky (ILC ), byly detekovány v primárních rakovinných lézích.19–24 IL-22 je exprimován v biologicky relevantních hladinách u karcinomu prsu, tlustého střeva, plic, žaludku a hepatocelulárního karcinomu.9,11,12,25,26 Ve většině studií jeho exprese je spojena se špatnou prognózou, vyšším stádiem onemocnění a rychlejší progresí nádoru.13,22–24,27–29 IL-22 působí výhradně prostřednictvím IL-22 receptoru (IL{{40 }}R) skládající se ze dvou podjednotek, IL-22RA1 a IL-10RB.30,31 Účinek sekretovaného IL-22 je modulován inhibitorem, IL{{47} } vazebný protein (IL-22BP, IL-22RA2), homolog IL-22RA1, který je produkován hlavně myeloidními buňkami.32,33 V podmínkách ustáleného stavu IL -22 je nezbytný homeostatický cytokin na epiteliálních bariérách, jako jsou střevo, plíce a kůže.34,35 V těchto místech IL-22 podporuje ochranu, regeneraci a opravu, aby udržela integritu bariéry,36, 37 a jeho nepřítomnost zhoršuje zánětem indukovanou karcinogenezi.13,38 Společně tato data zdůrazňují široké, na kontextu závislé funkce IL-22 ve fyziologických i patologických stavech. Po navázání receptoru IL-22 spouští Janusovy kinázy Jak1 a Tyk2, aby fosforylovaly STAT3, STAT1 nebo STAT5, ale IL-22 může iniciovat další downstream dráhy, včetně kaskády mitogenem aktivovaných proteinkináz (MAPK) nebo signalizace PI3K-AktmTOR, v závislosti na buněčném kontextu.13,36,39–44 Tato rozmanitost signálních drah se odráží v množství fyziologických účinků, které byly spojeny se signalizací IL{81}}, včetně těch popsaných výše, stejně jako ochranu před genotoxickým poškozením a indukci antibakteriálních peptidů, hlenu, prozánětlivých a protizánětlivých cytokinů a chemokinů.36,38,39,45,46 Rakovinové buňky indukují produkci IL-22 z Th buněk u pacientů s rakovinou prsu a plic.12,47,48 Uvolňování IL-1b vyvolané zánětem NLRP3 indukuje produkci IL-22 z T buněk v nádoru a obou IL-22+ Th buňky a podpis NLRP3-IL-1b lze nalézt ve vzorcích nádorů rakoviny prsu a plic.48,49 Zde jsme se rozhodli načrtnout mechanismus, kterým IL{102}} podporuje progrese rakoviny prsu a plic. Zjistili jsme, že IL{103}} podporuje šíření metastáz do plic a odhaluje okruh, kde IL{104}} zprostředkovává imunosupresi v metastatickém výklenku podporou exprese CD155 na rakovinných buňkách, což bylo spojeno se sníženou expresí CD226 na NK buňkách a snížená produkce interferonu-g (IFNg). Klinická data naznačují, že aktivace takových cest je spojena s výsledky pacienta.
VÝSLEDEK
cistanche doplněk výhody-zvyšuje imunitu
IL-22 ovlivňuje diseminované rakovinné buňky v syngenních myších modelech karcinomu plic a prsu
To understand the impact of the IL-22-IL-22R1 signaling axis on cancer progression, we analyzed syngeneic murine models of breast and lung carcinoma. As cancer patients mostly succumb to metastatic disease, we recapitulated this with phenotypically relevant models. We implanted either 4T1 breast cancer or Line-1 lung cancer cells subcutaneously (s.c.) in the right flank of wild-type mice (WT) and mice lacking IL-22 expression (Il22 / ) (Figure 1A). IL-22 did not impact the outgrowth of the primary tumors in either model (Figures 1B and 1C). Upon reaching pre-defined termination criteria (tumor >225 mm2 nebo ulcerace), plíce byly hlavním metastatickým místem v našem modelu s příležitostnými metastázami nalezenými jinde (nezobrazeno). Il22 / myši prokázaly sníženou metastatickou diseminaci buněk Line-1 a 4T1 do plic ve srovnání se zvířaty divokého typu nezávisle na velikosti primárního nádoru za použití různých metod detekce metastáz (obrázky 1B, 1C a S1A). Také jsme pozorovali podobný metastatický fenotyp v ortotopickém modelu rakoviny prsu, kde byly 4T1 buňky implantovány do prsního tukového polštáře (obrázek S2B). Všechny použité metody zaslepeného makroskopického počítání, klonogenních testů nebo histologie vykazovaly vysokou konzistenci při detekci nižší metastatické zátěže u 1122 / zvířat (obrázky 1B, 1C a S1C). To implikuje klíčovou roli IL-22 v metastatickém procesu. Dále jsme vynutili metastázy intravenózní injekcí rakovinných buněk, která obchází potřebu oddělení tkáně a invaze (obrázek 1D). Intravenózní (iv) injekce obou buněčných linií odrážely fenotyp v subkutánním modelu. Skutečně jsme mohli potvrdit nižší metastatickou zátěž u Il22 / myši (obrázky 1E a 1F). Tyto výsledky ukazují na specifickou roli IL-22 v diseminovaných buňkách v oběhu. Abychom rozeznali kmenově specifické účinky, použili jsme model rakoviny prsu E0771 (obrázek 1G).50,51 Intravenózní injekce buněk E0771- GFP odhalila sníženou metastatickou zátěž u Il22 / zvířat ověřená průtokovou cytometrií (obrázky 1H a S1D). Podobně jsme pozorovali nižší metastatickou zátěž v játrech myší, když byly E0771-GFP buňky injikovány intrasplenicky (obrázek S1E). Celá levá plíce myší s injekcí E0771-GFP byla opticky vyčištěna podle protokolu iDISCO pro kvantifikaci metastáz pomocí mikroskopie se světelnou vrstvou in situ (obrázek 1I).52 Zde 1122/myši vykazovaly sníženou náchylnost k rozvoji metastáz , zatímco velikost vizualizovaných metastáz se nelišila a neměla žádný specifický vzor jejich lokalizace (obrázek 1J). Stručně řečeno, IL-22 působila na roztroušené rakovinné buňky a umožnila metastázy rakoviny prsu a plic do plic.
T buňky jsou relevantním zdrojem IL-22 v metastatickém výklenku v plicích
Již dříve jsme identifikovali CD4+ T buňky jako hlavní zdroj IL-22 v primárních lidských plicních nádorech a vzorcích bronchoalveolární laváže.12,47,48 K vymezení zdroje IL-22 v plic našich modelů jsme intravenózně injikovali buňky E0771 do Foxp3mRFP Il17aGFPIl22sgBFP reportérových zvířat a kvantifikovali IL-22+ buňky pomocí průtokové cytometrie (obrázky 2A a S2A).53 Populace byly definovány jako CD{14}}, CD{15 }} a dvojitě negativní (DN) (CD4, CD8 ) ab T buňky (CD3+ gdTCR NK1.1 ), gd T buňky (CD3+ gdTCR+ NK1.1) a CD{{ 26}} NK1.1+ a CD3 NK1.1+ buňky (obrázky 2B a S2B). Pozorovali jsme nárůst frakce CD4+, CD8+ T buněk a NK11+ buněk, které produkovaly IL-22 v plicích zvířat s injekcí nádoru ( Obrázky 2C, S2C a S2D). Zde CD4+ a CD8+ T buňky tvořily většinu buněk produkujících IL-22-u myší s nádorem (obrázek 2C). Navíc jsme identifikovali, že takové CD4+ T buňky produkovaly IL-22, ale ne IL-17A (obrázek 2D). Tyto buňky měly nízkou expresi CD44, což potvrdilo jejich paměťový fenotyp v souladu s našimi předchozími pozorováními (obrázek S2E).48 K dalšímu prozkoumání těchto zjištění napříč modely jsme použili intracelulární barvení k posouzení produkce IL-22 v linii{ {56}} sc model, který přinesl podobné výsledky s výjimkou snížené frakce producentů CD8+ T buněk IL-22 (obrázky S2F–S2I). Mohli jsme také identifikovat, že IL-22+ buňky koexprimují IFNg, což odlišuje producenty myšího IL-22 od podskupiny Th1 (obrázek 2G).49 Dále jsme použili konfokální mikroskopii na přesném řezu řezy plic z reportérových zvířat, aby se zjistila jejich prostorová distribuce v plicích myší s injekcí nádoru. Zde jsme mohli identifikovat, že takoví producenti IL-22 a IL-17A se lokalizují téměř výhradně do metastatických ložisek (obrázek 2E). Jak prokázala průtoková cytometrie, nenašli jsme žádnou korelaci mezi produkcí IL-22 a IL-17A z reportérových buněk v metastatických ložiskách, což naznačuje, že IL-22 a IL-17 jsou skutečně produkovány dvěma různými buněčnými podskupinami. Také jsme potvrdili, že velká část buněk produkujících IL-22-jsou CD4+ T buňky (obrázek 2E). Protože tato data naznačovala převládající roli T buněk v produkci IL-22, vytvořili jsme myš Il22floxCd4cre s podmíněnou delecí Il22 ve všech zralých T buňkách (obrázek 2F). Při expozici buňkami E0771-GFP měly myši Il22floxCd4cre snížený sklon k rozvoji metastáz v plicích, což připomíná fenotyp pozorovaný u globálních zvířat Il22 (obrázek 2F). Mohli jsme však také potvrdit, že cre-rekombináza pod kontrolou promotoru CD4 zcela zrušila produkci IL-22 nejen v CD4+, ale také v CD8+ T buňkách izolovaných ze sleziny Il22floxCd4cre myší, a proto tento model nemohl být použit k určení konkrétního zdroje IL-22 (obrázek S2J). Abychom potvrdili roli Th buněk jako klíčového zdroje IL-22 v našem modelu, přenesli jsme T buňky divokého typu a Il22/CD{101}} do zvířat Rag1 / II22/, která následně obdržela E{{ 104}} GFP buňky iv (obrázek 2G). Zde bychom mohli potvrdit, že produkce IL{106}} adoptivně přenesenými CD4+ T buňkami je v našem modelu dostatečná k podpoře plicních metastáz, ale při použití CD4+ T buněk izolovaných z II22 / zvířat je zrušena (Obrázek 2G). Důležité je, že rozdíly v metastázách byly ovlivněny přihojením T buněk po přenosu (obrázek S2K). Na závěr jsme identifikovali Th buňky jako dostatečný zdroj IL{112}}, který pohání metastázy v plicích myší s nádorem, a dále jsme se snažili identifikovat relevantní cílovou buňku.
Obrázek 1. Knokaut IL-22-snižuje počet plicních metastáz, ale neovlivňuje růst nádoru u syngenních myších modelů karcinomu plic a prsu
Obrázek 2. T buňky jsou primárním zdrojem IL-22 v plicích myší s nádorem
Exprese IL-22RA1 na nádorových buňkách je nezbytná pro tvorbu metastáz
Exprese IL-22RA1 je omezena na nehematopoetické buňky a slouží jako limitující faktor pro signalizaci IL-22. Abychom prozkoumali jeho vliv na metastatický fenotyp, vytvořili jsme stabilní deleci Il22ra1 v buňkách 4T1 a Line-1 (obrázek 3A). V souladu s našimi předchozími zjištěními byl růst nádoru buněk 4T1 Il22ra1 do značné míry nedotčen ve srovnání s kontrolními buňkami 4T1 (obrázek 3B). Nicméně myši, kterým byly injekčně podány buňky 4T1 1122ral sc nebo iv, měly méně makroskopických a klonogenních metastáz v plicích ve srovnání s kontrolními buňkami 4T1 (obrázky 3B a 3C). Abychom potvrdili, že tento účinek není závislý na klonu, vytvořili jsme a analyzovali tři klony Line-1 Il22ra1 a testovali je proti třem kontrolním klonům, které poskytly podobné výsledky (obrázky 3D a 3E). To potvrzuje, že rakovinné buňky exprimující IL-22RA1-jsou relevantním cílem IL-22 při řízení plicních metastáz. Abychom vyloučili mimocílové efekty metodologie, použili jsme IL-22BP k inhibici signalizace IL-22. Vytvořili jsme buněčné linie 4T1 a Line-1, které konstitutivně vylučovaly IL-22BP (Il22ra2+) (obrázek S3A). Při subkutánní injekci rostly buňky Line-1 Il22ra2+ srovnatelně s kontrolou v místě implantace, jak bylo dříve vidět u modelů Il22ra1 a Il22 / myší, ačkoli buňky 4T1 Il22ra2+ rostly pomalejší (obrázek S3B). Zde měly buňky 4T1 Il22ra2+ při subkutánní injekci značně snížený počet metastáz (obrázek S3B a S3C). Navzdory větší variabilitě buňky Line-1 Il22ra2+ také vytvořily méně metastáz, když byly injekčně podány sc nebo iv (obrázek S3D a S3E). Neutralizace IL-22 prostřednictvím IL-22BP tedy do značné míry napodobovala fenotyp pozorovaný u buněk Il22ra1 a Il22/myši, což potvrzuje význam cytokinu pro metastatický proces.
cistanche doplněk výhody-zvyšuje imunitu
IL-22 řídí růst nádorových buněk během rané fáze metastatického přihojení
To determine the role of IL-22 signaling during the dissemination process, we analyzed the kinetics of metastatic seeding in our models. For this, we injected 4T1-GFP cells i.v. and analyzed lungs at 12 and 48 h after injection (Figure S4A). We used confocal microscopy to quantify the numbers of GFP+ colonies (defined as cell clusters of >100 mm) a jednotlivé buňky na mm2 plicní tkáně (obrázek S4B). Nebyli jsme schopni detekovat rozdíly 12 hodin po injekci, což naznačuje, že výsev nemusí být významně ovlivněn IL-22 (obrázky S4C a S4D). Avšak v 48-h časovém bodě se počet GFP+ buněk a kolonií v plicích 1122/myši snížil (obrázky S4C a S4D). To naznačuje roli IL-22 při řízení časných metastáz v plicích. Abychom vyhodnotili rychlost proliferace, společně jsme myším injekčně podali 5-ethynyl-20 -deoxyuridin (EdU) 4 hodiny před vyšetřením 12, 24, 48 hodin a 7 dní po injekci nádoru (obrázek S4E) . Podobně jako u mikroskopického počítání jsme nezjistili rozdíly v počtech buněk GFP+ dříve než 48 hodin po injekci (obrázky S4F–S4G). Na rozdíl od toho jsme mohli detekovat rozdíly v začlenění EdU, což ukazuje na vyšší podíl dělících se buněk pouze 7. den po injekci (obrázek S4G). Domníváme se tedy, že rozdíly v zátěži nádorem plic ovlivněné IL-22 pozorované již po 48 hodinách jsou zprostředkovány mechanismem nezávislým na proliferaci.
Obrázek 3. Exprese IL-22RA1 na nádorových buňkách je nezbytná pro tvorbu metastáz
IL-22 reguluje expresi CD155 na nádorových buňkách, a tím podporuje metastázy
Na základě našich zjištění, že IL-22 působí na rakovinné buňky IL-22ra1+ a podporuje metastázy, jsme provedli hromadné sekvenování RNA buněk 4T1 ošetřených IL-22, abychom dále vymezili základní mechanismus (GEO: GSE202314) (obrázek 4A). Objevili jsme 147 genů, které byly rozdílně regulovány. Z nich byla exprese 133 genů zvýšena a 14 sníženo po léčbě IL-22 (obrázky 4B a S5A). Ověřili jsme Pvr (poliovirový receptor, Pvr) jako jeden z nejvýrazněji zvýšených cílů pomocí qPCR (obrázek S5B). To je pozoruhodné, protože CD155, produkt Pvr, je nadměrně exprimován u různých druhů rakoviny a má vlastnosti podporující nádor, včetně metastáz.54–56 Abychom potvrdili naše zjištění, hodnotili jsme expresi CD155 v IL-22-stimulovaném 4T1, Buňky linie-1 a E0771 průtokovou cytometrií (obrázek 4C). Detekovali jsme zvýšení exprese CD155 ve všech buněčných liniích během 72 hodin (obrázky 4D a 4E), ale tento účinek chyběl u buněk postrádajících IL-22RA1 (obrázek S5C). Dále jsme hodnotili dopad IL-22 na expresi CD155 v buňkách E0771-GFP z plic myší s nádorem (obrázek 4F). Zde jsme mohli potvrdit, že buňky implantované do 1122 / myší měly nižší expresi CD155, což korelovalo s menší frakcí E0771-GFP buněk detekovaných průtokovou cytometrií (obrázky 4G a 4H). Abychom ověřili roli CD155 v metastázách, vytvořili jsme buněčné linie Pvr Line-1 a 4T1 (obrázky 4I, S5D a S5G). I když to mělo malý vliv na jejich schopnost subkutánního růstu (obrázky S5E a S5F), zrušilo to schopnost tvořit metastázy v plicích (obrázky 4J a S5H). Tento proces bychom mohli zvrátit konstitutivní expresí CD155 v Pvr buňkách nezávisle na IL-22-indukované regulaci (Pvr+).
Obrázek 4. IL-22 signalizace zvyšuje expresi CD155 na povrchu nádorových buněk a propůjčuje rezistenci vůči kontrole metastáz
V tomto nastavení bychom mohli indukovat metastázy v plicích Il22 / myší, zdůrazňující spojení mezi těmito dvěma molekulami a jejich roli jako mediátorů metastatického procesu (obrázky 4K a S5I).
CD155 na nádorových buňkách je spojen se sníženou expresí CD226 na NK buňkách a sníženou produkcí IFNg
CD155 hraje mimo jiné vnitřní roli v proliferaci a adhezi v rakovinných buňkách54–57. Nezjistili jsme nedostatky v proliferaci buněk Line-1 Pvr in vitro (data nejsou uvedena). Důležité je, že CD155 má prometastatickou roli mimo buňky tím, že se váže na imunomodulační receptory CD96, CD226 nebo TIGIT na povrchu NK a T buněk.54–56,58,59 Abychom přesně určili vazebné partnery CD155, analyzovali jsme protinádorové odpovědi v plicích myší obsahujících 4T1-luciferázové+ buňky (4T1-Luc) (obrázek 5A). Pomocí in vivo zobrazovacího systému (IVIS) jsme potvrdili, že myši divokého typu a 1122 / myši měly podobné naočkování nádorových buněk do dne 5 po injekci a rozdíly v nádorové zátěži se v průběhu dvou týdnů zvýšily (obrázky 5B a 5C) . Defekt produkce IFNg NK buňkami, ale ne jinými buněčnými typy, skutečně ukázal ztrátu humorálních efektorových mechanismů (obrázky 5D, 5E a S6A) a koreloval s vyšší nádorovou zátěží (obrázek S6B). Tento efekt byl konzistentně nalezen v modelu Line{30}} sc (obrázky S6C–S6E). Kontrolováno čipovou cytometrií, 60 vzorků od 4T1- myší nesoucích metastázy v plicích prokázalo zvýšenou expresi CD155 v metastatických ložiscích u WT, ale ne u 1122 / zvířat (obrázky 5F a S6F). Zjistili jsme vyšší infiltraci NK buněk do metastatických ložisek Il22 / ale ne WT zvířat, což naznačuje vyšší aktivaci a potvrzuje závislost na NK buňkách jako protinádorových efektorových buňkách (obrázek 5F). CD226, ale ne TIGIT nebo CD96, byl odlišně exprimován NK buňkami a v menší míře CD8+ T buňkami v plicích zvířat divokého typu a Il22 / (obrázky 5G a S6G–S6H). CD226 je koreceptor nezbytný pro aktivaci efektorových funkcí NK a CD8 T buněk. Proto jsme se rozhodli prozkoumat jeho patofyziologickou relevanci v našem modelu.61–64
cistanche tubulosa-zlepšuje imunitní systém
Blokáda CD226 ruší antimetastatický fenotyp zvířat s deficitem IL-22-
Nadměrná CD155-zprostředkovaná signalizace přítomná v mikroprostředí nádoru může vyvolat internalizaci a degradaci CD226 v efektorových buňkách.61,63 Abychom vymezili roli nadměrné exprese CD155 na CD226 a následnou protinádorovou odpověď, injekčně jsme podali kontrolu 4T1 a Pvr+ buňky iv u 1122/ myší a dvě skupiny také dostaly anti-CD226 blokující protilátku (480.1) (obrázek 6A). Jak Pvr+ buňky, tak CD226 blokáda by mohly podobně podporovat plicní metastázy u 1122/myši a tyto účinky nebyly synergické (obrázek 6B). Podobně jako u našich předchozích pozorování u zvířat divokého typu to bylo dostatečné k inhibici produkce IFNg NK buňkami (obrázek 6C). Nakonec jsme detekovali snížení exprese CD226 na NK buňkách u myší s injekcí Pvr{23}} ve srovnání s kontrolními buňkami. To korelovalo se sníženou kapacitou těchto NK buněk produkovat IFNg (obrázek 6D). Dále jsme zkoumali potenciál agonistické protilátky TIGIT (IG9) inhibovat aktivaci NK buněk u 1122/zvířat a potenciál blokády CD96 (3.3), aby se zabránilo inhibici funkce NK buněk (obrázek 6E). Ani agonista TIGIT, ani antagonista CD96 nezměnily počet metastáz ve srovnání s 1122/zvířata, která obdržela kontrolní nebo Pvr+ 4T1 buňky, v daném pořadí (obrázek 6F). Po aktivaci by TIGIT mohl inhibovat produkci IFNg z CD8+ T buněk, ale ne z NK buněk (obrázek 6G). Osa IL-22- CD155 tedy spouští sníženou expresi CD226 v NK buňkách a činí je inertními v mikroprostředí nádoru.
Exprese CD155 doplňuje podpis genu IL-22 u pacientů s rakovinou prsu a plic
Nakonec jsme hodnotili klinický význam CD155 v kontextu osy IL-22-IL-22RA1. Samotná exprese CD155 je spojena s nepříznivou prognózou u různých nádorových entit.54 Analyzovali jsme data sekvenování RNA z atlasu karcinomu genomu (TCGA) plicního adenokarcinomu (TCGA: LUAD, n=504) a HER2- pozitivní vzorky pacientů z datových souborů invazivního karcinomu prsu (TCGA: BRCA, n=110). Zaměřili jsme se na klíčové geny související s IL-22-: IL22RA1, IL22RA2, IL10RB a PVR. Ke stratifikaci kohort pacientů jsme použili aglomerativní shlukování, metodu shlukování bez dozoru, což vedlo ke třem hlavním shlukům (obrázky 7A a 7B). To odhalilo charakteristické vzorce genové exprese: shluk 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, IL10RBmed, PVRhi), shluk 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, IL10RBhi, PVRlo) a shluk 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, IL10RBlo, PVRmed) (obrázek 7C). Tyto shluky byly rovnoměrně distribuovány v těchto dvou kohortách (obrázek 7D). Pacienti v klastru 0 a datovém souboru LUAD klastru 2 měli horší přežití než pacienti v klastru 1 (obrázek 7E). Přežití shluků 1 a 2 se v obou kohortách nelišilo (obrázek 7E). Dále jsme vypočítali omezené průměrné doby přežití (RMST) pro klastry 0 a 1, abychom kvantifikovali rozdíl v očekávané době přežití do pěti let sledování, což vedlo k 361,18 dnům pro LUAD a 93,23 dnů pro BRCA (obrázek 7F). Shluky 0 a 1 měly rozdíly ve frekvenci patologických stádií onemocnění v nich v LUAD, ale ne v kohortě BRCA (obrázek 7G). Důležité je, že takové rozdíly v přežití mezi shluky (IL22RA1hiPVRhi) a 1 (IL22RA1loPVRlo) pocházejí hlavně z pacientů diagnostikovaných v časných (I a II), ale ne v pokročilých stadiích onemocnění (III a IV) (obrázek S7A). K posouzení dopadu každého genu na přežití jsme použili Coxův model proporcionálních rizik. Jak IL22RA1 (poměr rizika [HR]=1.23), tak PVR (HR=1.28) ovlivňují přežití, zatímco IL22RA2 a IL10RB nezměnily riziko v kohortě LUAD (obrázek S7B). Navíc pouze CD226 (p=0.06), ale ne TIGIT nebo CD96, měl tendenci ovlivňovat přežití, v souladu s našimi zjištěními v preklinických modelech (obrázek S7B). Použili jsme dekonvoluční algoritmus CIBERSORTx na kohortě LUAD, abychom zhodnotili, zda vzorce genové exprese našich klastrů mají dopad na infiltraci imunitních buněk u pacientů.65 Je zajímavé, že došlo ke zvýšení jednotek CIBERSORTx pro aktivované NK buňky v klastru 1 ve srovnání s klastremi. 0 a 2 u pacientů s LUAD, zatímco nebyly žádné rozdíly v klidových NK buňkách nebo aktivovaných CD{80}} paměťových T buňkách (obrázek S7C) s podobným trendem v kohortě BRCA (obrázek S7D). Tyto výsledky z klinických kohort společně demonstrují relevanci regulačního spojení mezi IL-22 odvozeným z T buněk a CD155.
Obrázek 5. Exprese CD226 je vyšší na NK buňkách u myší Il22–/–
DISKUSE
V této studii jsme objevili mechanismus, kterým T buňky produkují IL-22 k podpoře plicních metastáz u myších modelů rakoviny plic a prsu. Mechanicky T buňky v metastatických ložiscích v plicích, převážně CD4+, produkují IL-22, který signalizuje přímo prostřednictvím svého receptoru exprimovaného v rakovinných buňkách, čímž podporuje expresi prometastatické molekuly CD155.{{{{101} 5}},58,59 Navzdory dobře prostudované pan-rakovinné expresi CD155 a jeho vnitřní a vnější roli v progresi rakoviny,54 zůstává cesta zodpovědná za regulaci CD155 v maligních buňkách nepolapitelná.66–68 Prokázali jsme, že IL{{ 15}} zvýšil expresi CD155 v buněčných liniích rakoviny plic a prsu in vitro a in vivo, zatímco jeho konstitutivní exprese umožnila metastázy u 1122/myši, ve srovnání s kontrolními a deficitními buňkami. Zvýšená exprese CD155 v nádorovém plicním mikroprostředí vedla ke snížení kostimulační molekuly CD226 na NK buňkách, čímž se snížila jejich lokalizace do metastáz a produkce IFNg, což korelovalo s vyšší nádorovou zátěží. V našich předchozích studiích jsme detekovali akumulaci T buněk produkujících IL-22-ve vzorcích nádorů pacientů s nemalobuněčným karcinomem plic (NSCLC).12,48 Prokázali jsme, že rakovinné buňky spouštějí NLRP3- závislou sekreci IL-1b, která indukuje takovou produkci IL-22 hlavně z Th buněk.18 Za zmínku stojí, že u lidí v důsledku rozdílů v cytokinových profilech Th buněk IL{{ 31}} je také indukován v Th1 buňkách. Je možné, že by to mohlo narušit protinádorovou imunitní odpověď. Důležité je, že takové varianty Th1 by mohly částečně vysvětlit hyperprogresi rakoviny po aktivaci T buněk po blokádě kontrolních bodů.69 V souladu s našimi předchozími pozorováními jsme potvrdili akumulaci IL -22-produkující CD4+ a CD{{38} } T buňky, ale také NK1.{40}} buňky v metastatickém výklenku v plicích zvířat s injekcí nádoru. Je důležité poznamenat, že jsme pozorovali kmenově specifické rozdíly v akumulaci takových IL -22-produkujících CD8+ T buněk napříč našimi modely. Zrušení produkce IL-22 v celkem zralých T buňkách však stačilo k rekapitulaci účinku, který jsme pozorovali u zvířat s deficitem IL{45}}.70 Také adoptivní přenos CD4+ T buněk do Rag / II22 / myši byly dostatečné k vyvolání plicních metastáz, což přesně poukázalo na prvořadou roli Th buněk jako zdroje IL-22. Naše předchozí zjištění naopak naznačují, že navzdory akumulaci CD8+ T-buněk ve vzorcích nádoru je jejich příspěvek k IL-22 poolu malý.48 V každém případě je charakterizace takového CD{{53} }} T buňky produkující IL-22-jsou nezbytné pro pečlivé vyhodnocení jejich pro- nebo protinádorových vlastností, protože se objevují nová data o této subpopulaci.71,72 Také primární role NK a NKT buněk v kontrole nádorů převažuje nad jejich potenciální příspěvek k tvorbě metastáz prostřednictvím IL-22, který je rozpoznán v experimentu Rag / II22 / adoptivního přenosu za použití zvířat, která nemají zralé T buňky, ale mají funkční NK buňky.37 Tato hypotéza je dále podpořena našimi zjištěními v metastatickém ohniska, kde byly NK buňky nalezeny v hojnějším množství než cytotoxické T buňky, což zvýraznilo NK buňky jako zásadní hráče v kontrole nádorů v nepřítomnosti IL-22. Je důležité poznamenat, že jsme se zaměřili na producenty IL-22 v metastatických ložiscích v plicích, ale nezohlednili jsme jejich původ, klonalitu nebo jejich distribuci v krvi nebo lymfatických orgánech. Kromě toho různé zdroje IL-22 podporují progresi nádoru způsobem závislým na kontextu zprostředkovaným pleiotropním působením tohoto cytokinu. V tomto směru by podobné buňky produkující IL-22-v různých kompartmentech (plíce vs. slezina vs. lymfatické uzliny) mohly rozdílně ovlivňovat protumorální fenotypy nebo by neměly žádnou funkci v závislosti na kontextu, což bude třeba dále prozkoumat. Studie rakoviny opakovaně uvádějí, že IL-22 ovlivňuje vývoj a růst primárních nádorů a případně neoplastickou progresi.26,73–76 Tato představa je odůvodněna především schopností podporovat migraci, invazi a kmenovost rakovinných buněk in vitro a tím podpořit tvorbu metastáz.76,77 Důležité je, že ablace IL-22 může zmírnit imunosupresivní mikroprostředí v modelu Kras-mutanta plicního karcinomu.14 V současné studii jsme prokázali, že zvýšená metastatická zátěž byla přímý účinek IL-22 na diseminované nádorové buňky IL-22RA1+, což vedlo ke zvýšenému růstu kolonií. Důležité je, že naše data formálně nevylučují dopad na nenádorové buňky. Vliv IL-22 na diseminaci nádorových buněk prostřednictvím vnitřního působení endogenně exprimovaného IL{82}}R široce zdůrazňují Giannou et al.78
Obrázek 6. Signalizace CD226 je nepostradatelná pro produkci IFNg z NK buněk
Prokázali jsme, že Pvr je jedním z genů se zvýšenou expresí na rakovinných buňkách po léčbě IL-22. V tomto kontextu CD155-deficientní buňky vytvořily několik metastáz, a to jak u myší divokého typu, tak u myší Il22, a co je důležité, opětovné zavedení CD155 nám umožnilo rekonstituovat metastatický fenotyp. Vnitřní úloha CD155 v rakovinných buňkách byla dobře studována a je známo, že ovlivňuje zaočkování, proliferaci a migraci nádorových buněk.56,57 Nicméně buňky Pvr nevykazovaly inhibovanou proliferaci nebo migraci v našich rukou a zaočkování nádorových buněk nebyl ovlivněn u 1122 / myši. CD155, původně identifikován na buňkách prezentujících antigen, slouží jako vnější promotor progrese nádoru, který potlačuje funkci NK a T buněk vazbou na CD96 a TIGIT na jejich povrchu a indukuje internalizaci a downregulaci CD226.56,61–64,79–85Due ke své imunosupresivní funkci má CD155 v rakovinných a hostitelských buňkách prometastatické vlastnosti a je navržen jako cíl pro blokádu inhibice kontrolních bodů.61,86 NK buňky dostávají kostimulační signál od buněk prezentujících antigen prostřednictvím CD226. 87 Nadměrná stimulace CD226 v mikroprostředí nádoru však vede k internalizaci a degradaci.63 Tomu obvykle brání CD96 a TIGIT, které vážou CD155 s vyšší afinitou.58 Je zajímavé, že o buňkách 4T1 je známo, že indukují downregulaci CD226 při infiltraci nádoru. lymfocyty a potlačují produkci IFNg.88 Zde jsme prokázali, že deficit IL-22 zachoval expresi CD226 na NK a CD8+ T buňkách. Avšak pouze NK buňky měly dramaticky vyšší schopnost produkce IFNg a nepřímo korelovaly s metastatickou zátěží. Je zajímavé, že aktivace signalizace TIGIT v naší studii inhibovala produkci IFNg z CD8+ T buněk, ale ne NK, buněk a nebyla dostatečná ke zvýšení metastatické zátěže. Podobně další receptor pro CD155, CD96, nebyl ani rozdílně regulován u 1122/myši, ani jeho inhibice nezabránila metastázám, což ukazuje, že CD155 v našem modelu nepotlačuje NK buňky prostřednictvím CD96. To zdůrazňuje buněčně specifickou regulaci protinádorových odpovědí pomocí CD155 a jeho různých vazebných partnerů.
Výhody doplňku cistanche-jak posílit imunitní systém
Kliknutím sem zobrazíte produkty Cistanche Enhance Immunity
【Požádejte o více】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Je prokázán dopad CD155 na prognózu a jeho role v patogenezi rakoviny plic, prsu, tlustého střeva a dalších typů rakoviny.79–85 Existuje mnoho důkazů o prognostické relevanci IL-22 a jejích příbuzných genů u různých rakovinných entit.10,21,27,75,89–91 Některé studie však neuvádějí žádný vliv exprese IL{10}} na přežití.12 I když tyto nesrovnalosti mohou být způsobeny heterogenitou populace pacientů, odběr vzorků a problémy s hlášením, mnoho z těchto studií se zaměřuje na jediný gen související se signalizací IL{12}}. Zde jsme použili aglomerativní shlukování k rozlišení vzorců exprese IL22RA1, IL22RA2, IL10RB a PVR v kohortách LUAD a BRCA v TCGA a připojili je ke klinickým datům. Zde jsme identifikovali tři vzorce exprese těchto genů: vzor 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, PVRhi), vzor 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, PVRlo) a vzor 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, PVRmed). Zjistili jsme, že vysoká exprese IL22RA1 se shodovala s vysokou expresí PVR, což se také promítlo do špatných výsledků celkového přežití, zejména u pacientů s diagnostikovanými časnými (I a II), ale ne pokročilými (III a IV), patologickými stádii, což zdůrazňuje roli tohoto mechanismu v konkrétní fázi. Naopak vysoká exprese IL22RA2, také známá jako IL-22BP, korelovala s nižší expresí PVR a lepším přežitím.18,34 Třetí vzorec odpovídal zcela nízké expresi a představoval imunologicky chladné nádory.92 V tomto směru CIBERSORTx dekonvoluce ukázala, že shluk 1 charakterizovaný vysokou expresí IL22RA2 má genový podpis pro aktivované, ale ne klidové NK buňky ve srovnání s jinými shluky. V několika klinických studiích NSCLC bylo prokázáno, že exprese CD226 stratifikuje pacienty z hlediska výsledku.93 Avšak vzhledem k duálnímu způsobu pre- a posttranslační regulace CD226 se exprese ne vždy odráží v datech sekvenování mRNA.94 Studie, které se zaměřují na o posttranslační regulaci CD226 vyhodnoťte jeho expresi v klinických vzorcích pomocí barvení protilátek.63 Nicméně při dotazování souboru dat TCGA týkajícího se vztahu vazebných partnerů CD155 k přežití pouze CD226 směřoval ke zlepšení prognózy (log (HR) {{57 }}.24, p=0.06), zatímco TIGIT a CD96 neprokázaly žádnou korelaci s přežitím. Důležité je, že nádorové buňky upravené tak, aby vylučovaly IL-22BP, tvořily méně metastáz, což zdůrazňuje potenciál IL-22 dráhy pro cílenou terapeutickou intervenci. To by mohlo působit proti nadměrné expresi CD155 v nádoru, jehož přímé zacílení zůstává náročné kvůli složité síti koreceptorů. Dále je třeba poznamenat, že dlouhodobé účinky neutralizace IL-22 na metastázy nejsou známy, ale mohly by mít přímý dopad na terapeutické zvážení T buněk nebo poskytnout zdůvodnění pro neutralizaci IL-22 pomocí protilátek s příznivý bezpečnostní profil, jako je Fezakinumab (zkouška NCT01941537) nebo umělý IL-22 s designem založeným na struktuře.39,95 V souhrnu jsme identifikovali nadměrnou expresi CD155 na nádorových buňkách indukovanou IL{74}}jako mechanismus, který prospívá metastatickému růstu. Tato zásadní role v prognóze zdůraznila potenciál IL-22 jako terapeutického cíle u rakoviny. Dosud je neutralizace IL-22 navrhována hlavně jako strategie k léčbě autoimunitních onemocnění.31,49 Naše údaje o IL-22BP jako neutralizátoru IL-22, který fenokopíroval globální nedostatek IL-22, podpořil terapeutický potenciál pro cílení na osu IL-22-IL-22R1 a měl by být dále prozkoumán v preklinických a klinických studiích.
REFERENCE
1. Hanahan, D. a Weinberg, RA (2011). Charakteristické znaky rakoviny: příští generace. Cela 144, 646–674. https://doi.org/10.1016/j.cell.2011. 02.013.
2. Massague´, J. a Obenauf, AC (2016). Metastatická kolonizace cirkulujícími nádorovými buňkami. Příroda 529, 298–306. https://doi.org/10.1038/ nature17038.
3. Renner, P., Rovira, J., Klein, C., Schlitt, HJ, Geissler, EK, and Kroemer, A. (2014). Přirozené zabíječské buňky KLRG1(+) chrání před plicním metastatickým onemocněním pomocí imunosurveillance. OncoImmunology 3, e28328. https://doi.org/10.4161/onci.28328.
4. Mohme, M., Riethdorf, S., and Pantel, K. (2017). Cirkulující a diseminované nádorové buňky - mechanismy imunitního dozoru a úniku. Nat. Clin. Oncol. 14, 155–167. https://doi.org/10.1038/nrclinonc. 2016.144.
5. Briukhovetska, D., Do¨rr, J., Endres, S., Libby, P., Dinarello, CA a Kobold, S. (2021). Interleukiny u rakoviny: od biologie k terapii. Nat. Rev. Rak 21, 481–499. https://doi.org/10.1038/s41568-021-00363-z.
6. Kitamura, T., Qian, BZ a Pollard, JW (2015). Podpora metastáz imunitních buněk. Nat. Rev. Immunol. 15, 73–86. https://doi.org/10.1038/ nri3789.
7. Galon, J., and Bruni, D. (2020). Nádorová imunologie a evoluce nádorů: propletené historie. Imunita 52, 55–81. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.12.018.
8. Page` s, F., Mlecnik, B., Marliot, F., Bindea, G., Ou, FS, Bifulco, C., Lugli, A., Zlobec, I., Rau, TT, Berger, MUDr. , a kol. (2018). Mezinárodní validace konsenzuálního imunoskóre pro klasifikaci rakoviny tlustého střeva: prognostická studie a studie přesnosti. Lancet 391, 2128–2139. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(18)30789-X.
9. Rui, J., Chunming, Z., Binbin, G., Na, S., Shengxi, W., and Wei, S. (2017). IL-22 podporuje progresi rakoviny prsu regulací HOXB-AS5. Oncotarget 8, 103601–103612. https://doi.org/10.18632/ oncotarget.22063.
10. Kryczek, I., Lin, Y., Nagarsheth, N., Peng, D., Zhao, L., Zhao, E., Vatan, L., Szeliga, W., Dou, Y., Owens, S ., a kol. (2014). IL-22(+)CD4(+) T buňky podporují vznik kolorektálního karcinomu prostřednictvím aktivace transkripčního faktoru STAT3 a indukce methyltransferázy DOT1L. Imunita 40, 772–784. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2014.03.010.
11. Jiang, R., Tan, Z., Deng, L., Chen, Y., Xia, Y., Gao, Y., Wang, X., and Sun, B. (2011). Interleukin-22 podporuje lidský hepatocelulární karcinom aktivací STAT3. Hepatologie 54, 900–909. https://doi.org/10.1002/ hep.24486.
12. Kobold, S., Vo¨ lk, S., Clauditz, T., K€ horní, NJ, Minner, S., Tufman, A., D€ uwell, P., Lindner, M., Koch, I Heidegger, S., et al. (2013). Interleukin-22 je často exprimován u malobuněčného a velkobuněčného karcinomu plic a podporuje růst rakovinných buněk rezistentních na chemoterapii. J. Thorac. Oncol. 8, 1032–1042. https://doi.org/10.1097/JTO.0b013e31829923c8.
13. Hernandez, P., Gronke, K. a Diefenbach, A. (2018). Háček-22: interleukin-22 a rakovina. Eur. J. Immunol. 48, 15–31. https://doi.org/10. 1002/eji.201747183.
14. Khosravi, N., Caetano, MS, Cumpian, AM, Unver, N., De la Garza Ramos, C., Noble, O., Daliri, S., Hernandez, BJ, Gutierrez, BA, Evans, SE, a kol. (2018). IL22 podporuje Kras-mutantní rakovinu plic indukcí protumorové imunitní odpovědi a ochranou vlastností kmene. Cancer Immunol. Res. 6, 788-797. https://doi.org/10.1158/ 2326-6066.CIR-17-0655. 15. Li, H., Mou, Q., Li, P., Yang, Z., Wang, Z., Niu, J., Liu, Y., Sun, Z., Lv, S., Zhang, B a Yin, C. (2019). MiR-486-5p inhibuje IL-22-indukovaný epiteliálně-mezenchymální přechod buněk rakoviny prsu potlačením Dock1. J. Cancer 10, 4695–4706. https://doi.org/10.7150/jca.30596.
16. Kim, K., Kim, G., Kim, JY, Yun, HJ, Lim, SC a Choi, HS (2014). Interleukin-22 podporuje transformaci epiteliálních buněk a tumorigenezi prsu prostřednictvím aktivace MAP3K8. Karcinogeneze 35, 1352–1361. https://doi.org/10.1093/carcin/bgu044.
17. Katara, GK, Kulshrestha, A., Schneiderman, S., Riehl, V., Ibrahim, S. a Beaman, KD (2020). Interleukin-22 podporuje rozvoj maligních lézí u myšího modelu spontánního karcinomu prsu. Mol. Oncol. 14, 211–224. https://doi.org/10.1002/1878-0261.12598.
18. Huber, S., Gagliani, N., Zenewicz, LA, Huber, FJ, Bosurgi, L., Hu, B., Hedl, M., Zhang, W., O'Connor, W., Jr., Murphy, AJ, a kol. (2012). IL-22BP je regulován inflammasomem a moduluje tumorigenezi ve střevě. Příroda 491, 259–263. https://doi.org/10.1038/ nature11535.
19. Perez, LG, Kempski, J., McGee, HM, Pelzcar, P., Agalioti, T., Giannou, A., Konczalla, L., Brockmann, L., Wahib, R., Xu, H., a kol. (2020). Signalizace TGFbeta v buňkách Th17 podporuje produkci IL-22 a rakovinu tlustého střeva související s kolitidou. Nat. Commun. 11, 2608. https://doi.org/10.1038/ s41467-020-16363-w.
20. Meyer, A., Stark, M., Karstens, JH, Christiansen, H., and Bruns, F. (2012). Histiocytóza z Langerhansových buněk baze lební: je nízkodávkovaná radioterapie účinná? Zástupce případu Oncol. Med. 2012, 789640. https://doi.org/10.1155/2012/789640.
21. Zhuang, Y., Peng, LS, Zhao, YL, Shi, Y., Mao, XH, Guo, G., Chen, W., Liu, XF, Zhang, JY, Liu, T. a kol. (2012). Zvýšená intratumorální IL-22-produkující CD4(+) T buňky a Th22 buňky koreluje s progresí rakoviny žaludku a předpovídá špatné přežití pacientů. Cancer Immunol. Imunother. 61, 1965–1975. https://doi.org/10.1007/s00262-012- 1241-5.
22. Chen, X., Wang, Y., Wang, J., Wen, J., Jia, X., Wang, X., and Zhang, H. (2018). Akumulace T-helper 22 buněk, interleukinu-22 a supresorových buněk odvozených od myeloidů podporuje progresi rakoviny žaludku u starších pacientů. Oncol. Lett. 16, 253–261. https://doi.org/10.3892/ol.2018.8612.
23. Doulabi, H., Rastin, M., Shabahangh, H., Maddah, G., Abdollahi, A., Nosratabadi, R., Esmaeili, SA a Mahmoudi, M. (2018). Analýza buněk Th22, Th17 a CD4(+) společně produkujících IL-17/IL-22 v různých stádiích rakoviny tlustého střeva u člověka. Biomed. Pharmacother. 103, 1101–1106. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2018.04.147.
24. Zeng, H., Liu, Z., Wang, Z., Zhou, Q., Qi, Y., Chen, Y., Chen, L., Zhang, P., Wang, J., Chang, Y ., a kol. (2020). Buňky produkující intratumorální IL22-definují imunoevasivní podtyp svalově invazivního karcinomu močového měchýře (2017). Ochranná funkce IL-22BP při ischemicko-reperfuzním a acetaminofenem indukovaném poškození jater. J. Immunol. 199, 4078–4090. https://doi. org/10.4049/jimmunol.1700587.
25. Jiang, R., Wang, H., Deng, L., Hou, J., Shi, R., Yao, M., Gao, Y., Yao, A., Wang, X., Yu, L a Sun, B. (2013). IL-22 souvisí s rozvojem lidské rakoviny tlustého střeva aktivací STAT3. BMC Cancer 13, 59. https://doi.org/10.1186/1471-2407-13-59.
26. Fukui, H., Zhang, X., Sun, C., Hara, K., Kikuchi, S., Yamasaki, T., Kondo, T., Tomita, T., Oshima, T., Watari, J ., a kol. (2014). IL-22 produkovaný fibroblasty asociovanými s rakovinou podporuje invazi buněk rakoviny žaludku prostřednictvím signalizace STAT3 a ERK. Br. J. Cancer 111, 763–771. https://doi.org/ 10.1038/bjc.2014.336.
27. Liu, T., Peng, L., Yu, P., Zhao, Y., Shi, Y., Mao, X., Chen, W., Cheng, P., Wang, T., Chen, N ., a kol. (2012). Zvýšená cirkulace buněk Th22 a Th17 je spojena s progresí nádoru a přežitím pacientů u lidské rakoviny žaludku. J. Clin. Immunol. 32, 1332–1339. https://doi.org/10.1007/ s10875-012-9718-8.
28. Niccolai, E., Taddei, A., Ricci, F., Rolla, S., D'Elios, MM, Benagiano, M., Bechi, P., Bencini, L., Ringressi, MN, Pini, A ., a kol. (2016). Intratumorální buňky Th22 produkující IFN-gama korelují se stagingem TNM a nejhoršími výsledky u rakoviny pankreatu. Clin. Sci. 130, 247–258. https://doi.org/10.1042/CS20150437.
29. Xu, X., Tang, Y., Guo, S., Zhang, Y., Tian, Y., Ni, B., and Wang, H. (2014). Zvýšené intratumorální hladiny interleukinu 22 a frekvence interleukinu 22-produkujících CD4+ T buněk korelují s progresí rakoviny pankreatu. Slinivka břišní 43, 470–477. https://doi.org/10.1097/MPA.{10}}.
30. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP, and Pestka, S. (2001). Identifikace funkčního komplexu receptoru interleukinu-22 (IL-22): řetězec IL-10R2 (IL-10Rbeta ) je společný řetězec obou IL{{7 }} a IL-22 (IL- 10-související s T buňkami odvozený indukovatelný faktor, IL-TIF) receptorové komplexy. J. Biol. Chem. 276, 2725–2732. https://doi.org/10.1074/jbc.M0078 37200.
31. Ouyang, W. a O'Garra, A. (2019). Cytokiny rodiny IL-10 IL-10 a IL- 22: od základní vědy po klinický překlad. Imunita 50, 871–891. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.03.020.
32. Kempski, J., Giannou, AD, Riecken, K., Zhao, L., Steglich, B., L€ ucke, J., Garcia-Perez, L., Karstens, KF, Wo¨ stemeier, A. Nawrocki, M., a kol. (2020). IL22BP zprostředkovává protinádorové účinky lymfotoxinu proti kolorektálním nádorům u myší a lidí. Gastroenterologie 159, 1417– 1430.e3. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2020.06.033.
33. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP, and Pestka, S. (2001). Identifikace, klonování a charakterizace nového rozpustného receptoru, který váže IL-22 a neutralizuje jeho aktivitu. J. Immunol. 166, 7096-7103. https://doi. org/10.4049/jimmunol.166.12.7096.
34. Dudakov, JA, Hanash, AM a van den Brink, MRM (2015). Interleukin-22: imunobiologie a patologie. Annu. Rev. Immunol. 33, 747-785. https://doi.org/10.1146/annurev-immunol-032414-112123.
35. Wolk, K., Kunz, S., Witte, E., Friedrich, M., Asadullah, K., and Sabat, R. (2004). IL-22 zvyšuje vrozenou imunitu tkání. Imunita 21, 241–254. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2004.07.007.
36. Sabat, R., Ouyang, W., and Wolk, K. (2014). Terapeutické možnosti systému IL-22-IL-22R1. Nat. Rev. Drug Discov. 13, 21–38. https://doi. org/10.1038/nrd4176.
37. Zenewicz, LA, Yancopoulos, GD, Valenzuela, DM, Murphy, AJ, Stevens, S. a Flavell, RA (2008). Vrozený a adaptivní interleukin-22 chrání myši před zánětlivým onemocněním střev. Imunita 29, 947–957. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2008.11.003.
38. Gronke, K., Herna´ ndez, PP, Zimmermann, J., Klose, CSN, Kofoed Branzk, M., Guendel, F., Witkowski, M., Tizian, C., Amann, L., Schumacher, F. a kol. (2019). Interleukin-22 chrání střevní kmenové buňky před genotoxickým stresem. Příroda 566, 249–253. https://doi.org/10.1038/ s41586-019-0899-7.
39. Saxton, RA, Henneberg, LT, Calafiore, M., Su, L., Jude, KM, Hanash, AM a Garcia, KC (2021). Tkáňové ochranné funkce interleukinu-22 lze oddělit od prozánětlivých účinků pomocí strukturovaného designu. Imunita 54, 660–672.e9. https://doi.org/10. 1016/j.immuni.2021.03.008.
40. Dumoutier, L., Louahed, J. a Renauld, JC (2000). Klonování a charakterizace indukovatelného faktoru odvozeného od T buněk (IL-TIF) souvisejícího s IL-10-, nového cytokinu strukturně příbuzného IL-10 a indukovatelného IL-9. J. Immunol. 164, 1814–1819. https://doi.org/10.4049/jimmunol.164. 4,1814.
41. Lejeune, D., Dumoutier, L., Constantinescu, S., Kruijer, W., Schuringa, JJ, and Renauld, JC (2002). Interleukin-22 (IL-22) aktivuje kinázové dráhy JAK/STAT, ERK, JNK a p38 MAP v buněčné linii potkaního hepatomu. Cesty, které jsou sdílené a odlišné od IL-10. J. Biol. Chem. 277, 33676–33682. https://doi.org/10.1074/jbc.M204204200.
42. Nagalakshmi, ML, Rascle, A., Zurawski, S., Menon, S. a de Waal Malefyt, R. (2004). Interleukin-22 aktivuje STAT3 a indukuje IL-10 epiteliálními buňkami tlustého střeva. Int. Immunopharmacol. 4, 679-691. https://doi. org/10.1016/j.intimp.2004.01.008.
43. Mitra, A., Raychaudhuri, SK, a Raychaudhuri, SP (2012). Buněčná proliferace indukovaná IL-22-je regulována signální kaskádou PI3K/Akt/mTOR. Cytokin 60, 38–42. https://doi.org/10.1016/j.cyto.2012.06.316.
44. Bachmann, M., Ulziibat, S., H€ ardle, L., Pfeilschifter, J., and M€ uhl, H. (2013). IFNalpha převádí IL-22 na cytokin účinně aktivující STAT1 a jeho následné cíle. Biochem. Pharmacol. 85, 396-403. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2012.11.004.
45. Zheng, Y., Valdez, PA, Danilenko, DM, Hu, Y., Sa, SM, Gong, Q., Abbas, AR, Modrusan, Z., Ghilardi, N., de Sauvage, FJ a Ouyang , W. (2008). Interleukin-22 zprostředkovává časnou obranu hostitele proti navázání a odstranění bakteriálních patogenů. Nat. Med. 14, 282–289. https://doi. org/10.1038/nm1720.
46. Andoh, A., Zhang, Z., Inatomi, O., Fujino, S., Deguchi, Y., Araki, Y., Tsujikawa, T., Kitoh, K., Kim-Mitsuyama, S., Takayanagi , A., a kol. (2005). Interleukin-22, člen podrodiny IL-10, indukuje zánětlivé reakce v subepiteliálních myofibroblastech tlustého střeva. Gastroenterologie 129, 969–984. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2005.06.071.
47. Tufman, A., Huber, RM, Vo¨lk, S., Aigner, F., Edelmann, M., Gamarra, F., Kiefl, R., Kahnert, K., Tian, F., Boulesteix, AL, a kol. (2016). Interleukin-22 je zvýšen při výplachu pacientů s rakovinou plic a jinými plicními chorobami. BMC Cancer 16, 409. https://doi.org/10.1186/s12885-016- 2471-2.
48. Voigt, C., May, P., Gottschlich, A., Markota, A., Wenk, D., Gerlach, I., Voigt, S., Stathopoulos, GT, Arendt, KAM, Heise, C., a kol. (2017). Rakovinné buňky indukují produkci interleukinu-22 z paměťových CD4(+) T buněk prostřednictvím interleukinu-1 k podpoře růstu nádoru. Proč. Natl. Akad. Sci. USA 114, 12994–12999. https://doi.org/10.1073/pnas.{11}}.
49. Markota, A., Endres, S. a Kobold, S. (2018). Cílení na interleukin-22 pro léčbu rakoviny. Hučení. Vakcína. Imunother. 14, 2012–2015. https://doi.org/10.1080/21645515.2018.1461300.
50. Ewens, A., Mihich, E. a Ehrke, MJ (2005). Vzdálené metastázy ze subkutánně rostoucího medulárního adenokarcinomu prsu E0771. Anticancer Res. 25, 3905–3915.
51. Sugiura, K. a Stock, CC (1952). Studie v nádorovém spektru. I. Srovnání účinku methyl bis (2-chlorethyl)aminu a 3-bis(2-chlorethyl)aminomethyl-4-methoxymethyl -5-hydroxy{{7} }methylpyridinu na růst různých myších a potkaních nádorů. Rak 5, 382–402. https://doi.org/10.1002/1097-0142(195203)5:2<382::aidcncr2820050229>3.0.co;2-3.
52. Renier, N., Wu, Z., Simon, DJ, Yang, J., Ariel, P., and Tessier-Lavigne, M. (2014). iDISCO: jednoduchá a rychlá metoda k imunoznačení velkých vzorků tkáně pro objemové zobrazování. Cela 159, 896–910. https://doi.org/10. 1016/j.cell.2014.10.010.
53. Kleinschmidt, D., Giannou, AD, McGee, HM, Kempski, J., Steglich, B., Huber, FJ, Ernst, TM, Shiri, AM, Wegscheid, C., Tasika, E., et al.
54. O'Donnell, JS, Madore, J., Li, XY a Smyth, MJ (2020). Nádorové vnitřní a vnější imunitní funkce CD1
55. Seminář. Cancer Biol. 65, 189–196. https://doi.org/10.1016/j.semcancer.2019.11.013. 55. Molfetta, R., Zitti, B., Lecce, M., Milito, ND, Stabile, H., Fionda, C., Cippitelli, M., Gismondi, A., Santoni, A., and Paolini, R (2020). CD155: multifunkční molekula v progresi nádoru. Int. J. Mol. Sci. 21, 922. https://doi.org/10.3390/ijms21030922.
56. Gao, J., Zheng, Q., Xin, N., Wang, W., and Zhao, C. (2017). CD155, onkoimunologická molekula v lidských nádorech. Cancer Sci. 108, 1934– 1938. https://doi.org/10.1111/cas.13324.
57. Morimoto, K., Satoh-Yamaguchi, K., Hamaguchi, A., Inoue, Y., Takeuchi, M., Okada, M., Ikeda, W., Takai, Y., and Imai, T. ( 2008). Interakce rakovinných buněk s krevními destičkami zprostředkovaná Necl-5/poliovirovým receptorem zvyšuje metastázy rakovinných buněk do plic. Oncogene 27, 264–273. https://doi.org/10.1038/sj.onc.1210645.
58. Chan, CJ, Martinet, L., Gilfillan, S., Souza-Fonseca-Guimaraes, F., Chow, MT, Town, L., Ritchie, DS, Colonna, M., Andrews, DM a Smyth, MJ (2014). Receptory CD96 a CD226 stojí proti sobě v regulaci funkcí přirozených zabíječů. Nat. Immunol. 15, 431–438. https://doi.org/10.1038/ni.2850.
59. Fuchs, A., Cella, M., Giurisato, E., Shaw, AS a Colonna, M. (2004). Špičková hrana: CD96 (taktilní) podporuje adhezi NK buňky k cílové buňce interakcí s receptorem polioviru (CD155). J. Immunol. 172, 3994–3998. https://doi.org/10.4049/jimmunol.172.7.3994.
60. Jarosch, S., Ko¨hlen, J., Wagner, S., D'Ippolito, E., and Busch, DH (2022). ChipCytometrie pro multiplexní detekci proteinových a mRNA markerů na vzorcích lidské tkáně FFPE. STAR Protoc. 3, 101374. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2022.101374.
61. Chauvin, JM, Ka, M., Pagliano, O., Menna, C., Ding, Q., DeBlasio, R., Sanders, C., Hou, J., Li, XY, Ferrone, S., a kol. (2020). Stimulace IL15 s blokádou TIGIT revertuje dysfunkci NK-buněk zprostředkovanou CD{3}} u melanomu. Clin. Cancer Res. 26, 5520–5533. https://doi.org/10.1158/ 1078-0432.CCR-20-0575.
62. Weulersse, M., Asrir, A., Pichler, AC, Lemaitre, L., Braun, M., Carrie´, N., Joubert, MV, Le Moine, M., Do Souto, L., Gaud, G. a kol. (2020). Ztráta koaktivačního receptoru CD226 závislá na Eomes omezuje protinádorové funkce CD8(+) T buněk a omezuje účinnost imunoterapie rakoviny. Imunita 53, 824–839.e10. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 2020.09.006.
63. Braun, M., Aguilera, AR, Sundarrajan, A., Corvino, D., Stannard, K., Krumeich, S., Das, I., Lima, LG, Meza Guzman, LG, Li, K., a kol. (2020). CD155 na nádorových buňkách řídí rezistenci vůči imunoterapii indukcí degradace aktivačního receptoru CD226 v CD8(+) T buňkách. Imunita 53, 805–823.e15. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 2020.09.010.
64. Lepletier, A., Madore, J., O'Donnell, JS, Johnston, RL, Li, XY, McDonald, E., Ahern, E., Kuchel, A., Eastgate, M., Pearson, SA, a kol. (2020). Exprese nádorového CD155 je spojena s rezistencí na imunoterapii antiPD1 u metastatického melanomu. Clin. Cancer Res. 26, 3671–3681. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-19-3925.
65. Newman, AM, Steen, CB, Liu, CL, Gentles, AJ, Chaudhuri, AA, Scherer, F., Khodadoust, MS, Esfahani, MS, Luca, BA, Steiner, D., et al. (2019). Stanovení abundance a exprese typu buněk z hromadných tkání pomocí digitální cytometrie. Nat. Biotechnol. 37, 773-782. https://doi.org/10.1038/s41587-019-0114-2.
66. Soriani, A., Zingoni, A., Cerboni, C., Iannitto, ML, Ricciardi, MR, Di Gialleonardo, V., Cippitelli, M., Fionda, C., Petrucci, MT, Guarini, A., a kol. (2009). ATM-ATR-dependentní up-regulace DNAM-1 a NKG2D ligandů na buňkách mnohočetného myelomu terapeutickými činidly vede ke zvýšené citlivosti NK-buněk a je spojena se senescentním fenotypem. Krev 113, 3503–3511. https://doi.org/10.1182/blood{13}}.
