Jedinečné a sdílené miRNA tří typů exosomů

Dále jsme zkoumali roli jedinečných miRNA ze tří typů exosomů v regulaci signálu. Vennův diagram odhalil 16, 27 a 61 jedinečných miRNA v hESC-Exos, hiPSC-Exos a hUC-MSC-Exos, v daném pořadí, a 70 sdílených miRNA (obr. 6A). Regulační síť interakcí miRNA-protein byla hodnocena cílením na unikátní miRNA. V hESC-Exos bylo zjištěno, že 16 unikátních miRNA reguluje autofagii, PI3K-AKT, Foxo, HIF-1, ErbB, mTOR, dlouhověkost, dráhu AMPK atd. (obr. 6B). Pro 27 jedinečných miRNA v hiPSC-Exos odhalila KEGG analýza několik významných ontologií, včetně metabolismu xenobiotik, signalizace AGE-RAGE, signalizace mTOR, metabolismu retinolu, buněčné stárnutí, signalizace MAPK atd. (obr. 6C). V hUC-MSC-Exos bylo zjištěno, že 61 unikátních miRNA se účastní regulace signalizace PI3K-AKT, infekce lidským papilomavirem, signalizace cGMP-PKG, buněčné stárnutí, signalizace Ras, signalizace mTOR, signalizace JAK-STAT, NF-κB signalizace atd. (obr. 6D).

Glykosid cistanche může také zvýšit aktivitu SOD v srdeční a jaterní tkáni a významně snížit obsah lipofuscinu a MDA v každé tkáni, účinně zachycovat různé reaktivní kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atd.) a chránit před způsobeným poškozením DNA. OH-radikály. Cystanche fenylethanoidové glykosidy mají silnou schopnost vychytávání volných radikálů, vyšší redukční schopnost než vitamín C, zlepšují aktivitu SOD v suspenzi spermií, snižují obsah MDA a mají určitý ochranný účinek na funkci membrány spermií. Polysacharidy Cistanche mohou zvýšit aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytech a plicních tkáních experimentálně senescentních myší způsobených D-galaktózou, stejně jako snížit obsah MDA a kolagenu v plicích a plazmě a zvýšit obsah elastinu. dobrý čisticí účinek na DPPH, prodlužuje dobu hypoxie u senescentních myší, zlepšuje aktivitu SOD v séru a oddaluje fyziologickou degeneraci plic u experimentálně senescentních myší Experimenty prokázaly, že Cistanche má dobrou antioxidační schopnost s buněčnou morfologickou degenerací a má potenciál být lékem k prevenci a léčbě nemocí stárnutí kůže. Zároveň má echinakosid v Cistanche významnou schopnost vychytávat volné radikály DPPH a má schopnost vychytávat reaktivní formy kyslíku a bránit volnými radikály indukované degradaci kolagenu a má také dobrý reparační účinek na poškození aniontů volnými radikály thyminu.

Klikněte na doplněk Cistanche Deserticola

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Složky miRNA nepřímo významně přispívají k mnoha signálním drahám. Abychom prozkoumali interakci mezi jedinečnými shluky miRNA a kanonickými cestami, provedli jsme analýzu regulační sítě pomocí databáze IPA. Výsledky IPA odhalily, že nejvyšší počet přečtených miRNA (P<0.05, abundance>1000) v regulační síti byly mapovány na více kanonických signálních drah. miRNA a jejich odpovídající dráhy jsou uvedeny v dalším souboru 5. Pomocí miRNA hESC-Exos jako příkladů lze uvést několik vysoce hojných miRNA, včetně has-miR-95-3p, has-miR-30a{{8} }p, has-miR- 181-5p, has-miR-183-3p a has-miR-301a-3p, byly zapojeny do AMPK, autofagie, ErbB, dlouhověkosti regulace a mimo jiné signální dráha FOXO. Cytoscape byl použit k nakreslení sítě jedinečných miRNA ze tří typů exozomů a jejich regulovaných signálních drah (Dodatečný soubor 1: Obr. S11).

miRNA profily související s regulací pluripotence

To investigate the regulatory effect of exosome-derived miRNAs on the pluripotency of stem cells, we predicted the target genes and screened the miRNAs involved in regulating the above process. Pluripotency-related miRNAs (abundance>1000) ve třech typech exozomů (obr. 7A–C). První tři miRNA ze tří typů exozomů byly has-miR-302b-3p, has-miR-302a-5p a has-miR{{9} }d-3p (hESC-Exos), has-miR-372-3p, has-miR-371a-5p a has-miR-221-3p (hiPSC-Exos) a has-miR-21-5p, has-miR-146a-5p a has-miR- 320a-3p ( hUC-MSC-Exos). Dále jsme popsali regulační síť deseti nejlepších miRNA z exozomů a jejich cílové geny zapojené do regulace pluripotence (obr. 7D–F). Analýza Venn diagramu odhalila 12 překrývajících se miRNA, což naznačovalo, že by mohly být zásadními sadami miRNA při regulaci pluripotence kmenových buněk (obr. 7G–H).

Specifické proteiny a miRNA ve třech typech exozomů

Abychom dále ověřili skutečnou expresi specifických proteinů ve třech exozomech, provedli jsme Western blotting, abychom detekovali kandidátní proteiny v různých drahách (obr. 8A a B). Pro buněčný cyklus byly tři klíčové regulační faktory, MCM5, PCNA1 a CDK1, více exprimovány v hESC-Exos a hiPSCExos než v hUC-MSC-Exos. PRKAA1, patřící do rodiny ser/thr protein kináz, je buněčná energie, konzervovaný faktor ve všech eukaryotických buňkách a vykazuje podobnou zátěž ve třech exozomech. SYK je široce exprimován v hematopoetických buňkách a podílí se na spojení aktivovaných imunoreceptorů s následnými signalizačními událostmi. BTK hraje klíčovou roli ve vývoji B buněk a imunoregulaci. Proteinové zátěže SYK a BTK byly zvýšené u hUC-MSCExos ve srovnání s těmi u hESC-Exos nebo hiPSC-Exos. Wnt5 je členem genové rodiny Wnt, která se podílí na vývojových procesech, včetně regulace buněčného osudu a vzorování během embryogeneze. hESC-Exos byly nejvíce obohaceny o Wnt5, následované hiPSC-Exos a hUC-Exos. RHEB je životně důležitý při regulaci růstu a progrese buněčného cyklu vzhledem k jeho roli v signální dráze mTOR/S6K. Western blotting ukázal, že tři typy exosomů nesly podobnou zátěž RHEB. EGFR je buněčný povrchový protein, který váže epidermální růstový faktor, a tak indukuje dimerizaci receptoru a autofosforylaci tyrosinu, což vede k buněčné proliferaci. Jak hESC-Exos, tak hUC-MSC-Exos měly vyšší hladiny EGFR než hiPSC-Exos. ICAM2 je členem rodiny intercelulárních adhezních molekul (ICAM) a zprostředkovává adhezivní interakce důležité pro antigenně specifickou imunitní odpověď, clearance zprostředkovanou NK buňkami, recirkulaci lymfocytů a další buněčné interakce důležité pro imunitní odpověď a dozor. Mezi třemi exosomy měl hUC-MSC-Exos nejvyšší hladinu ICAM2. Kromě toho bylo pět nejlepších miRNA ve třech typech exozomů hodnoceno pomocí RT-qPCR a jejich exprese byla v souladu s výsledky sekvenování RNA (obr. 8C).

Diskuse

EV jsou bohaté na různé biologicky aktivní látky a skládají se převážně z proteinů, nukleotidů a lipidů [3, 17]. V posledních desetiletích výzkumná komunita zahájila zlatý věk analytických technik pro proteinové, nukleotidové a lipidové omiky. Mezi těmito technikami hmotnostní spektrometrie [14, 20] a vysoce výkonné sekvenování [6, 54] umožňují plošný screening a identifikaci komponent EV. Dvě databáze, Vesiclepedia (https://microvesicles.org) [28] a Expedia (https://evpedia.info) [29], jsou průběžně aktualizovány a poskytují přehled komponent savčích a nesavčích EV, resp. . Jako EV se exozomy liší od MV z hlediska jejich biologického původu a fyzických rozměrů [46]. S neustálým pokrokem v oblasti EV jsou neustále optimalizovány nové metody, aby se usnadnila izolace a purifikace exozomů, splňující přísnost potřebnou pro srovnávací analýzu. Abychom doplnili databáze exosomů a rozšířili rozsah jejich klinických aplikací, v této studii popisujeme složkový rámec exozomů z hESC a hiPSC, který dosud nebyl popsán. Také jsme porovnali jejich složení a biologické funkce s exozomy odvozenými od hUC-MSC. Za tímto účelem jsme zatkli exozomy z EV v uznaných velikostech pomocí ultracentrifugace kombinované s filtrací, s výjimkou MV a apoptotických těl, což usnadnilo rafinaci exosomových složek. Během fáze logaritmického růstu buněk byly shromážděné KM připraveny pro přípravu exosomů. Bylo zjištěno, že koncentrace částic hESC-Exos je významně vyšší než koncentrace hUC-MSC-Exos, ale podobná jako u hiPSC-Exos. Podobné výsledky byly získány při srovnání koncentrací proteinů. Naproti tomu celkové RNA vykazovaly významný pokles gradientů z hESC-Exos a hiPSC-Exos do hUC-MSC-Exos. Tyto výsledky naznačují, že hESC (H9) mohou hrát ústřední roli v replikační aktivitě a mají silnější schopnost vylučovat exosomy mezi třemi kmenovými buňkami.

V předchozích studiích se výzkumníci soustředili na dostupnost exozomů [1, 11, 58], přičemž byli omezeni na své pole výzkumu. V důsledku toho byla věnována menší pozornost rozdílové analýze mezi exosomy odvozenými z různých zdrojů. Ačkoli byla provedena určitá EV proteomika tří kmenových buněk, výzkumníci dosud neupřesnili rozměr exozomů [19, 32, 59] a metoda testu je obecně založena na jediné technice hmotnostní spektrometrie. V této studii byly k měření a kvantifikaci proteinových složek izolovaných exozomů použity metody TMT i LFQ. Bioinformatická analýza odhalila, že vysoce nabité proteiny by mohly koordinovat procesy vývoje, opravy poškození a metabolismus prostřednictvím intervenujících signálních drah Wnt, AMPK, VEGF a buněčného cyklu, což bylo v souladu s předchozí zprávou [19]. Podobně by se hiPSC-Exos mohly také účastnit výše uvedených biologických procesů ovlivněním kolaterálních signálů. EV proteomika hiPSC indukovaných z HFF však ukázala odlišný přehled genové ontologie, který se více zaměřil na procesy replikace DNA a katabolismu RNA [45]. Proto jsme odvodili, že exozomy vylučované z hiPSC pocházejících z různých tkání mohou mít různé proteinové profily. Pokud jde o hUC-MSCs-Exos, jeho složky se mísily s mnoha imunomodulačními aktivitami regulací komplementového systému, mikrobiální infekce, signalizace NF-KB atd., a ovlivnily četné metabolické signály, jako je metabolismus cholesterolu, metabolismus fosfolipázy D a purinů. metabolismus, poskytující výsledky podobné těm z předchozích zpráv [1, 59].

V této studii jsme párově porovnávali proteomy tří typů exozomů a dále analyzovali jejich exkluzivní proteiny z hlediska funkčních drah a regulačních sítí. HiPSC jsou typem pluripotentních kmenových buněk, které lze generovat přeprogramováním somatických buněk tak, aby napodobovaly pluripotenci hESC [48], což ukazuje, že tyto buňky jsou si do určité míry podobné. Přestože se jejich exosomové proteiny vysoce překrývaly, proteiny hESC-Exos byly obohaceny o vývojovou regulaci a funkce buněčného cyklu, což naznačuje, že hESC-Exos může mít v naší studii silnější schopnost regulovat pluripotenci než hiPSC-Exos. Pluripotence hUC-MSC je nižší než u hiPSC a hESC, jak se odráží v jejich výrazně odlišných proteinových profilech. Proteom hUC-MSC-Exos se lišil od proteomu hESC-Exos a hiPSC-Exos v imunoregulaci, protože byl obohacen o proteiny regulující aktivity přirozených zabíječských buněk a komplementového systému. Kromě toho bioinformatika proteinů sdílených třemi typy exosomů odhalila, že upregulace proteinů hESC-Exos nebo hiPSC-Exos se zaměřila více na metabolismus, vývoj a funkce buněčné proliferace interferencí s klasickými signálními cestami, jako jsou AMPK, Wnt, mTOR. a buněčný cyklus. Pro srovnání, upregulované proteiny hUC-MSC-Exos nebyly obohaceny pouze o imunitní signalizaci, včetně systému komplementu, mikrobiální infekce, signalizaci NF-κB a signalizaci receptorů B, ale také v metabolických procesech, jako je signalizace PPAR metabolismus cholesterolu a signalizace MAPK.

Exosomové náklady jsou jedinečného tkáňového a buněčného původu a obsahují miRNA [16]. Tato studie také ukázala, že exozomy izolované z CM produkovaných in vitro pomocí hESC, hiPSC a hUC-MSC obsahovaly výrazné a specifické miRNA podpisy. Zjistili jsme, že každá exosomální miRNA má jedinečnou krajinu. Exprese miRNA a interakce s 3' nebo 5' UTR jejich cílových genů se účastní komplexních fyziologických a patofyziologických aktivit[18]. Horní miRNA tří typů exozomů regulují řadu biologických procesů, včetně buněčného cyklu a signalizace Hippo, Wnt, AMPK a TGF. Profily miRNA hUC-MSC-Exos však měly silnější imunomodulační schopnost než profily hESC-Exos nebo hiPSC-Exos, pokud jde o chování B a T buněk, stejně jako signalizaci TNF, JAK-STAT a NF-KB. Zejména nejunikátnější profily miRNA byly spojeny s regulací autofagie, dlouhověkosti, signalizace PI3K-Akt, mTOR, AMPK a p53, což naznačuje, že tyto shluky miRNA mohou modulovat stárnutí, onemocnění související se stárnutím, opravu tkání po zranění a metabolismus. . Jedinečné miRNA hiPSC-Exos regulují signalizaci mTOR, buněčné stárnutí, metabolismus retinolu a signalizaci TNF, což také přispívá k regulaci stárnutí a metabolismu. Kromě signalizace mTOR a stárnutí buněk regulují jedinečné miRNA hUC-MSC-Exos signalizaci Foxo, Jak-STAT a NF-KB, což může přispět k remodelaci metabolického a imunitního mikroprostředí. Analýza sdílených miRNA mezi třemi typy exozomů dále podpořila tyto rozdíly v regulaci signalizace. Celkově shluky miRNA v hESC-Exos nebo hiPSC-Exos koordinovaly výskyt více událostí, jako je vývoj, buněčný cyklus a buněčná diferenciace. Zdá se, že sada miRNA hiPSC-Exos hraje v těchto funkcích méně důležitou roli než u hESC-Exos, ale důležitější roli než u hUCMSC-Exos. Pokud jde o hUC-MSC-Exos, nalezené profily miRNA naznačují jejich vynikající schopnost regulovat imunitní prostředí, zejména při hojení ran a infekcí.

Ve vývojové biologii podporují exosomy odvozené z pluripotentních kmenových buněk udržení pluripotentního stavu. Proto miRNA vstupující do buněčného mikroprostředí významně přispívají k udržení kmenovosti [4, 32]. Tři typy exosomů v této studii obsahovaly různé shluky miRNA, které regulují pluripotentní signalizaci. Nicméně 12 miRNA sdílených mezi třemi typy exozomů může být rozhodujících pro regulaci pluripotence, včetně miR- 21-5p, miR-92a-3p a miR-221-3p. Tuto hypotézu je třeba otestovat a je třeba prozkoumat více typů kmenových buněk. Kromě toho se překrývající se miRNA mezi hESC-Exos a hiPSC-Exos mohou podílet na diferenciaci a přeprogramování buněk, jak naznačují výsledky podrobnějších analýz. Například rodina miR-302 byla vysoce obohacena a exkluzivně pro hESC-Exos a hiPSC-Exos a významně přispěla k ovlivnění chování kmenových buněk modulací přeprogramování [33, 50]. Tento bod nepřímo odpovídá předchozímu výzkumu týkajícímu se jedinečnosti miR-302 v lidských a myších ESC [33, 50]. Analýza exprese shluků miRNA, které byly vysoce exprimovány v ESC během počáteční fáze přeprogramování, odhalila indukci miR-17 [41] a miR-106a/106b [37]. Nadměrná exprese miR-93 podpořila zvýšení počtu kolonií iPSC [35].

Signální síť vytvořená exosomovým nákladem řídí intracelulární děje a dále zasahuje do řady patologických a fyziologických procesů [3]. Exozomy hESC obsahují četné nabité proteiny a miRNA, o kterých se předpokládá, že regulují krajinu vývoje, metabolismu a anti-aging prostřednictvím míšení do signálních drah AMPK, mTOR a Wnt a regulují autofagii, dlouhověkost a buněčný cyklus. Mnoho studií zdůraznilo funkce hESCEV při omlazení stárnoucího hipokampu [25, 26], kostní dřeně [19] a endoteliálních buněk [10] a také zmírnění recidivující osteoartrózy dodáním specifických proteinů nebo miRNA [58]. Naše zjištění také podporují předchozí výzkum, ve kterém bylo zjištěno, že EV odvozené od ESC mají pozitivní důsledky při obnově narušené kardiovaskulární funkce [5]. EV odvozená od ESC umožnila zachovat kmen ESC, a tak byla schopna přeprogramování [4], což je v souladu s našimi výsledky pro náklady hESC-Exos. V naší studii měly hiPSC přeprogramované z pupečníkových buněk biologické funkce podobné těm z hESC-Exos; nicméně, žádné zprávy specificky podporovaly tuto teorii. Ve srovnání s tím hUC-MSC-Exos získalo více pozornosti a různé preklinické a klinické studie objasnily jejich terapeutický účinek na mnohočetná onemocnění [51]. Ačkoli hUC-MSC-Exos přispívá k regeneraci tkáně a remodelaci tkáně, tyto schopnosti jsou horší než schopnosti hESC-Exos a hiPSC-Exos. Naše analýza odhalila, že hUC-MSC-Exos vykazoval vynikající schopnost imunitní regulace. Tato zjištění poskytují základ pro další výzkum nemocí souvisejících se zánětem, jako je COVID-19 [2].

Závěry

Celkově je hESC-Exos vynikající v regulaci vývoje, metabolismu a proti stárnutí, hiPSC-Exos má podobné biologické funkce, ale je horší než hESC-Exos. Ve srovnání s tím hUC-MSC-Exos přispívá více k imunitní regulaci. Naše analýza rozšiřuje rozsah použití hESC-Exos, hiPSC a hUC-MSC-Exos a zdůrazňuje jejich příslušné výhody při intervenci signalizace související s onemocněním. Podle našich nejlepších znalostí je tato studie první, která uvádí systematickou a komplexní analýzu exosomové proteomiky a profilů miRNA hESC, hiPSC a hUC-MSC. Naše studie dále obohacuje současné databáze EV a usnadňuje získávání cennějších dat pro identifikaci vhodných acelulárních terapií v klinických podmínkách. Tyto exosomy se také starají o vývoj léků jako alternativního transportního systému, který nahradí virové transportní systémy, jako je adenovirus [7]. Ačkoli současné předpovědi postrádají podstatnou validitu, tato zjištění by mohla odhalit další individuální nebo společné aplikace tří exozomů v preklinickém nebo klinickém výzkumu. Kromě toho by budoucí výzkum mohl být také prováděn prostřednictvím integrované diferenciální analýzy exosomového nákladu s EV, stejně jako složek samotných buněk.

Zkratky

MSC: mezenchymální kmenová buňka; hESC: lidské embryonální kmenové buňky; hiPSC: Pluripotentní kmenové buňky indukované člověkem; hUC-MSC: lidské mezenchymální kmenové buňky z pupečníku; TMT: Tandem mass tag; LFQ: kvantifikace relativního peptidu bez označení; hESC-Exos: Exosomy odvozené z lidských embryonálních kmenových buněk; hiPSC-Exos: Exosomy odvozené z lidských embryonálních kmenových buněk; hUC-MSC-Exos: exosomy odvozené z lidské pupečníkové mezenchymální kmenové buňky; EV: Extracelulární vezikuly; MV: mikrovezikuly; Alix: gen interagující s apoptózou 2-protein X; TSG101: gen 101 náchylnosti k nádoru; HFF: fibroblasty lidské předkožky; CAM: molekuly buněčné adheze; TEM: Transmisní elektronová mikroskopie; PDI: Polydisperzita; TEAB: tetraethylamonium bromid; DEPs: Diferenciálně exprimované proteiny; FDR: Míra falešných objevů.

Poděkování

Jsme vděční Xueke Tan, Zhongshuang Lv a Xixia Li za pomoc s přípravou vzorků pro elektronovou mikroskopii a pořízením snímků TEM v Centru pro biologické zobrazování (CBI), Ústavu biofyziky Čínské akademie věd. Autoři také děkují Dr. Baohua Zou z Ústavu biofyziky Čínské akademie věd za její laskavou pomoc při zásadním čtení a návrhy.

Autorské příspěvky

YB, YZ a JG vymysleli a navrhli experimenty. YB a XQ provedli izolaci a identifikaci exosomu. YB, XQ, QL, SS, KZ, XQ, XZ, CJ, HW a ZY přispěly k bioinformatické analýze. YB, YZ a JG psali noviny. Všichni autoři přečetli a schválili rukopis.

Financování

Tato práce byla podpořena granty z Národního klíčového výzkumného a vývojového projektu (2019YFA0110400 pro GJ), Národní nadace pro vědu a techniku ​​(31971051, 31771562 pro GJ) a grantové podpory klinické medicíny Dengfeng v Dalianu (2021024 pro YZ).

Dostupnost dat a materiálů

Všechny datové soubory použité a/nebo analyzované během aktuální studie jsou na přiměřenou žádost k dispozici od odpovídajícího autora. Všichni autoři potvrdili, že byla zahrnuta citace dostupných údajů v sekci reference.

Prohlášení

Etický souhlas a souhlas s účastí

Autoři neuvádějí žádný potenciální střet zájmů.

Souhlas se zveřejněním

Nelze použít.

Podrobnosti o autorovi

1 Klíčová laboratoř mezioborového výzkumu, Ústav biofyziky, Čínská akademie věd, Peking 100101, Čína. 2 Univerzita Čínské akademie věd, Peking 100049, Čína. 3 Oddělení lékařské onkologie, Druhá přidružená nemocnice lékařské univerzity Dalian, Dalian 116023, Čína. 4 Šesté oddělení jaterních onemocnění, klinické centrum veřejného zdraví v Dalian, lékařská univerzita v Dalianu, Dalian 116023, Čína.

Reference

1. Abbaszadeh H, Ghorbani F, Derakhshani M, Movassaghpour A, Yousef M. Extracelulární vezikuly odvozené z mezenchymálních kmenových buněk z lidské pupeční šňůry: nové terapeutické paradigma. J Cell Physiol. 2020;235(2):706–17.

2. Abdelgawad M, Bakry NS, Farghali AA, Abdel-Latif A, Lotfy A. Terapie na bázi mezenchymálních kmenových buněk a exozomy u COVID-19: současné trendy a vyhlídky. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):469.

3. Abels ER, Breakefeld XO. Úvod do extracelulárních vezikul: biogeneze, selekce nákladu RNA, obsah, uvolňování a příjem. Cell Mol Neurobiol. 2016;36(3):301–12.

4. Automobily Baumann K. EV podporují představivost. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021;22(2):72–3.

5. Bei Y, Das S, Rodosthenous RS, Holvoet P, Vanhaverbeke M, Monteiro MC, Monteiro VVS, Radosinska J, Bartekova M, Jansen F, Li Q, Rajasingh J, Xiao J. Extracelulární vezikuly v kardiovaskulární terapii. Teranostika. 2017;7(17):4168–82.

6. Bellingham SA, Coleman BM, Hill AF. Malé hluboké sekvenování RNA odhaluje zřetelný podpis miRNA uvolněný v exozomech z neuronálních buněk infikovaných priony. Nucleic Acids Res. 2012;40(21):10937–49.

7. Bi Y, Gu L, Wang J, Chang Y, Jin M, Mao Y, Wang H, Ji G. Nový systém pro jednoduchou rychlou konstrukci adenovirového vektoru pro usnadnění úpravy genomu zprostředkované CRISPR/Cas{1}}. CRISPR J. 2021;4(3):381–91.

8. Bi Y, Guo X, Zhang M, Zhu K, Shi C, Fan B, Wu Y, Yang Z, Ji G. Mezenchymální kmenové buňky odvozené z kostní dřeně zlepšují ztučnění jater souvisejících s cukrovkou prostřednictvím transformace mitochondrií u myší. Stem Cell Res Ther. 2021; 12(1):602.

9. Bissels U, Wild S, Tomiuk S, Holste A, Hafner M, Tuschl T, Bosio A. Absolutní kvantifikace mikroRNA pomocí univerzální reference. RNA. 2009;15(12):2375–84.

10. Chen B, Sun Y, Zhang J, Zhu Q, Yang Y, Niu X, Deng Z, Li Q, Wang Y. Exozomy odvozené z lidských embryonálních kmenových buněk podporují hojení dekubitů u starých myší omlazením senescentních endoteliálních buněk. Stem Cell Res Ther. 2019; 10(1):142.

11. Chen L, Xiang B, Wang X, Xiang C. Exosomy odvozené z kmenových buněk pocházejících z lidské menstruační krve zmírňují fulminantní selhání jater. Stem Cell Res Ther. 2017;8(1):9.

12. Chiang HR, Schoenfeld LW, Ruby JG, Auyeung VC, Spies N, Baek D, Johnston WK, Russ C, Luo S, Babiarz JE, Blelloch R, Schroth GP, Nusbaum C, Bartel DP. Savčí mikroRNA: experimentální hodnocení nových a dříve anotovaných genů. Genes Dev. 2010;24(10):992–1009.

13. Choi DS, Choi DY, Hong BS, Jang SC, Kim DK, Lee J, Kim YK, Kim KP, Gho YS. Kvantitativní proteomika extracelulárních vezikul odvozených z lidských primárních a metastatických buněk kolorektálního karcinomu. J Extracell vesicles. 2012.

14. Choi DS, Kim DK, Kim YK, Gho YS. Proteomika extracelulárních vezikul: exozomy a exozomy. Mass Spectrom Rev. 2015;34(4):474–90.

15. Colombo M, Moita C, van Niel G, Kowal J, Vigneron J, Benaroch P, Manel N, Moita LF, Théry C, Raposo G. Analýza funkcí ESCRT v exosomové biogenezi, složení a sekreci zdůrazňuje heterogenitu extracelulárních vezikuly. J Cell Sci. 2013;126(Pt 24):5553–65.

16. Colombo M, Raposo G, Théry C. Biogeneze, sekrece a mezibuněčné interakce exozomů a dalších extracelulárních váčků. Annu Rev Cell Dev Biol. 2014;30:255–89.

17. Dai J, Su Y, Zhong S, Cong L, Liu B, Yang J, Tao Y, He Z, Chen C, Jiang Y. Exosomy: klíčoví hráči v oblasti rakoviny a potenciální terapeutické strategie. Signal Transduct Target Ther. 2020; 5(1):145.

18. Gangaraju VK, Lin H. MikroRNA: klíčové regulátory kmenových buněk. Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(2):116–25.

19. Gong L, Chen B, Zhang J, Sun Y, Yuan J, Niu X, Hu G, Chen Y, Xie Z, Deng Z, Li Q, Wang Y. Lidské ESC-sEV zmírňují ztrátu kostní hmoty související s věkem tím, že omlazují senescentní mezenchymální kmenové buňky pocházející z kostní dřeně. J Extracell vesicles. 2020;9(1):1800971.

20. Haraszti RA, Didiot MC, Sapp E, Leszyk J, Shafer SA, Rockwell HE, Gao F, Narain NR, DiFiglia M, Kiebish MA, Aronin N, Khvorova A. Vysokorozlišovací proteomická a lipidomická analýza exozomů a mikrovezikul z různé buněčné zdroje. J Extracell vesicles. 2016;5:32570.

21. He C, Zheng S, Luo Y, Wang B. Exosomová teranostika: biologie a translační medicína. Teranostika. 2018;8(1):237–55.

22. Hessvik NP, Llorente A. Současné poznatky o biogenezi a uvolňování exosomů. Cell Mol Life Sci. 2018;75(2):193–208.

23. Hinna A, Steiniger F, Hupfeld S, Stein P, Kuntsche J, Brandl M. Filtrextrudované lipozomy revisited: studie distribuce velikosti a morfologie o složení lipidů a parametrech procesu. J Liposom Res. 2016;26(1):11–20.

24. Hsu C, Morohashi Y, Yoshimura S, Manrique-Hoyos N, Jung S, Lauterbach MA, Bakhti M, Grønborg M, Möbius W, Rhee J, Barr FA, Simons M. Regulace exosomové sekrece pomocí Rab35 a jeho GTPase- aktivační proteiny TBC1D10A-C. J Cell Biol. 2010;189(2):223–32.

25. Hu G, Xia Y, Chen B, Zhang J, Gong L, Chen Y, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEV omlazují stárnoucí hipokampální NSC přenosem SMAD k regulaci MYT1-Egln{ {3}}Osa Sirt1. Mol Ther. 2021;29(1):103–20.

26. Hu G, Xia Y, Zhang J, Chen Y, Yuan J, Niu X, Zhao B, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEV omlazují senescentní hipokampální NSC aktivací lysozomů ke zlepšení kognitivní dysfunkce u vaskulární demence. Adva Sci. 2020;7(10):1903330.

27. Huang H, Xiong Q, Wang N, Chen R, Ren H, Siwko S, Han H, Liu M, Qian M, Du B. Kisspeptin/GPR54 signalizace omezuje antivirovou vrozenou imunitní odpověď prostřednictvím regulace aktivity kalcineurin fosfatázy. Sci Adv. 2018;4(8):9784.

28. Kalra H, Simpson RJ, Ji H, Aikawa E, Altevogt P, Askenase P, Bond VC, Borràs FE, Breakefeld X, Budnik V, Buzas E, Camussi G, Clayton A, Cocucci E, Falcon-Perez JM, Gabrielsson S, Gho YS, Gupta D, Harsha HC, Hendrix A, Hill AF, Inal JM, Jenster G, Krämer-Albers EM, Lim SK, Llorente A, Lötvall J, Marcilla A, Mincheva-Nilsson L, Nazarenko I, Nieuwland R , Nolte-'t Hoen EN, Pandey A, Patel T, Piper MG, Pluchino S, Prasad TS, Rajendran L, Raposo G, Record M, Reid GE, Sánchez-Madrid F, Schifelers RM, Siljander P, Stensballe A, Stoorvogel W, Taylor D, Thery C, Valadi H, van Balkom BW, Vázquez J, Vidal M, Wauben MH, Yáñez-Mó M, Zoeller M, Mathivanan S. Vesiclepedia: kompendium pro extracelulární vezikuly s kontinuální komunitní anotací. PLoS Biol. 2012;10(12): e1001450.

29. Kim DK, Kang B, Kim OY, Choi DS, Lee J, Kim SR, Go G, Yoon YJ, Kim JH, Jang SC, Park KS, Choi EJ, Kim KP, Desiderio DM, Kim YK, Lötvall J, Hwang D, Gho YS. Expedia: integrovaná databáze vysoce výkonných dat pro systémové analýzy extracelulárních vezikul. J Extracell vesicles. 2013.

30. Kim KI, van de Wiel MA. Efekty závislosti ve vícerozměrných testovacích problémech. BMC Bioinf. 2008;9:114.

31. Kingham E, Orefo RO. Embryonální a indukované pluripotentní kmenové buňky: pochopení, vytvoření a využití nano-nika pro regenerativní medicínu. ACS Nano. 2013;7(3):1867–81.

32. La Greca A, Solari C, Furmento V, Lombardi A, Biani MC, Aban C, Moro L, García M, Guberman AS, Sevlever GE, Miriuka SG, Luzzani C. Extracelulární vezikuly z mezenchymálních kmenových buněk odvozených z pluripotentních kmenových buněk získat stromální modulační proteomický vzor během diferenciace. Exp Mol Med. 2018;50(9):1–12.

33. Li HL, Wei JF, Fan LY, Wang SH, Zhu L, Li TP, Lin G, Sun Y, Sun ZJ, Ding J, Liang XL, Li J, Han Q, Zhao RC. miR-302 reguluje pluripotenci, tvorbu teratomů a diferenciaci v kmenových buňkách prostřednictvím AKT1/OCT4-závislého způsobu. Cell Death Dis. 2016; 7(1): e2078.

34. Li P, Kaslan M, Lee SH, Yao J, Gao Z. Pokrok v technikách izolace exosomů. Teranostika. 2017;7(3):789–804.

35. Li Z, Yang CS, Nakashima K, Rana TM. Regulace tvorby iPS buněk zprostředkovaná malou RNA. EMBO J. 2011;30(5):823–34.

36. Liang G, Zhang Y. Embryonální kmenová buňka a indukovaná pluripotentní kmenová buňka: epigenetická perspektiva. Cell Res. 2013;23(1):49–69.

37. Lüningschrör P, Hauser S, Kaltschmidt B. Kaltschmidt C (2013) MikroRNA v pluripotenci, přeprogramování a indukci buněčného osudu. Biochim Biophys Acta. 1833;8:1894–903.

38. Maas SLN, Breakefeld XO, Weaver AM. Extracelulární vezikuly: jedinečná mezibuněčná transportní vehikula. Trends Cell Biol. 2017;27(3):172–88.

39. Martínez-Greene JA, Hernández-Ortega K, Quiroz-Baez R, ResendisAntonio O, Pichardo-Casas I, Sinclair DA, Budnik B, Hidalgo-Miranda A, Uribe-Querol E, Ramos-Godínez MDP, Martínez-Martínez E Kvantitativní proteomická analýza extracelulárních podskupin vezikul izolovaných optimalizovanou metodou kombinující precipitaci na bázi polymeru a vylučovací chromatografii. J Extracell vesicles. 2021;10(6): e12087.

40. Mathieu M, Martin-Jaular L, Lavieu G, Théry C. Specifika sekrece a příjmu exosomů a dalších extracelulárních vezikul pro komunikaci mezi buňkami. Nat Cell Biol. 2019;21(1):9–17.

41. Mogilyansky E, Rigoutsos I. Klastr miR-17/92: komplexní aktualizace jeho genomiky, genetiky, funkcí a stále důležitějších a četnějších rolí ve zdraví a nemoci. Cell Death Differ. 2013;20(12):1603–14.

42. Nguyen HQ, Lee D, Kim Y, Bang G, Cho K, Lee YS, Yeon JE, Lubman DM, Kim J. Kvantitativní proteomická analýza sérových extracelulárních vezikulů rozlišujících pacienty s alkoholickými a nealkoholickými ztučněnými jaterními chorobami bez označení. J Proteomika. 2021;245: 104278.

43. Pittenger MF, Discher DE, Péault BM, Phinney DG, Hare JM, Caplan AI. Perspektiva mezenchymálních kmenových buněk: buněčná biologie ke klinickému pokroku. NPJ Regen Med. 2019;4:22.

44. Pocsfalvi G, Stanly C, Vilasi A, Fiume I, Capasso G, Turiák L, Buzas EI, Vékey K. Hmotnostní spektrometrie extracelulárních vezikul. Hmotnostní spektrum Rev. 2016;35(1):3–21.

45. Questa M, Romorini L, Blüguermann C, Solari CM, Neiman G, Luzzani C, Scassa MÉ, Sevlever GE, Guberman AS, Miriuka SGa. Generování iPSC linie iPSC-FH2.1 v hypoxických podmínkách z fibroblastů lidské předkožky. Stem Cell Res. 2016;16(2):300–3.

46. ​​Raposo G, Stoorvogel W. Extracelulární vezikuly: exosomy, mikrovezikuly a přátelé. J Cell Biol. 2013;200(4):373–83.

47. Ela S, Mäger I, Breakefeld XO, Wood MJ. Extracelulární vezikuly: biologie a nové terapeutické možnosti. Nat Rev Drug Discov. 2013;12(5):347–57.

48. Shi Y, Inoue H, Wu JC, Yamanaka S. Technologie indukovaných pluripotentních kmenových buněk: desetiletí pokroku. Nat Rev Drug Discov. 2017;16(2):115–

49. Skotland T, Sandvig K, Llorente A. Lipidy v exosomech: Současné znalosti a cesta vpřed. Prog Lipid Res. 2017;66:30–41.

50. Subramanyam D, Lamouille S, Judson RL, Liu JY, Bucay N, Derynck R, Blelloch R. Vícenásobné cíle miR-302 a miR-372 podporují přeprogramování lidských fibroblastů na indukované pluripotentní kmenové buňky. Nat Biotechnol. 2011;29(5):443–8.

51. Tang Y, Zhou Y, Li HJ. Pokroky v exozomech mezenchymálních kmenových buněk: přehled. Stem Cell Res Ther. 2021; 12(1):71.

52. Théry C, Witwer KW, Aikawa E, Alcaraz MJ, Anderson JD, Andriantsitohaina R, Antoniou A, Arab T, Archer F, Atkin-Smith GK, Ayre DC, Bach JM, Bachurski D, Baharvand H, Balaj L, Baldacchino S, Bauer NN, Baxter AA, Bebawy M, Beckham C, Bedina Zavec A, Benmoussa A, Berardi AC, Bergese P, Bielska E, Blenkiron C, Bobis-Wozowicz S, Boilard E, Boireau W, Bongiovanni A, Borràs FE, Bosch S, Boulanger CM, Breakefeld X, Breglio AM, Brennan M, Brigstock DR, Brisson A, Broekman ML, Bromberg JF, Bryl-Górecka P, Buch S, Buck AH, Burger D, Busatto S, Buschmann D, Bussolati B, Buzás EI, Byrd JB, Camussi G, Carter DR, Caruso S, Chamley LW, Chang YT, Chen C, Chen S, Cheng L, Chin AR, Clayton A, Clerici SP, Cocks A, Cocucci E, Cofey RJ, Cordeiro- da-Silva A, Couch Y, Coumans FA, Coyle B, Crescitelli R, Criado MF, D'Souza-Schorey C, Das S, Datta Chaudhuri A, de Candia P, De Santana EF, De Wever O, Del Portillo HA, Demaret T, Deville S, Devitt A, Dhondt B, Di Vizio D, Dieterich LC, Dolo V, Dominguez Rubio AP, Dominici M, Dourado MR, Driedonks TA, Duarte FV, Duncan HM, Eichenberger RM, Ekström K, El Andaloussi S , Elie-Caille C, Erdbrügger U, Falcón-Pérez JM, Fatima F, Fish JE, Flores-Bellver M, Försönits A, FreletBarrand A, Fricke F, Fuhrmann G, Gabrielsson S, Gámez-Valero A, Gardiner C, Gärtner K , Gaudin R, Gho YS, Giebel B, Gilbert C, Gimona M, Giusti I, Goberdhan DC, Görgens A, Gorski SM, Greening DW, Gross JC, Gualerzi A, Gupta GN, Gustafson D, Handberg A, Haraszti RA, Harrison P, Hegyesi H, Hendrix A, Hill AF, Hochberg FH, Hofmann KF, Holder B, Holthofer H, Hosseinkhani B, Hu G, Huang Y, Huber V, Hunt S, Ibrahim AG, Ikezu T, Inal JM, Isin M, Ivanova A, Jackson HK, Jacobsen S, Jay SM, Jayachandran M, Jenster G, Jiang L, Johnson SM, Jones JC, Jong A, Jovanovic-Talisman T, Jung S, Kalluri R, Kano SI, Kaur S, Kawamura Y, Keller ET, Khamari D, Khomyakova E, Khvorova A, Kierulf P, Kim KP, Kislinger T, Klingeborn M, Klinke DJ, Kornek M, Kosanović MM, Kovács ÁF, Krämer-Albers EM, Krasemann S, Krause M, Kurochkin IV, Kusuma GD, Kuypers S, Laitinen S, Langevin SM, Languino LR, Lannigan J, Lässer C, Laurent LC, Lavieu G, Lázaro-Ibáñez E, Le Lay S, Lee MS, Lee YXF, Lemos DS, Lenassi M, Leszczynska A , Li IT, Liao K, Libregts SF, Ligeti E, Lim R, Lim SK, Linē A, Linnemannstöns K, Llorente A, Lombard CA, Lorenowicz MJ, Lörincz ÁM, Lötvall J, Lovett J, Lowry MC, Loyer X, Lu Q, Lukomska B, Lunavat TR, Maas SL, Malhi H, Marcilla A, Mariani J, Mariscal J, Martens-Uzunova ES, Martin-Jaular L, Martinez MC, Martins VR, Mathieu M, Mathivanan S, Maugeri M, McGinnis LK , McVey MJ, Meckes DG Jr, Meehan KL, Mertens I, Minciacchi VR, Möller A, Møller Jørgensen M, Morales-Kastresana A, Morhayim J, Mullier F, Muraca M, Musante L, Mussack V, Muth DC, Myburgh KH, Najrana T, Nawaz M, Nazarenko I, Nejsum P, Neri C, Neri T, Nieuwland R, Nimrichter L, Nolan JP, Nolte-'t Hoen EN, Noren Hooten N, O'Driscoll L, O'Grady T, O' Loghlen A, Ochiya T, Olivier M, Ortiz A, Ortiz LA, Osteikoetxea X, Østergaard O, Ostrowski M, Park J, Pegtel DM, Peinado H, Perut F, Pfaf MW, Phinney DG, Pieters BC, Pink RC, Pisetsky DS , Pogge von Strandmann E, Polakovicova I, Poon IK, Powell BH, Prada I, Pulliam L, Quesenberry P, Radeghieri A, Rafai RL, Raimondo S, Rak J, Ramirez MI, Raposo G, Rayyan MS, Regev-Rudzki N, Ricklefs FL, Robbins PD, Roberts DD, Rodrigues SC, Rohde E, Rome S, Rouschop KM, Rughetti A, Russell AE, Saá P, Sahoo S, Salas-Huenuleo E, Sánchez C, Saugstad JA, Saul MJ, Schifelers RM, Schneider R, Schøyen TH, Scott A, Shahaj E, Sharma S, Shatnyeva O, Shekari F, Shelke GV, Shetty AK, Shiba K, Siljander PR, Silva AM, Skowronek A, Snyder OL 2nd, Soares RP, Sódar BW, Soekmadji C, Sotillo J, Stahl PD, Stoorvogel W, Stott SL, Strasser EF, Swift S, Tahara H, Tewari M, Timms K, Tiwari S, Tixeira R, Tkach M, Toh WS, Tomasini R, Torrecilhas AC, Tosar JP, Toxavidis V, Urbanelli L, Vader P, van Balkom BW, van der Grein SG, Van Deun J, van Herwijnen MJ, Van Keuren-Jensen K, van Niel G, van Royen ME, van Wijnen AJ, Vasconcelos MH, Vechetti IJ Jr. , Veit TD, Vella LJ, Velot É, Verweij FJ, Vestad B, Viñas JL, Visnovitz T, Vukman KV, Wahlgren J, Watson DC, Wauben MH, Weaver A, Webber JP, Weber V, Wehman AM, Weiss DJ, Welsh JA, Wendt S, Wheelock AM, Wiener Z, Witte L, Wolfram J, Xagorari A, Xander P, Xu J, Yan X, YáñezMó M, Yin H, Yuana Y, Zappulli V, Zarubova J, Žėkas V, Zhang JY, Zhao Z, Zheng L, Zheutlin AR, Zickler AM, Zimmermann P, Zivkovic AM, Zocco D, Zuba-Surma EK. Minimální informace pro studie extracelulárních vezikul 2018 (MISEV2018): stanovisko mezinárodní společnosti pro extracelulární vezikuly a aktualizace pokynů MISEV2014. J Extracell vesicles. 2018;7(1):1535750.

53. Théry C, Zitvogel L, Amigorena S. Exosomy: složení, biogeneze a funkce. Nat Rev Immunol. 2002;2(8):569–79.

54. Tosar JP, Gámbaro F, Sanguinetti J, Bonilla B, Witwer KW, Cayota A. Posouzení třídění malých RNA do různých extracelulárních frakcí odhalených vysoce výkonným sekvenováním buněčných linií prsu. Nucleic Acids Res. 2015;43(11):5601–16.

55. Trajkovic K, Hsu C, Chiantia S, Rajendran L, Wenzel D, Wieland F, Schwille P, Brügger B, Simons M. Ceramid spouští pučení exosomových vezikul do multivezikulárních endozomů. Věda. 2008;319(5867):1244–7.

56. Vader P, Mol EA, Pasterkamp G, Schifelers RM. Extracelulární vezikuly pro dodávání léčiv. Adv Drug Deliv Rev. 2016;106(Pt A):148–56.

57. van Niel G, D'Angelo G, Raposo G. Osvětlení buněčné biologie extracelulárních váčků. Nat Rev Mol Cell Biol. 2018;19(4):213–28.

58. Wang Y, Yu D, Liu Z, Zhou F, Dai J, Wu B, Zhou J, Heng BC, Zou XH, Ouyang H, Liu H. Exosomy z embryonálních mezenchymálních kmenových buněk zmírňují osteoartritidu prostřednictvím vyvážení syntézy a degradace chrupavky extracelulární matrix. Stem Cell Res Ther. 2017;8(1):189.

59. Wang ZG, He ZY, Liang S, Yang Q, Cheng P, Chen AM. Komplexní proteomická analýza exozomů pocházejících z lidské kostní dřeně, tukové tkáně a mezenchymálních kmenových buněk z pupečníku. Stem Cell Res Ther. 2020; 11(1):511.

60. Xie C, Mao X, Huang J, Ding Y, Jianmin W, Dong S, Kong L, Gao G, Li CY, Wei L. KOBAS 2.0: webový server pro anotaci a identifikaci obohacených cest a nemocí. Nucleic Acids Res. 2011;39(suppl_2): W316–22.

61. Xu R, Rai A, Chen M, Suwakulsiri W, Greening DW, Simpson RJ. Extracelulární vezikuly u rakoviny: důsledky pro budoucí zlepšení péče o rakovinu. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(10):617–38.

62. Yáñez-Mó M, Siljander PR, Andreu Z, Zavec AB, Borràs FE, Buzas EI, Buzas K, Casal E, Cappello F, Carvalho J, Colás E, Cordeiro-da Silva A, Fais S, Falcon-Perez JM , Ghobrial IM, Giebel B, Gimona M, Graner M, Gursel I, Gursel M, Heegaard NH, Hendrix A, Kierulf P, Kokubun K, Kosanovic M, Kralj-Iglic V, Krämer-Albers EM, Laitinen S, Lässer C, Lener T, Ligeti E, Linē A, Lipps G, Llorente A, Lötvall J, Manček-Keber M, Marcilla A, Mittelbrunn M, Nazarenko I, Nolte-'t Hoen EN, Nyman TA, O'Driscoll L, Olivan M, Oliveira C, Pállinger É, Del Portillo HA, Reventós J, Rigau M, Rohde E, Sammar M, Sánchez-Madrid F, Santarém N, Schallmoser K, Ostenfeld MS, Stoorvogel W, Stukelj R, Van der Grein SG, Vasconcelos MH, Wauben MH, De Wever O. Biologické vlastnosti extracelulárních vezikul a jejich fyziologické funkce. J Extracell vesicles. 2015;4:27066.

Poznámka vydavatele

Springer Nature zůstává neutrální ohledně jurisdikčních nároků v publikovaných mapách a institucionálních přidruženích.

【Další informace:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】