Studie o terapeutických účincích a mechanismech monomerů tradiční čínské medicíny na potkaním modelu hypogonadismu s pozdním nástupem

 

Abstraktní

Objektivní
Zhodnotit léčebné účinky a mechanismy tří monomerů tradiční čínské medicíny (TCM).icariin, verbascosideaginsenosid Rg1-nahypogonadismus s pozdním nástupem (LOH)v modelu potkana a prozkoumat jejich potenciál jakopřirozené intervence pro pokles testosteronu související s věkemu mužů středního věku.

Metody
U starších mužů byl založen model hypogonadismu s pozdním nástupem (LOH).Krysy Sprague-Dawleyintraperitoneální injekcícyklofosfamidsimulující nedostatek androgenů. Tři monomery TCM-icariin, verbascosideaginsenosid Rg1- byly podávány perorálně po dobu 60 dnů.

Na konci léčby byla změřena tělesná hmotnost a hmotnosti reprodukčních orgánů (varlata, nadvarlata, semenné váčky atd.).Histopatologické změnyve tkáni varlat byly hodnoceny pomocíbarvení hematoxylin-eozin (H&E).. Hladiny v séruFSH, LHatestosteronbyly testovány prostřednictvímELISA. Výrazandrogenní receptor (AR)protein a mRNA byly hodnoceny pomocíWestern blotakvantitativní PCR v reálném čase (qRT-PCR).

 

 

 

Výsledky

Ginsenosid Rg1vykázala nejvýraznější zlepšení vtělesné hmotnostiahmotnost reprodukčního orgánu(P < 0,01).

Icariinvýrazně zvýšila hmotnostvarlata, nadvarleteasemenné váčky(P < 0,01).

Verbascosidestředně zlepšená hmotnost semenných váčků (P < 0,05).

Všechny tři monomery TCM účinněobrácená testikulární degeneraceu LOH potkanů, obnovení struktury semenotvorných kanálků a zvýšení počtuspermatogenní buňkyazralé spermie.

Všechny monomerní skupiny prokázaly schopnostnižší hladiny FSH a LH v séruzatímcozvýšení sérového testosteronu. Theskupina icariinvykazovala nejvýznamnější endokrinní zlepšení (P < 0,01).

Úrovně vyjádřeníandrogenní receptor (AR)v proteinu i mRNA byly významně upregulovány ve všech léčených skupinách. Účinekicariinbylvýraznější než testosteron propionát, označující asilný regulační účinek na AR signalizaci.

 

Závěr

Tato studie to naznačujeginsenosid Rg1je nejúčinnější při zlepšováníhmotnost těla a orgánůu LOH krys, zatímcoicariinvykazuje nejsilnější účinek vzvýšení produkce testosteronuaposílení AR výrazu. Všechny tři monomery -icariin, verbascosideaginsenosid Rg1- předvedenoochranné účinky proti degeneraci varlatapodporuje mužskou reprodukční endokrinní funkci, nabízející slibné přírodní alternativy pro managementhypogonadismus související s věkem.

 

Klíčová slova

Hypogonadismus s pozdním nástupem (LOH); icariin; verbascoside; ginsenosid Rgl; tradiční čínská medicína; Přírodní posilovač testosteronu; syndrom stárnutí muže; exprese androgenního receptoru; Bylinná terapie pro mužské zdraví

Kliknutím na obrázek se dozvíte více o TCM bylince pro sexuální zdraví

 

 

Pozadí

Hypogonadismus s pozdním nástupem (LOH)u mužů středního a staršího věku úzce souvisí spokles hladin androgenů související s věkem, zejména testosteron. Populační epidemiologická studie z roku 2021 provedená v šesti reprezentativních provinciích v Číně, zahrnující6 296 mužů ve věku 40–79 let, odhalila následující míry prevalence LOH:

3.2%u mužů ve věku 50 let

11.2%ve svých 60 letech

24.0%v 70 letech [1]

LOH se vyznačujesnížený sérový testosteronspolu s konstelacípříznaky nedostatku androgenůjako například:

Nízké libido

Erektilní dysfunkce

Deprese a podrážděnost

Kognitivní pokles a ztráta paměti

Tyto příznaky mohouvýrazně zhoršují fyzickou i psychickou pohodu, stejně jakokvalitu života [2–3].

V současné době,testosteronová substituční terapie (TRT)je hlavní proud léčby LOH a může dočasně zmírnit příznaky. Nicméně, obavy okardiovaskulární riziko, zdraví prostatyadlouhodobou bezpečnostzůstat [4]. Zájem o objevování proto rostepřírodní, bezpečnější alternativy, zejména zTradiční čínská medicína (TCM).

Tato studie si klade za cíl zhodnotitterapeutické účinky a mechanismytří monomerů TCM-icariin, verbascosideaginsenosid Rg1- pomocí akrysí model LOH.

 

1. Materiály a metody

1.1 Pokusná zvířata

Šedesát15měsíční samci krys Sprague-Dawley (SD).(700–800 g) byly získány v lednu 2022 z Animal Experimental Center of China Three Gorges University. Licenční čísla:

Certifikát zvířete: Ne. 42010200007997

Produkční licence: SCXK (E) 2022-0012

Potkani byli chováni v kontrolovaném prostředí (teplota: 19–23 stupňů, relativní vlhkost: 55 %–65 %) s přirozeným cyklem světla a tmy a volným přístupem k potravě a vodě. Po1 týden aklimatizace, začaly experimenty.

1.2 Reagencie a nástroje

cyklofosfamid(Nanjing Jiancheng)

Icariin(Nanjing Guangrun Biotech)

Ginsenosid Rg1(Shanghai Macklin)

Verbascoside(Shanghai Zhenzhun Biotech)

AR protilátka(Santa Cruz, USA)

-protilátka proti aktinu(Sigma, USA)

Barvicí sady H&E(Shanghai Yiji Industrial)

ELISA soupravy pro sérum FSH, LH, testosteron(Shanghai Meilian)

qRT-PCR reagencie (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotech)

Nástroje: Termo čtečka mikrodestiček, optický mikroskop Olympus, zobrazovací systém LI-COR Odyssey, přístroj ABI qRT-PCR

 

1.3 Seskupování zvířat a indukce LOH modelu

Krysy byly náhodně přiřazeny6 skupin (n=10 na skupinu):

Kontrolní skupina:

Intraperitoneální (ip) injekce 0,9% fyziologického roztoku po dobu 5 dnů

Orální fyziologický roztok (1 ml/100 g) po dobu 60 dnů

Modelová skupina:

ip cyklofosfamid 20 mg/kg/den po dobu 5 dnů

Následuje perorální fyziologický roztok po dobu 60 dnů

Testosteron propionát (pozitivní kontrola):

ip cyklofosfamid (stejný jako výše)

Subkutánní injekce testosteron propionátu 5 mg/kg/den po dobu 7 dnů

Skupina Icariin:

ip cyklofosfamid (stejný)

Perorální icariin 200 mg/kg/den po dobu 60 dnů

Skupina verbascoside:

ip cyklofosfamid (stejný)

Perorální verbascosid 200 mg/kg/den po dobu 60 dnů

Ginsenoside Rg1 skupina:

ip cyklofosfamid (stejný)

Perorální ginsenosid Rg1 200 mg/kg/den po dobu 60 dnů

Všechny léčby byly podávány mezi8:00–11:30. Byla provedena hodnocení24 hodin po poslední dávce.

 

1.4 Tělesná hmotnost a index reprodukčních orgánů

Po zvážení byly krysy usmrceny cervikální dislokací. Thevarlata, nadvarlata a semenné váčkybyly pitvány a zváženy.

Jedenvarlata od každé krysybyl opraven v4% paraformaldehydpo dobu 72 hodin, dehydratována tříděným alkoholem, zalita v parafínu, nakrájena na řezy (5 μm) a obarvenaHematoxylin-Eosin (H&E). Morfologické změny byly pozorovány pod světelným mikroskopem.

 

1.5 Testy sérových hormonů

Krysy byly anestetizovány pomocí3% pentobarbital sodnýa krev byla odebrána přessrdeční punkce. Sérum bylo oddělenocentrifugace při 3000 ot./min po dobu 10 minut při 4 stupních. K měření byly použity soupravy ELISAFSH, LH a testosteronúrovně podle protokolů výrobce.

 

1.6 AR Protein Expression (Western Blot)

Testikulární tkáň byla lyžována a měřena koncentrace proteinu. Stejná množství proteinu byla vyřešena10% SDS-PAGE, přeneseny na PVDF membrány a inkubovány s primárními protilátkami protiARa-aktin (1:1000)přes noc. Po inkubaci sekundární protilátky následovala chemiluminiscenční detekce.ImageJbyl použit pro analýzu.

 

1.7 Exprese AR mRNA (qRT-PCR)

Celková RNA byla extrahována z testikulární tkáně. cDNA byla syntetizována reverzní transkripcí. qRT-PCR byla provedena metodou SYBR Green.

AR primery:

Vpřed: 5′-CAGGGACCA CGTTTTTACCCA-3′

Reverzní: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3′

- aktinové primery (vnitřní kontrola):

Vpřed: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Zadní strana: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

Tepelné cyklování: 95 stupňů po dobu 15 minut (předdenaturace), následuje 40 cyklů 95 stupňů po dobu 15 s a 60 stupňů po dobu 1 minuty. Data byla analyzována pomocí2^-ΔACtmetoda.

 

1.8 Statistická analýza

Data byla analyzována pomocíSPSS 26.0.

Výsledky jsou prezentovány jakoprůměr ± standardní odchylka (x̄ ± s)

t-testbyla použita pro srovnání dvou skupin

Jednosměrná ANOVAbyl použit pro více skupinové srovnání

P < 0,05byl považován za statisticky významný