Studie neuroendokrinně-imunitní funkce Cistanche Deserticola a jejích produktů napařování rýžového vína u modelu potkanů indukovaných glukokortikoidy-Ⅱ

3.2.4. Imunohistochemie

Neuronální apoptóza je řízena mnoha apoptotickými a antiapoptotickými geny, především genem Bax podporujícím apoptózu a antiapoptotickými geny genové rodiny Bcl{1}}. Bcl-2 je lokalizován v reaktivních organelách produkujících kyslík, jako jsou mitochondrie, endoplazmatické retikulum a jaderné membrány. Bcl-2 má malý vliv na volné radikály kyslíku, ale můžezabránit oxidativnímu poškození buněk. Bax transportuje z cytoplazmy do mitochondriální membrány, mění strukturu mitochondriální membrány a podporuje uvolňování cytochromu c a indukci apoptózy.

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PRO ZLEPŠENÍ SEXUÁLNÍ FUNKCE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

V cytoplazmě nadledvin došlo k expresi proteinu Bax a Bcl{0}}. Barvení ukázalo všechny žluté částice. Ve srovnání s BC skupinou se průměrná optická hustota Bax proteinu ve skupině MC významně zvýšila (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Obrázek 5(b) ukazuje, že ve srovnání s BC skupinou se průměrná optická hustota Bcl-2 proteinu ve skupině MC významně snížila (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Protein kaspázy-3 je lokalizován hlavně v cytoplazmě ve své původní formě v normálních tkáních a má nízkou expresi. Pozitivní signály jsou světle žluté nebo hnědožluté. Ve srovnání se skupinou BC se exprese kaspázy-3 ve skupině MC výrazně zvýšila (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

V normálních tkáních byla exprese genu Fas snížena a pozitivní signál pro hybridizaci in situ byl hnědožlutý. Jak je znázorněno na obrázku 5(d), ve srovnání s BC skupinou se průměrná optická hustota proteinu Fas ve skupině MC zvýšila (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

Protein FasL se nachází především v buněčné membráně nebo cytoplazmě a jeho pozitivní signály jsou hnědé. Ve srovnání s BC skupinou se průměrná optická hustota genu FasL ve skupině MC významně zvýšila (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Výsledky ukázaly, že CD a WCD mohouindukovat apoptózu v zánětlivých buňkácha snížit poškození nadledvin podporou exprese proteinu FasL a vazbou na protein Fas, aktivací kaspázového-3 proteinu a spuštěním kaspázové kaskády. Nejlepší byl účinek skupiny WCD-HD.

3.3. Stanovení imunitní funkce

3.3.1. Index imunitních orgánů

Ve srovnání s BC skupinou se významně snížil brzlíkový koeficient a index sleziny ve skupině MC (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PRO ZLEPŠENÍ SEXUÁLNÍ FUNKCE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Detekce podskupin T lymfocytů v periferní krvi

Procento CD4+ buněk v levém horním kvadrantu a CD8+ buněk v pravém dolním kvadrantu v BC a každé lékové skupině bylo vyšší než ve skupině MC. Ve srovnání s poměrem skupiny BC se poměr CD4+ThCD8+ významně snížil ve skupině MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Stanovení hladiny IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α a IFN-C v séru

Obrázek 8 ukazuje, že ve srovnání s BC skupinou se hladina IL-6, TNF- a IFN-c významně zvýšila (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Výsledky tkáňového mikroskopického pozorovacího experimentu Lymus

Obrázek 9 ukazuje, že ve skupině BC bylo přítomno velké množství lymfocytů. Lymfocyty a retikulocyty byly volně uspořádány uprostřed s rozptýlenými kulatými nebo oválnými thymocyty. Nevyskytla se žádná nekróza, žádná zánětlivá buněčná infiltrace a žádné abnormální změny.

Skupina MC vykazovala velké množství tkáně lymfoidní nekrózy, s neuspořádaným uspořádáním lymfocytů a retikulocytů ve středu. Kulaté nebo oválné thymocyty zmizely, byla patrná masivní buněčná degenerace nebo nekróza a došlo k zánětlivé buněčné infiltraci s abnormálními patologickými změnami.

Ve skupinách CD se morfologické charakteristiky lymfocytů vrátily k normálu a uspořádání centrálních lymfocytů a retikulocytů bylo téměř normální. Kulaté nebo oválné thymocyty se obnovily, ale zůstalo malé množství degenerativních nebo nekrotických lymfocytů a infiltrujících zánětlivých buněk.

Ve skupinách WCD a PC skupině byly morfologické charakteristiky lymfocytů lépe opraveny. Lymfocyty a retikulocyty v centru byly dobře zarovnány, kulaté nebo oválné thymocyty byly téměř normální, ale zůstal zde malý počet infiltrujících a degenerativních lymfocytů.

3.4. Genová exprese CaM proteinu

Hodnota RQ (CaM mRNA-aktin mRNA) byla považována za účelem zkoumání exprese CaM mRNA. RQ skupiny BC bylo 1. Výrazně se zvýšila exprese CaM mRNA v hypotalamu ve skupině MC (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Diskuse

Čínský lékopis [2] uvádí, že CD a WCD mohou být použity na klinice jako hlavní typy odvarů. Po spaření s rýžovým vínem seproti stárnutí a tonizující ledvinovo-jangové účinkybyly vylepšeny. Prostřednictvím UPLC-QqQ-MS jsme detekovali kvantitativní změny v chemické materiálové bázi během procesu paření rýžového vína. Iridoidní glykosidy byly nestabilní a obsah těchto glykosidů se snížil, dokonce se stal nedetekovatelným. Změnil se i obsah fenyletanolových glykosidů, což mohlo vyvolat změny farmakodynamiky a klinického účinku.

PŘÍRODNÍ CISTANCHE TUBULOSA PRO ZLEPŠENÍ SEXUÁLNÍ FUNKCE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Klasický model deficitu ledvin-yang byl replikován subkutánní injekcí kortikosteronu [19]. Předávkování kortikosteronem by mohlo inhibovat sekreci CRH v hypotalamu. Mezitím bylo také potlačeno tajemství ACTH. Snížila se hladina hormonu kůry nadledvin a tím došlo ke snížení funkce osy HPA. Hypofunkce osy HPA je běžnou charakteristikou deficitu ledvin-yang [20]. Potom krysy vykazují fenomén "vyčerpání" a symptomy jsou v souladu s příznaky nedostatku ledvin-yang na klinice.

Ve skupině MC se hladina CRH, ACTH, T a CORT v potkaním séru významně snížila (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Modulace podílu členů rodiny Bcl{0}} je jedním ze základních mechanismů, kterými FasThFasL zprostředkovává dráhu receptoru smrti a rodina Bcl-2 reguluje mitochondriální dráhu [21]. Faktor Bcl-2 inhibující apoptózu a faktory indukující apoptózu, jako je Bax, všechny patří do rodiny Bcl-2 [22]. Buněčná apoptóza může být určena relativním poměrem faktorů inhibujících apoptózu a faktorů indukujících apoptózu [23]. Mitochondrie mají funkci centrálních kontrolních bodů pro mnoho forem apoptózy [24]. Tato studie ukázala, že CD-MD a WCD mohou odvodit expresi Bax a zvýšit Bcl-2 nazlepšit nedostatek jangu ledvin. Fas je hlavní receptor smrti, který indukuje apoptózu ligací s Fas ligandem (FasL) [25]. Exprese Fas a FasL ve skupině MC se zvýšila, zatímco tato exprese se významně zvýšila ve skupině WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Deficit imunitních funkcí je jedním z důležitých projevů ledvinovo-jangové deficience [28]. V této studii jsme zjistili, že index sleziny a brzlíku ve skupině WCD-MD se významně obnovil (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

Osa HPA je nejdůležitějším regulačním systémem, protože reguluje sekreci glukokortikoidů a endokrinní systém k udržení sekreční funkce kůry nadledvin [32]. Nadměrná exprese CaM mRNA v tkáni hypotalamu souvisela s nedostatkem jangu ledvin. CD a WCD by mohly blokovat vápníkové kanály, inhibovat expresi CaM mRNA v hypotalamu a snižovat příliv vápníku, a tak snižovat aktivitu komplexu Ca2+·CaM.

Vznik nedostatku jangu a ledvin je proces vývoje chronického onemocnění. Ledviny již nejsou čistě anatomickým pojmem a je to obecný termín pro neuroendokrinní imunitu a genitourinární systémy. Neuroendokrinně-imunitní (NEI) síť je důležitým integrovaným regulačním systémem [33]. CD a WCD mohou regulovat funkci osy HPAT a zlepšit obnovu deficitu ledvin-yang. Tento výsledek poskytuje experimentální základ pro klinickou prevenci a léčbu deficitu ledvin-yang.