Studie o chemických složkách Cistanche Deserticola, čínského bylinného léku pro výživu ledvin a posílení jangu
Mar 09, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964audrey.hu@wecistanche.com
Intro
Cistanche deserticolakterý patří do čeledi Orobanchaceae, je suchý dužnatý stonek Cistanche deserticola, který je sladký, slaný a teplý. Má účinky tonizace ledvin, posílení jangu, zvlhčení střev a uvolnění střev. Používá se především k léčbě impotence, nachlazení a bolestí v pase a kolenou, neplodnosti, suchosti střev a zácpy. Byly také hlášeny farmakologické účinky přípravku Cistanche deserticola.
Ústav tradiční čínské medicíny Čínské akademie tradiční čínské medicíny provedl chemické a farmakologické studie naCistanche deserticola. Je prokázáno, že jeho etanolový extrakt působí na imunitní systém. Devět sloučenin bylo separováno a identifikováno jako D-mannitol - sitosterol, daukosterol, kyselina jantarová, triakontanol, 8-epibrucin glukosid, betain, glykolipid kyseliny kávové a polysacharidové sloučeniny. Kromě mannitolu a 8-epibrucin glukosidu byly z Cistanche deserticola poprvé získány další složky. Glykolipid kyseliny kávové, betain, mannitol, kyselina jantarová a další sloučeniny mají různé fyziologické aktivity. Mají účinky na imunitní systém, sexuální funkce, kardiovaskulární systém, játra, proti stárnutí a tak dále.
Experimentální část
Teplota tání byla měřena mikroskopem Boetius PHMK a teploměr nebyl seřízen; Hmotnostní spektrometrie (EI) byla stanovena přístrojem MMH 70-70 (UK) a FD byla stanovena M-80 plynovou chromatografií-hmotnostní spektrometr (Japonsko); Nukleární magnetická rezonance (vodíkové spektrum) byla stanovena přístrojem typu JEOL FX 90Q (Japonsko); ultrafialové spektrum bylo stanoveno přístrojem typu UV-3000; infračervené spektrum bylo měřeno přístrojem Hitachi typ 260-50, tabletování KBr a silikagely byly vyrobeny z mořské chemické továrny Qingdao, gel LH-20 byl vyroben ve Švédsku. Sušené masové stonky Cistanche deserticola byly zakoupeny od společnosti Beijing medical materials Company a identifikované Zhang Yanzhenem.
1. Extrakce a separace
Cistanche deserticola se rozdrtí, promyje se 95% ethanolem, rozpouštědlo se izoluje, rozpustí se v malém množství vody, extrahuje se etherem, silikagelová kolonová chromatografie, eluuje se petrolether-ether (6:4), čímž se získá bílý krystal ( já). Vodná vrstva extrahovaná etherem se odpaří, zahřeje se a rozpustí se v ethanolu, ochladí se, čímž se získá vločkovité vysrážení (II). Cistanche deserticola je perkolován 50 procenty etanolu. Extrahováno ethylacetátem, sloupcová chromatografie na silikagelu, eluce ethylacetátem, každý po 20ml (stejné níže) Celkem bylo odebráno 37 vzorků, které byly zkoumány chromatografií na tenké vrstvě. Část obsahující krystal (III) původně vytékající se spojila. 24 ~ 37 vzorků bylo odfiltrováno z bílých vloček (II) a odpařeno do sucha. Zbytek se podrobí sloupcové chromatografii na silikagelu a eluuje směsí butanon-ethylacetát-benzen-voda (4:3:2:0,2). Odebráno bylo 12 vzorků, z nichž 8 ~ 11 vzorků bylo odděleno od oranžových krystalů; vodná vrstva extrahovaná ethylacetátem byla extrahována n-butanolem, sloupcovou chromatografií na silikagelu a eluována směsí chloroform-methanol-voda (6:4:1). Pátý vzorek rozpustil krystalizaci na tenké vrstvě (IV), druhá část chromatografie na tenké vrstvě se spojila s modrou fluorescenční částí, pak se použila sloupcová chromatografie na silikagelu, eluce směsí chloroform-methanol-voda (7:3:2,5 ), použil stejnou metodu v kombinaci s modrou fluorescenční částí, prošel gelovou LH-20 kolonou, eluoval směsí methanol-voda (1:1), Osmý vzorek rozpustil nějaký žlutý prášek (V), pokračoval v eluci na 37 dílů, v kombinaci s požadovaným dílem výše, sloupcová chromatografie na silikagelu, rozprostřená směsí butanon-ethylacetát-benzen-voda (4:3:2:0,2), odříznout modrý fluorescenční segment a eluovat methanolem pro získání světla hnědý prášek (VI).
95% ethanolový extrakt, odstranění petroletheru a dichlormethanu, rozpuštění v methanolu, nízkotlaká sloupcová chromatografie na silikagelu, eluce směsí methanol-chloroform (9:1), každý po 20 ml, 18. až 28. díl rozpustil některé bezbarvé krystaly (VII) ; extrahován vodou zbytek Cistanche deserticola po extrakci ethanolem, poté zakoncentrován zbytek, ochlazení, rozpuštěno velké množství bílých krystalů (VIII), odstranění krystalizovaného vodného roztoku a poté ošetřeno čtyřnásobným množstvím ethanolu za vzniku více srážek (IX).
2. Identifikace
Sloučenina I: bílý jehličkovitý krystal byl získán rekrystalizací z acetonu, teplota tání 136 až 137 stupňů. Činidlo kyseliny sírové koncentrované v anhydridu kyseliny octové vykazovalo pozitivní reakci (zelená). EIMS m/z:414(Mplus). Hodnota Rf chromatografie na tenké vrstvě a infračervené spektrum byly v souladu se standardem - sitosterol, takže je potvrzen jako - sitosterol.
Sloučenina II byla rekrystalizována zahříváním a refluxováním s ethanolem dvakrát za získání bílé vločkovité precipitace, t.t. 290~291 stupňů. Činidlo kyseliny sírové koncentrované anhydridem kyseliny octové vykazovalo pozitivní reakci (zelené), - činidlo naftol vykazovalo pozitivní reakci. EIMS m/z: 396 (základní pík), 382, 255, 213, 81, 57, 43. Chromatografie na tenké vrstvě byla konzistentní se známým produktem daucosterolu a teplota tání směsi neklesla. Bylo potvrzeno, že jde o daukosterol.
Sloučenina III methanol rekrystalizoval do několika podlouhlých krystalů, mpl87 ~ 189 stupňů, pH 2. EIMS m/z: 119 (M plus 1), 118 (M plus), 101, 100, 74, 73, 55 (základní pík), 45, 28, 27. IR (KBr) cm-1: 3100 ~ 2500 (šířka, OH), 1690 (C=O), 1420, 1310, 1200, 920, 800. Hodnota RF chromatografie na tenké vrstvě je stejná jako u standardu kyseliny jantarové. Navíc je v souladu se standardním hmotnostním spektrem a standardním infračerveným spektrem kyseliny jantarové a teplota tání směsi se nesnižuje. Je potvrzena jako kyselina jantarová
Sloučenina IV se rekrystalizuje z ethanolu jako bílá lesklá pevná látka, teplota tání 83 ~ 84 stupňů. EIMS m/z: 420 (M plus -H20), 57 (základní pík). Hodnota Rf chromatografie na tenké vrstvě je stejná jako u známého triacontanolu a teplota tání směsi se nesnižuje. Výše uvedené údaje jsou v souladu s Triacontanolem uváděným v literatuře.
Sloučenina VI: po rozpuštění v acetonu byla provedena sloupcová chromatografie na silikagelu a eluována 60% methanolem za získání světle žlutých tenkých amorfních krystalů, které jsou snadno rozpustné ve vodě a rozpustné v methanolu, ethanolu a acetonu, činidlo -Naftol vykazovalo pozitivní reakci . IR (KBr) cm-1: 3700 ~ 3000 (OH), 2900 (CH2, CH3), 1690 (C=O), 1600520 (C=C), 1440, 1350 1280, 1260 (COC), 1156, 1110, 1050 (CO), 807. UV A nm (loge): 218 (sh, 4,30), 249 (3,91), 291 (4,08), 330 (4,15). H-NMR (CD3COD3) 5 ppm: 1,18 (3H, D, J=6, CH3 na rhamnóze), 2,75 (2h, t, J=7,2, 2H v poloze C), 4,75 ( 1H, D, J=8, C1-H na glukóze), 5,17 (1H, D, J=1,8, C1-H na rhamnóze), 4,20 ~ 3,30 (12H, m, 2H na poloze C, 6H na glukóze, 4H na rhamnóze), 6,27 (1H, D, J=16, 1H na poloze C), 7,52 (1H, a, J {{76} } Poloha C (1H), 6,60 (1H, a, J=8, C5"'-H), 6,90 (1H, DD, J=8 / 2, C6"' - H), 7,10 (1H, D, J=2, C2"'- H), 6,70 (1H, D, J=2, C2-H), 6,65 (1H, D, J {{ 105}}, C5-H), 6,52 (1H, DD, J=8/2, C6-H), H-NMR (DMOS) 5 ppm: 7,43 (1H. s, OH), 8,07 (1H, s, OH), 850 (2H, s, 2 * OH), zmizela po zhoršení výměny vody. [a] 22D: - 68,37 stupně (C {{126} },67MeOH).FDMS m/z:647 (M plus plus Na), 625 (M plus plus 1), 624 (M plus), 479 (M plus 1-rhamnosyl), 478 (M plus -rhamnosyl ), který odpovídá molekulovému vzorci C29H36O15. Po kyselé hydrolýze sloučeniny VI se na papírovém chromátu zobrazí dvě hnědé skvrny grafiky. Hodnota Rf je zcela v souladu s rhamnózou a glukózou a při smíchání se známým akteosidem bod tání neklesá. Výše uvedená data jsou v souladu s 3,4-dihydroxy skupinou popsanou v literatuře – fenethoxy-o- - L-rhamnosyl (1 → 3) - 4-o-skupina kyseliny kávové- D- glukopyranosid je v podstatě karcinogenní.
Sloučenina VII je bílý krystal získaný rekrystalizací aceton-methanolu, nad 299 stupňů (rozklad), extrémně rozpustný ve vodě, snadno rozplývavý a rozpustný v ethanolu a methanolu. Alkaloidové činidlo vykazuje pozitivní reakci. Experimentální hodnoty (procenta) elementární analýzy: C47,29, H9,16, N10,54; teoretické hodnoty (procenta): C47,54, H9,52, N11,11. Odpovídá molekulovému vzorci C5H11NO2.1/2H2O. IR (KBr) cm-1: 3360 (asociovaný NH, OH), 2940, 1620 (C=O), 1470, 1390, 1330, 1240, 1125, 980, 930, 890. H- NMR (D20) 5 ppm: 3,28 (9H,s, 3xCH3), 3,88 (2H,s,CH2), 4,68 (D20). EIMS m/z: 117 (M plus), 100, 85, 73, 59, 58 (základní pík), 44, 42. Chromatografie na tenké vrstvě je zcela v souladu s hodnotou Rf betainového standardu a teplotou tání směs neklesne. Spektrum nukleární magnetické rezonance, infračervené spektrum a hmotnostní spektrum jsou v souladu se standardním spektrem betainu, takže je betain rozpoznán.
Sloučenina IX: rozpuštěna ve vodě, extrahována směsí n-butanol-chloroform (1:4) a nečistoty byly odstraněny. Vodná vrstva byla ošetřena čtyřnásobným množstvím ethanolu, sraženina byla rozpuštěna ve vodě, odbarvena peroxidem vodíku a malomolekulární sloučeniny byly odstraněny dialýzou. Membrána byla ošetřena 5násobným množstvím ethanolu, aby se získala světle žlutá sraženina. Fehlingova reakce byla před hydrolýzou sraženiny negativní a po hydrolýze se vytvořila hnědočervená sraženina. Po kyselé hydrolýze byl hydrolyzát podroben papírové chromatografii. Oproti standardnímu cukru byla detekována pouze glukóza, bylo tedy potvrzeno, že byly detekovány polysacharidy, které jsou tvořeny převážně glukózou.
