Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

YANG Jian-hua1' 2 , HU Jun-ping2, RENA • Kasimu2 ,〔DU Nian-sheng

(1. Affiliated Tumor Hospital, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Čína; 2. College of Pharmacy, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, Čína)

Abstraktní:Cíl: Studovat vztahy mezi strukturou a aktivitou fenylethanoidních glykosidů v rostlinách Cistanche salsa na antioxidační aktivitu. Metody: Testovacími systémy DPPH • antioxidační aktivita šesti fenylethanoidových glykosidů z rostlinCistanchesalsa byla určena ke zkoumání vztahu mezi antioxidačními aktivitami a strukturálními charakteristikami fenylethanoidních glykosidů. Výsledky: Antioxidační aktivita fenylethanoidových glykosidů byla variantní s efektem závislým na dávce. Ukázalo se, že sekvence síly antioxidační aktivity šesti složek je2 ^Acetylakteosid > Acteoside Tubuloside BN Isoacteoside > Echinacoside > Cistanoside A. Závěr: Antioxidační aktivita fenylethanoidních glykosidů souvisí s počtem fenolických hydroxylů, sterickou zábranou, 2-acetylem na střední glukopyranóze a umístěním fenolického hydroxylu. Navíc může souviset s j3-nenasyceným ketonem fenolu-2-propenylu.

Klíčová slova: Cistanche salsa ( CA Mey. ) G, Beck; fenylethanoidové glykosidy; Antioxidační aktivita; Struktura-aktivita; DPPH

Echinakosid

Tradiční čínská medicínaCistancheje Cistanche salsa (CA Mey.) G. Beck, sušená masitá nať se šupinami a listy. Poprvé byla publikována v „Shen Nong's Materia Medica“. Četnost výskytu je nejvyšší, hned po ženšenu na receptech čínské medicíny proti stárnutí a stárnutí a má pověst „pouštního ženšenu“. Fenylethanoilové glykosidy jsou charakteristickými složkamiCistancherod rostlin. V současnosti bylo z tohoto rodu izolováno více než 30 takových sloučenin. Farmakologické studie v podstatě jasně ukázaly, že tyto sloučeniny jsou hlavním materiálovým základem proCistanchevyvíjet farmakologické aktivity).

Dibenzopikrylový radikál (DPPH •) je relativně stabilní volný radikál s volným elektronem na jeho N. Metanolový roztok DPPH- je fialový s maximálním absorpčním vrcholem při 517 nm. Když je přítomen lapač volných radikálů, jeho absorpce postupně mizí díky jeho jednoelektronovému párování. Jeho stupeň odbarvení je kvantitativně závislý na počtu elektronů, které přijímá. Proto lze použití spektrofotometrie k detekci změny absorbance DPPH po reakci s roztokem vzorku použít k testování schopnosti vzorku odstraňovat volné radikály a odolávat oxidaci (3). V současné době existují zprávy o antioxidačním výzkumu fenethylalkoholových glykosidů v lilkovém pyré při zachycování volných radikálů, ale neexistuje žádná analýza vztahu struktura-aktivita mezi jeho antioxidačními vlastnostmi a účinnými látkami. V tomto článku je metoda analýzy volných radikálů DPPH poprvé použita k testování antioxidační aktivity 6 monomerů fenethylalkohol glykosidů v Rouhuanrongu. Na základě strukturních charakteristik a výsledků stanovení aktivity těchto sloučenin jsou předběžně odvozeny fenethylalkoholové glykosidové složky. Vztah mezi strukturou a aktivitou antioxidační aktivity.

1 Přístroje a materiály

Echinakosid, cistanche glykosid A,verbascoside, isoverbasin glykosid, 2,-acetyl verbascosid, referenční látka anthokyan B ve zkumavce (izolovaná a připravená z Cistanche salsa, UV, IR, EI-ms/h -nmrJ3c-nmr data jsou v souladu s literární hodnotou, obsah je určen oblastí HPLC normalizační metoda, čistota je větší než 95 procent, strukturní vzorec je uveden na obrázku 1 a tabulce 1); Difenylpikrylový radikál (DPPH •) byl zakoupen od Sigma; ostatní činidla Všechna jsou domácí čistota.

SpectraMax M5 multifunkční celovlnný detektor biologické aktivity (Anthos Co. Rakousko), 96-jamková kultivační destička (Costar), elektronické váhy AB104-N]Mettler-Toledo Instr. (Shang Hai) Ltd.]

Obrázek 1 Strukturní vzorce šesti fenethanoilových glykosidů v Cistanche

Tabulka 1 Substituenty v 6 fenethanolových glykosidových sloučeninách v Cistanche

Poznámka: Ac je acetyl, Cf je trans-kafeoyl, Glc * pD-gluviolanóza a Rha je aL-ramnóza

2 Příprava zkušebního roztoku

DPPH • Připravte zásobní roztok o koncentraci 1,3 x 10'2mol/L s ethanolem, uložte jej do chladničky, zásobní roztok zřeďte etanolem na 1-3xl{{7} }^mol/l bezprostředně před použitím; 6 druhů fenethylalkoholových glykosidů Referenční látka a vitamín C jsou formulovány do roztoku o koncentraci 0.05-50,0 ptg/ml s ethanolem.

Akteosid

3 metody a výsledky

3. 1 Metoda Nejprve přidejte 10 |xL vzorku do jamek na vzorky, přidejte 10 |jlL etanolu do jamek pro slepé pokusy a poté přidejte 190 jil DPPH • o koncentraci 1,3 xlO^mol/L a umístěte je do ve tmě při pokojové teplotě po dobu 30 minut. K měření absorbance (A) při 517 nm použijte multifunkční celovlnový detektor biologické aktivity SpectraMax M5. Každá absorbance byla měřena 3krát paralelně a byla vzata průměrná hodnota. Míra clearance se vypočítá následovně: míra clearance ( procenta )=(slepý vzorek-A)/slepý vzorek x 100 procent

3.2 Výsledky Výsledky stanovení jsou uvedeny v tabulce 2. Z tabulky 2 je vidět, že šest fenethylalkoholových glykosidů v různých koncentracích má různé stupně vychytávacích účinků na DPPH • a jejich schopnost pohlcovat volné radikály má významnou dávku- vztah účinku s koncentrací. Glykosid na DP PH • Velikost scavenging efektu se zvyšuje s rostoucí koncentrací.

Tabulka 2 Rychlost clearance vzorků s různými koncentracemi na DPPH • («=3)

Poznámka: Pozitivní kontrolou je kyselina askorbová (vitamín C), číslo vzorku je 7

According to the IC5 of each sample. According to the value, the scavenging ability of 6 kinds of phenylethanoid glycosides on DPPH • is in order: 2'-acetyl verbascoside> verbascoside BN isophorbasin glycoside> echinacoside>cistanche glykosid A. Účinky šesti fenethylalkoholových glykosidů ve stejné koncentraci jako pozitivní kontrola vitaminu C jsou mírně nižší než účinky vitaminu C.

verbascoside

4. Diskuze

Výsledky této studie dále potvrdily, že fenethylalkoholové glykosidy mají obecně antioxidační aktivitu. Při analýze a porovnání jejich chemických struktur jsou verbascosid, iso-verbasin glykosid, 2'-acetyl verbasin glykosid a tubový anortozit B všechny glykosidy, zatímco echinakosid acistancheA jsou triglyceridy s velkou sterickou zábranou. Zvýšený efekt sterické zábrany činí echinakosid a solanakosid A obtížně přístupnými volným radikálům, takže jejich antioxidační kapacita je relativně slabá; strukturální rozdíl mezi echinakosidem a striata: echinakosid A je pouze R5 prvního je fenolická hydroxylová skupina a druhý je methoxyskupina. O-fenolická hydroxylová skupina je považována za důležitou funkční skupinu pro antioxidační aktivitu. Difenol hydroxylová skupina zmizí a antioxidační účinek se výrazně sníží. Analýzou struktury sloučeniny a kombinací výsledků měření lze odvodit, že antioxidační aktivita fenethylglykosidů v pastě z lilku souvisí s počtem aglykonů a fenolických hydroxylových skupin na fenylakryloylové skupině, polohou spojení fenolických látek. hydroxylová skupina, velikost sterické zábrany sloučeniny a centrální glukóza 2 Mezi substitucí acetylové skupiny v poloze existuje určitý vztah, který může souviset i s fragmentem struktury nenasyceného ketonu a,/3 na styrenacylová skupina, ale má malý vztah k substituční poloze fenylakryloylové skupiny.

DPPH • je relativně stabilní volný radikál centrovaný na N, se silnou absorpcí při 517 nm. Po přidání testované látky, detekcí změny absorbance při 517 nm poté, co radikály DPPH • reagují s roztokem vzorku, lze ověřit schopnost vzorku zachycovat volné radikály a antioxidaci. Experimenty ukazují, že použití DPPH • k vytvoření modelu poškození volnými radikály in vitro nevyžaduje složité vybavení a drahá činidla. Je jednoduchý a snadno použitelný, citlivý, spolehlivý a reprodukovatelný. Je to dobrá metoda pro screening lapačů volných radikálů.

Vitamin C je v současnosti uznáván jako vysoce aktivní a široce používaný antioxidant. Proto tento experiment zvolil vitamín C jako pozitivní kontrolu pro antioxidační kapacitu fenethylalkoholových glykosidů při vychytávání volných radikálů.

Reference

[1] Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei. Výzkum chemických složek Cistanche Pokrok výzkumu[J].Chinese Herbal Medicine, 2003,34(5):473476.

[2] Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Pokrok ve výzkumu farmakologických aktivit rostlin Cistanche[J]. Chinese Herbal Medicine, 2003, 34(9): Připojeno 16-18.

[3] Xu Shenhong, Hang Hu. Jednoduchá metoda pro screening lapačů volných radikálů [J]. Chinese Herbal Medicine, 2000, 31(2): 96-97.

[4] Fu Rong, Zhu Jiuwei. Stanovení antioxidační aktivity Chuanlinga, Rhodiola Rosea a Huang Zhi radikálovou spektrofotometrií difenylového pirátství [J]. Journal of Dalian University of Light Industry, 2004, 23 (2)): 114-117.