Současné HPLC stanovení hydrofilních bělících činidel v kosmetických přípravcích
Mar 22, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Miaw-Ling Chang a , Chur-Min Chang b,*
Abstraktní
Vysoce účinná metoda kapalinové chromatografie pro kvantifikaci čtyř nejčastěji používaných hydrofilníchběleníčinidlo*/kyselina glykolová (GA), kyselina askorbová (AA),arbutin(ART) a Mg askorbylfosfátu (MAP) byly rozvinutý. Izokratická separace byla provedena pomocí kolony C18 s iontovým párovým činidlem jako mobilní fází. Analyty byly detekovány absorpcí ultrafialového světla na vlnové délce 220 a 240 nm. Kalibrační křivky byly bylo zjištěno, že je lineární v dávkách 8,0-36 mg/ml (GA), 10,0-300 mg/ml (AA a ART) a 5,6-451 mg/ml (MAP). Ten korelační koeficient lineární regresní analýzy byl v rozsahu 0,9974-0,9997. Výtěžnost čtyř analytů byly mezi 94,8 a 100,1 % a přesnost této metody byla lepší než 6,9 % relativní směrodatná odchylka (R.S.D.) (n = 3). Bylo zjištěno, že AA se ve vodném roztoku rozkládá. Chcete-li se ujistit, že AA byla stabilní během Analýza HPLC, všechny analyty byly rozpuštěny v destilované vodě a tyto roztoky byly vyčištěny plynným dusíkem na odebere se kyslík a uloží se při teplotě 25 8 °C. Výsledky testování ukazují, že postup je rychlá, jednoduchá, selektivní metoda a je vhodný pro rutinní analýzu komerčníchkosmetika. # 2003 Elsevier B.V. Všechna práva vyhrazena.
Klíčová slova: Kosmetický přípravek; Hydrofilní bělící činidlo; Kyselina glykolová; Kyselina askorbová; Arbutin; Mg askorbylfosfátu; HPLC
Cistanche herbaje přírodní bělící činidlo.
1. Úvod
Lidé na Západě považují opálenou pokožku za zdravou a Krásné. Naopak, světlá kůže je považována za krásnou v orientálních zemích. Proto jsou bělící pleťové vody velmi oblíbené v orientální. Aplikují se na bělení kůže. Chemický peeling se obvykle používá při klinické léčbě poškozené pokožky obličeje způsobené akné, melasma, běžné bradavice a tak dále. V tomto technikakosmetickýpřípravky obsahující chemoterapeutické činidlo se aplikují na kůži po dobu stimulující obnovu kožních buněk. Barva kůže se stává lehčí. Tedy tato chemoterapeutická agent se také nazývá aběleníagent [1-6]. Má bylo hlášeno, že bělící činidlo, jako je kyselina glykolová (GA), jedna z hydroxykyselin, zvyšuje hydratace pokožky, a proto poskytuje hladší vzhled, což vede k menšímu počtu obličejových linek a vrásky [7,8]. Existují dva typy bělících činidel: lipofilní bělící činidla a hydrofilní činidla. Příklady lipofilního bělení činidla jsou kyselina kojová, kyselina salicylová, askorbyl palmitát, kyselina azelaová a adapalen. Příklady hydrofilních bělících činidel je kyselina glykolová (GA), kyselina askorbová (AA),arbutin(ART) a fosforečnan hořečnatý (MAP). Hydrofilní bělící činidla jsou zde studována, protože jejich polární skupiny mají špatnou afinitu k Kolona C18 používaná v HPLC a je obtížné je oddělit v HPLC. Použili jsme iontový pár metoda řešení tohoto problému.
Chemické struktury a maximum koncentrace těchto hydrofilníchběleníčinidla jsou uvedena v tabulce 1. Na Tchaj-wanu je bez omezení koncentrace použitého GA a AA v kosmetických přípravcích. UMĚNÍ však může být spotřebováno až 7 wt.% a MAP až 3 wt.%. Ačkoli neexistuje žádný limit pro koncentraci GA používané v kosmetických přípravcích, bylo hlášeno od US Food and Drug Administration, že toto bělící prostředek může způsobit těžké popáleniny nebo otoky kůže [9]. Obecně platí, že asi 30-40 wt.% z GA se používá vkosmetikak použití v kosmetické salony a vyšší koncentrace, 50-70 wt.%, se používá v kosmetických přípravcích, které mají být použity lékaři [10].
Účelem této studie je vyvinout metoda kvantitativní analýzy pro přesné měření obsahu bělících činidel v kosmetických prostředcích. Tato práce má velký význam pro veřejnou bezpečnost. I když existuje mnoho publikace popisující odhad bělicí prostředky v kosmetických přípravcích [11-16], současně metody kvantitativní analýzy mají dosud nebyly uvedeny v literatuře. Tato studie souvisí s analytickou metodou, která může detekovat a současně kvantifikovat hydrofilníběleníagenti.
Hydrofilníběleníagenti nejsou vždy stabilní ve vodném roztoku. Jsou podrobeni k oxidaci. Ačkoli několik studií pro stabilita AA byla hlášena [17-19], prostředí AA v těchto zprávách není vhodné pro HPLC pro současné stanovení hydrofilních bělidel. Je důležité ujistěte se, že hydrofilní bělící činidla jsou stabilní během analýzy pro přesnost výsledky.
2. Experimentální
2.1 Činidla a normy
GA, AA, ART a MAP a komerční byly zakoupeny od alfa co. (americká), Alfa Co. (americký), Wako (japonský) a Lipo. Co. (Americký), resp. Methylparaben a U-13 se získávají z Induchemu. Co. (Švýcarsko). Kyselina citronová, hydroxid tetrabutylamonný (TBAH), sorbitol, kyselina fosforečná a draslík dihyrofosfát byl zakoupen od společnosti Aldrich Co. (Američan). Všechny chemické látky byly analyticky-vědecké kvality. Komerčníkosmetickýprodukty od různých výrobců, byly zakoupeny z maloobchodních prodejen a z místní lékárny. Rozpouštědla a voda byly filtrovány přes 0,45 mm membrána a odplyněné.
2.2. Přístrojové vybavení
Přístroj pro HPLC (Hitachi Co., Japonsko) sestával z modulárního chromatografického systému. K němuž čerpadlo (model I-7100), UV detektor (Model I-7420; proměnná vlnová délka) a vstřikovací ventil se vzorkovací smyčkou o objemu 25 ml (Model 7725, Rheodyne, Cotati, USA) byl připojen. Data akvizice a zpracování byly provedeny s osobní počítač používající software SISC (Tchaj-wan). Injekce vzorku byly provedeny injekční stříkačkou 25 ml (Hamilton, Švýcarsko). A 5 mm, 250 mm/ 4,60 mm I.D. Nerezový Mightysil RP-18GP byl použit sloupec.
2.3 Chromatografické podmínky
Chromatografická analýza byla provedena pomocí jednosloupcová izokratická reverzní fázová metoda. V metoda párování iontů, mobilní fáze byla 0,005M pufrový roztok dihydrofosforečnanu draselného včetně tří chemikálií: TBAH, methanolu, a kyseliny fosforečné. Množství těchto tří chemické látky mají velký vliv na separaci a rozlišení spektra HPLC. Ten koncentrace TBAH se pohybovala od 1 do 10 mM; methanol od 1 do 10 obj.%. Různorodá částka kyseliny fosforečné byla přidána do pufru roztok pro nastavení hodnot pH od 2,5 do 5,0. Výsledky testování umožní vhodný mobilní telefon fáze, která má být zvolena pro dobré rozlišení. Všichni mobilní fáze byly filtrovány přes Millipore filtr, velikost pórů 0,45 mm a odplyněný sonikací před použitím. Průtok 1,1 ml/min byl ojetý. Analyty byly detekovány UV absorpcí při 220 nebo 240 nm. Identita čtyř složek byla přiřazena chromatografií s autentické normy. Byla provedena kvantifikace integrací píku pomocí externího metoda standardizace.
cistanche výhodyzbělení účinné pokožky
2.4 Kalibrační křivka
Skladové roztoky byly připraveny přesně vážení agentů a jejich následné rozpuštění v Voda. Pět pracovních roztoků čtyř analytů byly čerstvě připraveny ze svých zásob roztoků poměr 1-10 s destilovanou vodou. Vhodné zředění těchto pracovních roztoků koncentrace 10/300 mg/ml, s výjimkou GA a MAP, kde koncentrace byly 8,0–36,0 mg/ml a 5,6/451 mg/ml. Kalibrační křivky byly konstruovány vykreslením píku plochy každé složky versus koncentrace a udával hodnoty svahu spolu s průsečíkem a korelační koeficient pro každou kalibraci křivka. Kalibrační křivky byly určeny pro kvantifikaci čtyřběleníagenti ve čtyřech vzorky komerčníchkosmetika.
2.5 Studie obnovy
Vzorek krému neobsahujícího žádnéběleníagenti byl použit jako kontrola v regenerační studii. Rozmanité množství čtyř hydrofilních bělících činidel, GA, AA, ART a MAP, byly přidány k tomuto kontrolní krém. Koncentrace byla dána v Tabulka 4. Asi 1 g každého připraveného vzorku smetana byla zvážena do skleněné baňky a 30 ml byla přidána destilovaná voda a poté byla baňka ponořen do ultrazvukové lázně po dobu 15 minut termostat při 25 8C. Výsledné řešení byl vyroben do objemu 100 ml destilovaným voda a poté byla filtrována a odkysličena N2 po dobu asi 3 minut a poté utěsněn bakelitem šroubovací uzávěr a silikonový kroužek.
3. Výsledky a diskuse
3.1 Chromatografie a rozlišení
Struktura čtyřběleníagenti, GA, AA, ART a MAP jsou uvedeny v tabulce 1. Vše jsou to velmi polární molekuly. Pro polární analyty, methanol nebo acetonitril se obvykle používá jako součást mobilní fáze ve sloupci C18 nebo kyanopropylová kolona HPLC. Nicméně, koeulace těchto polárních analytů byla nalezena, když byl použit methanol nebo acetonitril. Proto je nemožné oddělit tyto analyty. Chcete-li tento problém vyřešit problém koeluhy, metoda párování iontů byla používané k redukci jejich polárního charakteru na získat přijatý retenční čas. Kromě toho je důležité pro nalezení vhodné separační podmínky pro současnou analýzu čtyř analytů vkosmetickýprodukty. Za účelem dosažení optimálního analytický stav, vliv mobilní fáze a jeho hodnoty pH jsou zde zvažovány. Výsledky získané jsou znázorněny na obr. 1. Koncentrace TBAH v mobilní fázi se lišila od 1 až 10 mM. Vypočtený kapacitní faktor klesá jako koncentrace TBAH se zvyšuje (viz obr. 1 písm. a)). Tento pokles hodnot kapacitního faktoru je ostrý pro MAP, ale velmi mírné pro GA, ART a AA. Významné rozdíl kapacitního faktoru mezi MAP a ostatní mohou být způsobeny silným iontem charakter MAP. Menší rozdíl v kapacitní faktor poskytuje přiměřený retenční čas v HPLC. Proto koncentrace TBAH byl vybrán jako 10 mM pro mobilní fázi. Ten vliv množství methanolu na kapacitu faktor byl znázorněn na obr. 1 b). Podobné výsledky byly nalezeny u těch pro TBAH. Vyšší koncentrace methanolu, menší rozdíl v kapacitní faktor a kratší retenční čas v HPLC. Deset procent objemu metanolu bylo zvolené v tomto případě.
Do výše uvedeného tlumivého roztoku bylo přidáno různé množství kyseliny fosforečné, aby změňte hodnoty pH z 2,5 na 5,0. Při hodnotě pH 5.0, široké a vícenásobné píky byly pozorovány u výsledky chromatografu. Vrcholy chromatografu protože GA, AA a ART se překrývají s každým jiný. Na rozdíl od předchozích výsledků je kapacita faktor se zvyšuje se zvyšováním hodnot pH pro MAP (viz obr. 1 písm. c)). Změna v kapacitní faktor způsobený hodnotami pH je velmi malý pro GA, AA a ART. Je nezbytné zvolit pH , která poskytuje dostatečné rozdíly v hodnotách kapacitní faktor pro dobré rozlišení v HPLC. Z těchto důvodů se hodnota pH rovná 2,5 byl vybrán. Výsledkem je vhodná mobilní fáze pro analýzu HPLC je 0,005 M draslíku dihydrofosfátový pufr obsahující 10 mM TBAH, 10 obj. % methanolu a kyseliny fosforečné. Kyselina fosforečná byla použita k úpravě Hodnota pH tlumivého roztoku na 2,5.
3.2 Stanovení vlnové délky pro UV detektor
UV spektrum těchtoběleníagenti rozpuštěný v mobilní fázi byl získán pomocí UV spektrofotometru. Maximální absorpční pík je při 220 nm pro GA, při 243 nm pro AA při 227 nm pro ART a při 238 nm pro MAP. Při 240 nm má UV detektor vysokou citlivost při detekci AA a MAP, ale velmi nízká citlivost pro GA a ART (viz obr. 2 b)). Zatímco při 220 nm, jasné špičky v HPLC chromatograf byl ukázán pro všechny čtyři bělící prostředky (viz obr. 2 písm. a)). Chcete-li získat lepší citlivost pro všechny analyty, vlnová délka detektor byl nastaven na 220 nm pro detekci a kvantifikace čtyř analytů. Postup je relativně rychlý s analytickou dobou běhu 12,1 min při pokojové teplotě (kolem 26 8 ° C).
3.3 Studie stability bělících činidel
AA prochází rozkladem na kyselinu dehydroaskorbovou (DHA), když se rozpustí ve vodě. Proto je důležité zachovat Kyselina askobová stabilní během analýzy přesnosti výsledků. Fernandes a kol. uvedli, že hlavními faktory ovlivňujícími degradaci jsou kyslík a teplota [19]. Ve své studii degradace byla významná za 1 hodinu a účinek Hodnoty pH roztoku při degradaci byly uvádí se pouze při pH 5,0 a 5,6. V naší studii byla hodnocena stabilita AA využití změny koncentrace AA v rozmanitost různých podmínek prostředí, jako je jako ošetřený nebo neošetřený roztok N2, hodnota pH a teplota. Čím delší je doba pro významná změna, tím stabilnější je askorbová.
Výsledky shrnuté v tabulce 3 ukazují silná korelace mezi stabilitou a ošetřenou nebo neošetřený roztok n2. Ztráta AA v neošetřený roztok je rychlejší než ošetřený řešení. Jak je uvedeno v tabulce 3, při 10 8C a pH 2, čas potřebný pro 10% degradaci AA byla asi 10 hodin bez léčby a asi 48 h pro ošetřený roztok. To může být způsobeno faktor, pro který je k dispozici mnohem méně kyslíku oxidace. Je třeba poznamenat, že v přítomnosti kyslíku a při 25 8C úroveň AA 8,7 % a 71,2 % po 10 hodinách bylo pozorováno pH 6,9 a 2,0. Toto výsledek lze vysvětlit vyšším množstvím disociovaná AA při pH 6,9 a tato forma by měla být méně stabilní než nedisociovaná forma [19]. Na kartě naopak, v nepřítomnosti kyslíku a při 25 nebo 10 8C, vodný roztok AA je mnohem lepší stabilní při pH 6,9. Důvod, proč je AA více stabilní dosud nebyla dále zkoumána. V vztah k teplotě roztoku, v neošetřeném AA je méně stabilní při vyšší teplotě (25 8 ° C) než při nižší teplotě (10 8 ° C). U ošetřených roztoků je však vodný roztok AA stabilní a nebyl ovlivněn teplota.
3.4 Validace linearity a zkouška přesnosti
Za použití popsaných chromatografických podmínek bylo dosaženo přiměřeného rozlišení mezi těmito analyty a ostatními sloučeninami v tenkosmetickývýrobek. Metoda byla ověřena pro linearitu a přesnost. Lineární křivka byla použité pro výpočet kalibračních křivek pro každouběleníagent. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 4. V celém rozsahu bylo dosaženo vynikající linearity od 5,6 do 451 mg/ml pro všechny standardy s výjimkou GA, u kterého byl rozsah od 8 do 36 mg/ml. Korelační koeficient je v rozsahu od 0,9974 do 0,9997. Přesnost metody byla vypočtená jako relativní směrodatná odchylka (R.S.D., n=5) zkoušek obsahujících tyto čtyři hydrofilní bělidla ve stejném rozsahu koncentrace. Bylo zjištěno, že rozsah R.S.D. je od 0,3 do 6,43 %.
3.5. Obnova
Krém neobsahující žádnéběleníagenti byli použitý jako kontrola v regenerační studii. Malý bylo přidáno množství čtyř bělících činidel k tomuto kontrolnímu krému. Chromatografie s pomocí HPLC ukazuje, že neexistuje žádný pík absorpce UV záření zjištěné pro kontrolní krém (viz obr. 3 písm. a)) a u vzorku byly zjištěny čtyři absorpční píky krém obsahující tyto čtyři bělicí prostředky. V 3(b), pík 1 je špička UV absorpce pro GA; vrchol 2 pro AA; vrchol 3 pro ART; špičkový 4 pro MAPA. Každé bělící činidlo má svou vlastní retenci Čas. Tento znak bude použit k jejich identifikaci bělící činidla později. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 2. Rozsah 94-100% zotavení pro čtyři látky byly získány při nízké i vysoké úrovni koncentrace. Koeficienty rozptylu vypočítané ze tří replik byly všechny menší než 6,9 %. HPLC chromatogramy čtyř analytů extrahovaných z experimentální formulace byly znázorněno na obr. 3 a nebyla pozorována žádná interference.
cistanche rostlinamáproti stárnutí,antioxidantaúčinky péče o pleť
3.6. Aplikace
Čtyři komerčně dostupnékosmetickýprodukty byly analyzovány. Jsouběleníkrém (kosmetické číslo 1), bělící gel C20 (kosmetický číslo 2), krém essence (kosmetické číslo 3) a peelingové mléko (kosmetické číslo 4). Tato kosmetika byla testována pomocí postupu popsané v této studii. Chromatografy pro tyto čtyři kosmetické přípravky jsou uvedeny na obr. 4(a/d). Chromatograf 4 a) poskytuje malou absorpci vrchol vrcholu 4, tj. kosmetické číslo 1 obsahuje MAPA. Chromatograf 4 b) vykazuje vrchol pík 2, což je známkou toho, že kosmetický číslo 2 obsahuje AA. Z chromatografu 4 c) a d) byl ART identifikován v kosmetických přípravcích číslo 3 a ga i AA byly identifikovány v kosmetickém čísle 4. Je zde neoznačený vrchol v chromatografu 4 d). Tento vrchol UV absorpce má retenční čas delší než u špičky 3, ale mnohem kratší než u vrcholu 4. Je jasné, že toto neoznačený absorpční pík není způsoben bělící činidla, ale díky jiným složkám v kosmetické číslo 4. Jejich kvantifikace bělící činidla byla provedena integrací píků v chromatografii pomocí metody externí standardizace. Úroveň bělící činidla v těchto čtyřechkosmetikaje uveden v Tabulka 5. Je třeba poznamenat, že získané výsledky potvrdit přesnost a prokázat shodu s označený nárok.
4. Závěr
Vyvinutý test HPLC je jednoduchý a rychlý pro současnou analýzu hydrofilníchběleníagenti. Kapacitní faktor byl použit k zvolte vhodnou mobilní fázi pro HPLC. My je třeba zvolit podmínku, která dává menší rozdíl v kapacitním faktoru pro přiměřenou retenční čas. Je nezbytný pro vybrané podmínka, která poskytne dostatek rozdílů v hodnotách kapacitního faktoru pro dobré rozlišení v chromatograf HPLC. Výsledkem je, že vhodný mobilní fáze pro HPLC analýzu je 0,005 M pufrový roztok dihydrofosforečnanu draselného obsahující 10 mM TBAH, 10 obj. % methanolu, a kyselina fosforečná. Kyselina fosforečná byla použita k hodnota pH tlumivého roztoku se upraví na 2,5. A lepší detekční vlnová délka proběleníčinidla jsou pro HPLC při 220 nm. Kromě toho pohodlná metoda stabilizace AA v analytickém byl získán postup. Což je důležité pro přesnost výsledků.
cistanche tubulosaplátky
