SARS-CoV-2: Velká séroprevalenční data z Pákistánu – je imunita stáda po ruce?
Apr 24, 2023
Abstraktní
Účel
Průzkumy séroprevalence z různých zemí ukázaly, že protilátky proti SARS CoV{0}} jsou pod 20 procenty i v nejnepříznivěji postižených oblastech a imunitu stáda nelze předvídat, dokud touto nemocí neonemocní více než polovina populace. Účelem tohoto průzkumu bylo odhadnout rozsah komunitního šíření infekce, související imunitu a vyhlídky a blízkost ke „stádní komunitě“.
Stádová imunita je, když se dostatek lidí ve skupině stane imunní vůči nemoci, takže celá skupina je před touto nemocí chráněna. Když se stále více lidí v populaci stává imunními vůči nemoci, šíření nemoci se zpomalí nebo zastaví, protože patogen nemůže najít nové lidi, které by infikoval. Imunity stáda lze dosáhnout opatřeními, jako je očkování, přirozená infekce a izolace. Imunita stáda a individuální imunita jsou velmi důležité. Imunitu musíme zlepšit i v každodenním životě. Cistanche dokáže výrazně zlepšit imunitu. Polysacharidy v Cistanche mohou regulovat imunitní odpověď lidského imunitního systému. Zlepšit stresovou schopnost imunitních buněk a posílit baktericidní účinek imunitních buněk.
Klikněte na doplněk cistanche deserticola
Metody
Studie byla provedena jako klastrově randomizovaný, průřezový celostátní průzkum. Tyto největší komunitní údaje o séroprevalenci SARS-CoV-2 byly shromážděny mezi 15. a 31. červencem 2020 ze sedmi náhodně vybraných měst patřících do tří nejlidnatějších provincií Pákistánu. K detekci protilátek SARS-CoV-2 byla použita sada ROCHE schválená FDA.
Výsledek
Vzorky séra 15 390 účastníků byly testovány na protilátky SARS CoV-2 s celkovou séroprevalencí 42,4 procenta. Séroprevalence se pohybovala od 31,1 procenta do 48,1 procenta v různých městech s nejvyšší v provincii Paňdžáb (44,5 procenta). V univariabilní analýze byla pravděpodobnost séropozitivity vyšší u mužů než u žen (OR: 1,10, 95% CI: 1,01–1,19, P<0.05). In multivariable analysis, the risk of being seropositive was lower (OR 0.72, 95% CI: 0.60–0.87, P<0.01) in the younger group (≤ 20 years) than in those aged above 60 years.
Závěr
Studie dospěla k závěru, že navzdory rozumné séroprevalenci země ještě nedosáhla základního minima odhadů pro imunitu stáda. Přestože se o trvanlivosti imunity v současnosti diskutuje, prokázala prokázaný informovaný posun směrem k delší straně.
Klíčová slova
Séroprevalence · Sars · CoV{0}} · Protilátky · Stádo · Imunita.
Úvod
Nové onemocnění související s koronavirem (COVID{0}}) začalo v Číně v prosinci 2019, zatímco Pákistán 26. února 2020 oznámil dva pozitivní případy [1]. Světová zdravotnická organizace vyhlásila SARS-CoV-2 11. března 2020 za globální pandemii a od té doby počet případů celosvětově přibývá, což má za následek nebývalé dopady na lidský život [2]. Statistika WHO COVID{10}} o potvrzených případech byla 81 533 368 do 31. prosince 2020, včetně 1 799 911 úmrtí po celém světě [3]. Stejně jako mnoho jiných zemí byl Pákistán svědkem nejvyššího počtu nových případů a úmrtí během června 2020, po kterém následoval strmý pokles [4, 5]. Opatření přijatá vládou Pákistánu a výsledný pokles případů byly světem velmi chváleny [6, 7], ale důvody nelze plně vysvětlit (kvůli nedostatku podpůrných důkazů/údajů) [5]. Se začátkem zimy došlo k oživení COVID{26}} a počet potvrzených případů vzrostl od konce října do poloviny prosince 2020 o 110 530 včetně 2 060 úmrtí [8].
Rozšířená infekce zasáhla všechny provincie Pákistánu s 230 718 případy v Sindhu, 62 377 v Khyber Paštunkhwa, 147 292 případy v Paňdžábu a 39 624 případy na území hlavního města Islámábád [8]. Reverzní transkripční polymerázová řetězová reakce (RT-PCR) je zlatým standardem pro potvrzení infekce SARS-CoV-2. Může však vynechat několik presymptomatických a asymptomatických infekcí během latence a neposkytuje informace o imunitě proti onemocnění, které by mohly pomoci ilustrovat stav imunity stáda v komunitě [9, 10]. Studie uvádějí případy reinfekce SARS CoV-2 [11–13], ale některé další studie dospěly k závěru, že pozitivní opakovaný test PCR může být způsoben několika dalšími důvody, jako je infekce mutovaným SARS Cov-2 a technické chyba s odběrem vzorků [14, 15].
Průzkumy séroprevalence rovněž poskytují odhady populace, která je stále náchylná k infekci [16]. Skutečný komunitní průzkum séroprevalence v Pákistánu stále chybí, zatímco většina provedených studií je v nemocnicích a s různou úrovní infekce (11–40 procent), vzhledem k tomu, že několik z nich bylo založeno na stažení [17– 19].
Imunitu stáda stále nelze v mnoha zemích světa předvídat, protože populační průzkumy séroprevalence odhalují protilátky jen 10–15 procent [20] a imunitu stáda nelze předvídat, dokud se nemocí nevyskytne více než polovina populace [21]. Stávové imunity proti nakažlivé nemoci, jako je COVID{4}}, lze dosáhnout, když se 70–90 procent populace stane imunní v důsledku hromadného očkování nebo vystavení infekci [22]. Druhá vlna COVID-19 již byla zaznamenána v mnoha zemích včetně Pákistánu [23, 24].
Proto je velmi důležité porozumět imunitní odpovědi u různých populací, protože má důležité důsledky pro veřejné zdraví a politiku [25, 26]. Stále však není jasné, zda lze dosáhnout stádní imunity prostřednictvím vakcíny nebo předchozí infekce.
Tato komunitní studie séroprevalence byla provedena ve třech hlavních provinciích Pákistánu, kde žije více než 90 procent populace země. Účelem bylo lépe odhadnout šíření infekce na úrovni komunity, související vzorec imunity vůči COVID-19 a vyhlídky na blízkost stádní imunity v budoucnu.
Metodologie
Tato studie byla provedena jako klastrově randomizovaný, průřezový celostátní průzkum. Sedm z devadesáti devíti měst bylo náhodně vybráno jako studijní skupina. V každém seskupení byli účastníci rekrutováni prostřednictvím mobilního kempování z náhodně vybraných odborových rad (správní jednotka v rámci okresu s velikostí populace 25,000–35,000). Shluky zahrnovaly Peshawar, Karáčí, Láhaur, Multan, Mansehra, Rawalpindi, Multan a Hajdarábád ze tří hlavních provincií (Khyber Pakhtunkhwa, Sindh a Paňdžáb).
Studie byla provedena od 15. do 31. července 2020 po schválení Institutional Review Board (IRB) Prime Foundation, Pákistán (IRB schválení č. Prime/IRB/2020-248). Po obdržení informovaného souhlasu bylo odebráno 5 ml periferní žilní krve do lithiové nádobky s heparinem. Základní demografické údaje odsouhlasujících subjektů byly zaznamenány na strukturovaném nástroji.
Uchovávání, zpracování a diagnostické značení vzorků po flebotomii
Vzorky byly transportovány do laboratoří ve specializovaných kontejnerech zajišťujících kontrolu teploty. Sérum bylo separováno, centrifugováno při 2500 ot./min. a skladováno v označených nádobkách a 20 ul bylo použito pro analýzu. Vzorky byly analyzovány pomocí imunologického testu Elecsys® (Roche, Basel, Švýcarsko) Anti-SARSCoV-2. Test využívá rekombinantní protein představující nukleokapsidový (N) antigen pro stanovení protilátek proti SARS-CoV-2.
Jde o imunotest pro kvalitativní detekci protilátek in vitro, který zahrnuje IgG proti SARS-CoV-2 v lidském séru a plazmě [27]. Souprava ROCHE schválená FDA pro detekci imunoglobulinů proti SARSCoV-2 má podle výrobce vysokou specificitu (100 procent) a citlivost více než 98,8 procenta [28]. Public Health England však odhaduje jeho specificitu na 100 procent, ale senzitivitu na 87 procent [29]. Řez pro významnou hladinu protilátek byl vzat jako 1 AU/ml podle pokynů výrobce.
Statistická analýza
Data byla zadána a analyzována v SPSS verze 24.0. Pro spojité proměnné byly vypočteny průměry, medián a standardní odchylky, zatímco pro kategorické proměnné byly vypočteny frekvence, počty a procenta. Interval spolehlivosti pro podíly byl vypočten pomocí binomických exaktních metod. Chí-kvadrát test byl použit k porovnání kategoriálních proměnných, jako je pohlaví, věková skupina a umístění. Byla provedena logistická regresní analýza, aby se předpověděla pravděpodobnost séropozitivity mezi různými věkovými skupinami. Prahová hodnota statistické významnosti byla stanovena při hodnotě P menší nebo rovné 0,05.
Výsledek
Na protilátky proti SARS-CoV-2 bylo testováno celkem 15 390 vzorků séra (jeden vzorek na jednotlivce) ze tří hlavních provincií Pákistánu na sedmi různých místech, jak je uvedeno ve výše uvedených metodách. Tabulka 1 ukazuje odhady séroprevalence podle pohlaví, věkových skupin a různých lokalit. Většina účastníků patřila do provincie Paňdžáb (n=8872, 57,6 procenta), následovala Khyber Pakhtunkhwa (n=4797, 31,2 procenta) a provincie Sindh (n=1721, 11,2 procenta).
Z celkového počtu bylo 12 280 (79,8 procenta) mužů a 3110 (20,2 procenta) žen s průměrným věkem 35,21 let (SD±13,29). Věková skupina 21–40 let tvořila většinu lidí (n=9348, 60,7 procenta), zatímco nejnižší počet účastníků tvořila věková skupina nad 60 let (n=652, 4,2 procenta).
Během sledovaného období z celkového vzorku (n=15,390) bylo 6518 testovaných pozitivních na protilátky SARS COV-2 s celkovou séroprevalencí 42,4 procenta (Binomial Exact 95% CI: 41,5–43,14 ).
V různých věkových skupinách měla nejvyšší séropozitivitu starší věková skupina nad 60 let (44,6 procenta, 95procentní CI: 40,7–48,5), zatímco nejnižší séropozitivita byla odhadnuta v mladší věkové skupině menší nebo rovna až 20 (36,7 procenta, 95 procent CI: 34,2–39,1) (tabulka 1). Séroprevalence byla nejvyšší v provincii Paňdžáb (44,5 procenta) (binomická přesná 95 procent CI: 43,5–45,6), následovaná Khyber Pakhtunkhwa (42,2 procenta) (binomální přesná 95 procent CI: 41,2–44,0) a provincie Sindh (3,18 procenta) Přesný 95procentní CI: 29,6–34,1) se statisticky významnou asociací (P<0.01) when chi-square test was applied. The city-wise seroprevalence was also calculated that ranging from 31.1% (Binomial Exact 95% CI: 28.8–33.3) in Mansehra city to 48.1% (Binomial Exact 95% CI: 46.3–49.8) in Peshawar city (Fig. 1). For the remaining five locations, the seroprevalence estimates fell within this range (31.1–48.1%).
V univariabilní analýze byla pravděpodobnost séropozitivity vyšší u mužů než u žen (OR: 1,10, 95% CI: 1,01–1,19, P<0.05) but was not statistically significant in multivariable analysis (P>{{0}}.05) (Tabulka 2). Pravděpodobnost séropozitivity v multivariabilní analýze byla nízká v mladším věku (méně než nebo rovna 20 rokům) s OR: 0,72, 95procentní CI: 0,60–0,87 ve srovnání s věkovou skupinou nad 60 let let a měl vysoce statisticky významnou hodnotu P<0.01. Similarly, the age groups of 20–40 and 41–60 years also had a lower risk of being seropositive (OR: 0.91, 95% CI: 0.77–1.07) and (OR: 0.98, 95% CI: 0.83–1.16) respectively to the age group of above 60 years and was found to be numerically higher (P = 0.25, P=0.88) (Table 2).
Diskuse
Během současné pandemie se sérologické testování jeví jako užitečná strategie k určení přenosu COVID z člověka na člověka-19. Využití sérologických testů u asymptomatické populace nebo u těch, kteří vykazují mírné symptomy, je klíčové, protože jen zřídka se rozhodnou pro PCR testování [30] maskující aktuální míru infekce populace. Různé studie provedené v různých částech světa ukázaly, že mnoho lidí s pozitivním testem na SARS-CoV-2 nevykazovalo žádné příznaky [31–33].
Tato studie provedla sérologické testy na COVID-19 u populace ze tří provincií Pákistánu. Séropozitivita se v naší studii zvyšovala se zvyšujícím se věkem. Aktuální přehled Lai a kolegů uvedl, že tomu tak je i v některých jiných studiích, ale nebylo to univerzální zjištění, avšak ve všech studiích [34]. Navíc ani oni, ani Anand et al. v přehledu velkých dat v USA zjistil jakýkoli významný rozdíl v séropozitivitě mezi muži a ženami [34, 35]. Naše studie multivariabilní analýzy také nenašla žádný významný rozdíl v séropozitivitě mezi pohlavími.
Studie však zjistila celkovou séroprevalenci 42,4 procenta. Vědomí, že když je většina populace imunní vůči infekční nemoci, poskytuje nepřímou ochranu, tj. stádní imunitu těm, kteří vůči této nemoci imunní nejsou. Vzhledem k tomu, že účinné očkování proti COVID-19 má řadu problémů s cenovou dostupností a dodavatelským řetězcem, zejména pro rozvojové země spolu se skutečností, že se chřipkové viry považují za rychle mutující, zůstává hlavní možností přirozený průběh infekce pro získání imunity stáda [36].
Byly vzneseny otázky ohledně doby trvání imunity proti COVID-19. Nedávná studie publikovaná ve Science Journal uvedla, že imunologická paměť SARS-CoV-2 může trvat déle než šest měsíců, a dále odhalila, že spike-IgG byl relativně stabilní více než šest měsíců a spike-specifické paměťové B buňky byly hojnější po šesti měsících než po jednom měsíci [37].
Zprávy týkající se vzniku varianty obav (VOC) ve Spojeném království brazilského původu mohou představovat náročný scénář, pokud jde o sledování a kontrolu šíření VOC a pochopení jejich účinků na pandemii, zejména v zemích s nízkými až středními příjmy. země (LMIC). Toto, stejně jako krátkodobá imunita spojená s pandemiemi podobnými fu, nevylučuje reinfekci a problémy s dosažením imunity stáda [38].
Závěr
Celková séroprevalence protilátek SARS CoV{0}} v Pákistánu byla v této studii přiměřeně vysoká (k červnu 2020), ale stále nedosahovala základního minima pro imunitu stáda. Séroprevalence se lišila v různých městech Pákistánu a také podle věku a pohlaví. Imunita, i když je závislá na řadě činitelů, hostitelů a faktorů prostředí, nemusí být velmi krátkodobá (3 měsíce nebo tak, jak se dříve věřilo), a postupem času přibývají důkazy, které ukazují na dlouhověkost organismu. imunitu mnohem dál.
Omezení
Omezením, které je třeba mít na paměti, může být výběrové zkreslení, ke kterému mohlo dojít v důsledku dobrovolné účasti náhodně vybraných UC.
Doplňkové informace
Online verze obsahuje doplňkový materiál dostupný na https://doi.org/10.1007/s15010-021-01629-2.
Poděkování
Autoři by rádi poděkovali všem účastníkům studie, oboru a pracovníkům laboratoře zapojeným do odběru a analýzy séra pro tuto studii.
Financování
Financování této studie poskytla nadace Al-Khidmat Health Foundation, zatímco soupravy protilátek SARS CoV-2 darovala společnost ROCHE.
Dostupnost dat a materiálu
Údaje ze studie jsou na odůvodněnou žádost k dispozici od odpovídajícího autora.
Prohlášení
Konflikt zájmů
Autoři této studie prohlašují, že nemají žádné známé konkurenční finanční zájmy nebo osobní vztahy, které by se mohly jevit jako vliv na práci uváděnou v této studii.
Reference
1. Noreen N, Dil S, Niazi S, Naveed I, Khan N, Khan F a kol. pandemie COVID-19 a Pákistán; omezení a mezery. Glob Biologická bezpečnost [Internet]. 21. května 2020 [citováno 15. listopadu 2020]; 1(4). Dostupné na http://jglobalbiosecurity.com/articles/https://doi.org/10.31646/ bio.63/
2. Mahase E. Covid-19: WHO vyhlašuje pandemii kvůli „alarmující úrovni“ šíření, závažnosti a nečinnosti. BMJ. 2020;m1036.
3. Dashboard WHO Coronavirus Disease (COVID-19) [Internet]. Covid19.kdo.int. 2020 [citováno 13. prosince 2020]. Dostupné z: https://covid19.who.int/?ftag=MSF0951a18
4. Pákistán Coronavirus: 356 904 případů a 7 141 úmrtí — Worldometer [Internet]. [citováno 15. listopadu 2020].
5. Nevysvětlitelný pokles počtu případů COVID-19 odborníků na zdraví [Internet]. Thenews.com.pk.2020 [citováno 18. prosince 2020].
6. Bývalý hlavní ekonom WB chválí pákistánské zacházení s koronavirem [internet]. [citováno 15. listopadu 2020].
7. Dawn.com A. Šéf WHO chválí Pákistán za potlačení Covid19 a zároveň udržení ekonomiky nad vodou [Internet]. DAWN.COM. 2020 [citováno 15. listopadu 2020].
8. Zdravotní poradenská platforma COVID{1}} Ministerstva národních předpisů a koordinace zdravotnických služeb [internet]. Covid. vlád. pk. 2020 [citováno 18. prosince 2020].]
9. Gao Z, Xu Y, Sun C, Wang X, Guo Y, Qiu S a kol. Systematický přehled asymptomatických infekcí COVID-19. J Microbiol Immunol Infect. 2021;54:12–6.
10. Moghadas S, Fitzpatrick M, Sah P, Pandey A, Shoukat A, Singer BH a kol. Důsledky tichého přenosu pro kontrolu epidemií COVID-19. Proč Natl Acad Sci. 2020;117:17513–5.
11. Ye G, Pan Z, Pan Y, Deng Q, Chen L, Li J a kol. Klinická charakteristika těžkého akutního respiračního syndromu reaktivace koronaviru 2. J Infect. 2020;80:e14–7.
12. Ravioli S, Ochsner H, Lindner G. Reaktivace COVID-19 pneumonie: zpráva o dvou případech. J Infect. 2020;81:e72–3.
13. Loconsole D, Passerini F, Palmieri V, Centrone F, Sallustio A, Pugliese S, et al. Recidiva COVID-19 po uzdravení: případová zpráva z Itálie. Infekce. 2020;48:965–7.
14. SeyedAlinaghi S, Oliaei S, Kianzad S, Afsahi A, MohsseniPour M, Barzegary A, et al. Riziko reinfekce nového koronaviru (CoVID-19): systematický přehled současných důkazů. Svět J Virol. 2020; 9:79–90.
15. Colson P, Finaud M, Levy N, Lagier J, Raoult D. Důkazy reinfekce SARS-CoV-2 odlišným genotypem. J Infect. 2021;82:84–123.
16. Khan S, Qureshi M, Haq I, Majid S, Bhat A, Nabi S, et al. Séroprevalence SARS-CoV-2 specifických IgG protilátek v okrese Srinagar v severní Indii – průřezová studie. PLoS ONE. 2020;15:e0239303.
17. Younas A, Waheed S, Khawaja S, Imam M, Borhany M, Shamsi T. Séroprevalence protilátek SARS-CoV-2 mezi zdravými dárci krve v Karáčí, Pákistán. Transf Apheresis Sci. 2020;59:102923.
18. Javed W, Baqar JB, Abidi SHB, Farooq W. Zjištění séroprevalence z metropolí v Pákistánu: důsledky pro hodnocení prevalence COVID-19 a smrtelných případů v husté městské pracující populaci. Arch Epidemiol. 2020; 4:143.
19. Chughtai OR, Batool H, Khan MD, Chughtai AS. Frekvence protilátek IgG COVID-19 mezi speciální policejní jednotkou Lahore, Pákistán. J Coll lékař Surg Pak. 2020;30:735–9.
20. Byambasuren O, Dobler C, Bell K, Rojas DP, Clark J, McLaws ML, et al. Srovnání séroprevalence infekcí SARS-CoV-2 s kumulativními a imputovanými případy COVID-19: systematický přehled. PLoS ONE. 2021;16:e0248946.
21. Fontanet A, Cauchemez S. COVID-19 stádní imunita: kde to jsme? Nat Rev Immunol. 2020;20:583–4.
22. Rogers L, Health J. Co je to stádová imunita a jak jí můžeme dosáhnout pomocí COVID-19? [Internet]. Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health. 2020 [citováno 18. prosince 2020].
23. Looi M. Covid-19: zasáhne Evropu druhá vlna? BMJ. 2020:m4113.
24. Druhá vlna Covid-19 v Pákistánu; jsou další epizody na cestě? [Internet]. BMJ. 2020 [citováno 18. prosince 2020].
25. Příroda. 2020. Proč je u vakcín důležité dekódování imunitní odpovědi na COVID. Příroda. Přístup: 10. srpna 2020. Dostupné z: https://www.nature.com/articles/d41586-020-02943-9
26. Příroda. 2020. Proč je u vakcín důležité dekódování imunitní odpovědi na COVID. Příroda. Přístup: 14. června 2020. Dostupné z: https://media.nature.com/original/magazine-assets/d41586- 020-02943-9/d41586-020-02943-9
27. Elecsys® Anti-SARS-CoV-2 [Internet]. Diagnostika. 2021 [citováno 1. dubna 2021]. Dostupné z: https://diagnostics.roche.com/global/en/products/params/elecsys-anti-sars-cov-2.html
28. Test na protilátky COVID-19 společnosti Roche získává povolení FDA pro nouzové použití a je dostupný na trzích, které akceptují značku CE. Přístupné 14. září 2020. Dostupné z: http://www.roche.com/media/releases/med-cor-2020-05-03.html
29. Testy protilátek Baraniuk C. Covid-19: briefing. BMJ. 2020;369:m2284.
30. Infantino M, Damiani A, Li Gobbi F, Grossi V, Lari B, Macchia D a kol. Přehled výhod a omezení sérologických testů na infekční onemocnění saRs-coV-2. Italský J Lab Med. 2020;16:7–17.
31. Sutton D, Fuchs K, D'Alton M, Gofman D. Univerzální screening na SARS-CoV-2 u žen přijatých k porodu. N Engl J Med. 2020;382:2163–4.
32. Li R, Pei S, Chen B, Song Y, Zhang T, Yang W a kol. Významná nedokumentovaná infekce usnadňuje rychlé šíření nového koronaviru (SARS-CoV-2). Věda. 2020;368:489–93.
33. Gudbjartsson DF, Helgason A, Jonsson H, Magnusson OT, Melsted P, Norddahl GL a kol. Šíření SARS-CoV-2 v islandské populaci. N Engl J Med. 2020;382:2302–15.
34. Lai C, Wang J, Hsueh P. Populační průzkumy séroprevalence protilátky anti-SARS-CoV-2: aktuální přehled. Int J Infect Dis. 2020;101:314–22.
35. Anand S, Montez-Rath M, Han J, Bozeman J, Kerschmann R, Beyer P, et al. Prevalence protilátek SARS-CoV-2 u velkého celostátního vzorku pacientů na dialýze v USA: průřezová studie. Lanceta. 2020;396:1335–44.
36. Mills MC, Salisbury D. Výzvy při distribuci očkování proti COVID-19. E Clin Med. 2020;100674.
37. Dan JM, Mateus J, Kato Y, a kol. Imunologická paměť na SARS-CoV-2 hodnocená po dobu až 8 měsíců po infekci. Věda. 2021;371:eabf4069.
38. Covid-19: Brazilská „varianta zájmu“ zjištěna ve Spojeném království [Internet]. BBC novinky. 2021 [citováno 1. dubna 2021].
Mohsina Haq1 · Asif Rehman1 · Junaid Ahmad2 · Usman Zafar3 · Sufyan Ahmed4 · Mumtaz Ali Khan5 · Asif Naveed6 · Hala Rajab1 · Fawad Muhammad1 · Wasifa Naushad1 · Muhammad Aman1 · Hafeez Ur Rehman1 · Hafeez Ur Rehman1 · Ul Sajed Najb · Ul Saje Naja
For more information:1950477648nn@gmail.com
