Pokrok ve výzkumu klasifikace difuzního velkobuněčného B-lymfomu

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Difuzní velkobuněčný B-lymfom (DLBCL) tvoří 25 až 35 procent všech nehodgkinských lymfomů a je heterogenní a agresivní skupinou s různými klinickými, patologickými a biologickými rysy. lymfom. Předchozí klinické studie identifikovaly rituximab, cyklofosfamid, doxorubicin, vinkristin a prednison (R-CHOP) jako standardní léčbu první linie u pacientů s DLBCL, z nichž 50 až 70 procent pacientů může. refrakterní nebo kompletní remise a následně relaps, zatímco pouze 10 procent refrakterních a relabujících pacientů lze vyléčit tradiční záchrannou imunochemoterapií kombinovanou s autologní transplantací krvetvorných buněk a zbývajících 90 procent pacientů má špatné výsledky léčby. Obrovskou výzvou se proto stalo, jak zlepšit prognózu těchto pacientů. V současné době probíhají i klinické studie diskutující o kombinaci dalších léků (např. lenalidomid, ibrutinib aj.) na bázi R-CHOP k dalšímu zlepšení účinnosti, ale k výraznému pokroku nedošlo. DLBCL má značnou heterogenitu, takže jak provádět přesné stratifikované diagnózy a vést individualizovanou léčbu je také jedním ze současných hotspotů výzkumu. Tento článek shrnuje postup klasifikace DLBCL.

cistamcheZvyšte proliferaci buněk

1. COO typizace DLBCL pomocí čipu pro profilování genové exprese

DLBCL má zjevnou heterogenitu v buněčné morfologii a prognóze. V roce 2000 ALIZADEH a další použili technologii genových čipů ke screeningu a detekci 3 186 genů, které hrají důležitou roli ve vývoji, diferenciaci a karcinogenezi lymfocytů, a mapovali genovou expresi DLBCL. Profil genové exprese (GEP) ukázal, že DLBCL pochází z B lymfocytů v různých stádiích diferenciace. Podle GEP lze DLBCL rozdělit na dva podtypy: typ podobný germinálním B buňkám (GCB) a typ podobný aktivovaným B buňkám (ABC). Následné studie ROSENWALD et al. tento výsledek také potvrdil. Následné studie zahrnovaly více případů a více typů genetického screeningu a zjistili, že někteří pacienti nedokázali určit zdroj buněk, které byly charakterizovány mezi dvěma podtypy, pojmenovanými typ 3, také známými jako neklasifikované. U DLBCL různého původu studie zjistila, že vykazuje různé prognózy, mezi nimiž DLBCL odvozené z GCB může získat delší dobu přežití. Typizace buněčného původu (COO) odhalila heterogenitu DLBCL a při léčbě R-CHOP byly mezi podtypy významné rozdíly v přežití, což poskytlo teoretický základ pro hodnocení prognózy a výběr režimu. Výsledky testu GEP založené na technologii genových čipů jsou v současnosti uznávány jako zlatý standard pro posuzování původu buněk DLBCL. Výsledky testů jsou nejspolehlivější, ale jsou drahé a vyžadují vysoké vzorky, obvykle čerstvě zmrazené vzorky živé tkáně, takže funkčnost není silná. V klinické praxi se příliš nepoužívá.

2. Použití technologie NanoString pro COO typování DLBCL

NanoString (Fluorescent Barcode Labeled Single-Molecule Detection) je nová vysoce výkonná detekční technologie profilování genové exprese založená na přímém měření fluorescenčních molekulárních čárových kódů na sondách poté, co molekuly nukleové kyseliny hybridizují se sondami. Každá značka čárového kódu odpovídá specifické sekvenci mRNA a ve stejném vzorku lze měřit až 800 čárových kódů, přičemž požadovaný objem vzorku může být až 100 ng RNA. Digitální kvantifikační technologie NanoString eliminuje potřebu transkripce, amplifikace nebo konstrukce knihovny, eliminuje zdlouhavé experimentální procedury a lidské zdroje a minimalizuje potenciální zkreslení způsobené enzymatickými reakcemi. U klinických vzorků s řídkými vzorky může technologie NanoString přímo používat vzorky zalité v parafínu ke kvantifikaci RNA bez extrakce RNA. Tato technická výhoda jej činí praktičtějším v klinické praxi. SCOTT a kol. provedl screening 20 genů na základě dat typizace GEP a použil technologii NanoString k provedení typizace COO na 119 vzorcích DLBCL. Konzistence mezi výsledky výzkumu a „zlatým standardem“ dosáhla 95 procent a pacienty lze dále rozdělit na typ GCB, typ ABC a neklasifikovaný typ, poslední dva jsou souhrnně označovány jako non-GCB typ, což také ukazuje, že prognóza GCB typu je lepší než u non-GCB typu. Další studie založené na technologii NanoString dále potvrdily hodnotu této technologie při typování COO DLBCL.

Tradiční čínská medicína bylinacistamche, je také známý jako "pouštní ženšen"

3. COO typizace DLBCL pomocí technologie kvantitativní PCR

Jak typizace genového čipu, tak typizace NanoString vyžaduje drahé speciální vybavení, jehož široké uplatnění v klinické praxi je obtížné. Kvantitativní PCR je běžně používaná metoda pro ověření genové exprese. Vyznačuje se jednoduchým ovládáním, vysokou citlivostí a přesností a lze jej získat ze vzorků zalitých v parafínu. Tým Li Xiaoqiu poprvé použil kvantitativní PCR k provedení rozsáhlé klinické validace v populacích čínských pacientů a vyvinul produkt vhodný pro klinické genetické testování, konkrétně test DLBCL-COO. V této studii bylo ve veřejné databázi vyšetřeno 32 genů významně souvisejících s typizací DLBCL-COO a bylo zařazeno 160 pacientů a poté byly použity metody imunohistochemie, kvantitativní PCR a genový čip k detekci jejich vzorků zalitých v parafínu a odpovídajících čerstvých U vzorků tkání výsledky ukázaly, že výsledky typizace testu DLBCL-COO byly z 92 procent v souladu se „zlatým standardem“; analýza přežití ukázala, že výsledky typizace testu DLBCL-COO Assay významně korelovaly s celkovým přežitím a prognóza typu GCB byla významně lepší než u typu ABC (P =0.023), což je vysoce konzistentní s domácími a výsledky zahraničních výzkumů. Relativně řečeno, platforma metod pro typizaci pomocí technologie kvantitativní PCR je otevřenější, obsluha jednodušší a vhodná pro rutinní vývoj ve většině laboratoří molekulární patologie.

4. COO typizace DLBCL imunohistochemicky

V některých oblastech, kde jsou finanční prostředky a technologie vzácné, je obtížné široce používat typizační technologii založenou na GEP, takže klinicky nejrozšířenější je stále typizační metoda založená na imunohistochemii (IHC). V roce 2005 HANS a další použili pro typování technologii tkáňových mikročipů a vytvořili typizační model IHC pomocí detekce CD10, BCL6 a MUM-1. DLBCL lze rozdělit na typ GCB a typ bez GCB. Prognóza prvního je výrazně lepší než prognóza druhého. (P<0.001), the="" agreement="" of="" this="" typing="" method="" with="" the="" gold="" standard="" was="" 84%.="" in="" order="" to="" further="" improve="" the="" accuracy="" of="" prognostic="" judgment,="" new="" typing="" systems,="" such="" as="" choi="" and="" tally,="" have="" been="" proposed="">

Typizace Choi je založena na pěti biomarkerech včetně CD10, BCL6, MUM-1, FOXP1 a GCET1 a dva markery, FOXP1 a GCET1 jsou přidány k metodě Hansovy typizace, která je z 93 procent v souladu se „zlatým Standard". Předchozí studie ukázaly, že FOXP1 je vysoce exprimován v typu ABC a vysoká exprese je spojena se špatnou prognózou. Když je kritická hodnota FOXP1 80 procent, lze konkrétně rozlišit ABC typ DLBCL. GCET1 je však vysoce exprimován v B buňkách odvozených od germinálních center, takže přidání GCET1 k Hansově typizaci je užitečné pro rozlišení DLBCL typu GCB a typu ABC. Co se týče predikce prognózy, Choiova klasifikace byla použita k predikci 3-letého přežití pacientů, z nichž typ GCB byl 88 procent, typ ABC 44 procent a výsledky predikce klasifikace GEP „zlatého standardu“ (typ GCB byl 92 procent, typ ABC byl 44 procent) 44 procent) je poměrně blízko. Li Min a kol. porovnal prediktivní schopnost Choi klasifikace a Hansovy klasifikace a také ukázal, že první z nich byla přesnější. Celkové přežití skupiny GCB a non-GCB skupiny podle Hansovy klasifikace nevykázalo žádný významný rozdíl (P=0.102), zatímco klasifikace Choi nevykázala žádný významný rozdíl v celkovém přežití (P=0 .102). Prognóza skupiny GCB byla významně lepší než prognóza skupiny bez GCB (3-roční míra přežití byla 61,8 procenta a 42,5 procenta, v tomto pořadí, P<0.05). however,="" it="" is="" worth="" noting="" that="" in="" recent="" years,="" with="" the="" high="" inconsistency="" of="" bcl6="" found="" by="" different="" research="" centers,="" the="" inclusion="" of="" bcl6="" in="" the="" improved="" classification="" of="" choi="" and="" hans="" has="" been="" canceled.="" operation="" and="" result="">

Jak bylo uvedeno výše, Hansova typizace na základě IHC a typizace Choi mají podobné funkce a výsledky několika protilátek jsou posuzovány v určitém pořadí, což vede k tomu, že některé protilátky mají vyšší prioritu než jiné. Metoda typu umožňuje vyloučit následné výsledky protilátek, pokud jsou splněny předchozí podmínky. Psaní GEP však nesleduje určité pořadí ani nevylučuje určité výsledky. Aby se tyto rozdíly snížily, MEYER et al. vyvinula typizační metodu, která neposuzuje výsledky protilátek v určitém pořadí, konkrétně metodu typizace Tally. Nejvyšší shoda se „zlatým standardem“ byla 93 procent, zatímco psaní Hanse i Choi bylo 87 procent. Metoda typu sčítání zahrnuje stejná množství protilátek GCB (GCET1 a CD10) a ABC (FOXP1 a MUM-1) a klasifikace je určena imunofenotypovým párem, který je pozitivnější na antigen. Pro každý typ se používají dvě protilátky, takže v případě stejného pozitivního výsledku pro každý typ je pro stanovení imunofenotypu potřeba LMO2 (LMO2 Větší nebo rovna 30 procentům je hraniční hodnota). Studie potvrdily, že LMO2 je specificky exprimován v B lymfocytech nebo lymfomech odvozených od GCB a jeho vysoká exprese je významně spojena s dobrou prognózou u DLBCL.

Závěrem lze říci, že ačkoli COO typizační metoda DLBCL založená na IHC není tak dobrá jako typizace NanoString a kvantitativní PCR typizace, konzistence se „zlatým standardem“ je také 74 procent -93 procent. Má výhody nízkých nároků a další výhody, které jsou vhodné pro rutinní rozvoj různých nemocnic. Mezi nimi jsou metody typizace Choi a Tally více konzistentní se „zlatým standardem“, ale GCET1, FOXP1 a LMO2 nejsou stálé protilátky, což do určité míry omezuje jejich široké použití.

cistamche plátky pro denní spotřebu pro zlepšení buněčné proliferace a snížení buněčné apoptózy

5. Průzkum typizace DLBCL na základě genové mutace

Téměř všichni pacienti s DLBCL mají genové mutace a pacienti s určitými mutacemi mohou ovlivnit účinnost specifických cílených léků a ovlivnit tak prognózu. Proto má podtypování DLBCL založené na mutačních signaturách klinické využití. SCHMITZ a kol. vybrali čerstvě zmrazené vzorky od 574 pacientů s DLBCL a použili sekvenování exomů a transkriptomů k analýze počtu kopií DNA genového čipu. Mezi nimi bylo vybráno 372 genů pro cílenou amplifikaci a opětovné sekvenování, aby se identifikovaly ty s reprodukovatelnými geny. Sexuálně mutované geny. Výsledky studie rozdělily DLBCL do 4 genotypů: typ MCD (hlavně komutace MYD88L265P a CD79B), typ BN2 (hlavně fúze BCL6 a mutace NOTCH2), typ N1 (hlavně mutace NOTCH1) a typ EZB (hlavně mutace EZH2) mutace a BCL2 translokace), mezi nimiž jsou typy MCD a N1 převážně odvozeny od ABC, typ EZB je převážně odvozen od GCB a typ BN2 představuje určitý podíl pacientů s ABC, GCB a neklasifikovaných pacientů (typ GCB představoval 19 procent, ABC typu tvořilo 41 procent a nezařazeného typu 40 procent). Studie také zjistila, že nové genotypy mohou lépe určit prognózu, mezi nimiž typy BN2 a EZB mají lepší prognózu než typy MCD a N1. Typy MCD, N1, BN2 a EZB předpovídají 5-roční míru přežití 26 procent, 36 procent, 65 procent, 68 procent, multivariační analýza také ukázala, že nový genotyp byl nezávislým faktorem ovlivňujícím prognózu a nebyl ovlivněn podle skóre IPI. Výzkumný tým vytvořil algoritmus LymphGen pro klasifikaci DLBCL do 7 genotypů na základě předchozího výzkumu, přidal A53 (s inaktivací TP53), ST2 (s mutacemi SGK1 a TET2) a další neklasifikovatelné. Tato metoda genotypování mohla identifikovat 63,1 procent genotypů DLBCL . Mezi nimi má nejlepší prognózu podtyp BN2 u typu ABC a podtyp ST2 u typu GCB má lepší prognózu než podtyp EZB. Proto se má za to, že nová genotypizace dále odhaluje patogenezi DLBCL s různou patogenezí mezi podtypy a různé genotypy reagují na imunochemoterapii odlišně, což může ovlivnit výběr cílené terapie, ale největším omezením této klasifikační metody je, že některé pacienty nelze zařadit do žádného podtypu, což si zaslouží další studium.

Prostřednictvím celoexomového sekvenování 3{{30}}4 pacientů s DLBCL, CHAPUY et al. získali data o nízkofrekvenčních mutacích, rekurentních mutacích, somatických změnách počtu kopií a strukturálních variantách a definovali pacienty jako pět genotypů: C1 typ (hlavně BCL10, TNFAIP3, UBE2A, CD70 mutace a BCL6 translokace, většinou ABC původu), typ C2 (dochází k bialelické inaktivaci TP53, která ovlivňuje chromozomální stabilitu a buněčný cyklus a nemá nic společného s původem ABC/GCB), typ C3 (hlavně mutace BCL2, CREBBP2, EZH2, KMT2D, TNFRSF14, hlavně původ GCB), typ C4 (hlavně mutace SGK1, HIST1H1E, NFKBIE, BRAF a CD83, většinou původu GCB), typ C5 (hlavně CD79B, MYD88L265P, ETV6), mutace PIM1 a TBL1XR1, většinou původu ABC, časté v primárním centrálním nervovém systému a testikulární DLBCL) a typ C0 (nedostatek jasných genetických ovladačů). Studie dále analyzovala vztah mezi novými genotypy a prognózou. Výsledky ukázaly, že C0, C1 a C4 měly lepší prognózu, zatímco C3 a C5 měly špatnou prognózu. U pacientů s ABC byla prognóza typu C1 významně lepší než u typu C5. , zatímco typ C4 byl významně lepší než typ C3 u pacientů s GCB. Nová genotypizace také definuje nízkorizikové DLBCL typu ABC (typ C1), jehož buňky mohou pocházet z extrafolikulární marginální zóny; a vysoce rizikové DLBCL typu GCB se strukturálními variantami BCL2 a PETN a epigenetickými enzymy. Změny (typ C3), zatímco DLBCL typu GCB s nízkým rizikem je spojena se změnami v kinázách a mnohočetných rekombinantních proteinech více drah (BCR/PI3K, JAK/STAT, BRAF) (typ C4); typizace nesouvisející s původem ABC/GCB S bialelickou inaktivací TP53, nestabilitou 9p21.3/CDKN2A a příbuzných genů (typ C2). Klíčové genetické rysy těchto DLBCL zahrnují mutace, somatické změny počtu kopií a strukturální variace a změny v těchto třech třídách genetických informací, které lze použít k vysvětlení rozdílů ve výsledcích onemocnění a léčby.

Na základě cíleného sekvenování 293 genů LACY et al. analyzovali charakteristiky genových mutací u 928 pacientů s DLBCL a rozdělili pacienty do 5 podtypů: typ MYD88 (hlavně mutace MYD88L265P, PIM1, CD79B, hlavně původu ABC, do tohoto podtypu patří většina původních pacientů s DLBCL s centrálním nervovým systémem, varlaty a prsy ); Typ BCL2 (s EZH2, BCL2, CREBBP, T

Mutace NFRSF14, KMT2D a MEF2B jsou hlavně, hlavně z GCB, k tomuto typu patří někteří pacienti s lymfomem vysokého stupně a DLBCL transformovaní z folikulárního lymfomu); typ SOCS1/SGK1 (hlavně včetně mutací SOCS1, CD83, SGK1, NFKBIA, HIST1H1E a STAT3 jsou odvozeny hlavně z GCB a většina primárních mediastinálních DLBCL patří k tomuto typu); typ TET2/SGK1 (hlavně včetně mutací TET2, SGK1, KLHL6, ZFP36L1, BRAF, MAP2K1 a KRAS, hlavně původu GCB); typ NOTCH2 (včetně mutací NOTCH2, BCL10, TNFAIP3, CCND3, SPEN, TMEM30A FAS a CD70, složených z ABC, GCB a neklasifikovaného původu, s podobnými rysy jako lymfom marginální zóny); nezařazený podtyp (neklasifikován jinde, NEC). Studie analyzovala vztah mezi různými genotypy a prognózou a výsledky ukázaly, že nejhorší prognózu má MYD88 s 5-letou mírou přežití 42 procent; BCL2, SOCS1/SGK1 a TET2/SGK1 měly dobrou prognózu s 5-letou mírou přežití 64,9 procenta, respektive 62,5 procenta a 60,1 procenta; zatímco prognóza typů NOTCH2 a NEC byla mezi těmito dvěma a 5-roční míra přežití byla 48,1 procenta, respektive 53,6 procenta.

Abychom to shrnuli, je vidět, že tyto tři klasifikační systémy se nejen liší, ale mají také určité překrývající se obsahy. Mezi nimi typy MYD88, C5 a MCD souvisejí se zdrojem ABC. Primární lymfom centrálního nervového systému a testikulární lymfomy se většinou vyskytují u těchto tří typů a prognóza je špatná. Typ C2 je charakterizován mutací/delecí TP53 a většina z nich má špatnou prognózu a A53 odpovídá C2. Typy BCL2, C3 a EZB jsou spojeny se zdrojem GCB, mají stejný mutační podpis jako folikulární lymfom, a přestože jsou u tohoto typu častější lymfomy s dvojitým zásahem a lymfomy vysokého stupně, celková prognóza je dobrá. Typy SOCS1/SGK1 a C4 jsou hlavně DLBCL odvozené od GCB, které mají podobné genetické charakteristiky jako primární mediastinální velkobuněčný B-lymfom a mají nejlepší prognózu. Současná typizace mutací je však složitá a metody a výsledky různých studií se liší. Proto je třeba proces analýzy v budoucnu ještě zjednodušit, aby se dále objasnil dopad genů jádrových mutací na prognózu a léčbu.

cistamcheobsahuje bohatý echinakosid a akteosid, které mohou vyživovat tělo a chránit ho před viry a nemocemi

souhrn

Typizace COO na základě GEP je „zlatým standardem“, ale vyžaduje vysoké vzorky, je drahá a není snadné ji rutinně provádět v klinické praxi. Alternativně bylo typování COO založené na NanoString, kvantitativní PCR a imunohistochemických technikách dále optimalizováno z hlediska požadavků na vzorky, technické obtížnosti a experimentálních nákladů, ale přesnost prognostického úsudku a role vedení léčby je stále vyšší než u Zlatý standard. Existuje určitá mezera. Současné studie také ukázaly, že téměř všichni pacienti s DLBCL obsahují genetické mutace a nepříznivé genetické mutace mohou významně ovlivnit prognózu. Cílená terapie některých specifických mutací může také zlepšit prognózu, takže nová klasifikace založená na genových mutacích má důležitý klinický význam. Typizace genových mutací je komplementární k typizaci COO, což vysvětluje, že v rámci stejného podtypu COO existuje také významná heterogenita. Typizace genových mutací však nemůže zahrnovat všechny pacienty a je zapotřebí dalšího výzkumu, aby se potvrdil hlavní význam klinické prognózy a zda tradiční a nové cílené léky, které se v současnosti používají, mohou vést léčbu prostřednictvím této typizace.