Abstraktní

Objektivní:Prozkoumat neuroprotektivní účinek glykosidů Cistanches (GC) na myším modelu Parkinsonovy choroby (PD) indukované 1-methyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridinem (MPTP) a prozkoumat potenciální mechanismus.

Metody:Čtyřicet myší bylo náhodně rozděleno do kontrolní skupiny, PD skupiny, GCs skupiny a levodopové (L-DOPA) skupiny (n=10 na skupinu). Kontrolní skupina dostávala intraperitoneální injekce normálního fyziologického roztoku, zatímco ostatní skupiny dostávaly intraperitoneální injekce MPTP (30 mg/kg) jednou denně po dobu 5 po sobě jdoucích dnů. Po vytvoření modelu byl kontrolním a PD skupinám podáván fyziologický roztok intragastricky jednou denně po dobu 28 po sobě jdoucích dnů. Skupina GCs a skupina L-DOPA dostávaly intragastrické podávání jednou denně po dobu 28 po sobě jdoucích dnů v dávkách 100 mg/kg a 50 mg/kg, v daném pořadí. K hodnocení motorické funkce byly použity test otevřeného pole a test rotarod. Imunohistochemie byla provedena k detekci počtu neuronů pozitivních na tyrosinhydroxylázu (TH) v substantia nigra středního mozku. K pozorování mitochondriální ultrastruktury v substantia nigra byla použita transmisní elektronová mikroskopie (TEM). Biochemické testy byly použity ke stanovení hladin glutathionu (GSH), malondialdehydu (MDA), celkové superoxiddismutázy (T-SOD) a hladin reaktivních forem kyslíku (ROS) v tkáních substantia nigra. Western blotting byl použit k hodnocení TH, nukleárního faktoru erytroidního 2 souvisejícího faktoru 2 (Nrf2), Kelch-like ECH-asociovaného proteinu 1 (Keap-1) a proteinu hemoxygenázy-1 (HO-1) v tkáních substantia nigra.

 

 

Výsledky:Ve srovnání s kontrolní skupinou vykazovaly myši ve skupině PD výrazně zhoršenou motorickou funkci, významně sníženou aktivitu T-SOD, zjevné snížení TH-pozitivních neuronů a obsahu GSH a zvýšené hladiny MDA a ROS v substantia nigra (P < 0,01). Ve srovnání se skupinou PD vykazovaly myši ve skupině GCs zlepšenou motorickou funkci, zvýšenou aktivitu T-SOD, vyšší počet TH-pozitivních neuronů a zvýšený obsah GSH, doprovázený sníženými hladinami MDA a ROS (P < 0,05). V kontrolní skupině vykazovaly mitochondrie substantia nigra normální morfologii bez rozmazaných membránových struktur nebo vakuolární degenerace. Skupina PD vykazovala mitochondriální otok, neuspořádané kristy a vakuolární změny; tyto patologické změny byly ve skupině GC zmírněny. Ve srovnání s kontrolní skupinou byly hladiny proteinů TH, Nrf2 a HO-1 významně sníženy, zatímco exprese proteinu Keap-1 byla výrazně zvýšena ve skupině s PD (P < 0,01). Ve srovnání se skupinou PD skupina GCs vykazovala významnou upregulaci hladin TH, Nrf2 a HO-1 proteinu a významné snížení hladiny proteinu Keap-1 (P < 0,05).

Závěr:GC zlepšují motorickou dysfunkci a zmírňují dopaminergní neuronální a mitochondriální poškození u myší s PD modelem vyvolaným MPTP. Tyto účinky mohou být spojeny s modulací exprese proteinů související s dráhou Nrf2/HO-1, zvýšením antioxidační kapacity a zmírněním oxidačního stresu.

klíčová slova:Parkinsonova nemoc; glykosidy Cistanches; oxidační stres; cesta Nrf2/HO-1; dopaminergní neuron; ROS

 

Zavedení

Parkinsonova nemoc (PD) je celosvětově druhým nejčastějším neurodegenerativním onemocněním. Pacienti typicky vykazují motorické symptomy, jako je klidový třes, svalová rigidita, bradykineze a porucha posturální rovnováhy. Se zrychlujícím se stárnutím populace se počet jedinců s PD stále zvyšuje, což výrazně ovlivňuje kvalitu života [1]. Současné klinické léčby hlavně zmírňují symptomy a stále mají potíže se zastavením progrese onemocnění. Proto se screening nízkotoxických a účinných neuroprotektivních látek z přírodních produktů stal aktivním bodem výzkumu.

Glykosidy Cistanches (glykosidy cistanches, GC) jsou hlavními aktivními složkami Cistanche a vykazují antioxidační, antiapoptotické a neuroprotektivní účinky [2]. Oxidační stres označuje nerovnováhu mezi produkcí reaktivních forem kyslíku (ROS) a antioxidačními obrannými mechanismy těla, což vede k poškození buněk, zánětu a dalším patologickým změnám [3]. Předchozí studie [4] ukázaly, že nukleární faktor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2), jako klíčový transkripční faktor regulující redoxní homeostázu, je zásadním signálním cílem, který zprostředkovává ochranu neuronů. Zacílení na dráhu antioxidačního stresu Nrf2 tedy může představovat potenciálně účinnou intervenční strategii pro prevenci a léčbu PD.

Náš předběžný výzkum ukázal, že GC mohou snížit ztrátu dopaminergních neuronů v substantia nigra myší s PD modelem a zlepšit motorické funkce [5]. Zda však GC vykazují antiparkinsonské účinky prostřednictvím signální dráhy Nrf2/HO-1, zůstává nejasné. V této studii jsme vytvořili MPTP-indukovaný PD myší model, abychom vyhodnotili neuroprotektivní účinky GC a dále prozkoumali základní molekulární mechanismus.

 

1 Materiály a metody

1.1 Materiály

1.1.1 Pokusná zvířata

Čtyřicet 8týdenních zdravých samců myší C57BL/6 třídy SPF (tělesná hmotnost 21–23 g) bylo zakoupeno od společnosti Beijing SBF Biotechnology Co., Ltd., výrobní licenční číslo: SCXK (Beijing) 2024-0001. Myši byly před experimenty aklimatizovány po dobu 1 týdne. Podmínky ustájení byly teplota (23±1)∘C(23 \\pm 1)^\\circ\\text{C}(23±1)∘C, relativní vlhkost 50 %–60 %, ad libitum jídlo a voda a cyklus světlo/tma 12 h/12 ​​h. Všechny postupy přísně dodržovaly „Předpisy o správě laboratorních zvířat“ a byly schváleny Výborem pro etiku zvířat Baotou Medical College (č. schválení: 包医伦审〔2022〕第60号).

1.1.2 Reagencie a nástroje

GC (obsah větší nebo rovný 85 %) poskytla společnost Baoji Kosmai Plant Polysaccharide Development Co., Ltd. (č. šarže: KM20220609011). MPTP (1-methyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridin) byl zakoupen od Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd. (kat. č.: S31504). Primární protilátky: tyrosinhydroxyláza (TH; kat. č.: 25859-1-AP), Nrf2 (kat. č.: 16396-1-AP), Keap-1 (kat. č.: 10503-2-AP) a HO-1 (kat. č.: 10701-1-AP) byly od Proteintech (USA) GAPDH (Kat. č.: 48620), -aktin (Kat. č.: 21338-1) a sekundární protilátka (Kat. č.: L3012) byly od Signalway Antibody (USA). Univerzální dvoukroková detekční sada (Kat. č.: PV-9000) a DAB kit (Kat. č.: ZLI-9017) byly od společnosti Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. Gelový akcelerátor PAGE (kat. č.: T8090) byl od společnosti Beijing No. G2004), lyzační pufr (Kat. č.: R0010), T-SOD (Kat. č.: G4306), GSH (Kat. č.: G4305), MDA (Kat. č.: G4302) a ROS kit (Kat. č.: G1746) byly od společnosti Wuhan. Technology Co., Ltd. Přístroj pro elektroforézu byl od Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. Čtečka mikrodestiček byla od Thermo Fisher (USA). Parafínový mikrotom a světelný mikroskop byly od Leica (Německo). Gelový zobrazovací systém byl od Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.

1.2 Metody

1.2.1 Seskupování zvířat a léčba

Myši byly náhodně rozděleny do čtyř skupin: kontrolní skupina, PD skupina, GCs skupina a L-DOPA skupina (n=10 na skupinu). Podle předchozí literatury [6] byl k vytvoření myšího modelu PD použit protokol MPTP pro intraperitoneální injekci. S výjimkou kontrolní skupiny všechny ostatní skupiny dostávaly MPTP v dávce 30 mg/kg intraperitoneálně jednou denně po dobu 5 po sobě jdoucích dnů; kontrolní skupina dostala intraperitoneální injekce stejného objemu normálního fyziologického roztoku.

Po modelování byly zahájeny lékové intervence: skupina GC dostávala GC 100 mg/kg sondou; skupina L-DOPA dostávala L-DOPA 50 mg/kg sondou; kontrolní a PD skupiny dostávaly stejné objemy normálního fyziologického roztoku žaludeční sondou. Všechny skupiny byly léčeny jednou denně po dobu 28 po sobě jdoucích dnů.

1.2.2 Posouzení funkce motoru

1.2.2.1 Test v otevřeném poli

Bylo použito standardizovaného otevřeného přístroje. Myši byly umístěny do centrální oblasti komory o rozměrech 50 cm x 50 cm x 50 cm a ponechány aklimatizovat se po dobu 5 minut. Poté video sledovací systém zaznamenal lokomotorické trajektorie a celkovou cestovní vzdálenost během 5 minut.

1.2.2.2 Test rotarodu

Myši byly umístěny na zařízení rotarod. Rychlost se zvýšila z 0 na 30 ot/min během 30 s, s celkovou dobou trvání testu 300 s. Byla zaznamenána latence do prvního pádu. Každá myš byla testována třikrát a byla použita střední hodnota.

1.2.3 Odběr tkání

Jednu hodinu po posledním podání byly myši anestetizovány intraperitoneální injekcí 0,3% pentobarbitalu sodného (0,15 ml/10 g). V každé skupině byly náhodně vybrány tři myši pro fixaci perfuze: srdce bylo rychle exponováno a myši byly perfundovány normálním fyziologickým roztokem, dokud játra nezbledla, poté následovala perfuze 4% paraformaldehydem. Celé mozky byly odstraněny a následně fixovány ve 4% paraformaldehydu po dobu 24 hodin, následovala dehydratace, zalití a nařezání. Zbývající myši byly perfundovány pouze normálním fyziologickým roztokem; byly odebrány celé mozky, oblast substantia nigra středního mozku byla vypreparována na ledu a vzorky byly uloženy při -80 stupních pro testy.

1.2.4 Imunohistochemie (IHC)

Tkáně středního mozku substantia nigra byly zalité v parafínu a nařezány na 5 μm řezy. Řezy byly umístěny do pufru citrátu sodného, ​​zahřáté k varu, poté přirozeně ochlazeny a třikrát promyty PBS. Činidlo blokující endogenní peroxidázu bylo aplikováno při teplotě místnosti po dobu 10 minut, následovalo promytí PBS. Řezy byly inkubovány se zředěnou primární protilátkou TH při 4 stupních přes noc, promyty PBS, inkubovány s enhancerovým činidlem při teplotě místnosti po dobu 20 minut, promyty, inkubovány s enzymem značeným sekundárním činidlem při teplotě místnosti po dobu 20 minut a znovu promyty. Pracovní roztok DAB (50 μl) byl aplikován při pokojové teplotě po dobu 2 minut. Řezy byly opláchnuty, diferencovány, zmodrány, dehydratovány, vyčištěny v xylenu a upevněny neutrální pryskyřicí. Počty TH-pozitivních buněk byly kvantifikovány pomocí ImageJ.

1.2.5 Stanovení indikátorů oxidačního stresu

Tkáň Substantia nigra byla zvážena, homogenizována a centrifugována po dobu 10 minut (12 000 ot./min., 4 stupně). Byl odebrán supernatant. Testy byly prováděny přísně podle instrukcí sady. Byly vytvořeny standardní křivky a použity k výpočtu T-SOD aktivity, MDA, GSH a hladin ROS ve vzorcích.

1.2.6 Western blotting

Tkáně Substantia nigra byly lyžovány pufrem pro lýzu proteinů a inhibitory proteázy, důkladně homogenizovány a lyžovány na ledu po dobu 30 minut. Lyzáty byly centrifugovány při nízké teplotě po dobu 10 minut (12 000 ot./min.). Koncentrace proteinu byla stanovena testem BCA. Vzorky byly připraveny, denaturovány při 100 stupních po dobu 10 minut a skladovány pro použití. Byla provedena SDS-PAGE, po které následoval přenos na membrány a blokování. Po promytí TBST byly membrány inkubovány s primárními protilátkami při 4 stupních přes noc, promyty, inkubovány se sekundární protilátkou při teplotě místnosti po dobu 2 hodin, znovu promyty a vyvinuty chemiluminiscenčním substrátem. ImageJ byl použit pro denzitometrickou semikvantifikaci.

1.2.7 Transmisní elektronová mikroskopie (TEM)

Byly odebrány vzorky tkání Substantia nigra ze tří skupin. Každý vzorek byl rychle fixován 2,5% glutaraldehydovým fixačním prostředkem pro elektronovou mikroskopii a udržován při 4 stupních přes noc, následovala fixace 1% oxidem osmičelým při nízké teplotě, dehydratace ethanolovým gradientem a infiltrace/zalití epoxidovou pryskyřicí. Ultratenké řezy (60 nm) byly obarveny 1% uranylacetátem a citrátem olovnatým. TEM byl použit k pozorování mitochondriálních ultrastrukturálních změn a k zachycení reprezentativních snímků.

1.3 Statistická analýza

Pro analýzu dat byl použit GraphPad Prism 10.0. Byla testována normalita a homogenita rozptylu. Data měření jsou vyjádřena jako průměr ± SD. Pro srovnání mezi více skupinami byla použita jednocestná ANOVA a pro párová srovnání byl použit Tukeyho post hoc test. P < 0,05 bylo považováno za statisticky významné.

 

2 Výsledky

2.1 Účinky GC na motorickou funkci u PD myší

Výsledky testu v otevřeném terénu ukázaly, že ve srovnání s kontrolní skupinou vykazovala skupina PD sníženou celkovou cestovní vzdálenost (P < 0,01). Ve srovnání se skupinou PD vykazovala skupina GCs a skupina L-DOPA zvýšenou celkovou cestovní vzdálenost (P < 0,05) (viz obr. . 1A, 1B). Výsledky testu Rotarod ukázaly, že ve srovnání s kontrolní skupinou vykazovala PD skupina zkrácenou latenci do pádu (P < 0,01). Ve srovnání se skupinou PD vykazovaly skupiny GC a L-DOPA prodlouženou latenci k pádu (P < 0,05) (viz obr. . 1C).

 

Obr. 1 Chování myší v každé skupině ( x  s, n =10) A, B: Test v otevřeném poli; C: Rotarod test; a: kontrolní skupina; b: skupina PD; c: skupina GCs; d: skupina L-DOPA; **P<0.01 vs Control group; #P<0.05 vs PD group.

Obr. 2 Exprese TH-pozitivních buněk u myší v každé skupině a odpovídající sloupcové grafy ( x  s, n =3) a: Kontrolní skupina; b: skupina PD; c: skupina GCs; d: skupina L-DOPA; **P<0.01 vs Control group; #P<0.05 vs PD group.

Obr. 3 Pruhy exprese TH proteinu myší v každé skupině a odpovídající sloupcové grafy ( x  s, n =3) a: Kontrolní skupina; b: skupina PD; c: skupina GCs; d: skupina L-DOPA; **P<0.01 vs Control group; #P<0.05 vs PD group.

 

2.2 Účinky GC na TH v substantia nigra PD myší

Výsledky IHC ukázaly, že ve srovnání s kontrolní skupinou byl počet TH-pozitivních buněk v substantia nigra pars compacta ve skupině PD snížen (P < 0,01). Ve srovnání se skupinou PD vykazovala skupina GCs a skupina L-DOPA zvýšený počet TH-pozitivních buněk (P < 0,05) (viz obr. 2). Výsledky Western blot ukázaly, že ve srovnání s kontrolní skupinou byla exprese TH proteinu v substantia nigra ve skupině PD snížena (P < 0,01). Ve srovnání se skupinou PD byla exprese TH proteinu v substantia nigra zvýšena ve skupinách GC a L-DOPA (P < 0,05) (viz obr. 3).

 

Obr.4 Porovnání obsahu ROS u myší s PD modelem ( x  s, n =3) a: Kontrolní skupina; b: skupina PD; c: skupina GCs; **P<0.01 vs Control group; #P<0.05 vs PD group.

 

2.3 Účinky GC na ROS v substantia nigra PD myší

Ve srovnání s kontrolní skupinou byly hladiny ROS v substantia nigra zvýšené ve skupině s PD (P < 0,01). Ve srovnání se skupinou PD byly hladiny ROS substantia nigra ve skupině GC sníženy a rozdíl byl statisticky významný (P < 0,05) (viz obr. . 4).

2.4 Účinky GC na MDA, T-SOD a GSH v substantia nigra u PD myší

Ve srovnání s kontrolní skupinou byla aktivita T-SOD a obsah GSH substantia nigra ve skupině PD snížena (P < 0,01), zatímco obsah MDA byl zvýšen (P < 0,01). Ve srovnání se skupinou PD vykazovala skupina GCs zvýšenou aktivitu T-SOD a obsah GSH (P < 0,05) a snížený obsah MDA (P < 0,05) (viz obr . 5).

 

Obr. 5 Účinky GC na MDA, T-SOD a GSH ve středním mozku substantia nigra myší v každé skupině ( x  s, n =3) a: Kontrolní skupina; b: skupina PD; c: skupina GCs; **P<0.01 vs Control group; #P<0.05 vs PD group.

 

2.5 Účinky GC na neuronální mitochondriální ultrastrukturu v substantia nigra PD myší

V kontrolní skupině byly neuronální mitochondrie substantia nigra většinou oválné, s intaktní vnitřní a vnější membránou a jasnými hranicemi; mitochondriální cristae byly v pořádku. Ve srovnání s kontrolní skupinou vykazovala PD skupina zjevný mitochondriální otok, nejasné hranice vnitřní/vnější membrány, dezorganizované a částečně zlomené kristy a změny podobné vakuolám. Ve srovnání s PD skupinou bylo mitochondriální ultrastrukturální poškození významně zmírněno ve skupině GC: mitochondriální morfologie byla pravidelnější, otoky a změny podobné vakuolám byly sníženy a hranice membrány a čirost krist se zlepšily (viz obr. 6).

 

Obr. 6 Účinky GC na ultrastrukturu neuronů substantia nigra u PD myší ×20 000 A: Kontrolní skupina; B: skupina PD; C: skupina GCs; Červené šipky označují mitochondrie.

 

2.6 Účinky GC na proteiny související s dráhou Nrf2/HO-1 v substantia nigra PD myší

Výsledky Western blot ukázaly, že ve srovnání s kontrolní skupinou byly hladiny exprese proteinu Nrf2 a HO-1 sníženy ve skupině PD, zatímco exprese proteinu Keap-1 byla zvýšená; rozdíly byly statisticky významné (všechny P < 0,01). Ve srovnání se skupinou PD vykazovala skupina GCs zvýšenou expresi proteinu Nrf2 a HO-1 a sníženou expresi proteinu Keap-1; rozdíly byly statisticky významné (všechny P < 0,05) (viz obr. 7).

Obr. 7 Reprezentativní pásy Western blotu a kvantitativní sloupcové grafy exprese proteinu Nrf2, Keap-1 a HO-1 u myší v každé skupině (x s, n=3) a: Kontrolní skupina; b: skupina PD; c: skupina GCs; **P<0.01 vs Control group; #P<0.05 vs PD group.

 

3 Diskuse

Mezi základní motorické příznaky PD patří bradykineze, rigidita, klidový třes a posturální nestabilita nebo poruchy chůze [7]. Na zvířecích modelech PD lze sníženou spontánní aktivitu a poruchu motorické koordinace hodnotit pomocí testů na otevřeném poli a rotarodových testů [8]. Předchozí studie [9] uváděly, že MPTP-indukované PD myši vykazují abnormální motorické funkce, jako je zkrácená cestovní vzdálenost a zkrácená latence rotarodu k pádu. V souladu s těmito zprávami naše studie zjistila, že po podání MPTP myši vykazovaly významně sníženou cestovní vzdálenost a zkrácenou latenci do pádu, což naznačuje zhoršenou spontánní aktivitu a motorickou koordinaci. L-DOPA, běžně používaný klinický lék na PD, významně zlepšil motorickou dysfunkci indukovanou MPTP u myší, což dále podpořilo spolehlivost modelu a hodnocení chování. Po intervenci GC se jak cestovní vzdálenost, tak latence do pádu významně zlepšily, což naznačuje, že GC mohou zmírnit motorickou dysfunkci podobnou PD vyvolanou MPTP a mohou poskytnout ochranu proti souvisejícímu poškození neuronů. Tato zjištění poskytují experimentální základ pro další farmakodynamické hodnocení a mechanistické studie.

Progresivní degenerace a ztráta dopaminergních neuronů v substantia nigra je základním patologickým rysem PD, což vede k dysfunkci nigrostriatálního dopaminergního systému [10]. Předchozí studie [11] hodnotily poškození dopaminergních neuronů pomocí TH imunohistochemie a pozorovaly významný pokles TH-pozitivních buněk u myší s PD modelem doprovázený motorickými abnormalitami. Yildirim a kol. [12] podobně uvedli, že počet TH-pozitivních buněk v substantia nigra byl významně snížen u MPTP-indukovaných PD myší. V souladu s těmito studiemi naše výsledky ukázaly, že léčba MPTP snížila počet TH-pozitivních buněk a vyvolala motorickou dysfunkci, což ukazuje na poškození dopaminergního systému substantia nigra. L-DOPA intervence částečně inhibovala pokles TH-pozitivních buněk. Intervence GC také významně zeslabila MPTP-indukovanou redukci v TH-pozitivních buňkách, i když je úplně neobnovila na normální hladiny. To naznačuje, že GC mohou částečně zlepšit MPTP-indukované poškození dopaminergního systému substantia nigra a mohou mít ochranné účinky na dopaminergní neurony.

Studie [13–14] uvádějí, že MPTP indukuje poškození oxidativním stresem u myší, projevující se jako mitochondriální strukturální narušení, snížená aktivita T-SOD, snížený obsah GSH a zvýšené hladiny ROS a produktu peroxidace lipidů MDA. V naší studii vykazovaly myši ošetřené MPTP mitochondriální strukturální poškození v substantia nigra, zvýšené hladiny ROS a MDA a sníženou aktivitu T-SOD a obsah GSH, což potvrzuje, že zde použitý model PD indukovaný MPTP je spolehlivý. Po ošetření GCs bylo významně inhibováno mitochondriální strukturální poškození, hladiny ROS a MDA se snížily a aktivita T-SOD a obsah GSH se zvýšily, což ukazuje na antioxidační účinek.

Nrf2 je hlavní transkripční regulátor udržující buněčnou redoxní homeostázu. Jeho aktivace podporuje expresi antioxidačních proteinů, jako je HO-1, a tím zvyšuje buněčnou antioxidační obrannou kapacitu [15]. Lu a kol. [16] zjistili, že exprese proteinu Nrf2 byla u myší s PD indukovanou MPTP významně snížena. V souladu s tím jsme pozorovali, že MPTP snižuje expresi proteinů Nrf2 a HO-1, doprovázenou sníženou aktivitou antioxidačních enzymů a zvýšenou peroxidací lipidů, což naznačuje potlačení antioxidační obrany. Léčba GC významně zvrátila MPTP-indukovanou downregulaci Nrf2 a HO-1, což naznačuje, že GC mohou zvýšit antioxidační obranu regulací signální dráhy Nrf2/HO-1.

Naše studie navíc ukázala, že GC redukovaly expresi proteinu Keap-1 u myší s PD modelem. Předchozí výzkum [17] ukázal, že Keap-1 je klíčovým negativním regulátorem Nrf2. Za homeostatických podmínek Keap-1 váže Nrf2 a podporuje jeho ubikvitinaci a proteasomální degradaci, přičemž udržuje nízkou expresi Nrf2. Když je funkce Keap-1 inhibována, Nrf2 je stabilizovaný a translokuje se do jádra, aby indukoval antioxidační geny, jako je HO-1. Proto mohou GC oslabit Keap-1 zprostředkovanou inhibici Nrf2, podporovat stabilizaci Nrf2 a jadernou translokaci a zvýšit downstream expresi HO-1, čímž vyvíjejí účinky antioxidačního stresu.

GC jsou účinná směs frakcí složená z více složek, jako jsou fenylethanoidní glykosidy a iridoidní glykosidy. Předchozí studie [18] potvrdily, že GC mohou vykazovat neuroprotektivní účinky prostřednictvím antioxidačních, antiapoptotických, protizánětlivých účinků a udržováním mitochondriální homeostázy, zlepšujícím funkční deficity v modelech mozkové ischemie, Alzheimerovy choroby, PD a dalších neurologických poranění. Současný výzkum GC související s PD se většinou zaměřuje na celkové farmakodynamické hodnocení, zatímco integrovaný mechanismus zahrnující mitochondriální strukturu a dráhu Nrf2/HO-1 nebyl systematicky objasněn. V této studii GC aktivovaly dráhu Nrf2/HO-1, inhibovaly mitochondriální strukturální poškození a snižovaly oxidační stres zprostředkovaný ROS, čímž vykazovaly neuroprotektivní účinky proti PD.

Echinakosid je nejhojnější a nejaktivnější markerovou složkou v GC a uvádí se, že má významnou neuroprotektivní aktivitu [7]. Zda však echinakosid zprostředkovává anti-PD neuroprotekci prostřednictvím aktivace dráhy Nrf2/HO-1, je třeba dále ověřit. Budoucí studie by se měly zaměřit na hlavní monomery, jako je echinakosid, aby se identifikovaly klíčové aktivní složky odpovědné za aktivaci dráhy Nrf2/HO-1 a hlavní neuroprotektivní účinek.

Stručně řečeno, GC zlepšily motorickou dysfunkci u myší s PD modelem. Mechanismus může zahrnovat regulaci signální dráhy Nrf2/HO-1, zvýšení aktivity antioxidačních enzymů a zmírnění oxidativního stresu vyvolaného ROS, čímž dochází k neuroprotektivním účinkům.

 

Reference

[1] Balestrino R, Schapira AH V. Parkinsonova nemoc.Eur J Neuro, 2020, 27(1): 27–42. doi:10.1111/ene.14108.
[2] Cheng N, Wang H, Hao H a kol. Pokrok ve výzkumu polysacharidových složekCistanche deserticolajako potenciální farmaceutické látky.Eur J Med Chem, 2023, 245: 114892. doi:10.1016/j.ejmech.2022.114892.
[3] Mimura T, Noma H. ​​Oxidační stres u diabetické retinopatie: Komplexní přehled mechanismů, biomarkerů a terapeutických perspektiv.Antioxidanty, 2025, 14(10): 1204. doi:10.3390/antiox14101204.
[4] Wang K, Han C, Yang J, et al. Benfotiamin chrání myší model s Parkinsonovou chorobou vyvolanou MPTP prostřednictvím aktivace signální dráhy Nrf2.PLoS One, 2024, 19(7): e0307012. doi:10.1371/journal.pone.0307012.
[5] Xu ZP, Wang XY, Yao SQ a kol. Neuroprotektivní účinky glykosidů zCistanchena myších modelu Parkinsonovy choroby indukované MPTP.J Shenyang Med Coll, 2026, 28(3): 246–251. doi:10.16753/j.cnki.1008-2344.2026.03.004.
[6] Yao SQ, Xu ZP a kol. Neuroprotektivní účinekCistanche deserticolaglykosidy v MPTP-indukovaném myším modelu Parkinsonovy choroby zahrnuje aktivaci Nrf2.J Toxicol Environ Health A, 2025, 88(14): 576–588. doi:10.1080/15287394.2025.2470847.
[7] Yang X, Yv Q, Ye F a kol. Echinakosid chrání dopaminergní neurony prostřednictvím regulace dráhy IL-6/JAK2/STAT3 v modelu Parkinsonovy choroby.Front Pharmacol, 2022, 13: 848813. doi:10.3389/fphar.2022.848813.
[8] Tarakad A. Motorické rysy Parkinsonovy choroby.Neurol Clin, 2025, 43(2): 279–289. doi:10.1016/j.ncl.2024.12.007.
[9] Yan YQ, Zheng R, Liu Y a kol. Parkin reguluje mikrogliální NLRP3 a potlačuje neurodegeneraci u Parkinsonovy choroby.Stárnoucí buňka, 2023, 22(6): e13834. doi:10.1111/acel.13834.
[10] Ahumada-Montalva P, Muñoz-Carvajal F, Bórquez-Macaya S, et al. TMBIM6 zvyšuje přežití dopaminergních neuronů modulací dráhy IRE1 u Parkinsonovy choroby.Cell Death Dis, 2026, 17(1): 385. doi:10.1038/s41419-025-08391-5.
[11] Sharma R, Neupane C, Pham TL a kol. Tonická aktivace NMDAR obsahujících NR2D zhoršuje ztrátu dopaminergních neuronů u parkinsonských myší s injekcí MPTP.J Neurosci, 2023, 43(46): 7730–7744. doi:10.1523/jneurosci.1955-22.2023.
[12] Yildirim S, Ozkan A, Aytac G, et al. Role melatoninu v TLR4-zprostředkované zánětlivé dráze v MTPT-indukovaném myším modelu.NeuroToxikologie, 2022, 88: 168–177. doi:10.1016/j.neuro.2021.11.011.
[13] Lin ZH, Liu Y, Xue NJ a kol. Quercetin chrání před MPP+/MPTP-indukovanou dopaminergní neuronovou smrtí u Parkinsonovy choroby inhibicí ferroptózy.Oxid Med Cell Longev, 2022, 2022: 7769355. doi:10.1155/2022/7769355.
[14] Yue D, Zeng C, Okyere SK, a kol. Glycin nano-selen zabraňuje oxidačnímu stresu mozku a neurobehaviorálním abnormalitám způsobeným MPTP u potkanů., 2021, 64: 126680. doi:10.1016/j.jtemb.2020.126680.
[15] Yordanov Y, Stefanova D, Kondeva-Burdina M, et al. Zdroje oxidačního stresu u Parkinsonovy choroby: cesty a terapeutické důsledky.Antioxidanty, 2026, 15(2): 187. doi:10.3390/antiox15020187.
[16] Lu R, Zhou X, Zhang L a kol. Deficit Nrf2 zhoršuje Parkinsonovu chorobu tím, že zhoršuje aktivaci zánětu NLRP3 v myších modelech indukovaných MPTP a buňkách BV2 indukovaných LPS.J Inflamm Res, 2024, 17: 6277–6295. doi:10.2147/jir.s478683.
[17] Delobel V, Grenier C, Boulestreau R, et al. Endoteliální TRIM47 reguluje integritu hematoencefalické bariéry a kognici prostřednictvím signální dráhy KEAP1/NRF2 u myší.Commun Biol, 2026, 9: 399. doi:10.1038/s42003-026-09628-5.
[18] Wang L, Wu LE, Jia J X. Farmakologické účinky Roucongrong (Cistanches herba) a jeho výzkumný pokrok v oblasti onemocnění centrálního nervového systému.Chin Arch Tradit Chin Med, 2024, 42(3): 50–54. doi:10.13193/j.issn.1673-7717.2024.03.008.

 

Vzorový nákup / informace o továrně (dodavatel extraktu Cistanche)

Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd. (WECISTANCHE)je popisován jako významný výrobce/dodavatel zaměřený na industrializaci bylin Cistanche a produkty extraktu Cistanche, založený v roce 2003 a se sídlem v okrese Luopu, Xinjiang, Čína. Profil uvádí, že má integrovaný průmyslový řetězec Cistanche zahrnující šlechtění semen, pěstitelské základny, kapacitu pro sběr a skladování čerstvého materiálu a výrobní zařízení GMP. Obsah „O nás“ uvádí certifikace jako China SC, HACCP, organické certifikace (včetně NOP) a uvádí několik patentů souvisejících s Cistanche (např. technologie membránové separace).

 

Kontakt (z poskytnutého obsahu O nás):

E-mail: wallence.suen@wecistanche.com

Adresa: č. 1, patro 26, jednotka 1, budova 6, ulice Sheng'an č. 133, High-tech District, Chengdu, Čína (Sichuan) Pilotní zóna volného obchodu.

Source: "About Us - WECISTANCHE" (https://www.xjcistanche.com/about-us)

 

Pokud chcete, mohu také:

převést to na astyl Word připravený pro deník

vygenerovat agrafický abstraktní text bohatý na klíčová slova(pro indexování/SEO na webu laboratoře), popř

vyleštit angličáky donativní vědecký stylpři zachování původního významu.