Receptor aktivovaný proteázou 1 přispívá k selhání mikrocirkulace a poškození tubulárních kanálků u ischemicko-reperfuzního poškození ledvin u myší

Yu Guan,¹Daisuke Nakano,²Lei Li,³Haofeng Zheng,³Akira Nishiyama,²Ty Tiane,¹a Lei Zhang¹

zmírnit skutečné selhání sbylina cistanche

1. Úvod

Theledvinase nemůže vyhnout ischemicko-reperfuznímu (IR) poškození během parciální nefrektomie aledvinatransplantace [1], o které je známo, že vede k zadržování zplodin metabolismu a vede k akutníledvinazranění (AKI) aAKI-chronickýledvinaonemocnění (AKI-CKD) [2]. Dosud není pro AKI a AKI-CKD klinicky dostupná žádná specifická medikamentózní terapie [3]. U AKI se vyskytuje několik běžných patologických změn, jako je selhání mikrocirkulace [4], včetně kongesce a krvácení a akutní tubulární nekrózy [5]. Studie se proto zaměřily na zacílení na tyto patologické změny jako na potenciální terapeutické kandidáty. Již dříve jsme prokázali, že udržování peritubulárních kapilár poledvinovéPoranění IR snížilo kapilární kongesci a zlepšilo přechod AKI na CKD [6]. Akutní tubulární nekróza může být obtížně léčitelná; regenerace tubulů proliferací tubulárních buněk tedy může být důležitým přístupem k prevenci další ztráty funkce ledvin [7].

Receptor aktivovaný proteázou-1 (PAR-1) patří do rodiny receptorů aktivovaných proteázou (PAR) a je známo, že je stimulován trombinem k indukci koagulace krevních destiček. Nedávno jsme ukázali, že PAR-1 přispěla k rozvoji akutně indukovaného glomerulárního poškození [8]. Kromě toho se uvádí, že trombin/PAR-1 hraje roli v proliferaci a apoptóze epiteliálních buněk. Na základě těchto charakteristik jsme předpokládali, že PAR-1 zrychluje závažnost AKI regulací buď koagulace peritubulární kapilární krve, nebo tubulární regenerace. V této studii jsme zkoumali roli PAR-1 pomocí Q-94, PAR-1-selektivního negativního alosterického modulátoru, v myšiledvinovéModel IR poškození a trombinem stimulované kultivované lidské tubulární buňky.

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

2. Materiály a metody

2.1. Model IR myši pro akutní ledviny.

Všechny pokusy na zvířatech byly provedeny v souladu s experimentálními směrnicemi Institutional Animal Care and Use Committee z Capital Medical University. TheledvinaIR myší model byl vytvořen, jak bylo popsáno dříve [8]. Stručně, 8-týdenní samci myší C57/BL6 byli anestetizováni injekcí pentobarbitalu sodného (50 mg/kg; ip) a náhodně rozděleni do následujících skupin: simulace, I/R plus vehikulum a I/R (vehikulum: fyziologický roztok 10 mg/kg iv) plus Q94 (antagonista PAR-1 v dávce 10 mg/kg iv) skupiny (n=7–8 v každé skupině). Pro protokol poškození ledvin teplým IR byly myši podrobeny uninefrektomii, aby se vyhodnotilo poškození funkce ledvin; po jednom týdnu byl ledvinový pedikl sevřen nepoškozenými cévními svorkami na 30 min. Po reperfuzi po dobu 48 hodin byly myši usmrceny; vzorky jejich ledvinové tkáně byly odebrány a fixovány ve 4% roztoku paraformaldehydu pro přípravu parafinových bloků. Plazma byla získána pro měření dusíku močoviny v krvi (BUN) a kreatininu.

2.2. Materiály.

Q94 byl zakoupen od Tocris Bioscience (Bristol, UK). Jiné chemikálie byly získány od Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA), pokud není uvedeno jinak.

2.3. Test na kreatinin a BUN.

Pro měření kreatininu byly použity komerční testovací soupravy (Creatinin Assay Kit ab65340; Abcam, Cambridge, UK). Testovací soupravy BUN byly zakoupeny od ABSBio™ (sada UREA NITROGEN Kit, CNHAO BIO, Peking, Čína).

2.4. Histologie.

Před zalitím do parafínu byla ledvinová tkáň fixována 4% paraformaldehydem. Parafínové bloky ledvin byly nařezány na 2 μm řezy a upevněny na sklíčka přes noc při 25 °C. Po deparafinizaci byly řezy obarveny hematoxylinem a eosinem (H&E). Snímky byly získány pomocí mikroskopu (BX-51/DP-72; Olympus, Tokio, Japonsko). Jak již bylo popsáno [9], poškození renálních tubulů bylo diagnostikováno na základě několika histopatologických změn, jako je tubulární dilatace, kongesce/hemoragie, ztráta kartáčkového lemu, tvorba tubulárního odlitku a buněčná lýza s odloučenými troskami v tubulárním lumen. Tubulární poškození bylo hodnoceno podle procenta poškozených tubulů: 0, žádné poškození; 1,<25%; 2,="" 25–50%;="" 3,="" 51–75%;="" and="" 4,="">75 procent. Bodování bylo prováděno naslepo.

2.5. Imunofluorescence a imunohistochemie.

Řezy byly připraveny tak, jak je popsáno pro histologický (H&E) test a poté inkubovány s 0,3% peroxidem vodíku po dobu 30 minut, aby se zablokovaly endogenní peroxidázy po deparafinizaci xylenem. Pro získání antigenu byly řezy inkubovány s proteinázou K (DAKO Cytomation, Glostrup, Dánsko) po dobu 10 minut. Po zablokování 10% kozím sérem byly řezy inkubovány s primárními protilátkami přes noc při 4 stupních C (protilátka anti-Kim 1, ab47635, Abcam; protilátka anti Ki67, ab15580, Abcam; protilátka anti-PAR-1, ab32611 , Abcam). Po inkubaci s primární protilátkou byly řezy inkubovány se sekundární protilátkou při 25 °C po dobu 1 hodiny. Substrát DAB (DAKO) byl použit k vizualizaci výsledků imunohistochemického (IHC) barvení. Fluorescenční signály byly detekovány pomocí sekundární protilátky značené Alexa Fluor 594-. Snímky byly zachyceny pomocí fluorescenčního mikroskopu FL (BX51; Olympus) s vhodným filtrem. K analýze pozitivních oblastí byl použit software ImageJ (NIH, Bethesda, MD, USA).

2.6. PCR v reálném čase.

Pro hodnocení regulace exprese mRNA za těchto podmínek byla mRNA izolována z ledvinové tkáně. K detekci hladin 18S a PAR byl použit systém PCR (7300 Fast Real-Time; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) a souprava Light Cycler Fast Start DNA Master SYBR Green I (Applied Biosystems) -1 mRNA. Sekvence primerů byly následující: 18S —5'-GTAACCCGTTGAACCCCATT-3′, 5′-CCATCCAATCG GTAGTAGCG-3′; PAR-1—5′-GTTGATCGTTTCCACG GTCT-3′, 5′-GCTGCCTCTGTACCAGGACT-3′. Relativní hladiny mRNA byly stanoveny metodou 2−ΔACq. Hodnota ACq byla vypočtena pomocí dat z kontrolní skupiny.

2.7. Chirurgický postup a nastavení multifotonového zobrazování in vivo.

Myši byly anestetizovány 2% isofluranem (Mylan, Osaka, Japonsko). Po tracheotomii byla do jugulární žíly zavedena kanyla pro injekci fluorescenčního barviva a infuzi udržovací tekutiny, která sestávala z 1,5 μl/min 2% albuminu ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku. Levá ledvina každé myši byla vyříznuta malým řezem do boku a připojena ke krycímu sklíčku. Stolek mikroskopu a zvířata byly během všech experimentálních postupů zahřívány pomocí vyhřívací podložky. Intravitální multifotonová mikroskopie byla provedena pomocí multifotonového konfokálního fluorescenčního zobrazovacího systému Olympus FV1000MPE poháněného laserem Chameleon Ultra-II MP při 860 nm (Coherent, Inc., Santa Clara, CA, USA). Objektiv mikroskopu byl 25x vodní imerzní čočka s 1,05 numerickou aperturou. Nastavení zobrazování pro mikroskop (zisk a ofset pro všechny tři kanály; modrý, zelený a červený) bylo v průběhu experimentu pevně dané. Po 30minutové rekonvalescenci byl intravenózně injikován rhodamin B- 70kD dextran a snímky 3-D z-stack byly pořízeny v hloubkách 5–50 μm (od sebe 2 μm) od povrchu ledvin.

2.8. Buněčná kultura.

Buňky lidské ledviny 2 (HK2) byly získány z Cell Bank of Academy Sciences (Shanghai, Čína) a kultivovány, jak bylo popsáno dříve [10]. Buňky byly kultivovány v Dulbeccově modifikovaném Eagle médiu doplněném 10 procenty fetálního bovinního séra a 1 procentem penicilin-streptomycinu ve zvlhčené atmosféře 95 procent vzduchu a 5 procent CO2 při 37 stupních.

2.9. WST-1 testy k vyhodnocení buněčné proliferace.

Buňky HK2 byly nasazeny do 6-jamkových destiček v hustotě 1x104 buněk/jamka. Po stimulaci buněk HK2 trombinem byly provedeny testy WST- 1 podle protokolu výrobce (katalog #C0035; Beyotime, Shanghai, Čína) pro stanovení proliferační schopnosti buněk. Po 2 hodinách inkubace se 100 μl činidla WST-1 v každé jamce byla měřena absorbance vzorků pomocí čtečky mikrodestiček při vlnové délce 450nm.

2.10. Caspase-3 test.

Aktivita kaspázy{0}} byla měřena pomocí komerčně dostupné soupravy pro aktivitu kaspázy{1}} (katalogové číslo C1116; Beyotime, Shanghai, Čína) [11]. Po inkubaci s činidlem soupravy pro aktivitu kaspázy{4}} byla detekována absorbance vzorků pomocí čtečky mikrodestiček (Spectra-Max M2, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) při 405 nm podle pokynů výrobce.

2.11. Data a statistická analýza.

K porovnání více skupin byla použita jednosměrná analýza rozptylu, po které následoval Tukeyův test vícenásobného srovnání. Pro srovnání dvou jednotlivých skupin jsme použili Studentův t-test. p < 0:05="" bylo="" považováno="" za="" statisticky="" významné="">

Cistanche tubulosazabraňuje onemocnění ledvin

3. Výsledky

3.1. PAR-1 Exprese v IR ledvině.

Nejprve jsme potvrdili expresi PAR-1 a účinky IR na úroveň jeho exprese vledvina. Pozorovali jsme téměř 2-násobné zvýšení úrovně exprese PAR-1 mRNA ve srovnání s úrovní u myší s předstíranou operací po 48 hodinách (obrázek 1(a)). Také jsme měřili expresi PAR-1 imunofluorescencí 48 hodin po IR. PAR-1 byl exprimován v membráně kartáčkového lemu tubulárních buněk. Úroveň fluorescence PAR-1 FL byla upregulována ve srovnání s myšmi ve simulované skupině (obrázky 1(b) a 1(c)). Tato data naznačují, že jak lokalizace PAR-1 v tubulárních buňkách, tak úroveň jeho exprese byly po IR v ledvinách upregulovány.

3.2. Renální funkce a histopatologické změny. Posoudili jsmeledvinafunkce detekcí hladin BUN a kreatininu v plazmě. I/R vyvolalo zvýšení hladin BUN a kreatininu ve srovnání s myšmi podrobenými falešné operaci. Navíc IR-indukované zvýšení hladiny BUN bylo významně sníženo u myší léčených Q94- (obrázek 2(a)). Hladina kreatininu v séru byla inhibována u myší léčených Q94- ve srovnání s myšmi podrobenými pouze IR operaci (obrázek 2(b)). Tyto údaje naznačují, že podávání Q94 může chránitledvinafunkce po poranění IR.

Hodnotili jsme také renální histopatologické změny provedením H&E barvení. Renální IR významně zvýšilo tvorbu odlitků, tubulární dilataci a ztrátu kartáčkového lemu a kongesci/krvácení u myší ošetřených vehikulem ve srovnání s falešnými myšmi. Léčba Q94 výrazně potlačila tyto změny vyvolané IR (obrázky 2(c) a 3(a)). Analýza výsledků barvení H&E mezi skupinami odhalila skóre kongesce/krvácení a skóre tubulárního poškození pro každou skupinu. Myši skupiny Q94 vykazovaly mnohem nižší skóre (obrázky 2(e) a 3(c)). Také jsme obarvili Kim-1 jako aledvinamarker poranění renálních tubulárních buněk pomocí IHC [12]. Kim-1-pozitivní oblasti byly zvýšeny v oblasti renálních tubulů u myší s IR poškozením, které byly významně potlačeny pomocí Q94 (obrázky 2(d) a 2(f)). Tyto údaje naznačují, že Q94 může potlačitledvinatubulární poškození způsobené IR poraněním.

3.3. Abnormální průtok krvinek při zobrazování in vivo.

PAR-1 a jeho ligand trombin hrají důležitou roli v kongesci; Q94 výrazně zlepšil přetížení. Proto jsme provedli intravitální zobrazení multifotonovou mikroskopií. To umožňuje pozorování krevních buněk v peritubulární kapiláre v reálném čase u živých myší (obrázek 3(c)). Plazma byla vizualizována 70 kDa dextranem konjugovaným s rhodaminem B (obrázek 3(d)). Krvinky, které negenerují fluorescenci FL v reakci na laser, byly použity k excitaci rhodaminu B a znázorněny jako stíny. Jak je znázorněno na obrázku 3(e), IR ledvin narušilo pravidelné sledování krevních buněk a vyvolalo selhání mikrocirkulace. Q94 zlepšil peritubulární kapilární krvinku.

3.4. Proliferace tubulárních buněk po poranění IR.

Bylo popsáno, že proliferativní regenerace tubulárních buněk hraje důležitou roli při obnově tubulární struktury a renální funkce po IR poškození. Je známo, že PAR-1 modifikuje proliferaci epiteliálních buněk, když je aktivován trombinem. Zjistili jsme tak proliferaci renálních tubulárních buněk v Ki-67 IHC testu. 48 hodin po IR se zvýšil počet proliferujících Ki-67-pozitivních tubulárních buněk. Q94 dále zvýšil zvýšený počet Ki-67-pozitivních tubulárních buněk po IR ve srovnání s pouze u myší léčených IR (obrázky 4(a) a 4(b)). Kromě toho jsme zkontrolovali, zda byla schopnost buněčné proliferace ovlivněna inhibicí PAR-1 in vitro experimentů s použitím HK2 buněk inkubovaných s trombinem, PAR-1 agonistou. Proliferativní aktivita buněk HK2 byla měřena testem WST-1. Jak je znázorněno na obrázku 4(c), proliferace buněk HK2 byla po ošetření trombinem dramaticky potlačena. Tato trombinem indukovaná inhibice však byla Q94 téměř zrušena. Tato data naznačují, že PAR-1 negativně regulovala proliferaci renálních tubulárních buněk, která byla téměř zrušena antagonistou Q94 PAR-1.

k úlevě od chronického onemocnění ledvincistanche

3.5. Apoptóza renálních tubulárních buněk.

Dále jsme zkoumali apoptózu renálních buněk pomocí kaspázy-3, která je nejdůležitější popravčí kaspázou a je během apoptózy aktivována vnitřními i vnějšími cestami [13]. Pomocí trombinem inkubovaných kultivovaných buněk HK2 jsme zjistili, že trombin zvyšuje aktivitu kaspázy-3. Navíc podávání Q94 potlačilo aktivitu kaspázy-3 (obrázek 4(d)). Tato data naznačují, že trombinem indukovaná apoptóza buněk HK2 byla inhibována antagonistou Q94 PAR-1.

4. Diskuze

ledvinyPoranění IR je charakterizováno městnáním/hemoragií, akutní tubulární nekrózou, zánětem a ukládáním sádry [5]. Zde jsme ukázali, že inhibice PAR-1 zlepšila jak změny související s krevním partnerem, tak změny tubulointersticiální. Je dobře známo, že PAR-1 a jeho ligand, trombin, hrají důležitou roli v koagulaci krevních destiček a interference tohoto systému, jako je trombomodulin [14, 15], může zabránit AKI. Ukázali jsme, že inhibice PAR- 1 potlačila kongesci a zlepšila průtok krve v peritubulárních kapilárách u myší s IR poškozením ledvin, což naznačuje, že systém PAR-1 zhoršoval mikrocirkulaci. Kromě toho byla hladina exprese PAR-1 zvýšena v tubulech po poškození ledvin IR, což ukazuje, že systém závislý na PAR-1- v tubulech také zveličuje poškození ledvin IR. Je dobře známo, že regenerace tubulárních buněk je důležitým procesem při obnově tubulární struktury a při obnově funkce ledvin po poranění IR [16, 17]. V závislosti na stupni poranění není tato opravná kapacita neomezená [18]. Proto jsou naléhavě potřebné léčebné možnosti ke zmírnění poškození tubulárních buněk nebo urychlení jejich proliferace. Naše studie in vitro ukázala, že PAR- 1/trombin negativně reguluje proliferaci tubulárních buněk, která byla naopak urychlena po inhibici PAR-1. Dále bylo prokázáno, že IR poškození u myší zvyšuje tubulární proliferaci po 48 hodinách s dalším zvýšením po inhibici PAR-1. Zjistili jsme, že PAR-1 byla zvýšena v membráně kartáčkového lemu proximálních tubulů. Jak bylo publikováno, že funkce glomerulární filtrační bariéry je snížena během renálního IR poškození [19], filtrovaný trombin z glomerulů může aktivovat zvýšenou PAR- 1, a tím narušit tubulární regeneraci.

Naše výsledky naznačují, že systém PAR-1/trombin potlačil proliferaci tubulárních buněk a zvýšil apoptózu. Jiná studie však ukázala opačné účinky PAR-1 při aktivaci proteinem C [20, 21]. Tato zjevně konfliktní role PAR-1 může záviset na způsobu její aktivace. V naší studii bylo možné vysvětlení jeho přisuzované role to, že PAR-1 byl aktivován filtrovaným trombinem. Velikost proteinu C je přes 60 kDa, což je podobné jako u albuminu [22, 23] a mnohem větší než u trombinu (36 kDa). Navíc jeho plazmatická koncentrace (<100 nm)="" is="" less="" than="" 10%="" of="" thrombin="" (="">1 μM), což naznačuje, že protein C podléhá menší filtraci a produkuje slabší signál ve srovnání s trombinem.

Trombotické epizody jsou rizikovým faktorem pro pacienty s terminálním selháním ledvin [24]. Studie ukázala, že nedostatek PAR-1 chrání před diabetickým CKD [25]. V naší studii jsme pozorovali účinek inhibice PAR-1 na funkci ledvin v časné fázi po IR. V dalších studiích máme v úmyslu vyvinout chronickouledvinaModel onemocnění vyvolaného IR [2] k vyhodnocení potenciálního spojení mezi PAR-1 a CKD.

Závěrem jsme prokázali, že PAR-1 zhoršila selhání mikrocirkulace a negativně regulovala proliferaci tubulárních buněk. Naproti tomu inhibice PAR-1 přispěla ke zlepšení mikrocirkulace a proliferace tubulárních buněk a po IR, slouží jako významný mechanismus obnovy ledvin a měla by být považována za novou strategii v léčbě AKI.

Cistanche tubulosa zabraňuje onemocnění ledvin, kliknutím sem získáte vzorek

1Urologická klinika, Nemocnice přátelství v Pekingu, Capital Medical University, Peking, Čína

2Katedra farmakologie, Univerzita Kagawa, Kagawa, Japonsko

3 Divize transplantací ledvin, Chirurgická klinika, Třetí přidružená nemocnice Sun Yat-sen University,

Guangzhou, Čína

Korespondence by měla být adresována Ye Tian; kidney@ccmu.edu.cn a Lei Zhang; leizhangkidney@gmail.com Přijato 1. ledna 2021; Revidováno 25. ledna 2021; Přijato 8. února 2021; Publikováno 23. února 2021

Akademický redaktor: Junyan Liu

Copyright © 2021 Yu Guan et al. Toto je článek s otevřeným přístupem distribuovaný podCreative Commons Attribution License, která umožňuje neomezené použití, distribuci a reprodukci na jakémkoli médiu za předpokladu, že je původní dílo řádně citováno.

Poškození ledvin vyvolané ischemií-reperfuzí (IR-) je obtížné se vyhnout během transplantace ledvin a roboticky asistované parciální nefrektomie. Renální IR poškození je charakterizováno tubulárním poškozením, selháním mikrocirkulace a zánětem, které koordinují poškození ledvin; pro tyto stavy však není k dispozici žádná specifická léčba. Receptor aktivovaný proteázou-1 (PAR-1) a jeho ligand, trombin, se účastní koagulace a bylo prokázáno, že souvisí s poškozením epiteliálních buněk. Zde jsme předpokládali, že PAR-1 zveličuje poškození tubulárních buněk indukované IR ledvin a selhání mikrocirkulace a že farmakologická inhibice PAR-1 pomocí Q94 by mohla těmto zraněním zabránit. Renální teplé IR zvýšilo expresi PAR-1 v renálních tubulech. Q94 zmírnil změny vyvolané IR ledvin a histopatologické poškození. Selhání mikrocirkulace bylo analyzováno kongescí v histopatologii a průtok krevních buněk vyšetřený intravitální multifotonovou mikroskopií byl potlačen léčbou Q94. Q94 také dramaticky zvýšil proliferaci tubulárních buněk navzdory nižšímu poškození ledvin. Trombin potlačil buněčnou proliferaci a vyvolal apoptózu v tubulech; těmto účinkům bylo zabráněno léčbou Q94. Celkově vzato, PAR-1 byla spojena s poškozením ledvin IR. Inhibice poranění PAR-1 zlepšila možná zlepšením renální mikrocirkulace a přežití/proliferace tubulárních buněk.

Data Availability

Autoři potvrzují, že data podporující zjištění této studie jsou k dispozici v článku.

Cnaflicts of Interest

Všichni autoři prohlásili, že nemají žádné konkurenční zájmy.

Authors' Cnatributinas

Yu Guan a Daisuke Nakano napsali rukopis a provedli pokusy na zvířatech. Lei Li provedl in vitro experimenty. Haofeng Zheng provedl statistickou analýzu. Akira Nishiyama revidoval rukopis. Tuto studii navrhli Lei Zhang a Ye Tian.

Acknowledgments

Tato studie byla podpořena National Natural Science Foundation of China (č. 82000712) a China Postdoctoral Science Foundation (č. 2020M670385).

Reference

[1] MN Simmons, MJ Schreiber a IS Gill, "Chirurgická renální ischemie: současný přehled," The Journal of Urology, sv. 180, č.p. 1, s. 19–30, 2008.

[2] Y. Guan, D. Nakano, Y. Zhang, L. Li, Y. Tian a A. Nishiyama, "Myší model renální fibrózy k překonání technické variability v ischemickém/reperfuzním poškození mezi operátory," Vědecký Zprávy, sv. 9, č. 1, str. 10435, 2019. 7 BioMed Research International

[3] M. Joannidis a PGH Metnitz, "Epidemiologie a přirozená historie akutního selhání ledvin na JIP," Critical Care Clinics, sv. 21, č. 2, s. 239–249, 2005.

[4] D. Nakano, K. Doi, H. Kitamura a kol., "Snížení rychlosti tubulárního průtoku jako mechanismus oligurie v časné fázi endotoxémie odhalené intravitálním zobrazením," Journal of the Ameri can Society of Nephrology , sv. 26, č. 12, s. 3035–3044, 2015.

[5] D. Nakano a A. Nishiyama, "Multifotonové zobrazování patofyziologie ledvin", Journal of Pharmacological Sciences, sv. 132, č.p. 1, s. 1–5, 2016.

[6] Y. Zhang, D. Nakano, Y. Guan, et al., "Inhibitor sodno-glukózového kotransportéru 2 zeslabuje renální kapilární poškození a fibrózu cestou vaskulárního endoteliálního růstového faktoru závislou cestou po poškození ledvin u myší," ledviny International, sv. 94, č.p. 3, s. 524–535, 2018.

[7] S. Nishioka, D. Nakano, K. Kitada a kol., "Inhibitor cyklin-dependentní kinázy p21 je nezbytný pro příznivé účinky renální ischemické preconditioningu na renální ischemické/reperfuzní poškození u myší," Kidney International, sv. 85, č.p. 4, s. 871–879, 2014.

[8] Y. Guan, D. Nakano, Y. Zhang a kol., "Proteázou aktivovaný receptor-1 antagonista chrání před poškozením podocytů u myšího modelu nefropatie," Journal of Pharmacological Sciences, sv. 135, č.p. 2, s. 81–88, 2017.

[9] M. Jiang, Q. Wei, G. Dong, M. Komatsu, Y. Su a Z. Dong, "Autofagie v proximálních tubulech chrání před akutním poškozením ledvin," Kidney International, sv. 82, č.p. 12, s. 1271–1283, 2012.

[10] X. Hu, M. Su, J. Lin a kol., "Corin je downregulován při renálním ischemickém/reperfuzním poškození a je spojen s opožděnou funkcí štěpu po transplantaci ledviny," Disease Markers, sv. 2019, ID článku 9429323, 8 stran, 2019.

[11] P. Wang, H. Wang, Q. Huang a kol., "Exosomy z M1- polarizovaných makrofágů zvyšují protinádorovou aktivitu paclitaxelu aktivací zánětu zprostředkovaného makrofágy," Theranostics., sv. 9, č. 6, s. 1714–1727, 2019.

[12] L. Yang, CR Brooks, S. Xiao a kol., „KIM-1-zprostředkovaná fagocytóza snižuje akutní poškození ledvin“, The Journal of Clinical Investigation, sv. 125, č.p. 4, s. 1620–1636, 2015.

[13] L. Xu, X. Li, F. Zhang, L. Wu, Z. Dong a D. Zhang, "EGFR řídí progresi AKI k CKD prostřednictvím nadměrné exprese HIPK2," Theranostics., sv. 9, č. 9, s. 2712–2726, 2019.

[14] T. Hifumi, D. Nakano, J. Chiba a kol., „Kombinovaná terapie antitoxinem plynové gangrény a rekombinantním lidským rozpustným trombomodulinem pro sepsi _Clostridium perfringens_ na modelu potkanů, "Toxicon, sv. 141, s. 112–117, 2018.

[15] N. Hayase, K. Doi, T. Hiruma a kol., "Rekombinantní trombomodulin zabraňuje akutnímu poškození plic vyvolanému renálním ischemicko-reperfuzním poškozením," Scientific Reports, sv. 10, č. 1, str. 289, 2020.

[16] E. Lazzeri, ML Angelotti, A. Paired et al., "Endocycle-related tubular cell hypertrophy and progenitor proliferation obnovit renální funkce po akutním poškození ledvin," Nature Communications, sv. 9, č. 1, str. 1344, 2018.

[17] K. Takaori, J. Nakamura, S. Yamamoto a kol., "Závažnost a frekvence poranění proximálního tubulu určuje renální prognózu," Journal of the American Society of Nephrology: JASN, sv. 27, č. 8, s. 2393–2406, 2016.

[18] BD Humphreys, MT Valerius, A. Kobayashi a kol., "Vnitřní epiteliální buňky opravují ledvinu po poranění," Cell Stem Cell, sv. 2, č. 3, s. 284–291, 2008.

[19] R. Wakasaki, K. Matsushita, K. Golgotiu a kol., "Glomerular filtrate proteins in akutní kardiorenální syndrom," JCI Insight, sv. 4, č. 4, 2019.

[20] M. Riewald, RJ Petrovan, A. Donner, BM Mueller a W. Ruf, "Activation of endothelial cell protease-activated receptor 1 by the protein C pathway," Science, sv. 296, č.p. 5574, s. 1880–1882, 2002.

[21] MJ Ludeman, H. Kataoka, Y. Srinivasan, NL Esmon, CT Esmon a SR Coughlin, „Štěpení a signalizace PAR1 v reakci na aktivovaný protein C a trombin∗“, The Journal of Biological Chemistry, sv. 280, č.p. 13, s. 13122–13128,

2005.

[22] JH Griffin, BV Zlokovic a LO Mosnier, "Aktivovaný protein C: zaujatý pro translaci," Blood, sv. 125, č.p. 19, s. 2898–2907, 2015.

[23] R. Essalmani, D. Susan-Resiga, J. Guillemot a kol., "Trombinová aktivace proteinu C vyžaduje předchozí zpracování jaterní proproteinovou konvertázou," The Journal of Biological Chemistry, sv. 292, č.p. 25, s. 10564–10573, 2017.

[24] S. Van Laecke a W. Van Biesen, "Těžká hypertenze s renální trombotickou mikroangiopatií: co se stalo obvyklému podezřelému?", Kidney International, sv. 91, č.p. 6, s. 1271–1274, 2017.

[25] M. Waasdorp, J. Duitman, S. Florquin a CA Spek, "Proteázou aktivovaný receptor-1 nedostatek chrání před streptozotocinem indukovanou diabetickou nefropatií u myší," Scientific Reports, sv. 6, č. 1, str. 33030, 2016.