Již existující imunita T-buněk proti SARS-CoV-2 v neexponovaných zdravých kontrolách v Ekvádoru, jak bylo zjištěno testem COVID-19 interferonu-gama

ABSTRAKTNÍ

Pozadí: Studie imunitních reakcí T-buněk proti SARS-CoV-2 jsou důležité pro pochopení imunitního stavu jednotlivců nebo populací. Zde používáme jednoduchý, levný a rychlý test stimulace plné krve – interferon-gama Release Assay (IGRA) – ke studiu imunity T-buněk vůči SARS-CoV-2 u pacientů v rekonvalescenci s COVID-19 a neexponované zdravé kontakty z Quita v Ekvádoru. Metody: Produkce interferonu-gama (INF-g) byla měřena v heparinizované krvi rekonvalescentních a neexponovaných subjektů po 24h stimulaci SARS-CoV-2 Spike S1 proteinem, proteinem Receptor Binding Domain (RBD) popř. nukleokapsidový (NP) protein, v daném pořadí. Přítomnost IgG-RBD proteinových protilátek v obou studijních skupinách byla stanovena pomocí "interní" ELISA. Výsledky: Jak bylo měřeno pomocí produkce INF-g, 80 procent pacientů v rekonvalescenci COVID{20}}, všichni séropozitivní IgG-RBD, mělo silnou odpověď T-buněk.

Neočekávaně však 44 procent neexponovaných zdravých kontrol, všechny IgG-RBD séronegativní, mělo silnou virově specifickou odpověď T-buněk na COVID-19 IGRA, pravděpodobně kvůli předchozí expozici běžným koronavirům způsobujícím nachlazení nebo jiným virové nebo mikrobiální antigeny. Závěr a diskuse: Vysoké procento neexponovaných zdravých subjektů s již existující imunitou naznačuje, že část ekvádorské populace má pravděpodobně T-buňky reaktivní na SARS-CoV-2. Vzhledem k tomu, že technika IGRA je jednoduchá a lze ji snadno rozšířit pro vyšetřování, kde je potřeba vysoký počet pacientů, může tato COVID{10}} IGRA sloužit k určení, zda odpověď pouze T-buněk představuje ochrannou imunitu vůči SARS-CoV -2 infekce v populační studii. © 2021 Autoři. Vydal Elsevier Ltd jménem Mezinárodní společnosti pro infekční nemoci.

Zároveň, když je naše imunita nízká, existuje mnoho způsobů, jak imunitu zlepšit, příjem potravin, které mohou posílit imunitu, jako jsou cistanche, polysacharidy, bílkoviny, aminokyseliny a další látky obsažené v cistanche mohou často regulovatiimunitní systém.

Click cistanche tubulosa extraktový práškový produkt

Úvod

Imunitní odpověď na infekci SARS-CoV-2 zahrnuje nejen produkci protilátek, ale infekce také spouští u pacientů odpověď T-buněk (Lipsitch et al., 2020, Ni et al., 2020). Obecně se stanovení přítomnosti a velikosti specifické odpovědi paměťových T-buněk na tuto infekci koronavirem provádí pomocí testu ELISPOT stanovením počtu lymfocytů, které produkují IFN-g po stimulaci antigeny nebo peptidy specifickými pro onemocnění (Ni a kol., 2020, Pai a kol., 2014, Abate a kol., 2013, Braun a kol., 2020, Grifono a kol., 2020, LeBert a kol., 2020, Sekine a kol., 2020).

Pro tuto techniku ​​se mononukleární buňky periferní krve (PBMC) izolují z čerstvé heparinizované krve centrifugací s gradientem hustoty; sekrece cytokinů jednotlivými T-buňkami je kvantifikována mikroskopem nebo speciálním přístrojem – čtečkou destiček ELISPOT. Stanovení ELISPOT je technika „pouze pro výzkumné laboratoře“, která je vysoce pracná, technicky náročná, relativně drahá a nelze ji snadno použít v klinické laboratoři nebo použít v populačních studiích. Vzhledem k nákladům, infrastruktuře a laboratorním požadavkům potřebným k provedení testu může být jeho použití v prostředí s omezenými zdroji, jako je Ekvádor, minimální.

Buněčné imunitní reakce mohou být také stanoveny přímočařejším testem: testem uvolňování interferonu-gama (IGRA). Tento test, krevní test in vitro, kvantifikuje cytokiny vylučované T-buňkami (tj. gama interferon (IFN-g); lze však kvantifikovat i jiné cytokiny jako TNF nebo IL-2) po stimulaci celé krve (nejen izolované lymfocyty) se specifickými antigeny (Pai et al., 2014, Abate et al., 2013). Vylučovaný cytokin IFN-g se měří pomocí testu ELISA, což je technika snadno dostupná ve většině laboratoří, a výsledky se odečítají pomocí čtečky destiček ELISA. IGRA našly uplatnění v klinické laboratoři a používají se ke stanovení latentní infekce Mycobacterium tuberculosis (MTB), stejně jako k měření cytomegalovirové (CMV) specifické buněčně zprostředkované imunity a predikci CMV infekce u příjemců transplantátu (Pai et al. , 2014, Abate et al., 2013). Tyto testy IGRA byly rozsáhle hodnoceny a ve srovnání s testem ELISPOT se ukázalo, že vykazují podobné schopnosti pro predikci infekce MTB nebo CMV. Kromě toho je k dispozici několik komerčních testů a testů označených FDA nebo CE k detekci imunity proti TBC nebo CMV, které jsou široce prováděny.

V této studii zkoumáme použití COVID-19 IGRA a hodnotíme velikost uvolňování IFN-g u rekonvalescentních pacientů s COVID-19 a zdravých kontrol COVID-19 naivních v reakci na konkrétní antigeny viru SARS-CoV-2: protein RBD; S1 část Spikeho proteinu; nebo nukleokapsidový (N) protein. Kromě toho určujeme přítomnost SARS-CoV-2 specifických IgG protilátek u těchto účastníků pomocí „interní“ ELISA (Amanat et al., 2020, Guevara et al., 2021). Ukazujeme, že významné procento neexponovaných dárců má T-buňky reaktivní na SARS-CoV{13}}, a o těchto výsledcích diskutujeme.

materiály a metody

Rekonvalescentní pacienti s COVID{0}}, zdravé kontroly a prostředí

Tato studie byla provedena v Quito v Ekvádoru v září 2020. Pro předurčení velikosti vzorku nebyly použity žádné statistické metody. Tabulka 1 ukazuje charakteristiky 32 pacientů v této studii: třináct pacientů v rekonvalescenci COVID-19, všichni s nezávažnými příznaky/příznaky COVID{5}} a pozitivní diagnózou RT-PCR v červnu 2020; a 17 neexponovaných zdravých kontrol. Tyto zdravé kontroly byly během pandemie extrémně obezřetné, vyhýbaly se kontaktu s jinými lidmi a samy nehlásily žádné typické známky a příznaky COVID{10}} po dobu trvání pandemie, jako je horečka, přetrvávající kašel, nebo ztráta čichu nebo chuti. Do této studie byli zahrnuti také dva asymptomatičtí přenašeči SARS-CoV{12}}. Tyto dva subjekty nikdy nevykazovaly žádné příznaky ani známky onemocnění COVID{13}}; technika RT-PCR na nich však byla provedena jako požadavek na pracovní povolení v červnu 2020 a vyústila v pozitivní diagnózy.

sérologie

Sérologie a IGRA pro všechny pacienty a kontroly byly provedeny během posledních dvou týdnů září 2020, tři měsíce po diagnóze RT-PCR u rekonvalescentních pacientů. Ke stanovení přítomnosti IgG protilátek specifických pro koronavirus v naší studijní skupině byla použita „interní“ ELISA IgG vázající doménu SARS-CoV -2 receptorů (RBD) (9, 10).

Test uvolňování gama interferonu (IGRA)

Pro IGRA byl odebrán vzorek heparinizované krve (4 ml) a rozdělen do alikvotů po 250 ml a stimulován 2 mg/ml proteinu RBD (izolační postup z reference 9) nebo 2 mg/ml komerčně dostupného nukleokapsidu. (N) protein nebo Spike (S1) protein (ViroGen, katalogová čísla: 00,221-V a 00,226-V, v tomto pořadí). Ke stanovení optimální koncentrace antigenů pro stimulaci v IGRA byla použita křivka závislosti odpovědi na dávce s krví od IGRA-pozitivních a IGRA-negativních pacientů. Při 2 ug/ml byla u neinfikovaných kontrol zjištěna maximální odpověď IFN-g v krvi od subjektů COVID{15}} bez stimulace. Pro každého účastníka byla zahrnuta nestimulovaná kontrola (NIL) a testovali jsme 250 ml krevní vzorek s mitogenním fytohemaglutininem (PHA), což je pozitivní kontrola pro posouzení rychlosti cytokinové odpovědi vzorku krve. Stimulace byla realizována v 96-jamkové destičce ELISA s plochým dnem při 37 °C po dobu 24 hodin. Plazma byla sklizena a produkce IFN-g byla stanovena pomocí testu Human IFN-g ELISA (MaxTM Standard Set Biolegend kat. č. 430,101).

Výsledek

RBD IgG ELISA ukázala, že všichni symptomatickí pacienti COVID{{0}} (pozitivní RT-PCR) byli tři měsíce po diagnóze RT-PCR pozitivní na IgG protilátky proti proteinu RBD. Dva asymptomatičtí RT-PCR pozitivní pacienti a všichni zdraví neexponovaní kontrolní pacienti byli séronegativní s tímto testem ELISA (viz tabulka 1). Výsledky stimulace plné krve v testu COVID-19 IGRA jsou uvedeny na obrázku 1. Silná indukce produkce IFN-g byla nalezena u 80 procent pacientů se symptomy COVID-19 s všechny tři antigeny, ale protein N a protein S byly nejúčinnějšími stimulátory odpovědi IFN-g (obrázek 1 A, B, C). Dva asymptomatičtí, ale RT-PCR pozitivní pacienti (pacienti 14 a 15), oba bez specifických protilátek SAR-CoV-2, také vykazovali silnou indukovatelnou imunitní odpověď T-buněk. 45 procent pacientů dosud neléčených COVID{19}} vykazovalo indukovatelnou T-buněčnou imunitu. Odpověď u těchto zdravých neexponovaných kontrol s odpovědí T-buněk se statisticky významně nelišila v rozsahu od rekonvalescentních pacientů s COVID{23}} na žádný ze stimulujících antigenů (hodnota p=0,271, 0,437, a 0,719 pro RBD, N a S1 proteiny, v daném pořadí).

Obrázek 1. Produkce IFN-g po stimulaci plné krve rekonvalescentních pacientů s COVID-19 a zdravých neexponovaných kontrol pomocí proteinu RBD, N nebo S1.

Výsledky stimulace pacientů v rekonvalescenci a kontrol pomocí proteinu RBD, N nebo S1 jsou uvedeny na obr. 1A, B a C. Na obr. 1D jsou odpovědi INF-g každého pacienta a na tři antigeny jsou seskupeny. Pacienti s potvrzenou infekcí COVID-19 jsou očíslováni 1–15, z toho pacienti 14 a 15 byli asymptomatičtí. Subjekty 16–33 jsou COVID{11}} naivní pacienti.

Po 24 hodinách stimulace byly koncentrace IFN-g v plazmě stanoveny pomocí komerčně dostupné soupravy na bázi imunosorbentního testu s imunoanalýzou navázanou na lidský IFN-g (Biolegend kat. č. 430,101). Velikost stimulace byla vyjádřena jako optická hustota při 450 nm (OD450) pro krev stimulovanou antigenem mínus OD450 pro krev bez stimulace antigenem. OD 1,0 odpovídalo přibližně 400 pg/ml IFN-g. Fytohemaglutinin (PHA) byl použit jako mitogen v konečné koncentraci 5 mg/ml v IGRA k posouzení kvality a schopnosti reakce krve. Všichni pacienti a kontroly vykazovali maximální produkci cytokinu tímto mitogenem se střední optickou hustotou (OD450) 2,54 (SD=0 0,13), což představuje přibližně 1000 pg/ml IFN-g. Nebyl žádný rozdíl v mediánu hladiny IFN-g v nestimulované krvi pacientů v rekonvalescenci a zdravých kontrol (OD450=0,38, SD=0,14 versus OD450=0,32. SD=0.16). Tyto výsledky nejsou zobrazeny. V každém grafu byla nakreslena vodorovná čára, která představuje mezní hodnotu pro stimulaci. Tato hodnota byla stanovena výpočtem průměru plus dvou směrodatných odchylek odpovědi devíti subjektů (pacientů 16, 18, 19, 22, 27–31) z kontrolní skupiny s nejnižší produkcí INF–g po stimulaci.

Diskuse a závěry

Pomocí snadno proveditelného testu plné krve, který hodnotí odpovědi T-buněk, jsme zjistili, že většina pacientů v rekonvalescenci a významná část zdravých neexponovaných jedinců měla specifickou a silnou odpověď T-buněk stanovenou produkcí INF-g po stimulaci. se specifickými antigeny SARS-CoV-2 (obrázek 1). Několik studií, všechny využívající test ELISPOT, uvedlo přítomnost odpovědi T-buněk u většiny nebo všech pacientů v rekonvalescenci COVID{9}} (Braun a kol., 2020, Grifono a kol., 2020, LeBert a kol. , 2020, Sekine a kol., 2020, Moderbacher a kol., 2020, Mateus a kol., 2020, Peng a kol., 2020).

Co se však týče reakce T-buněk u zdravých neexponovaných kontrol, byly hlášeny míry odezvy mezi 28 a 50 procenty (Doshi, 2020, de Vries, 2020, Lipsitch a kol., 2020, Sagar a kol., 2020) a několik studie neuvádějí žádnou odpověď T-buněk u pacientů s naivní kontrolou COVID-19 (de Vries, 2020, Moderbacher a kol., 2020, Schwarzkopf a kol., 2021). Většina těchto studií byla provedena pomocí testu ELISPOT, ale v Itálii a USA byla k detekci reakce T-buněk SARS-CoV-2 také použita IGRA (Petrone et al., 2020, Murugesan et al. ., 2020). V obou studiích byla u pacientů v rekonvalescenci zjištěna specifická odpověď T-buněk; nicméně IGRA nezjistila odpověď INF-g u zdravých neexponovaných subjektů.

Preexistující imunita T-buněk vůči SARS-CoV-2 u pacientů naivních COVID-19 byla přezkoumána v několika publikacích (Altmann a Boyton, 2020, Dosho et al., 2020, de Vries, 2020, Sette a Crotty, 2020). Důvod, proč může být u zdravého neexponovaného subjektu detekována specifická odpověď T-buněk COVID{9}}, zůstává nejasný a je předmětem spekulací. Většina studií ELISPOT s naivními subjekty COVID{11}} používala vzorky lidské krve získané před objevením viru SARS-CoV-2 v roce 2019, tedy před jakoukoli možností expozice. Z tohoto důvodu tyto studie ELISPOT dospěly k závěru, že odpověď T-buněk u neexponovaných zdravých jedinců pravděpodobně pochází z předchozího kontaktu s cirkulujícími koronaviry „běžného nachlazení“ (Grifoni et al., 2020, Matheus et al., 2020) nebo předchozí expozice chřipce. a/nebo CMV viry (Mahajan et al., 2020) nebo jiné virové nebo mikrobiální antigeny (Tan et al., 2020). V naší studii byla použita krev odebraná během pandemie dobrovolníkům, kteří sami uvedli nulový kontakt, byla séronegativní na COVID-19 antigen RBD a nikdy nevykazovali žádné známky ani příznaky COVID-19.

Nemůžeme proto vyloučit, že odpověď T-buněk u některých našich „naivních“ zdravých kontrol COVID-19 pochází z asymptomatických infekcí virem SARS-CoV-2. Pacienti 14 a 15 naší studie jsou toho příkladem. Tito jedinci byli klasifikováni jako pacienti s COVID-19 kvůli pozitivní RT-PCR; byly však asymptomatické a nevyvinula se u nich protilátková odpověď proti proteinu RBD, ale oba vykazovali silnou odpověď T-buněk.

Je možné, že po kolonizaci nosohltanu SARS-CoV-2 jim imunitní systém těchto dvou asymptomatických pacientů zanechal odpověď pouze na paměťové T-buňky a nebyly nalezeny žádné specifické protilátky proti SARS-CoV-2 indukovaný. Dalším vysvětlením je, že reakce T-buněk pochází z předchozí infekce podobné koroně a již existující imunitní reakce T-buněk chránila tyto dva pacienty před rozvojem invazivnějšího vzorce onemocnění. Preexistující zkříženě reaktivní T-buňky by mohly být významné při vysvětlení některých rozdílů v míře infekce nebo patologii (Le Bert et al., 2020, Sagar et al., 2020). Pokud jde o kohortu naivních kontrol, vyloučili jsme, že tato skupina obsahuje značný počet jedinců infikovaných SARSCoV-2 s nezjištěnou asymptomatickou infekcí, v podstatě proto, že všechny integrandy kontrolní skupiny jsou IgG séronegativní pro antigen RBD.

Dalším důvodem je, že prevalence infekce v Ekvádoru je relativně nízká. V době této studie, v září 2020, Ekvádor hlásil asi 200000 potvrzených případů COVID-19 (asi 1,1 procenta populace). Samozřejmě, skutečná prevalence infekce mohla být několikanásobně vyšší, ale i tak je nepravděpodobné, že se nakazilo 45 procent této kontrolní skupiny, a proto se díváme na reakci T-buněk specifickou pro SARS-CoV{ {9}} infekce.

Závěrem lze říci, že zjištění vysokého procenta neexponovaných zdravých subjektů s již existující imunitou v Quito v Ekvádoru vyvolává očekávání, že významná část naší populace bude mít pravděpodobně T-buňky reaktivní na SARS-CoV{2}}, protože předchozí expozice chřipce, CMV virům nebo běžným koronavirům způsobujícím nachlazení. Budoucí výzkumy by se měly zaměřit na určení, zda již existující imunitní odpověď je ochranná a/nebo může překonat závažnější onemocnění COVID-19 nebo přispívá k rychlejšímu uzdravení.

Význam a omezení této studie

Naše studie ukázala, že COVID-19 IGRA je užitečný a citlivý nový nástroj, který dokáže vyhodnotit expozici koronavirům nebo zkříženou reaktivitu s podobnými viry stanovením uvolňování IFN-g po stimulaci virově specifickými antigeny. Technika je jednoduchá, relativně levná a lze ji použít v klinické laboratoři. To rozhodně není případ testu ELISPOT. Navíc lze test IGRA snadno rozšířit pro populační studie a vyšetřování, kde je vyžadován vysoký počet pacientů. Společně se sérologií lze IGRA použít ke screeningu protilátkových i T-buněčných odpovědí jednotlivých pacientů, aby bylo možné lépe porozumět imunitě na úrovni populace a určit již existující imunitu u séronegativních jedinců.

Důležitým omezením naší studie je, že studijní vzorek není reprezentativní pro populaci. Pro předurčení velikosti vzorku nebyly použity žádné statistické metody. Kromě toho náš test nerozlišoval mezi produkcí IFN-g buněk CD4 plus nebo CD8 plus, ale lze zvážit stimulaci s definovanými peptidy CD8(plus) a CD4(plus) (Grifoni et al., 2020, Peng et al. , 2020) a byl použit v IGRA popsaných v Petrone et al., 2020 a Murugesan et al., 2020). Pomocí tohoto IGRA lze také měřit indukci dalších cytokinů (Petrone et al., 2020). Podobně lze IGRA použít pro sledování po vakcinaci ke stanovení vývoje reakce T-buněk u očkovaných jedinců nebo může být použit ke stanovení, zda přítomnost zkříženě reaktivních paměťových T-buněk je spojena s ochrannou imunitou a může zmírnit projevy onemocnění způsobené infekcí SARS-CoV-2 (Sagar et al., 2020).

Etický souhlas a souhlas s účastí

Krev byla odebrána po informovaném písemném souhlasu. Etická komise Ministerstva zdravotnictví Ekvádoru schválila protokol studie 004–2020.

Střet zájmů

Autoři prohlašují, že nemají žádné konkurenční zájmy.

Autorské příspěvky

Studovat design; JHW a GE; Sběr dat a laboratorní experimenty: GE, AG, JC, AMR a MMV; Analýza dat; JHW, GE a ET; Psaní: JHW, GE a ET.

Poděkování

Vyjadřujeme svou vděčnost všem dárcům a zdravotnickému personálu zapojenému do této práce, zejména Sandře Vivero a Sandře Fonsece, za pomoc při odběru vzorků. Tato studie byla podpořena výzkumným fondem z Universidad de las Américas. Institut Sustainable Sciences, San Francisco, Kalifornie, USA a nadace „Por Todos“ v Ekvádoru poskytly protein RBD a „interní“ test ELISA. Děkuji Howardu E. Takiffovi a Flor Pujol (IVIC, Venezuela), Paulině E. Andrade (USFQ, Ekvádor) a Lilly Verhagen (UMC, Nizozemsko) za jejich plodné diskuse.

Reference

Abate D, Saldan A, Mengoli C, Fiscon M, Silvestre C, Fallico L a kol. Srovnání cytomegalovirové (CMV) enzymatické imunosorbentní skvrny a kvantifikátoru CMV testů uvolňujících gama interferon při hodnocení rizika CMV infekce u příjemců transplantovaných ledvin. J Clin Microbiol 2013;51(8):2501–7.

Altmann DM, Boyton RJ. T buněčná imunita SARS-CoV-2: specifičnost, funkce, trvanlivost a role v ochraně. Sci Immunol 2020;5(49)eabd6160.

Amanat F, Stadlbauer D, Strohmeier S, Nguyen THO, Chromikova V, McMahon M, et al. Sérologický test k detekci sérokonverze SARS-CoV-2 u lidí. Nat Med 2020;26:1033–6.

Braun J, Loyal L, Frentsch M, Wendisch D, Georg P, Kurth F a kol. SARS-CoV-2- reaktivní T buňky u zdravých dárců a pacientů s COVID-19. Příroda 2020;587:270–4.

de Vries RD. SARS-CoV-2-specifické T-buňky u neexponovaných lidí: přítomnost zkříženě reaktivních paměťových buněk se nerovná ochranné imunitě. Sig Transduct Target Ther 2020;5:224.

Doshi P. Covid-19: má mnoho lidí již existující imunitu? BMJ 2020;370: m3563.

Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, Mateus J, Dan JM, Moderbacher ČR a kol. Cíle reakcí T-buněk na koronavirus SARS-CoV-2 u lidí s onemocněním COVID-19 a neexponovaných jedinců. Cell 2020;181(7)1489–501.

Guevara A, Vivero S, Nipaz V, Guaraca V, Coloma J. Nízkonákladová SARS-CoV-2 rRBD ELISA k detekci sérostatu v ekvádorské populaci s COVID-19. Am J Trop Med Hyg [39_TD$DIFF]2021.

Le Bert N, Tan AT, Kunasegaran K, Tham CYL, Hafezi M, Chia A a kol. Imunita T-buněk specifická proti SARS-CoV{1}} v případech COVID-19 a SARS a neinfikované kontroly. Příroda 2020;584(7821):457–62.

Lipsitch M, Grad YH, Sette A, Crotty S. Zkříženě reaktivní paměťové T buňky a stádová imunita vůči SARS-CoV-2. Nat Rev Immunol 2020.

Mahajan S, Kode V, Bhojak K, Magdalene CM, Lee K, Manoharan M, et al. Imunodominantní T-buněčné epitopy z spike antigenu SARS-CoV-2 odhalují robustní preexistující T-buněčnou imunitu u neexponovaných jedinců. bioRxiv 2020.

Mateus J, Grifoni A, Tarke A, Sidney J, Ramirez SI, Dan JM a kol. Selektivní a zkříženě reaktivní T buněčné epitopy SARS-CoV{1}} u neexponovaných lidí. Science 2020;370 (6512):89–94.

Moderbacher RC, Ramirez SI, Dan JM, Grifoni A, Hastie KM, Weiskopf D a kol. Antigenově specifická adaptivní imunita vůči SARS-CoV-2 u akutního COVID-19 a v souvislosti s věkem a závažností onemocnění. Cell 2020; S0092-8674(20):31235–6.

Murugesan K, Jagannathan P, Pham TD, Pandey S, Bonilla HF, Jacobson K a kol. Test uvolňování interferonu-gama pro přesnou detekci odpovědi T-buněk SARS-CoV-2. Clin Infect Dis 2020;ciaa1537.

Ni L, Ye F, Cheng ML, Feng Y, Deng YQ, Zhao H a kol. Detekce SARS-CoV-2- specifické humorální a buněčné imunity u pacientů v rekonvalescenci COVID-19. Imunita 2020;52(6)971–7.

Pai M, Denkinger CM, Kik SV, Rangaka MX, Zwerling A, Oxlade O a kol. Testy uvolňování gama interferonu pro detekci infekce Mycobacterium tuberculosis. Clin Microbiol Rev 2014;27(1):3–20.

Peng Y, Mentzer AJ, Liu G, Yao X, Yin Z, Dong D a kol. Široká a silná paměť CD4 plus a CD8 plus T buňky vyvolané SARS-CoV-2 u pacientů v rekonvalescenci ve Spojeném království po COVID-19. NatImmunol 2020.

Petrone L, Petruccioli E, Vanini V, Cuzzi G, Fard SN, Alonzi T a kol. Test plné krve k měření specifické reakce na SARS-CoV-2-u pacientů s COVID-19. Clin Microbiol Infect 2020.

Sagar M, Reifler K, Rossi M, Miller NS, Sinha P, White L a kol. Nedávná endemická infekce koronavirem je spojena s méně závažným onemocněním COVID-19. J Clin Invest 2020.

Schwarzkopf S, Krawczyk A, Knop D, Klump H, Heinold A, Heinemann FM a kol. Buněčná imunita u COVID-19 rekonvalescentů s infekcí PCR potvrzenou, ale s nedetekovatelným SARS-CoV-2-specifickým IgG. Emerg Infect Dis. 2021; 27(1).

Sekine T, Perez-Potti A, Rivera-Ballesteros O, Strålin K, Gorin JB, Olsson A a kol. Robustní T buněčná imunita u rekonvalescentních jedinců s asymptomatickým nebo mírným COVID-19. Cell 2020;183(1)158–68.

Sette A, Crotty S. Preexistující imunita vůči SARS-CoV-2: známé a neznámé. Nat Rev Immunol. 2020;20(8)457–8.

Tan CCS, Owen CJ, Tham CYL, Bertoletti A, van Dorp L, Balloux F. Preexistující zkříženou reaktivitu zprostředkovanou T buňkami na SARS-CoV-2 nelze vysvětlit pouze předchozí expozicí endemickým lidským koronavirům. bioRxiv 2020; 2020.

For more information:1950477648nn@gmail.com