Potenciální biomarkery slz pro diagnostiku Parkinsonovy choroby – pilotní studieⅡ

3. Výsledky

3.1. Pacienti a klinické parametry

Mezi březnem 2019 a říjnem 2019 bylo do této pilotní studie zahrnuto 24 pacientů s iPD, tři symptomatickí nosiči mutace E46K-SNCA a 27 subjektů CT, jejichž obecné charakteristiky jsou uvedeny v tabulce 1. Průměrná doba trvání onemocnění u pacientů s PD byla 9,36 let a měli mírné bilaterální motorické postižení (UPDRS skóre) a Hoehnovo a Yahr skóre, které naznačovalo mírné až středně těžké motorické postižení. Charakteristickým znakem pacientů s IPD bylo, že 40 procent z nich mělo mírnou až středně těžkou blefaritidu.

3.2. Údaje nLC MS/MS Celkem 560 slzných proteinů bylo ve zde analyzovaných vzorcích identifikováno předchozími proteomickými studiemi slz a několik skupinově specifických změn slzného proteomu bylo evidentních u pacientů s PD ve srovnání s CT. U pacientů s PD ve srovnání s CT byly evidentní proteiny s různou abundancí s předchozími proteomickými studiemi na slzách a několik skupinově specifických změn proteomu slz. V obou skupinách byly detekovány proteiny s různými abundancemi, ačkoli většina deregulovaných proteinů v slzném proteomu pacientů s PD byla nadměrně exprimována. Byla provedena analýza sítě STRING PPI za účelem vyhodnocení interakcí mezi proteiny, které se významně lišily u pacientů s PD a CT (obrázek 1). Proteiny, které byly nadměrně exprimovány u pacientů s PD, byly zapojeny do významně více interakcí, než se očekávalo, což naznačuje, že zvýšení těchto proteinů má určitou biologickou souvislost (obrázek 1A). Mezi proteiny, které byly downregulovány, však byly pozorovány slabší vztahy, což představuje diferencovaný shluk (obrázek 1B). Většina odlišně exprimovaných proteinů by mohla být lokalizována buď do extracelulárních nebo intracelulárních kompartmentů.

Pro lepší pochopení potenciální role odlišně exprimovaných proteinů v biologickém kontextu byly provedeny funkční anotační analýzy s různými termíny genové ontologie (GO). V důsledku toho bylo pozorováno, že deregulované proteiny se účastní různých biologických procesů (obrázek 2): imunitní reakce (lipokalin 2-LCN 2, serpin B3-SPB3, folikulární dendritickými buňkami secernovaný peptid - FDSCP, kadherin - MFGM a neutrofilní gelatináza- asociovaný lipokalin-NGAL); apoptóza (olfactomedin-4—OLFM4, kaspáza-14—CASPE a gama-glutamylcyklotransferáza—GGCT); zánět (Calprotektin-S100A8, S100A9); degradace kolagenu (myeloblastická-PRTN3 a metaloproteináza 9-MMP9); syntéza proteinů (heterogenní jaderný ribonukleoprotein A3—ROA3); diferenciace keratinocytů (protein podobný kalmodulinu 5—CALML5); transport lipidů (apolipoprotein D-APOD, apolipoprotein A2-APOA2 a protein 2-LRP2 příbuzný lipoproteinu s nízkou hustotou); a obrana (myeloperoxidáza – MPO, defensin alfa 3 – DEFA 3, glutathionperoxidáza 3 – GPX3, chitináza -3-jako protein 2 – CH3L2 a lysozym C – LYSC).

Pokud byli pacienti s PD posuzováni všichni společně a odděleně jako pacienti s iPD a pacienti s mutací E46K-SNCA, upregulované slzné proteiny byly evidentní ve všech třech těchto skupinách, přičemž jejich exprese se u každé lišila (obrázek 3). Je třeba poznamenat, že byli studováni pouze tři pacienti nesoucí mutaci E46K-SNCA a rozptyl dat z té doby byl větší. Stejné proteiny byly silněji exprimovány v slzách pacientů s mutací E46K-SNCA než v slzách pacientů s iPD. Všechna tato srovnání byla provedena na hodnotách relativních k hodnotám vzorků slz CT.

Tabulka 2 ukazuje proteiny, které byly upregulované (násobek > 1,5) a downregulované (násobek < 0 0,5) ve skupině IPD s blefaritidou ve srovnání s pacienty s IPD bez blefaritidy. U pacientů s mutací E46K-SNCA se blefaritida nerozvinula.

Mezi slznými proteiny deregulovanými u pacientů s PD vyčnívala skupina šesti proteinů, z nichž pět bylo nadměrně exprimováno ve skupině PD vzhledem k CT (prelamin A/C-LMNA, katepsin D-CATD, kyselá ceramidáza-ASAH1, přechodná endoplazmatická retikulum ATPáza-TERA a cytoplazmatický dynein 1-DYHC1), přičemž jeden z nich byl downregulován (tripeptidyl-peptidáza 1-TPP1: Tabulka 3). Tyto proteiny byly spojeny s neurodegenerativními procesy, zejména změnami lysozomální autofagie, apoptózy, retrográdního axonálního transportu a demyelinizačních procesů. Bylo zajímavé povšimnout si vztahu těchto proteinů se změnami v lysozomální funkci. Ze šesti proteinů tři vykazovaly dobrou schopnost správně klasifikovat pacienty s PD a CT, jak se odráží v hodnotách AUC křivek ROC, a souvisely se změnami v lysozomální funkci: CATD, ASAH1 a DYHC1.

Jednorozměrná logistická regresní analýza identifikovala čtyři proměnné se statistickou významností v=0.05: věk pacientů a násobek změny v proteinech CATD, ASAH1 a DYHC1 (tabulka 4).

Kromě toho bylo zjištěno, že proteiny LMNA a DYHC1 mají statistickou významnost při=0.1. Multivariační logistický regresní model byl vytvořen zvážením věku a proteinů s jakoukoli hladinou významnosti. Zatímco obecný model vykazoval význam pouze v případě proteinu CATD (tabulka 5), ​​model byl pravděpodobně ovlivněn malým počtem dostupných vzorků a zvýšení počtu studovaných vzorků by mohlo dobře identifikovat další významné proměnné.

4. Diskuze

Tato studie byla provedena s cílem analyzovat proteiny pomocí nano-kapalinové chromatografie-hmotnostní spektrometrie (nLC–MS/MS) a vybrat ty proteiny související s neurodegenerativními onemocněními, které měly vyšší rozlišovací schopnost mezi studovanými skupinami PD a TC. V posledních letech bylo provedeno několik hledání kandidátních biomarkerů v slzách pacientů s PD; závěr byl však takový, že k nalezení nejlepšího kandidáta na diagnostický nebo prognostický biomarker pro tuto patologii jsou zapotřebí další ověřovací studie. Diagnóza PD je v současnosti založena na přítomnosti motorických a nemotorických symptomů, včetně poruch spánku nebo čichových deficitů. Motorické symptomy se objevují hlavně tehdy, když ztráta dopaminergních neuronů dosáhne kolem 50–60 procent.

Click to life extension cistanche pro Parkinsonovu chorobu

Dosažení včasné diagnózy tedy otevře cestu k modifikaci průběhu onemocnění a snad oddálí těžké postižení způsobené touto patologií. Tato problematika se stala klíčovým aspektem ve výzkumu PD, ačkoli nedostatek validních biomarkerů představuje hlavní překážku, která brání identifikaci pacientů v preklinických nebo prodromálních stádiích, stejně jako sledování vývoje onemocnění a účinků léčby.

Z tohoto důvodu se tato studie zaměřila na hledání spolehlivého biomarkeru PD v neinvazivní tekutině, jako jsou slzy. Oko má mnoho nervových a cévních elementů, které se také nacházejí v mozku, takže je ideální pro objevování nových biomarkerů, které by mohly být použity k diagnostice PD nebo jiných neurodegenerativních onemocnění, stejně jako při objevování nových terapeutických cílů. Zde byly slzy pacientů s PD a CT získány skleněnými kapilárami bez předchozí anestezie a bez dotyku povrchu oka. Předchozí pilotní studie o pacientových slzách byly provedeny se skupinou pacientských slz [19] a naše analýza je první individuální analýzou slz, která umožní identifikaci specifických individuálních markerů. Použitím kapilár k získání vzorků slz se vyhneme dotyku spojivkového epitelu, čímž se odliší proteiny nacházející se v slzách od spojivkových proteinů, jak se to děje při použití Schirmerových proužků. V naší studii jsme našli významně deregulované proteiny u pacientů s PD.

Tyto proteiny se účastní především zánětlivých a neurodegenerativních procesů, apoptózy a imunitních reakcí. Zánět je všudypřítomný u neurodegenerativních onemocnění, včetně PD, a nedávné studie zjistily, že epitopy T-buněk odvozené od -syn jsou přednostně rozpoznávány u pacientů s PD, stejně jako T buňky v cílových oblastech PD, což pravděpodobně naznačuje autoimunitní složku PD [20 ]. Předpokládalo se, že neurony jsou chráněny před autoimunitním útokem, ale dopaminergní neurony jsou zranitelné, protože mají na svém buněčném povrchu proteiny, které pomáhají imunitnímu systému rozpoznat cizí látky [21]. T buňky mohou potenciálně zaměnit neurony poškozené onemocněním za cizorodé látky a v důsledku toho Sulzer et al. navrhli model, ve kterém -syn-specifické T buňky způsobují neuronální smrt při neurodegenerativních onemocněních spojených se specifickým chybným skládáním tohoto proteinu. V naší studii byly ve vzorcích slz pozorovány mimo jiné skupiny deregulovaných proteinů souvisejících s imunitní odpovědí, jako jsou LCN2, SPB3 a FDSCP. Nicméně některé imunoglobuliny zapojené do imunitní odpovědi, jako je IgA2, nevykazovaly statisticky významné rozdíly mezi skupinou PD a skupinou CT.

Jsou zapotřebí další studie, aby se objasnilo, zda tento vztah mezi imunitní odpovědí a proteiny nalezenými v slzách přímo souvisí s PD. Neurozánět lze definovat jako nespecifickou zánětlivou příhodu v mozku a celý CNS má neurozánětlivou složku, která je patrná u onemocnění, jako je roztroušená skleróza (RS), mozková aneuryzmata a cévní mozkové příhody, epilepsie, AD a PD a u kterých byla zahrnuta aktivita enzymů degradujících extracelulární matrix (ECM) nebo metaloproteáz (MMP). MMP se účastní mnoha fyziologických a patologických procesů v mozku a krvi. Hematoencefalická bariéra (BBB) ​​je tvořena endoteliálními kapilárami, které oddělují přívod krve do mozku, a její funkce spočívá ve třech strukturách, které jsou kritické pro její integritu: endoteliální buňky mozkových kapilár, těsná spojení (TJ). ) mezi těmito buňkami a bazální membránou. Endotel je bariérou pro malé hydrofilní sloučeniny, protože TJ utěsňují mezery mezi sousedními endoteliálními buňkami, brání nekontrolovanému průchodu rozpuštěných látek mezi těmito buňkami a přeměňují endotel mozku na relativně nepropustnou bariéru [22,23].

Bazální membrána však spojuje tyto endoteliální buňky s pericyty a astrocyty za vzniku neurovaskulární jednotky, která usnadňuje komunikaci mezi buňkami. Tato membrána je zásadní pro správné fungování BBB a jako taková pro homeostázu mozku a jeho celkové zdraví. Bylo navrženo, že MMP specificky narušují TJs a tráví bazální membránu endotelu, čímž přispívají k určitým mozkovým onemocněním [24]. I když je technicky obtížné prokázat aktivitu MMP in vivo, silnější aktivita MMP byla spojena s větší permeabilitou BBB po cerebrovaskulární příhodě a během reperfuze in vivo [25]. Zvýšení MMP-2 a MMP-9 mRNA a aktivity bylo popsáno po reperfuzi u hypertenzních potkanů ​​s okluzí mediální cerebrální arterie (MCAO) [26]. Kromě toho byl únik BBB také detekován v piriformním kortexu těchto potkanů ​​ve spojení s narušením TJ, což naznačuje, že tyto MMP mění integritu BBB degradací proteinů TJ [26]. Jako takové a navzdory technickým problémům existují určité důkazy, že MMP tráví proteiny TJ a ECM in vivo.

Exprese a aktivita MMP-1, -2 a -9 byly stanoveny v posmrtné mozkové tkáni pacientů s PD, a zatímco u MMP-1 a MMP nebyly pozorovány žádné změny. -9 ve srovnání s věkově odpovídajícími kontrolami bylo v SN pacientů s PD evidentní 50procentní snížení aktivity MMP-2 [27]. Bylo navrženo, že slabší aktivita MMP 2 by mohla pomoci dopaminergním neuronům a jejich neuritům přežít v SN [27]. Navíc MMP{11}} byla také studována ohledně PD, která by se mohla potenciálně podílet na štěpení -syn. MMP-3 štěpí purifikovaný -syn in vitro a agregaci augmentů -syn v přítomnosti agregátů MMP-3, které by byly zvláště škodlivé pro dopaminergní buňky u PD. Je příznačné, že MMP-1, -2 a -9 a MT1-MMP také štěpí purifikovaný -syn, i když méně účinně než MMP-3 [28]. Zdá se, že MMP-3 se účastní dopaminergní neurodegenerace, neurozánětu a integrity BBB u PD; budou však zapotřebí další studie, aby se objasnila úloha všech těchto MMP u PD a zda by jejich specifická inhibice mohla představovat platnou terapeutickou strategii. Zde byly hladiny MMP-9 vyšší v trhlině u pacientů s PD, a to jak u pacientů s iPD (2,{27}}násobně), tak u pacientů s mutací E46K-SNCA (3-násobně).

U posledních pacientů s PD se blefaritida nerozvinula, což naznačuje, že zvýšení koncentrací MMP-9 není tak silně spojeno s blefaritidou jako s patologií PD. Při samostatné analýze skupin iPD však vidíme, že u pacientů s IPD s blefaritidou je silnější overexprese MMP-9, 3,08krát vyšší než u pacientů s IPD bez blefaritidy. Již dříve jsme studovali podíl této MMP na trhlině u pacientů s patologiemi očního povrchu [29,30]. Budou však nutné další studie, aby se zjistilo, zda zvýšení MMP-9 přímo souvisí s PD nebo patologiemi očního povrchu, které by mohly změnit analýzu slz.

Shromažďují se důkazy o důležité úloze energetického metabolismu u neurodegenerativních onemocnění, včetně PD. Abnormální lipidové frakce a peroxidace lipidů byly hodnoceny u pacientů s PD [31] a v důsledku toho byly lipidové frakce navrženy jako možné ochranné biomarkery PD. Nedávné epidemiologické studie na prospektivní kohortě nebo s uspořádáním případ-kontrola se pokusily posoudit souvislosti mezi lipidovými frakcemi a rizikem PD [32–35]. Některé z těchto studií měly malé velikosti vzorků, zatímco jiné zkoumaly pouze specifické lipidové frakce, zejména cholesterol, nebo kontrolovaly omezený počet potenciálních zmatků. Ačkoli byla pozorována konzistentní souvislost mezi vyššími hladinami cholesterolu a nižším rizikem PD, základní příčina není známa a je třeba posoudit, zda jsou podobné výsledky pozorovány u jiných lipidových frakcí. V testovaných vzorcích slz se zdá, že členové rodiny apolipoproteinů (APO) jsou deregulovaní, což je rodina proteinů, která se podílí na mnoha neurodegenerativních poruchách. Protein APOE se podílí na několika poruchách mozku, včetně AD, RS, traumatických lézí mozku a Creutzfeldt-Jakobovy choroby [36–38], což zvyšuje možnost, že ApoE může také hrát významnou roli v rozvoji PD. Kromě toho byly v mozku transgenního myšího modelu PD detekovány vyšší hladiny cholesterolu, a protože APO se podílejí na udržování homeostázy cholesterolu, mohla by existovat možná souvislost mezi APO a PD [39].

Jen málo studií se však zaměřilo na roli APO u PD. V CNS jsou APO produkovány gliovými buňkami a jsou vychytávány neurony, aby byly použity při růstu axonů a pro synaptickou aktivitu. Kromě toho se předpokládá, že ApoE má neuroprotektivní roli, brání apoptóze neuronů a retinálních gangliových buněk (RGC) [40]. Exprese APO v lidském mozku je ovlivněna typem APO a věkem jedince. Z různých APO jsou ApoE, ApoD a ApoJ nejsilněji exprimovány v mozku. Úroveň jejich exprese se však může v různých fázích života měnit a například v mozku novorozenců je o 50 procent více ApoE než v mozku dospělého, zatímco v mozku dospělého je přibližně 10krát více ApoD a ApoJ než v tom embrya. ApoD je exprimován především v mozku, periferních nervech, placentě, plicích, vaječnících a slezině [41]. V našich vzorcích slz se zdá, že ApoD je u pacientů s PD nadměrně exprimován. Gliové buňky blízké SN pacientů s PD mají více ApoD, o kterém se předpokládá, že souvisí s oxidačním stresem, protože ApoD chrání buňky před oxidačním stresem a jeho zvýšená exprese inhibuje peroxidaci lipidů [42].

Zdá se, že exprese ApoD v mozkovém kmeni chrání před neurodegenerací a v poškozených mozcích neurony ApoD neexprimují [41]. ApoD v slzách tedy vyžaduje další studie u pacientů s PD a pacientů s jinými neurodegenerativními onemocněními, aby se posoudilo, zda má u těchto pacientů skutečný neuroprotektivní účinek. Mezi dalšími proteiny, o kterých se v této studii zjistilo, že jsou deregulované, byla vybrána malá skupina kvůli jejich zapojení do neurodegenerativních procesů, konkrétně do lysozomální autofagie nebo neuronálního transportu. Ubikvitin-proteazomová (UPP) dráha byla navržena tak, aby hrála klíčovou roli v degradaci -syn [43]; nicméně přibývá důkazů, že lysozom může také zprostředkovávat degradaci -syn [44,45]. Bez ohledu na přesnou autofagickou dráhu, kterou -syn vstupuje do lysozomu, se předpokládá, že je za normálních podmínek rychle degradován "synukleinázou". V dopaminergních neuronech existuje dynamická rovnováha mezi různými konformačními formami a oligomerními stavy proteinu -syn, která je modulována faktory, které mohou urychlit nebo inhibovat agregaci a tvorbu fibril [46]. Identifikace a charakterizace toxických druhů -syn jsou stále neúplné a mnoho studií se zaměřilo na různé stavy agregace proteinů.

Tyto studie se pokusily určit, zda toxické druhy odpovídají nerozpustným fibrilárním proteinům nacházejícím se hlavně v LB nebo naopak pre-fibrilárním proteinovým oligomerům nebo protofibrilám. Existuje stále více důkazů in vivo a in vitro, že oligomerní druhy jsou patologicky nejrelevantnějšími izoformami [47,48], a dokonce bylo navrženo, že LB by mohly být protektivní, představující formu agrese. Za fyziologických okolností je -syn aktivní na synapsích a účastní se procesů, jako je tvorba, obchodování a spojování synaptických vezikul (SV). Je také spojena s recyklací SV a skladováním dopaminu.

Fosforylace a defosforylace -syn řídí aktivaci a deaktivaci tohoto proteinu, která je také řízena lysozomální autofagií a degradací proteazomu řízenou ubikvitinylací [49]. V patologických stavech vyvolaných různými podněty dochází -syn k nesprávnému skládání, mutaci nebo fosforylaci, která vede k jeho agregaci, ovlivnění tvorby a spojení lysozomálních váčků bez vyvolání lysozomální autofagie a vedoucí k jeho ukládání v dopaminergních neuronech, tvorbě LB. a apoptóza [49]. Zde prezentované výsledky ukazují, že mezi proteiny deregulovanými v slzné tekutině pacientů s PD, jak pacientů s iPD, tak nosičů mutace E46K-SNCA, existují dva proteiny související s lysozomální autofagií: CATD a ASAH1. CATD je důležitá lysozomální aspartylproteáza a je zajímavé, že nedostatek CATD a její enzymatická inaktivace u lidí vede k časnému nástupu progresivní a nakonec fatální neurodegenerace, která je klasifikována jako jeden z několika syndromů neuronálních ceroidních lipofuscinóz (NCL) [50,51 ]. In vitro CATD produkuje částečnou proteolýzu rekombinantního -syn [52] a schopnost CATD regulovat -syn byla hodnocena u dopaminergních buněk divokého typu a mutantních dopaminergních buněk v kultuře.

Kromě toho byly studovány mozky několika CATD-deficientních savců s NCL, aby se vyhodnotilo endogenní zpracování -syn, a následně se dospělo k závěru, že enzymatická aktivita CATD hraje důležitou roli v metabolismu -syn. Protein ASAH1 je lysozomální enzym, který přeměňuje lysozomální ceramid na sfingosin. Inhibice ASAH1 zvyšuje hladiny ceramidu a také snižuje množství oxidovaného -syn a ubikvitinylovaného proteinu v dopaminergních neuronech odvozených od pacientů s PD. Snížení hladin ceramidu v důsledku zvýšené aktivity ASAH1 může přispívat k akumulaci intracelulárního -syn, protože mění lysozomální autofagii, možná inhibuje uvolňování -syn do extracelulárního prostoru.

DYHC1 a LMNA jsou dva další relevantní proteiny deregulované v slzách pacientů s PD. DYHC1 je protein zapojený do pohybu organel v buňce a retrográdního transportu v axonech. Z dalších neurodegenerativních onemocnění se podílí na AD a PD. Změny DYHC1 způsobují špatný transport do jeho normální synaptické polohy a špatnou proteinovou clearance, jako je clearance lysozomální proteázy katepsinu D [53]. Tato navrhovaná sekvence událostí by vytvořila autokatalytickou spirálu, ve které by se procesy, které vedou k inhibici axonálního transportu a produkci fosforylovaného -syn, vzájemně stimulovaly, což by poskytlo racionální vysvětlení časné synaptické ztráty ve striatu u pacientů s PD. A konečně, nadměrná exprese proteinu LMNA v slze PD byla implikována v demyelinizaci, ale dosud to nesouviselo s PD [54].

Je to však cesta, která si zaslouží, aby byla v budoucích studiích zvážena. Tato studie má určitá omezení, jako je nízký počet zahrnutých pacientů, proto by měla být považována za pilotní studii a to je třeba vzít v úvahu při interpretaci výsledků. Kromě toho by bylo nutné ověřit kandidátní proteiny nejen ve větší kohortě, ale také zkontrolovat, zda se vyskytují v jiných tělesných tekutinách (tj. v krvi nebo mozkomíšním moku). Je také důležité mít na paměti, že možné mechanismy navrhované v tomto článku jsou pouze hypotézy, které by bylo nutné ověřit v dalších studiích. Kromě toho je třeba poznamenat, že vzhledem k tomu, že prohledávání databáze bralo v úvahu kanonické proteinové sekvence, nebyly získány žádné informace o proteoformách. Ačkoli by to mohlo představovat omezení specifičnosti výsledků, věříme, že informace získané na úrovni kanonické sekvence mají stále velkou hodnotu a poskytují cenné poznatky o molekulárních charakteristikách onemocnění.

Při interpretaci dat je však třeba mít na paměti možnost, že za anotované výsledky mohou být zodpovědné určité proteoformy.

5. Závěry

V této pilotní studii proteomická analýza odhalila, že určité proteiny byly upregulovány v slzách pacientů s PD, zejména těch, kteří se podílejí na lysozomální funkci. Důležitost této studie při identifikaci proteinů v slzách zapojených do neurodegenerace by měla být zdůrazněna jako jejich vztah k pacientům s PD s fenotypem agresivního onemocnění. Protože se jednalo o pilotní studii, byl studován pouze omezený počet pacientů. Limitací studie je rozdíl ve věku mezi kontrolní skupinou a skupinou s PD. Analýza se vzorky slz u zdravých jedinců bez očních patologií je komplikovaná, protože v určitém věku je obtížné najít dobrovolníky bez změn slzného filmu. Budoucí studie s většími kohortami pacientů nám umožní identifikovat specifické biomarkery pro PD, které by v ideálním případě pomohly předpovědět nástup tohoto onemocnění.

Přesto zde poskytujeme důkaz, že proteom jednotlivých pacientů lze analyzovat použitím pouze omezeného množství slz. Při dobrém tréninku je nejlepším způsobem, jak extrahovat slzy pro proteomické studie, použití skleněné kapiláry, čímž se zabrání kontaminaci buněk, ke které může dojít při použití Schirmerových proužků. Doufáme, že v budoucích studiích potvrdíme zde prezentované výsledky a identifikujeme endofenotypy PD prostřednictvím proteomického profilu slz, což by mohlo sloužit k dosažení časné diagnózy PD.

Reference

1 George, JM Synukleiny. Genome Biol. 2001, 3, 1–6. [CrossRef]

2. Láska, S. Neuropatologické vyšetřování demence: Průvodce pro neurology. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatrie 2005, 76 (Suppl. 5), v8–v14. [CrossRef]

3. Spillantini, MG; Schmidt, ML; Lee, VM-Y.; Trojanowski, JQ; Jakeš, R.; Goedert, M. - Synuklein v Lewyho tělíscích. Příroda 1997, 388, 839–840. [CrossRef]

4. Atik, A.; Stewart, T.; Zhang, J. Alfa-synuklein jako biomarker pro Parkinsonovu chorobu. Mozkový patol. 2016, 26, 410–418. [CrossRef] [PubMed]

5. Satake, W.; Nakabayashi, Y.; Mizuta, I.; Hirota, Y.; Ito, C.; Kubo, M.; Kawaguchi, T.; Tsunoda, T.; Watanabe, M.; Takeda, A.; a kol. Celogenomová asociační studie identifikuje běžné varianty na čtyřech lokusech jako genetické rizikové faktory pro Parkinsonovu chorobu. Nat. Genet. 2009, 41, 1303–1307. [CrossRef] [PubMed]

6. Polymeropoulos, MH; Higgins, JJ; Golbe, LI; Johnson, WG; Ide, SE; Di Iorio, G.; Sanges, G.; Stenroos, ES; Pho, LT; Schaffer, AA; a kol. Mapování genu pro Parkinsonovu chorobu na chromozom 4q21-q23. Science 1996, 274, 1197–1199. [CrossRef] [PubMed]

7. Zarranz, JJ; Alegre, J.; Gomez-Esteban, JC; Lezcano, E.; Ros, R.; Ampuero, I.; Vidal, L.; Hoenička, J.; Rodriguez, O.; Atarés, B.; a kol. Nová mutace, E46K, -synukleinu způsobuje Parkinsonovu demenci a demenci s Lewyho tělísky. Ann. Neurol. 2003, 55, 164–173. [CrossRef]

8. Archibald, NK; Clarke, poslanec; Mosimann, UP; Burn, DJ Vizuální příznaky u Parkinsonovy choroby a demence Parkinsonovy choroby. Mov. Porucha. 2011, 26, 2387–2395. [CrossRef] [PubMed]

9. Safranow, K.; Nowacká, B.; Lubi 'nski, W.; Honczarenko, K.; Potemkowski, A. Oftalmologické rysy Parkinsonovy choroby. Med Sci. Monit. 2014, 20, 2243–2249. [CrossRef] [PubMed]

10. Chesnoková, NB; Pavlenko, TA; Ugrumov, MV Oční poruchy jako projev Parkinsonovy choroby. Zhurnal Nevrologii i Psikhiatrii Imeni SS Korsakova 2017, 117, 124–131. [CrossRef] [PubMed]

11. Murueta-Goyena, A.; Del Pino, R.; Galdós, M.; Arana, B.; Acera, M.; Carmona-Abellán, M.; Fernández-Valle, T.; Tijero, B.; Lucas-Jiménez, O.; Ojeda, N.; a kol. Tloušťka sítnice předpovídá riziko úbytku kognitivních funkcí u Parkinsonovy choroby. Ann. Neurol. 2020, 89, 165–176. [CrossRef]

12. Nakahara, T.; Mori, A.; Kurauchi, Y.; Sakamoto, K.; Ishii, K. Neurovaskulární interakce v sítnici: Fyziologické a patologické role. J. Pharmacol. Sci. 2013, 123, 79–84,3. [CrossRef]

13. Lopatina, EV; Penniyaynen, VA; Tsyrline, VA Vliv norepinefrinu a selektivních blokátorů 1 -adrenoceptorů na růst explantátů tkáně sítnice. Býk. Exp. Biol. Med. 2012, 153, 48–50. [CrossRef] [PubMed]

14. Bowd, C.; Zangwill, LM; Weinreb, RN; Girkin, CA; Fazio, MA; Liebmann, JM; Belghith, A. Rasové rozdíly v rychlosti změny optické koherenční tomografie spektrální domény – měřená minimální šířka okraje a tloušťka vrstvy retinálních nervových vláken. Dopoledne. J. Ophthalmol. 2018, 196, 154–164. [CrossRef] [PubMed] 15. Wisniewski, JR; Zougman, A.; Nagaraj, N.; Mann, M. Univerzální metoda přípravy vzorků pro analýzu proteomů. Nat. Metody 2009, 6, 359–362. [CrossRef]

16. Meier, F.; Geyer, PE; Zima, SV; Cox, J.; Mann, M. Metoda získávání BoxCar umožňuje jednorázovou proteomiku v hloubce 10,000 proteinů za 100 minut. Nat. Metody 2018, 15, 440–448,3. [CrossRef] [PubMed]

17. Tyanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, MY; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Výpočetní platforma Perseus pro komplexní analýzu (prote)omických dat. Nat. Metody 2016, 13, 731–740. [CrossRef] [PubMed]

18. Perez-Riverol, Y.; Csordas, A.; Bai, J.; Bernal-Llinares, M.; Hewapathirana, S.; Kundu, DJ; Inuganti, A.; Griss, J.; Mayer, G.; Eisenacher, M.; a kol. Databáze PRIDE a související nástroje a zdroje v roce 2019: Zlepšení podpory pro kvantifikační data. Nucleic Acids Res. 2019, 47, D442–D450. [CrossRef]

19. Boerger, M.; Funke, S.; Leha, A.; Roser, A.-E.; Wuestemann, A.-K.; Maass, F.; Bähr, M.; Grus, F.; Lingor, P. Proteomická analýza slzné tekutiny odhaluje vzory specifické pro onemocnění u pacientů s Parkinsonovou chorobou – pilotní studie. Park. Relat. Porucha. 2019, 63, 3–9. [CrossRef]

20. Arlehamn, ČSL; Garretti, F.; Sulzer, D.; Sette, A. Role pro adaptivní imunitní systém u Parkinsonovy a Alzheimerovy choroby. Curr. Opin. Immunol. 2019, 59, 115–120. [CrossRef]

21. Sulzer, D.; Surmeier, DJ Neuronální zranitelnost, patogeneze a Parkinsonova choroba. Mov. Porucha. 2013, 28, 715–724. [CrossRef]

22. Martin, TA; Mansel, RE; Jiang, WG Antagonistický účinek NK4 na HGF/SF indukované změny v transendoteliální rezistenci (TER) a paracelulární permeabilitě lidských vaskulárních endoteliálních buněk. J. Cell. Physiol. 2002, 192, 268–275. [CrossRef]

23. Zlokovic, BV Hematoencefalická bariéra ve zdraví a chronických neurodegenerativních poruchách. Neuron 2008, 57, 178–201. [CrossRef]

24. Feng, S.; Cen, J.; Huang, Y.; Shen, H.; Yao, L.; Wang, Y.; Chen, Z. Matrix metaloproteinase-2 a -9 Secernované leukemickými buňkami zvyšují propustnost hematoencefalické bariéry tím, že narušují proteiny těsného spojení. PLoS ONE 2011, 6, e20599. [CrossRef]

25. Gu, Y.; Zheng, G.-Q.; Xu, M.; Li, Y.; Chen, X.; Zhu, W.; Tong, Y.; Chung, SK; Liu, KJ; Shen, J. Caveolin-1 reguluje aktivitu matrixových metaloproteináz zprostředkovaných oxidem dusnatým a permeabilitu hematoencefalické bariéry u fokální mozkové ischemie a reperfuzního poškození. J. Neurochem. 2011, 120, 147–156. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, Y.; Estrada, EY; Thompson, JF; Liu, W.; Rosenberg, GA Narušení těsných spojení proteinů v mozkových cévách zprostředkované matricovou metaloproteinázou je zvráceno syntetickým inhibitorem matricové metaloproteinázy u fokální ischemie u krys. J. Cereb. Blood Flow Metab. 2007, 27, 697–709. [CrossRef] [PubMed]

27. Lorenzl, S.; Albers, DS; Narr, S.; Chirichigno, J.; Beal, M. Exprese MMP-2, MMP-9 a MMP-1 a jejich endogenních kontraregulátorů TIMP-1 a TIMP-2 v posmrtné mozkové tkáni při Parkinsonově chorobě Choroba. Exp. Neurol. 2002, 178, 13–20. [CrossRef] [PubMed]

28. Kim, ST; Kim, E.-M.; Choi, JH; Syn, HJ; Ji, IJ; Joh, TH; Chung, SJ; Hwang, O. Matrix metaloproteináza-3 přispívá ke zranitelnosti nigrálních dopaminergních neuronů. Neurochem. Int. 2010, 56, 161–167. [CrossRef]

29. Acera, A.; Vecino, E.; Duran, JA Tear MMP-9 Hladiny jako marker zánětu očního povrchu u konjunktivochalázy. Vyšetřování. Oftalmol. Vis. Sci. 2013, 54, 8285–8291. [CrossRef]

30. Recalde, JI; Duran, JA; Rodriguez-Agirretxe, I.; Soria, J.; Sanchez-Tena, MA; Pereiro, X.; Suarez, T.; Acera, A. Změny hladin biomarkerů slz u keratokonu po zesítění rohovkového kolagenu. Mol. Vis. 2019, 25, 12–21. [PubMed]

31. Dexter, DT; Carter, CJ; Wells, FR; Javoy-Agid, F.; Agid, Y.; Lees, A.; Jenner, P.; Marsden, CD Bazální peroxidace lipidů u Substantia Nigra je zvýšená u Parkinsonovy choroby. J. Neurochem. 1989, 52, 381–389. [CrossRef] [PubMed]

32. Huang, X.; Abbott, RD; Petrovič, H.; Mailman, RB; Ross, GW Nízký LDL cholesterol a zvýšené riziko Parkinsonovy choroby: Prospektivní výsledky Honolulu-Asia Aging Study. Mov. Porucha. 2008, 23, 1013–1018. [CrossRef] [PubMed]

33. Huang, X.; Alonso, A.; Guo, X.; Umbach, DM; Lichtenštejnsko, ML; Ballantyne, CM; Mailman, R.; Mosley, TH; Chen, H. Statiny, cholesterol v plazmě a riziko Parkinsonovy choroby: Prospektivní studie. Mov. Porucha. 2015, 30, 552–559. [CrossRef]

34. Ma, VR; Gurevich, T.; Giladi, N.; El-Ad, B.; Tsamir, J.; Hemo, B.; Peretz, C. Vyšší sérový cholesterol a snížené riziko Parkinsonovy choroby: kohortová studie bez statinů. Mov. Porucha. 2018, 33, 1298–1305.

35. Zhang, L.; Wang, X.; Wang, M.; Sterling, NW; Vemeno.; Lewis, MM; Yao, T.; Mailman, RB; Li, R.; Huang, X. Hladiny cirkulujícího cholesterolu mohou souviset s faktory ovlivňujícími Parkinsonovo riziko. Přední. Neurol. 2017, 8, 501. [CrossRef]

36. Tamam, Y.; Tasdemir, N.; Yalman, M.; Tamam, B. Asociace genotypů apolipoproteinu E s prognózou u roztroušené sklerózy. Eur. Med. Pharmacol. Sci. 2011, 15, 1122–1130.

37. Ponsford, J.; McLaren, A.; Schönberger, M.; Burke, R.; Rudzki, D.; Olver, J.; Ponsford, M. Asociace mezi apolipoproteinem E a závažností traumatického poranění mozku a funkčním výsledkem v rehabilitačním vzorku. J. Neurotrauma 2011, 28, 1683–1692. [CrossRef]

38. Amouyel, P.; Francouzská výzkumná skupina pro epidemiologii lidských spongiformních encefalopatií; Vidal, O.; Laplanche, J.-L.; Launay, J. Alely apolipoproteinu E jako hlavní faktory náchylnosti pro Creutzfeldt-Jakobovu chorobu. Lancet 1994, 344, 1315–1318. [CrossRef]

39. Koob, AO; Ubhi, K.; Paulsson, JF; Kelly, J.; Rockenstein, E.; Mante, M.; Adame, A.; Masliah, E. Lovastatin zlepšuje akumulaci a oxidaci synukleinu v transgenních myších modelech -synukleinopatií. Exp. Neurol. 2010, 221, 267–274. [CrossRef]

40. Hayashi, H.; Campenot, RB; Vance, DE; Vance, JE Lipoproteiny obsahující apolipoprotein E chrání neurony před apoptózou prostřednictvím signální dráhy zahrnující protein s nízkou hustotou lipoproteinového receptoru-1. J. Neurosci. 2007, 27, 1933–1941. [CrossRef]

41. Navarro, A.; Mendez, E.; Diaz, C.; del Valle, E.; Martinez-Pinilla, E.; Ordonez, C.; Tolivia, J. Celoživotní exprese apolipoproteinu D v lidském mozkovém kmeni: Korelace se sníženou neurodegenerací související s věkem. PLoS ONE 2013, 8, e77852. [CrossRef] [PubMed]

42. Elliott, DA; Weickert, CS; Garner, B. Apolipoproteiny v mozku: Důsledky pro neurologické a psychiatrické poruchy. Clin. Lipidol. 2010, 5, 555–573. [CrossRef] [PubMed]

43. Leroy, E.; Anastasopoulos, D.; Konitsiotis, S.; Lavedan, C.; Polymeropoulos, MH Delece v genu pro Parkin a genetická heterogenita v řecké rodině s časným nástupem Parkinsonovy choroby. Hučení. Genet. 1998, 103, 424–427. [CrossRef] [PubMed]

44. Shin, Y.; Klucken, J.; Patterson, C.; Hyman, BT; McLean, PJ Ko-chaperonový karboxylový konec proteinu interagujícího s Hsp70- (CHIP) zprostředkovává rozhodnutí o degradaci alfa-synukleinu mezi proteazomálními a lysozomálními cestami. J. Biol. Chem. 2005, 280, 23727–23734. [CrossRef] [PubMed]

45. Webb, JL; Ravikumar, B.; Atkins, J.; Skepper, JN; Rubinsztein, DC Alfa-synuklein je degradován jak autofagií, tak proteazomem. J. Biol. Chem. 2003, 278, 25009–25013. [CrossRef]

46. ​​Dehay, B.; Bourdenx, M.; Gorry, P.; Przedborski, S.; Vila, M.; Hunot, S.; Singleton, A.; Olanow, CW; Obchodník, KM; Bezard, E.; a kol. Cílení na alfa-synuklein pro léčbu Parkinsonovy choroby: Mechanistické a terapeutické úvahy. Lancet Neurol. 2015, 14, 855–866. [CrossRef] 47. Bengoa-Vergniory, N.; Roberts, RF; Wade-Martins, R.; Alegre-Abarrategui, J. Alfa-synukleinové oligomery: Nová naděje. Acta Neuropathol. 2017, 134, 819–838. [CrossRef]

48. Rockenstein, E.; Nuber, S.; Overk, ČR; Ubhi, K.; Mante, M.; Patrick, C.; Adame, A.; Trejo-Morales, M.; Gerez, J.; Piccotti, P.; a kol. Akumulace alfa-synukleinu náchylného k oligomerům exacerbuje synaptickou a neuronální degeneraci in vivo. Mozek 2014, 137, 1496–1513. [CrossRef]

49. Datta, I.; Ganapathy, K.; Razdan, R.; Bhonde, R. Umístění a počet astrocytů určují přežití a funkci dopaminergních neuronů pod 6-stresem OHDA zprostředkovaným diferenciálním uvolňováním BDNF. Mol. Neurobiol. 2017, 55, 5505–5525. [CrossRef]

50. Partanen, S.; Haapanen, A.; Kielar, C.; Pontikis, C.; Alexander, N.; Inkinen, T.; Saftig, P.; Gillingwater, TH; Cooper, JD; Tyynela, J. Synaptické změny v thalamokortikálním systému myší s deficitem katepsinu D: Model lidské kongenitální neuronální ceroidní lipofuscinózy. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2008, 67, 16–29. [CrossRef]

51. Siintola, E.; Partanen, S.; Stromme, P.; Haapanen, A.; Haltia, M.; Maehlen, J.; Lehesjoki, AE; Tyynela, J. Deficit kathepsinu D je základem vrozené lidské neuronální ceroidní lipofuscinózy. Mozek 2006, 129, 1438–1445. [CrossRef] [PubMed]

52. Cullen, V.; Lindfors, M.; Ng, J.; Paetau, A.; Swinton, E.; Kolodziej, P.; Boston, H.; Saftig, P.; Woulfe, J.; Feany, MB; a kol. Úroveň exprese katepsinu D ovlivňuje zpracování, agregaci a toxicitu alfa-synukleinu in vivo. Mol. Brain 2009, 2, 5. [CrossRef] [PubMed]

53. Chu, J.; Thomas, LM; Watkins, SC; Franchi, L.; Nunez, G.; Salter, RD Cytolyziny závislé na cholesterolu indukují rychlé uvolňování zralého IL-1beta z myších makrofágů v inflammasomu NLRP3 a závislém na katepsinu B. J. Leukoc. Biol. 2009, 86, 1227–1238. [CrossRef]

54. Padiath, QS; Fu, YH Autosomálně dominantní leukodystrofie způsobená duplikacemi laminu B1 klinická a molekulární případová studie změněné jaderné funkce a onemocnění. Metody Cell Biol. 2010, 98, 337–357.

další informace:ali.ma@wecistanche.com