Extrakt z listů Ocimum Gratissimum bohatý na polyfenoly zabraňuje toxickým účinkům cyklofosfamidu na funkci ledvin potkanů ​​Wistar

Pro více prosím kontaktujte:oscar.xiao@wecistanche.com

Abstraktní

Pozadí:Cyklofosfamid (CP) je jednou z účinných a levných chemoterapií používaných v klinických podmínkách proti různým nádorům. Jeho spojení s nefrotoxicitou však omezuje jeho terapeutické použití. List Ocimum gratis simum je léčivá rostlina s četnými farmakologickými a terapeutickými účinky, jako jsou antioxidační, protizánětlivé a antiapoptotické vlastnosti.

Metody: Tato studie byla navržena tak, aby vyhodnotila ochranný účinek Ocimum gratissimum (OG) proti dysfunkci ledvin vyvolané CP u potkanů. Potkani byli předem ošetřeni 400 mg/kg tělesné hmotnosti extraktu z listů Ocimum gratissimum (Ocimum G.) po dobu 4 dnů a poté bylo od 5. do 7. dne společně podáváno 50 mg/kg tělesné hmotnosti CP spolu s Ocimum G. Markery funkce ledvin a oxidativní stres, příjem potravy a vody, elektrolyty, aldosteron, infltrace leukocytů, zánět a histopatologické změny.

Výsledek:Ve skupinách léčených CP byl pozorován zjevný zánět ledvin a poškození ledvin. Podávání extraktu z listů Ocimum G. však zabránilo oxidačnímu stresu, poranění ledvin, zmírnilo zánět, zvýšilo produkci aldosteronu a snížilo ztrátu iontů sodíku a vody u potkanů. Plazmatický kreatinin, močovina a koncentrace albuminu v moči byly normalizovány po podání extraktu Ocimum G. u potkanů ​​léčených CP. Ocimum G. také snížil plazmatické koncentrace interleukinu-(IL)-6, C-reaktivního proteinu a aktivitu myeloperoxidázy a malondialdehydu u potkanů ​​léčených CP.

Závěr: Ocimum G. zabránil poškození ledvin a zlepšil renální funkci prostřednictvím inhibice zánětu a oxidantem indukované toxicity CP. Účinnost Ocimum G. souvisí s přítomností různých fytochemikálií v rostlině.

klíčová slova:Antioxidant, kreatinin, cyklofosfamid, list Ocimum gratissimum, ledviny, sodík.

Pozadí

Cyklofosfamid (CP) je antineoplastická sloučenina, která je spojena s dusíkatým yperitem. Používá se v klinickém prostředí k léčbě široké škály nádorových onemocnění a při imunosupresivní terapii po transplantacích orgánů, léčbě autoimunitních poruch, jako je revmatoidní artritida, Wegenerova granulomatóza a nefritický syndrom u dětí [1]. Bez ohledu na široké spektrum klinického použití léku je známo, že CP způsobuje četná poškození orgánů závislá na dávce, což omezuje jeho terapeutické použití v klinickém prostředí. Protože bylo známo, že je prospěšný při léčbě nefrotického syndromu u dětí [1], v některých předchozích studiích bylo naopak hlášeno, že indukuje poškození močového měchýře [2, 3] a způsobuje renální toxicitu při nevhodném použití v důsledku použití CP předávkování [4–6]. Aktivní metabolit CP, 4-hydroxycyklofosfamid, je částečně tautomerizován na aldosfosfamid, který je zase štěpen fosfatázou v oběhu a živé buňce a dává vzniknout dvěma cytotoxickým metabolitům, fosforamidovému yperitu a akroleinu [6]. Terapeutický účinek fosforamidového yperitu byl již dříve popsán jako odpovědný za protinádorové účinky [6], zatímco akrolein je zodpovědný za cytotoxické účinky CP, jako je hemoragická cystitida během podávání léku [2, 7]. Toxický metabolit CP poškozuje živé tkáně tím, že omezuje tkáňový endogenní antioxidační systém prostřednictvím tvorby reaktivních volných kyslíkových radikálů, které jsou mutagenní pro živé buňky. Bylo popsáno, že podávání vysoké dávky CP zvyšuje peroxidaci lipidů a způsobuje snížení endogenních enzymatických a neenzymatických antioxidantů [7, 8]. Předchozí studie popisovaly prospěšné použití antioxidačních látek spolu s chemoterapií při prevenci nežádoucích účinků léku na tělesné tkáně [7, 9, 10]. Antioxidační látky jako kolaviron se ukázaly jako účinné v prevenci kardiotoxicity CP u potkanů ​​[11]. Tedy kombinaceantioxidační činidlospolu s chemoterapeutickými léky může být potenciálním terapeutickým přístupem k prevenci nebo zastavení cytotoxického rozvoje CP. Ocimum gratissimum (Ocimum G.) je čeleď hluchavkovitých (Lamiaceae), které patří mezi bylinné druhy rostlin. Je známá jako hřebíček nebo africká bazalka v mnoha zemích tropických oblastí (Asie, Indie, Brazílie a západní Afrika atd.). To je obrovsky nalezené v Nigérii [12]. Mnoho států této země (Nigérie) používalo Ocimum G. jako omáčku a zeleninovou polévku. Bylo zjištěno, že listy a listy Ocimum G. obsahují polyfenoly a další bioaktivní sloučeniny [13, 14]. Rostliny Ocimum gratissimum se používají k léčbě různých onemocnění, jako je průjem, ulcerózní kolitida, horečka a katar [14–17]. Rostlina má mnoho farmakologických výhod díky svým protizánětlivým, antioxidačním, antibakteriálním, antidiabetickým a antimalarickým schopnostem [14, 18–20]. Antimikrobiální aktivita extraktu Ocimum G. byla testována in vitro proti různým lidským patogenům, jako je Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, Escherichia, Vibro spp, Enterobacter spp, Enterococcus faecalis atd. Antifungální aktivita esenciálního oleje Ocimum G Extrakty byly zaznamenány in vitro [19, 21, 22] a Ocimum G. byl použit jako apelant proti komárům [23]. Nedávná studie na zvířatech naznačila důležitost ochranného účinku extraktů Ocimum G. při prevenci nepravidelností krevního tlaku proti toxicitě chloridu kobaltnatého [24] a také při zmírňování srdečních abnormalit spojených s jaterní fibrózou snížením regulace interleukinu-6 signální dráha [25] nebo navozením antioxidačních účinků [26]. Vodný extrakt z listů Ocimum G. vykazoval antioxidační účinky proti kardio-renálnímu poškození vyvolanému chloridem kobaltnatým [24] a předcházel žaludečním vředům snížením sekrece žaludeční kyseliny a ulcerací [27]. Také kyselina ursolová z extraktů Ocimum G. prokázala protisrpkovitou aktivitu [28] a protirakovinnou [29, 30]. Dále bylo prokázáno, že esenciální oleje Ocimum G. vykazují u potkanů ​​vazorelaxační vlastnosti závislé na endotelu [31]. Studie in vivo a in vitro hodnotily, že eugenol, léčivá složka přípravku Ocimum G., snižuje hladiny glukózy v krvi prostřednictvím inhibice alfa-glukosidázy [32]. Navíc klinická studie prokázala farmakologickou přiměřenost přípravku Ocimum G. k tomu, aby vykazoval podobnou aktivitu jako chlorhexidin proti plaku a zánětu dásní [33]. Se všemi těmito vlastnostmi Ocimum G. jsme předpokládali, že Ocimum G. by mohl být možným terapeutickým prostředkem, když se použije spolu s CP k prevenci nebo zastavení nežádoucích účinků CP. Tato studie byla proto navržena tak, aby zkoumala příznivé účinky extraktu z listů Ocimum gratissimum bohatého na polyfenoly na nefrotoxicitu vyvolanou CP u samců potkanů ​​Wistar.

Kliknutím sem se dozvíte více

Materiály a metody

Injekce cyklofosfamidu (200 mg/10 ml) byla získána od Celon Laboratory (Hyderabad, Indie); injekce hydrochloridu ketaminu (50 mg/10 ml) byla zakoupena od Popular Pharmaceuticals Ltd., (Gazipur, Bangladéš); Testovací soupravy pro biochemické parametry byly získány od Randox Laboratories Limited, (Crumlin, Spojené království) atd. Byly zakoupeny 1-difenyl-2-pikrylhydrazyl (DPPH), metanol, uhličitan sodný, Trolox a činidlo Folin–Ciocâlteu od společnosti Merck & Co., Kenilworth, NJ, USA. Mezi použité přístroje patří hmotnostní spektrometr pro plynovou chromatografii (GCMS-QP2010 SE, Shimadzu Corporation, Kyoto, Japonsko) a ultrafialový spektrofotometr (Beckman, DU 7400, USA), Soxhletův přístroj, rotační odparka, mikroskop (Olympus CH; Olympus , Tokyo, Japonsko); fotoaparát (Leica DM 750).

Příprava polyfenolového extraktu z listů Ocimum gratissimum

Listy Ocimum gratissimum byly shromážděny ze zahrady v Usi, stát Ekiti, Nigérie. Byla získána příslušná institucionální povolení ke shromažďování Ocimum gratissimum. Tato studie je v souladu s mezinárodními, národními a/nebo institucionálními směrnicemi pro použití různých částí rostliny. Vzorky rostliny byly ověřeny panem Omolem, kurátorem herbáře katedry botaniky Univerzity Obafemi Awolowo, Ile-Ife, kde byl v herbáři univerzity uložen kupónový exemplář (1945). Extrakt bohatý na polyfenoly byl získán z listů Ocimum G. (900g) podle našich předchozích extrakčních metod rostliny [14]. K získání konečného extrakčního produktu, extraktu bohatého na polyfenoly z listů Ocimum gratissimum (PREOG), byl použit methanol za sníženého tlaku při 40 stupních za použití rotační odparky. Výsledný koncentrát extraktu byl lyofilizován pomocí lyofilizátoru. Zbytek (8{{40}}},85 g) byl uchováván v Petriho miskách s těsně přiléhajícím krytem a skladován při -20 stupních, dokud nebyl potřebný pro studii. Získaný extrakt Te OG byl rozpuštěn ve vodě (0,2 ml/podání) a podáván krysám podle navržené dávky. Analýza plynové chromatografie-hmotnostní spektrometrie (GC‑MS) OG extraktů Chemické složení získaného extraktu bylo ověřeno pomocí plynové chromatografie-hmotnostní spektrometrie (GC–MS). Chavez a kol. Metoda [34] byla přijata s mírnou úpravou. Ke stanovení sloučenin byla použita kapilární kolona z taveného oxidu křemičitého (tloušťka filmu 30 x 0,25 HP-5Ms, 0,25 μm) obsahující helium jako nosný plyn (průtok 1/ml). Teplota pece 40 stupňů byla nastavena a udržována po dobu 5 minut a poté postupně zvyšována o 3 stupně/min až na 270 stupňů. 60:1 byl nastaven jako dělicí poměr. Pro spojovací části a iontové zdroje byla nastavena teplota 180 stupňů a pro hmotnostní spektrometr byla nastavena teplota rozhraní 240 stupňů. Pro kvantitu ionizační energie bylo použito 70 eV, přičemž režim dopadu elektronů (EI) byl zvolen pro vytvoření stabilních a reprodukovatelných hmotnostních spekter a pro běh vzorků byl použit rozsah hodnot 50–650 m/z. Čas zpoždění MS před skenováním byl 5 minut. Získané sloučeniny jsou uvedeny v tabulce 2. Stanovení celkového obsahu fenolů Celkový obsah fenolů (TPC) v extraktech byl vyhodnocen pomocí techniky Folin–Ciocâlteu, jak je popsáno v Gulcin et al. [35] s několika úpravami. Stručně řečeno, 100 ul (0,5 mg/ml) extraktů z Ocimum G. bohatých na polyfenol bylo umístěno do samostatných hladkých zkumavek. Do každé zkumavky obsahující extrakt Ocimum G. bylo přidáno asi 500 μl (1 procento v/v) fenolového činidla Folin–Ciocâlteu a zkumavky byly ponechány stát 5 minut. a poté vortexován. Po ponechání stát po dobu 5 minut bylo k alikvotům přidáno asi 400 ul (20 procent hmotn./hmotn.) uhličitanu sodného, ​​které byly poté inkubovány ve tmě při teplotě místnosti po dobu 90 minut. Pro vývoj barev. Absorbance každé směsi byla hodnocena ultrafialovým spektrofotometrem (Beckman, DU 7400, USA) při 765 nm. Jako slepý pokus byl použit roztok uhličitanu sodného bez přídavku fenolového činidla Folin–Ciocâlteu. Pro kalibrační křivku byly použity standardy kyseliny gallové. TPC vzorků byly stanoveny z lineární regrese standardů kyseliny gallové. Výsledky byly reprezentovány jako ekvivalent kyseliny gallové (GAE) na gram suché hmotnosti extraktu Ocimum gratissimum (mg GAE/g). Postup byl proveden trojmo (n=3). Test vychytávání volných radikálů DPPH Aktivita vychytávání volných radikálů extraktu byla stanovena podle metody popsané v RakMai et al. [36] s drobnými úpravami. Byly přidány asi 2 ml roztoku DPPH-methanol (180 μmol/L) a smíchány s extraktem v koncentraci 0,1 mg/ml. Alikvoty byly inkubovány ve tmě při 25 stupních. Absorbance vzorku byla stanovena pomocí spektrofotometru při 517 nm v různých časových intervalech mezi 0 a 60 min. Jako slepé vzorky byly použity alikvoty extraktů bez přídavku roztoku DPPH-methanol. Trolox, syntetický analogvitamínE, byl použit jako pozitivní kontrola. Níže uvedená rovnice byla použita pro hodnocení čisticích vlastností extraktů. Postup byl proveden trojmo (n=3). Kde vzorek je extrakt plus DPPH, Ablank je pouze extrakt, A kontrola je absorbance kontrolního roztoku (obsahujícího pouze DPPH). Péče o zvířata Pro studii bylo použito dvacet osm (28) samců krys Wistar o hmotnosti 120-180 g. Tey byl získán z Animal Holding College of Health Sciences, Univerzita Obafemi Awolowo, Ile-Ife. Všechny krysy byly drženy v konvenčních klecích po dobu 1 týdne, aby se aklimatizovaly na podmínky prostředí při 28-32 stupni, a byl jim umožněn volný přístup ke stravě a čisté pitné vodě. Experiment byl schválen Health Research Ethics Committee (HREC) Univerzity Obafemi Awolowo a studie byla popsána v souladu s pokyny ARRIVE (zvířata ve výzkumu: hlášení experimentu in vivo) [37].

Cistanche proti únavě

Histopatologické studie

Tkáně byly nařezány na {{0}}}μm silné řezy pomocí mikrotomu, fixovány na sklíčka a obarveny PAS. Sklíčka byla pozorována pod světelným mikroskopem (Olym pus CH; Olympus, Tokio, Japonsko) a mikrofotografie byly pořízeny fotoaparátem Leica DM 750 při 400 mag. upozornění. Sekce renálních tkání byla hodnocena certifikovaným patologem, který byl zaslepený vůči experimentálnímu protokolu. Glomerulární poškození bylo hodnoceno mezi stupni 0 a 4 hodnocením mesangiální proliferace, tloušťky bazální membrány a změn fibrinoidů. Tubulární poškození bylo hodnoceno mezi stupni 0 a 4 hodnocením vakuolární degenerace, deskvamace, tubulární degenerace, proximální tubulární nekrózy a tvorby sádry. Tubulointersticiální zánětlivé infiltráty byly hodnoceny mezi stupni 0 a 2 hodnocením diverzity zánětlivých buněk v médiu a přítomnosti infiltrátů v epitelu tubulů (tabulka 1) [44]. Celkové skóre poškození ledvin 0–2 představovalo žádnou/ mírnou nefrotoxicitu, 3–6 středně těžkou nefrotoxicitu a 7–10 těžkou nefrotoxicitu [44].

Výsledek

Analýza plynovou chromatografií-hmotnostní spektrometrií, obsah fenolů a kapacita vychytávání DPPH extraktu z listů Ocimum gratissimum Analýza GC–MS odhalila některé bioaktivní sloučeniny extraktu z listů Ocimum gratissimum (tabulka 2). Polyfenolický obsah extraktu byl rozpoznán metodou Folin–Ciocâlteu (tabulka 2). Celkový obsah fenolů (TPC) (80,36±0,50mg GAE/100g) získaný v extraktu z Ocimum G. odhalil, že extrakt z Ocimum gratissimum je bohatý na obsah fenolů. Schopnost extraktu pohlcovat DPPH byla také hodnocena výpočtem hodnoty IC50, která se vztahuje k množství extraktu, které je schopno vychytat 50 procent volných radikálů obsažených v reakční směsi. Hodnota IC50 (22,12 ± 0,43 mg/ml) extraktu byla vysoká a to znamenalo vysokouantioxidantaktivita listů Ocimum gratissimum. Funkce vysokého obsahu fenolů v rostlině se tedy ukázala v její schopnosti vychytávat aktivitu volných radikálů (tabulka 2).

Účinek PREOG a cyklofosfamidu na clearance kreatininu

Významný pokles renální clearance kreatininu byl pozorován ve skupině se samotným CP ve srovnání s kontrolou (p<0.05). however,="" the="" preog-treated="" groups="" revealed="" a="" significant="" increase="" in="" the="" creatinine="" clearance="" when="" compared="" with="" cp="" alone="" treated="" group=""><0.05)>

Diskuse

V současné studii existují náznaky zvýšených hladin v parametrech oxidačního stresu, jako je peroxidace lipidů, peroxid vodíku (H2O2) a oxid dusnatý (NO), což naznačuje, že membránové lipidy a proteiny ledvin potkanů ​​léčených Pouze CP byly poškozeny. Také aktivity antioxidačních enzymů, jako je superoxiddismutáza a kataláza, a hladina neenzymatického antioxidantu, redukovaného glutathionu, byly sníženy ve skupině léčené samotným CP. Pokles antioxidantů v renálních buňkách krys léčených samotným CP byl známkou redox-homeostázové nerovnováhy. Již dříve bylo prokázáno, že CP indukuje oxidační poškození, zánět a buněčnou nekrózu nebo apoptózu po aktivaci a podpoře reaktivních forem kyslíku (ROS) prostřednictvím svého metabolitu akroleinu [7, 11, 14], který následně spouští deaktivaci a sníženíantioxidační obranakapacity postižených organismů [10, 11, 45]. V této studii převažuje nadprodukce ROS nad endogennímantioxidační kapacitaspouští oxidační stres a následně poškozuje ledvinové buňky potkanů ​​léčených CP, což se projevilo zvýšenými hladinami markerů oxidačního stresu a sníženými hladinamiantioxidační parametry. Histologický pohled na tyto krysy také ukázal glomerulární poškození a tubulární nekrózu renálních buněk. Redoxní nerovnováha navíc vyvolává nadprodukci prozánětlivých cytokinů [3, 14]. Pozorovaná nadprodukce ROS spustila peroxidaci lipidů a mobilizaci prozánětlivých cytokinů a současně vyvolala zánětlivé poškození renálních buněk. Hodnocení IL-6 v této studii bylo významně zvýšené u potkanů ​​léčených CP, což naznačuje ataku oxidativního stresu a zánět ledvinových buněk. Bylo zjištěno, že zvýšení IL-6 spouští a/nebo stimuluje játra k zahájení reakce akutní fáze, která vede ke zvýšení produkce cirkulujícího C-reaktivního proteinu (CRP) a dalších bioaktivních mediátorů [46]. CRP byl významně zvýšen u potkanů ​​léčených CP a zvýšená hladina tohoto biomarkeru byla známkou časného obranného systému proti infekcím, informacím a poškození tkání [47, 48]. Zvýšení hladiny CRP v této studii dále potvrdilo prodělávání zánětu u potkanů ​​léčených samotným CP. Bylo pozorováno, že CP spouští redukci endogenních antioxidantů ledvin, jako je nadměrné využití GSH ledvinami v důsledku akumulace produktů metabolitů cyklofosfamidu v renálních tubulárních buňkách [9]. V důsledku tohoto procesu mohly ledviny potkanů ​​léčených samotným CP zvýšit imunitní odpověď proti jejich buňkám, což následně vedlo k zánětu, jak ukazuje zvýšení plazmatického CRP. Ve shodě, CP má potenciál vyvolat zánět a pravděpodobné imunologické poškození v ledvinách krys ošetřených CP.

Závěr

Závěrem lze říci, že výsledky ze současných zjištění ukázaly, že extrakt z Ocimum gratissimum bohatý na polyfenoly zabránil nežádoucím vedlejším účinkům CP na renální funkce snížením oxidačního stresu, zabránil nadprodukci prozánětlivých cytokinů a infltraci leukocytů a zlepšil antioxidační enzymatické funkce. činnost ledvinových tkání. Kromě toho bylo potvrzeno, že CP indukoval snížení sekrece aldosteronu a usnadnil nadměrnou ztrátu sodíku a vody močí u potkanů. Extrakt z Ocimum G. zlepšil renální funkce, zvýšil produkci aldosteronu a zabránil nadměrné ztrátě sodíku a vody u potkanů ​​léčených CP. Přítomnost polyfenolu a antioxidantů v listech Ocimum gratissimum z něj činí perfektního kandidáta pro léčbu a/nebo prevenci nefrotoxického účinku cyklofosfamidu.

Reference

1. Chabner BA, Ryand DP, Pax-Ares L, Garcis-Carbonero, Calaresi P. Anti-neoplastická činidla. In: Harnam JG, Libmirde LE, redakce. Goodman a Gilman jsou farmakologickým základem terapeutik. 10. vyd. New York: McGraw Hill; 2001. str. 1389–459.

2. Chabner BA a kol. Antineoplastická činidla. In: Brunton LL, Lazo JS, Parker KL, redakce. Goodman a Gilman jsou farmakologickým základem terapeutik. 11. vyd. New York: McGraw Hill; 2006. str. 1322–8. 1694.
3. Ge B, Yang D, Wu X, Zhu J, Wei W, Yang B. Cytoprotektivní účinky lipozomu kyseliny glycyrrhetinové proti cystitidě vyvolané cyklofosfamidem prostřednictvím inhibice zánětlivého stresu. Int Immunopharmacol. 2018;54:139–44.
4. Sinanoglu O, Yener AN, Ekici S, Midi A, Aksungar FB. Ochranné účinky spiruliny při nefrotoxicitě a urotoxicitě indukované cyklofosfamidem u potkanů. Basic Transl Sci. 2012.
5. Caglayan C, Temel Y, Kandemir FM, Yildirim S, Kucukler S. Naringin chrání před hepatotoxicitou a nefrotoxicitou vyvolanou cyklofosfamidem prostřednictvím modulace oxidačního stresu, zánětu, apoptózy, autofagie a poškození DNA. Environ Sci Pollut Res Int. 2018;25(21):20968–84.
6. Zhang J, Tian Q, Yung S, Chuen S, Zhou S, Duan W a kol. Metabolismus a transport oxazafosforinů a klinické implikace. Drug Metab Rev. 2005;37:611–703.
7. Famurewa AC, Edeogu CO, Ofor FI, Besong EE, Akunna GG, Maduagwuna EK. Downregulace redoxní nerovnováhy a signalizace iNOS/NF-ĸB/kaspáza-3 se suplementací zinku zabraňuje urotoxicitě hemoragické cystitidy vyvolané cyklofosfamidem u potkanů. Life Sci. 2021;266:118913.
8. Oyagbemi AA, Omobowale TO, Saba AB, Olowu ER, Dada RO, Akinrinde AS. Kyselina gallová zlepšuje neurotoxicitu vyvolanou cyklofosfamidem u potkanů ​​Wistar prostřednictvím aktivity zachycující volné radikály a zlepšením antioxidačního obranného systému. J Diet Suppl. 2016;13:402–19.
9. Abraham P, Isaac B. Účinky orálního glutaminu na nefrotoxicitu vyvolanou cyklofosfamidem u potkanů. Hum Exp Toxicol. 2010;30(7):616–23.
10. Šerif IO. Neuroprotektivní mechanismuskvercetinproti urotoxicitě vyvolané cyklofosfamicí: vliv na oxidační stres a zánětlivé markery. J Cell Biochem. 2018;119(9):7441–8. 11. Omole JG a kol. Ochranný účinek kolavironu na srdeční toxicitu vyvolanou cyklofosfamidem u potkanů. J Evid Based Integr Med. 2018;23:1
11. Efraim KD, Jacks TW, Sodipo OA. Histopatologické studie toxicity Ocimum gratissimum zanechávají extrakt na některých orgánech králíků. Afr J Biomed Res. 2003;6:21–5.
12. Akinmoladun AC, Ibukun EO, Emmanuel A, Obuotor EM, Farombi EO. Fytochemická složka a antioxidační aktivita extraktu z listů Ocimum gratissimum. Sci Res Essays. 2007;2:163–6.
13. Alabi QK, Akomolafe RO, Omole JG, Adefsayo MA, Ogundipe OL, Aturamu A, et al. Extrakt z listů Ocimum gratissimum bohatý na polyfenoly zlepšuje kolitidu prostřednictvím zmírnění poškození sliznice tlustého střeva a regulací produkce prozánětlivých cytokinů a oxidačního stresu u potkanů. Biomed Pharmacother. 2018;103:812–22.
14. Ofah VN, Chikwendu UA. Protiprůjmové účinky extraktu z listů Ocimum gratissimum u pokusných zvířat. J Ethnopharmacol. 1999;68:327–30.