Bělící kosmetika má velký tržní rozsah a široké vyhlídky na vývoj, zatímco bělící produkty tradiční čínské medicíny byly vždy centrem výzkumu. V této studii byl poprvé izolován a purifikován bělící aktivní extrakt Platycodon grandiflorum (PGE) a byl objasněn mechanismus bělící aktivity a chemické složení PGE. Pomocí analýzy vysokoúčinné kapalinové chromatografie-hmotnostní spektrometrie (HPLC-MS) bylo identifikováno celkem 45 složek, včetně arbutinu, syringinu, kyseliny chlorogenové, glykosidu E, platykodinu D3, baicalinu, platykodinu D, luteolinu. Míra vychytávání volných radikálů PGE vůči DPPH a ABTS byla 98,03 procenta a 84,30 procenta. Míra inhibice PGE vůči tyrosináze byla až 97,71 procenta. PGE měl významné protizánětlivé účinky na makrofágy RAW264.7 stimulované lipopolysacharidem (LPS) a měl významné inhibiční účinky na tvorbu tyrosinázy a melaninu u buněk B16F10 stimulovaných a-MSH. Výsledky ukázaly, že PGE dosáhl synergického bělícího účinku inhibicí aktivace volných kyslíkových radikálů na tyrosinázu, antioxidačním, protizánětlivým účinkem, enzymatickou aktivitou a tvorbou melaninu. Jako bělící činidlo extrahované z přírodních rostlin má PGE vynikající potenciál ve výzkumu a vývoji rostlinné bělící kosmetiky, což pokládá základ pro další vývoj a využití zdrojů Platycodon grandiflorum a poskytuje teoretický základ pro vývoj zelené a organické bělící kosmetiky.
Podle relevantních studiícistancheje obyčejná bylina, která je známá jako "zázračná bylina, která prodlužuje život". Jeho hlavní složkou jecistanosid, která má různé účinky jako napřantioxidant, aprotizánětlivéa podporu imunitních funkcí. Mechanismus mezi cistanche abělení kůžespočívá v antioxidačním účinku cistanche glykosidů. Melanin v lidské kůži je produkován oxidací tyrosinu katalyzovanoutyrosinázaa oxidační reakce vyžaduje účast kyslíku, takže se volné radikály v těle stávají důležitým faktorem ovlivňujícím produkci melaninu. Cistanche obsahuje cistanosid, což je antioxidant a může tak snížit tvorbu volných radikálů v těleinhibující produkci melaninu.
Další informace:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
1. Úvod
V globálním kosmetickém průmyslu existuje mnoho druhů bělící funkční kosmetiky a očekává se, že podíl na trhu dále poroste. Aby uspokojil rostoucí poptávku po látkách pro bělení kůže v bělicích kosmetických přípravcích a dosáhl bělícího účinku pokožky, zavedl kosmetický průmysl několik chemických přísad, včetně hydrochinonu, cysteinu, glutathionu, vitamínu A a glukokortikoidu. Tyto sloučeniny mají dobré bělící účinky; některé z nich však mají toxické vedlejší účinky; například „rhododendron“ způsobuje bílé skvrny na kůži uživatele,1 „Hydrochinon“ má cytotoxické a mutagenní vlastnosti,2 „Glukokortikoid“ může způsobit hormonálně dependentní dermatitidu.3 V současné době přidávání těchto složek (rododendron, hydrochinon, glukokortikoid ) do kosmetiky není povoleno. Účinek přípravku není jediným standardem, který spotřebitel při nákupu kosmetiky zvažuje. V posledních letech dochází k neustálému výbuchu problémů s bezpečností kosmetických výrobků ve snaze o zdraví. Vědci zjistili, že bělící účinné látky extrahované z přírodních bylin jsou méně toxické a mají mnohem méně vedlejších účinků. Stále větší počet spotřebitelů oceňuje bezpečnost výrobků. Kromě toho se zelené, ekologické a organické produkty staly populárnějšími, jak se odráží v propagaci mnoha značek přímého prodeje. Proto se výzkum a objevování bezpečných a zdravých bělících složek péče o pleť staly trendem moderního vývoje. Používání čínských bylinných extraktů z přírodních rostlin jako surovin v kosmetice se postupně stalo výzkumným centrem ve vývoji bělících a pleťových produktů.4
Platycodon grandiflorum, tradiční čínský léčivý materiál, se v Číně používá již více než 2000 let. Nejstarší záznam lze vysledovat zpět k „bylinné klasice Shennong“.5 Tradičním farmakologickým účinkem Platycodon grandiose je snížení kašle a vykašlávání. Platycodon grandiflorum obsahuje saponiny, aleje, fenolové kyseliny, steroly a polysacharidy.6–8 Složitost a rozmanitost chemických složek určuje rozmanitost jejich biologických aktivit.9 Moderní farmakologické výzkumy ukázaly, že Platycodon grandiflorum má protizánětlivé, bakteriostatické a protizánětlivé účinky. -nádorové, antioxidační, imunitní-regulace a další farmakologické účinky.10,11 V Koreji a severní Číně je Platycodon grandiflorum široce používán jako surovina v potravinách a kosmetice. Kosmetika vyrobená ze suroviny Platycodon grandiflorumas, jako je bělící esence, bělící mléko a bělící sprchový gel, je oblíbená spotřebiteli v Koreji, Japonsku a dalších asijských zemích.12 Extrakt z Platycodon grandiflorum je také uveden v mezinárodní kosmetické surovině Katalog materiálů.13 Nicméně bělící aktivní složky a mechanismus účinku Platycodon grandiflorum jsou stále nejasné a bylo provedeno několik předběžných studií o jeho bělící aktivitě. Gong XJ a kol. porovnali tyrosinázové inhibiční aktivity různých čínských bylin a zjistili, že Platycodon grandiflorum má nejsilnější inhibiční účinek.14 Na tomto základě Xu BJ et al. hodnotili bělící účinek účinné složky Platycodon grandiflorum prostřednictvím experimentu s inhibicí tyrosinázy a zjistili, že účinnou složkou Platycodon grandiflorum byl pravděpodobně celkový obsah saponinů.15 V této studii, abychom dále objasnili aktivní bělící látky a mechanismus bělení Platycodon grandiflorum , jsme jako výzkumný objekt použili bělící aktivní extrakt Platycodon grandiflorum získaný metodou farmakodynamického sledování. Studiem aktivity a složek objasňujeme složení bělících účinných látek Platycodon grandiflorum a zkoumáme mechanismus bělení bělících účinných látek Platycodon grandiflorum. Studie poskytne teoretický základ pro lepší využití Platycodon grandiflorum jako suroviny pro bělící kosmetiku.
Účinky bělení kůže zahrnují snížení produkce melaninu v kůži. Melanin je hlavním pigmentem pro kontrolu barvy kůže a vlasů. Je to vysokomolekulární sloučenina široce rozšířená u zvířat a rostlin. Při nadměrné produkci melaninu se melanin hromadí v kůži, vytváří skvrny a pihy, které mohou vést k těžké rakovině kůže.16 Proto, aby se zabránilo nadměrné pigmentaci kůže, je nutné produkci melaninu inhibovat. Melanocyty jsou umístěny v epidermální bazální vrstvě a jsou řízeny tyrosinázou. Reaktivní formy kyslíku aktivují tyrosinázovou aktivitu a tyrosináza katalyzuje 3,4-dihydroxyfenylalanin (DOPA) za vzniku DOPA chinonu a následně katalyzuje DOPA chinon za vzniku melaninu autooxidací a enzymatickou reakcí. Inhibice tyrosinázy a proliferace melanocytů tedy může významně inhibovat produkci melaninu.17 Navíc dobré antioxidační a protizánětlivé účinky mohou snížit poškození způsobené oxidací a zánětem kůže, zpomalit stárnutí kůže a udržet pokožku elastickou a hladkou, a tím projevují synergický bělící účinek.18,19
Abychom našli přírodní aktivní extrakt z Platycodon grandiflorum s bělícími, antioxidačními a protizánětlivými vlastnostmi, tato studie se zaměřila především na účinky extraktu Platycodon grandiflorum (PGE) na inhibici tyrosinázy, intracelulární inhibici tyrosinázy a inhibiční aktivitu buněk. generace melaninu. Cílem studie bylo analyzovat inhibiční účinek PGE na aktivitu tyrosinázy a tvorbu melaninu a komplexně zhodnotit účinek PGE na bělení a péči o pokožku a jeho antioxidační a protizánětlivé účinky. Chemické složení PGE bylo identifikováno a analyzováno pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) a kapalinové chromatografie (LC)/hmotnostní spektrometrie (MS) a byl objasněn specifický bělící aktivní materiál PGE. Je životně důležité vyvinout nové produkty Platycodon grandiflorum a podporovat rozvoj průmyslu Platycodon grandiflorum.
2. Materiály a metody
2.1. Materiály
Kyselina mravenčí, methanol, 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH), 2,20-kasino-bis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonová kyselina) (ABTS ), acetylaceton, NaOH, K2S208 a Ehrlichovo činidlo byly získány od Beijing Chemical Plant. Referenční produkty platycodin D, arbutin, platycodin D3, glykosid E, syringin, kyselina chlorogenová, baicalin a luteolin byly získány z China Institute of Pharmaceutical Biological Products Identification. Chromatograficky čistý acetonitril a methanol byly získány od JT Baker Co., USA. Tyrosináza, L-tyrosin, hyaluronát sodný a hyaluronát byly získány od společnosti Beijing Solebo Technology Co., Ltd. Původní buňky 264.7 a buňky B16F10 byly zakoupeny od Centra zdrojů buněk Šanghajského institutu biologických věd v Číně a uloženy v laboratoř lékařské fakulty přidružené k Changchunské univerzitě čínské medicíny. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), fetální bovinní sérum a antibiotika (penicilin a streptomycin) byly získány od Gibco USA. Triton X-100, a-MSH, souprava ELISA (NO, IL-6, TNF-a) a souprava pro počítání buněk-8 (CCK{22}}) byly získány od Changchun Baijin Biotechnology Co., Ltd. Čistá voda byla získána od společnosti Wahaha Food Co. Ltd.
2.2. Příprava bělícího aktivního extraktu Platycodon grandiflorum
Platycodon grandiflorum byl dodán společností Hebei Renxin Pharmaceutical Co. Ltd. Platycodon grandiflorum byl rozdrcen intonový prášek, zahříván a znovu použit s 95% roztokem ethanolu třikrát, pokaždé 1 hodinu. Poté byl produkt zfiltrován a filtrát byl izolován a spojen s filtrátem získaným ze tří extrakcí. Filtrát byl vysušen a smíchán s destilovanou vodou pro rozlišení a n-butanol (1:1 objem) nasycený vodou byl pětkrát extrahován. Vrstva n-butanolu byla spojena, roztok n-butanolu byl odstraněn a byl získán PGE. Rychlost extrakce PGE z Platycodon grandiflorum byla 8,9 procenta.
2.3. Buněčná kultura
Buňky myšího melanomu B16F10 a buňky RAW264.7 byly kultivovány v DMEM doplněném 10 procenty fetálního hovězího séra, 100 U ml-1 penicilinu a 100 g ml-1 streptomycinu ve zvlhčeném vzduchu s 5 procenty CO2 při 37 °C. byly pěstovány do fúzního stavu, byly štěpeny trypsinem a buňky byly ponechány projít každé dva dny. Všechny experimenty byly provedeny třikrát a opakovány třikrát, aby byla zajištěna opakovatelnost.
2.4. Test životaschopnosti buněk
Pro vyhodnocení bezpečnosti PGE byly účinky PGE na buňky B16F10 a RAW264.7 stanoveny metodou CCK-8 podle pokynů výrobce.20 Nejprve byly buňky B16F10 a RAW264.7 kultivovány v {{ 10}}jamkové destičky v koncentracích 5 × 103 buněk na jamku a 1 × 10⒋ buněk na jamku po dobu 24 hodin a poté ošetřeny PGE nebo DMEM v různých koncentracích po dobu 72 hodin. Po ošetření bylo do každé jamky přidáno 10 ml CCK-8 činidla a buňky byly dále kultivovány po dobu 2 hodin. Absorbance při 450 nm byla měřena pomocí čtečky mikrodestiček.
2.5. Antioxidační aktivita
Antioxidační aktivita PGE byla stanovena pomocí DPPH a ABTS testů vychytávání volných radikálů a kyselina askorbová byla použita jako pozitivní kontrola.21,22 Výsledky byly vyjádřeny jako procentuální míra inhibice.
Dále roztok PGE, kyselina askorbová a platykodin D s různými koncentracemi ({{0}}.2, 0.4, 0.6, 0.8 , 1.0 a 1,2 mg ml―1) byly přidány do zkumavky na ucpání. Poté byly do každé zkumavky přidány 2 ml roztoku DPPH; zkumavky byly vortexovány, směs byla promíchána a ponechána reagovat v tmavé komoře po dobu 30 min a byla stanovena absorbance A1 při 520 nm. Poté byly jako kontrolní skupina použity 2 ml methanolu místo roztoku DPPH pro stanovení hodnoty absorbance A2. Hodnota absorbance A0 byla stanovena nahrazením roztoku vzorku 2 ml methanolu jako slepé kontrolní skupiny. Upravte hodnotu absorbance na 0 pomocí methanolu. Rychlost vychytávání radikálů DPPH byla vypočtena podle následujícího vzorce:
Pro přípravu ABTS plus $ matečný louh bylo smícháno 35,2 mg ABTS a 6,139 mg persíranu draselného na konstantní objem 10 ml. Po 12–16 hodinách reakce při teplotě místnosti byl roztok zředěn methanolem, dokud hodnota absorpce roztoku při 734 nm nebyla asi 7.{{10}} × 0.2. Poté 30 ml roztoku PGE, kyseliny askorbové a platykodinu D s různými koncentracemi (0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2 mg ml―1) byly smíchány s 220 ml roztoku ABTS plus c v 96-jamkové enzymaticky označené destičce a absorbance při 734 nm byla měřena po reakci ve tmě po dobu 6 minut.
kde A0 je absorbance slepého vzorku a AS je absorbance vzorku, který má být měřen.
2.6. Lipopolysacharidem indukovaná protizánětlivá aktivita makrofágů RAW264.7
Makrofágy RAW264.7 v 1 ml média byly nasazeny do 24-jamkové destičky s 1 x 104 buněk na jamku a kultivovány přes noc, aby buňky přilnuly ke stěně. Buňky byly kultivovány po dobu 24 hodin po expozici lipopolysacharidu (LPS) a extraktům PGE v různých koncentracích (10, 50, 100 mg ml-1). Koncentrace NO, IL-6 a TNF-a v buněčném supernatantu byly stanoveny pomocí soupravy ELISA podle pokynů výrobce.23
2.7. Tyrosinázová aktivita
Pomocí metody popsané v literatuře, s fosfátovým pufrem (25 mmol, pH=6,8) jako rozpouštědlem, roztokem substrátu L-tyrosinu (0,5 mg ml―1), tyrosinovým enzymem roztok (50 U mL―1) a další roztoky v 96-jamkových destičkách 240 mL celkového reakčního systému, spolu se 120 mL substrátového roztoku, 40 mL fosfátového pufru, 40 mL roztoku vzorku a mixéru. Poté bylo do výše uvedeného systému přidáno 40 ml roztoku tyrosinového enzymu. Byla zaznamenána odezva konstantní teploty vodní lázně 37 °C po dobu 20 minut a absorbance byla měřena při 475 nm.
kde A je absorbance roztoku vzorku nahrazeného ekvivalentním roztokem pufru, B je absorbance roztoku vzorku, roztok tyrosinázy je nahrazen ekvivalentním roztokem pufru, C je absorbance roztoku vzorku a D je absorbance ekvivalentní roztok pufru místo roztoku tyrosinázy (tabulka 1).
2.8. Inhibiční aktivita tvorby melaninu
Buňky melanomu B16F10 v 1 ml média byly nasazeny do 24-jamkové kultivační destičky, s 1 x 104 buněk na jamku, a kultivovány přes noc, aby buňky přilnuly ke stěně. Buňky byly kultivovány s a-melanocyty stimulujícím hormonem (100 nM a-MSH) po dobu 48 hodin a kultivovány s různými koncentracemi PGE a arbutinu (100, 150, 200 mg ml-1) po dobu 24, 48 a 72 hodin.
Po době podávání byly buňky dvakrát promyty PBS (pH=7,2) a smíchány s PBS 200 ml obsahujícím 1 procento Tritonu X-100. Buňky byly lyžovány zmrazením a rozmražením. Poté, co byl systém odstřeďován při 12 000 otáčkách za minutu po dobu 30 minut, byl supernatant odstraněn a do buněčných granulí byl přidán 1 M NaOH obsahující 10 procent dimethylsulfoxidu (300 ml); poté reagoval při 80 stupních po dobu 2 hodin, aby došlo k lýze melaninu v buňkách.25 Byla stanovena absorbance při 450 nm.
2.9. Aktivita buněčné tyrosinázy
Buňky melanomu B16F10 v 1 ml média byly nasazeny do 24-jamkové kultivační destičky s 1 × 104 buňkami na jamku a kultivovány přes noc, aby buňky přilnuly ke stěně. Buňky byly kultivovány s a-melanocyty stimulujícím hormonem (100 nM a-MSH) po dobu 48 hodin a kultivovány s různými koncentracemi (100, 150, 200 mg ml-1) PGE a arbutinu po dobu 24, 48 a 72 hodin. Po době podávání byly buňky dvakrát promyty PBS (pH =7,2) a smíchány s PBS 200 ml obsahujícím 1 procento Tritonu X-100. Buňky byly lyžovány zmrazením a rozmražením. Po odstředění při 12 000 otáčkách za minutu po dobu 30 minut byl supernatant umístěn na 96-jamkovou destičku, 100 ml na jamku, a smíchán se 100 ml 0,1% roztoku L-DOPA. Po inkubaci při 37 stupních po dobu 2 hodin byla okamžitě stanovena absorbance při 475 nm.
2.10. Analýza chemického složení
2.10.1. HPLC analýza.Roztok vzorku PGE byl analyzován pomocí systému Shimadzu LC{{0}}AHT HPLC s odpařovacím detektorem rozptylu světla ELSD6000 (Alltech CHROM).27 Chromatografická separace byla provedena na Sepax Bio -C18 kolona (4,6 x 250 mm, 5 mm, od Sepax Technologies, Delaware, USA). Systém mobilní fáze se skládal z mobilní fáze A (acetonitril) a mobilní fáze B (0,1% kyselina mravenčí voda). Gradient rozpouštědla je uveden v tabulce 2. Chromatografické podmínky byly následující: průtok byl 0,8 ml min-1, počáteční teplota detekce rozptylu světla odpařováním (ELSD) byla 105 × C, průtok plynu byl 2,8 l min-1 1 a vstřikované množství bylo 20 1. Bylo připraveno dvacet šarží PGE.
2.10.2. Analýza chemického složení PGE pomocí HPLC v kombinaci s hmotnostní spektrometrií.Technologie Q-Orbitrap LC/MS s vysokým rozlišením byla použita v kombinaci s hmotnostním spektrometrem Q Exactive s vysokým rozlišením na chromatografickém systému Ultimate 3000 RS k analýze a identifikaci chemické složení roztoku vzorku PGE prostřednictvím MS.28 Podmínky MS jsou následující: iontový zdroj: elektrosprejový ionizační zdroj; režim skenování: přepínač skenování kladných a záporných iontů; detekční metoda: plná hmotnost/dd-MS2; rozlišení: 70 000 (plná hmotnost), 17 500 (dd-MS2); rozsah skenování: 150.0–2000.0 m/z; elektrosprejové napětí: 3,8 kV (kladné); kapilární teplota: 300 stupňů C; srážkový plyn: vysoce čistý argon (čistota 99,999 procent $); plášťový plyn: dusík (čistota 99,999 % $, 40 arb); pomocný plyn: dusík (čistota $ 99,999 procent, 350 stupňů); doba sběru dat: 30,0 min. Chromatografické podmínky: chromatická grafická kolona: RP-C18 (150 x 2,1 mm, 1,8 mm, Welch); Průtok: 0,30 ml min― 1; vodná fáze: 0,1% vodný roztok kyseliny mravenčí; organická fáze: 0,1 procenta kyseliny mravenčí acetonitrilu; kapalina na mytí jehel: methanol; teplota kolony: 35 °C; injekční objem: 5,00 ml. Gradient rozpouštědla je uveden v tabulce 3.
2.11. Statistika dat
Všechny experimenty byly provedeny alespoň třikrát. Data byla uvedena jako střední hodnota ± standardní odchylka. Statistické analýzy byly provedeny pomocí SPSS 21.0 a Origin 9.0. Pro vícenásobná srovnání byla data podrobena jednocestné ANOVA (Turecko post hoc) a párovému t-testu pro stanovení statistické významnosti. p < 0,05 bylo považováno za statisticky významné rozdíly mezi skupinami.
3. Výsledky
3.1. Účinky PGE na životaschopnost buněk B16F10 a 264.7
Účinky PGE na buňky melanomu B16F10 a makrofágy RAW264.7 byly detekovány metodou CCK-8. Buňky byly ošetřeny různými koncentracemi PGE po dobu 24 hodin a poté detekovány pomocí metody CCK-8. Výsledky jsou vyjádřeny jako procento přežití vzhledem ke kontrolní skupině. Při koncentracích PGE 10–100 mg ml―1 (životaschopnost buněk: 99,42 ±1,951–107,17 ±2,601 procenta) nevykazoval PGE žádný cytotoxicita na buňkách 264.7 (obr. 1). K významnému poklesu buněčné aktivity však došlo při koncentraci PGE 200 mg ml-1 (životaschopnost buněk: 74,91 ± 1,574 procent). Proto je rozsah dávkování 10–100 mg ml―1 (rychlost extrakce PGE v Platycodon Grandiflorum byla 8,9 procenta. Koncentrace 10–100 mg ml―1 PGE odpovídá 0,11–1,12 mg ml―1 Platycodonu Přidání 1 ml média obsahujícího léčivo na jamku je ekvivalentní přidání 0,11–0,12 mg Platycodon Grandiflorum.). Zde bylo vybráno 10 mg ml―1, 50 mg ml―1 a 100 mg ml―1 (koncentrace rostlinných léčivých materiálů: 0,11 mg ml―1, 0,56 mg ml―1, 1,12 mg ml―1, v tomto pořadí) jako nízké, střední a vysoké koncentrace.
Aktivita buněk B16F10 byla mírně odlišná od aktivity buněk 264.7. Když byla koncentrace PGE 10–200 mg ml―1 (životaschopnost buněk: 99,03 ±1,965 procenta –91,48 ±1,382 procenta), aktivita buněk B16F10 se významně nelišila od aktivity kontrolní skupiny. Když však byla koncentrace 250 mg ml―1 (životaschopnost buněk: 85,69 ± 2,284 procenta), aktivita buněk B16F10 začala klesat a buněčná aktivita při koncentraci PGE 1000 mg ml―1 (životaschopnost buněk: 70,75). rozmezí dávkování 10–200 m3,337 procenta) bylo nejnižší. g ml―1 (Rychlost extrakce PGE v Platycodon Grandiflorum byla 8,9 procenta. Koncentrace 100–200 mg ml―1 PGE odpovídá 1,12–2,24 mg ml―1 Platycodon Grandiflorum. Přidání 1 ml léku obsahujícího médium na jamku odpovídá přidání 1,12–2,24 mg Platycodon Grandiflorum.). Zde 100 mg ml―1, 150 mg ml―1 a 200 mg ml―1 (koncentrace rostlinných léčivých materiálů: 1,12 mg ml―1, 1,68 mg ml―1 2,24 mg ml―1, v tomto pořadí ) byly vybrány jako nízké, střední a vysoké koncentrace (obr. 2).
3.2. Antioxidační kapacita PGE
K měření antioxidační aktivity PGE byly použity testy DPPH a ABTS vychytávání volných radikálů. Vychytávací aktivity PGE vůči radikálům DPPH a ABTS byly stanoveny při různých koncentracích PGE (0,5, 1.0, 1,5, 2.0, 2,5 mg ml― 1). Platycodin D a kyselina askorbová byly použity jako pozitivní kontrola. Jak je znázorněno na obr. 3, vychytávací aktivita PGE vůči volným radikálům DPPH a ABTS se zvýšila v závislosti na dávce, podobně jako u výsledků pozitivní kontrolní skupiny. Když byla koncentrace PGE 6,25 mg ml― 1, vychytávací aktivita vůči radikálu DPPH byla 98.{19}}3 ±0,60 procent, téměř stejná jako vychytávací aktivita kyseliny askorbové. Kromě toho PGE také vykazoval silnou vychytávací aktivitu vůči radikálu ABTS (84,30 ± 0,53 procenta), která byla vyšší než u kontrolní skupiny platycodinu D.
3.3. Účinek snížení PGE na LPS-stimulovanou zánětlivou odpověď makrofágů RAW264.7
Podle výsledků účinku PGE na aktivitu makrofágů RAW264.7 v části 3.1 byly pro testování účinku vybrány koncentrace PGE 10, 50 a 100 mg ml―1 jako nízké, střední a vysoké dávky. PGE na LPS-stimulovaný zánět makrofágů RAW264.7. Jak je znázorněno na obr. 4, PGE v závislosti na dávce snižoval produkci NO v LPS-stimulovaných makrofázích RAW264.7 a v závislosti na dávce snižoval hladiny zánětlivých faktorů IL-6 a TNF-a.
3.4. Účinky PGE na aktivitu tyrosinázy hub, obsah melaninu v melanocytech B16F10 a aktivitu intracelulární tyrosinázy
Jak je znázorněno na obr. 5, inhibiční aktivita PGE vůči tyrosináze se významně zvýšila se zvýšením koncentrace extraktu. Čím vyšší je koncentrace PGE, tím silnější je inhibiční aktivita tyrosinázy. Tyrosinázové inhibiční aktivity PGE při 0,5, 1.0, 1,5, 2.0, 2,5 a 3.0 mg ml―1 byly 6{ {29}},29 procenta, 79,32 procenta, 85,14 procenta, 95,23 procenta, 96,43 procenta a 97,71 procenta, v tomto pořadí. Když však byla koncentrace PGE 2,5–3.0 mg ml― 1, inhibiční aktivita tyrosinázy se významně nezvýšila; nebylo tedy nutné provádět experimenty s vyššími koncentracemi. Za stejných podmínek byla míra inhibice 3,0 mg ml‵1 PGE (koncentrace rostlinných léčivých materiálů: 33,71 mg ml―1) podobná jako u arbutinu (3 mg ml―1, 96,97 ±1,849 procenta) a vyšší než platycodinu D (3 mg ml-1, 81,67 ± 2,331 procent).
Podle účinku PGE na aktivitu melanocytů B16F10 v části 3.1 byly koncentrace PGE 100, 150 a 200 mg ml―1 PGE vybrány jako nízké, střední a vysoké dávky pro testování účinku PGE na obsah melaninu. a tyrosinázovou aktivitu melanocytů B16F10 stimulovanou a-MSH. Jak je ukázáno na obr. 6, tyrosinázová aktivita buněk B16F10 stimulovaných 100 nM a-MSH (kontrolní skupina) byla významně vyšší než aktivita nestimulovaných buněk. Se zvýšením koncentrace PGE se inhibiční aktivity produkce tyrosinázy a melaninu na buňkách B16F10 významně zvýšily v závislosti na dávce. S prodlužující se dobou podávání se postupně zvyšovala inhibiční aktivita PGE na tyrosinázu buněk B16F10 a produkci melaninu.
Další informace: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
