Část 2: Transplantace králičích PBMC indukovaných extraktem z kuřecího bílku jako léčba renálního ischemicko-reperfuzního poranění u králíků

Pro více informací kontaktujte:tina.xiang@wecistanche.com

Kliknutím na níže uvedený odkaz získáte část 1

https://www.xjcistanche.com/news/part-1-transplantation-of-chicken-egg-white-ex-54616513.html

Kliknutím získáte další informace. o zlepšení ledvin

Výsledek

1. Úspěšné značení PBMC pomocí CFSE

PBMC značené karboxyfluorescein diacetátem a sukcinimidylesterem (CFSE) vykazovaly žlutozelenou fluorescenci pod fluorescenčním mikroskopem, jak je ukázáno na Eig 1B. Po kontrastním barvení DAPI všechny buňky vykazovaly modrou fluorescenci, jak je ukázáno na obr. 1A, a analýza překryvu fluorescenčního barvení ukázala, že buňky byly úspěšně značeny, jak je ukázáno na Eig 1C.

2. Identifikace PBMC po indukci

2.1.Relativní úrovně exprese genů souvisejících s multipotenci a somatických buněk v neindukovaných a indukovaných PBMC.Exprese NANOG, OCT4 a SOX2 byla významně zvýšena v PBMC stimulovaných extraktem z kuřecího bílku a exprese genu somatických buněk LMNA byla snížena (obr. 1D), což naznačuje, že se buňky diferencovaly na multipotentní buňky. Statistická analýza ukázala, že tyto dvě skupiny byly významně odlišné (n=3,p=0,003). Buňky byly indukovány třikrát a do studie byly zahrnuty tři biologické replikáty. Rozdíl v genu LMNA somatických buněk mezi těmito dvěma skupinami nebyl statisticky významný.

2.2. Faktor pluripotence indukovaných PBMC byl významně vyšší než u neindukovaných PBMC. Mezi neindukovanými buňkami {{0}}.081 procent bylo pozitivních na OCT4-PE, zatímco 99,3 procenta indukovaných buněk bylo pozitivních na OCT4-PE . Procento SSEA-4-pozitivních neindukovaných a indukovaných buněk bylo 1,{26}}8 procent a 16,5 procenta. Kromě toho 0,495 procent neindukovaných buněk bylo pozitivních na NANOG-PE, zatímco 95,8 procenta indukovaných buněk bylo zjištěno jako NANOG-PE-pozitivních (obr. 1E-1M). Procenta izotypových kontrolních buněk pozitivních na OCT4-PE, SSEA-4-PE a NANOG-PE byla 0,546 procenta, 0,401 procenta, respektive 0,249 procenta.

2.3. Imunohistochemické analýzy poskytly pozitivní výsledky pro indukované PBMC.Imunohistochemické analýzy OCT4 a NANOG ukázaly, že tyto markery exprimovaly indukované PBMC, ale ne neindukované PBMC (obr. 2A-2D). Obr. 2A a 2C ukazují neindukované PBMC a obr. 2B a 2D ukazují indukované PBMC. Kromě toho je exprese OCT4 ukázána na obr. 2A a 2B a obr. 2C a 2D ukazují expresi NANOG.

2.4. Western blot analýzy poskytly pozitivní výsledky pro indukované PBMC.Podle výsledků Western blotu byl OCT4 exprimován v indukovaných PBMC, ale ne v neindukovaných PBMC (obr. 2E).

2.5. Relativní délky telomer byly významně delší u indukovaných PBMC.Na základě kvantitativních výsledků PCR byly telomery indukovaných PBMC (1,83807±0,84756) významně delší než telomery neindukovaných PBMC (1±0,08307) (Eig 2E, průměr ± standardní odchylky , n=5,p=0.013), což naznačuje, že se buňky diferencovaly na mladé kmenové buňky. Relativní délky telomer se po dediferenciaci skutečně zvýšily.

3. Hladiny dusíku močoviny a kreatininu v séru byly sníženy ve skupině s indukovanými buňkami

Modelová kontrolní skupina měla obsah močovinového dusíku 22,1 mmol/l a obsah kreatininu 452 umol/l. Po třech kolech transplantace s indukovanými buňkami byl obsah močovinového dusíku 7 mmol/l a obsah kreatininu 74 μmol/l; tyto hodnoty byly podobné normálním hodnotám. Hladiny ve skupině s neindukovanými buňkami zůstaly zvýšené (obr. 2G). Statistická analýza ukázala statisticky významné rozdíly mezi výsledky čtyř skupin (p= 00,031).

4. Koncentrace proteinů v moči byly sníženy v indukované skupině

Koncentrace proteinu v moči v modelové kontrolní skupině byla 8,17 mg/ml. Po třech ošetřeních byla koncentrace proteinu v moči u indukované skupiny 4,35 mg/ml, což bylo podobné normální hladině. Avšak obsah proteinu v moči u neindukované skupiny zůstal vysoký na 7,96 mg/ml (obr. 2H). Statistická analýza ukázala statisticky významné rozdíly mezi výsledky získanými ze čtyř skupin (p=0,001).

5. V indukované skupině byly detekovány značené buňky

Jak je znázorněno na obr. 3A-3D, mnoho fluorescenčních buněk bylo distribuováno v ledvinách skupiny s indukovanými buňkami, zatímcoledvinové tkáněz ostatních tří skupin nevykazovaly žádné fluorescenční buňky. Možným vysvětlením je, že indukované buňky jsou transportovány do poškozené ledviny, aby napravily poškození. Distribuce fluorescenčně značených indukovaných PBMC ve zmrazených řezech ledvin naznačovala, že tyto buňky se podílely na opravě poškozené ledviny.

6. Struktura ledvin indukované skupiny vykazovala normální fenotyp

Na základě výsledků barvení hematoxylinem-eosinem (HE) byla poškozena struktura ledvin králíků v modelové kontrolní skupině. Po ošetření indukovanými buňkami,ledvinovétkáňová struktura vykazovala normální fenotyp. Naproti tomu poškození ledvinové tkáně přetrvávalo ve skupině s neindukovanou buněčnou léčbou (obr. 3E-3H). Skóre akutní tubulární nekrózy (ATN) je znázorněno na obr. 3I.

7. IOD indukovaných buněčných skupin byl významně snížen

K provedení imunohistochemické analýzy kumulativní optické hustoty (IOD) byl použit software Image-Pro Plus 6.0(Media Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USA). Pro každou skupinu bylo z každé části náhodně vybráno alespoň šest polí s 200× zvětšením a byly pořízeny snímky. Pokusili jsme se zobrazit celé zorné pole, abychom zajistili, že každá fotografie bude mít stejné pozadí. Software Image-Pro Plus 6.0 byl použit k výběru stejné hnědé barvy jako jednotného standardu pro posouzení pozitivního zbarvení na všech snímcích. Každý snímek byl analyzován pro stanovení IOD pozitivního barvení. IOD byla významně zvýšena v modelové kontrolní skupině, zatímco IOD normální kontrolní skupiny a skupiny indukovaných buněk byly sníženy, respektive významně sníženy. IOD skupiny s neindukovanými buňkami nebyla výrazně snížena ve srovnání s modelovou kontrolní skupinou (obr. 3). Statistická analýza ukázala významné rozdíly mezi výsledky čtyř skupin (p =0,001).

8. Fibróza byla zlepšena ve skupině s indukcí

V modelové kontrolní skupině bylo pozorováno značné ukládání kolagenových vláken a došlo k závažné fibróze. Tato fibróza byla zlepšena nebo eliminována ve skupině léčené indukovanými buňkami, zatímco těžká fibróza byla stále pozorována ve skupině léčené neindukovanými buňkami (Eig 4A-4D).

9. Ztluštění bazální membrány nebylo u indukované skupiny pozorováno

Tloušťka glomerulární bazální membrány, bazilární membrány ledvinového pouzdra a tubulointersticiální membrány byla významně zvýšena v modelové kontrolní skupině. Ve skupině s indukovanými buňkami bazální membrána nevykazovala žádné významné ztluštění, zatímco silnější bazální membrány byly stále pozorovány ve skupině s neindukovanými buňkami (obr. 4E-4H). Skóre tloušťky bazální membrány je znázorněno na obr. 4I.

10. Transplantované buňky diferencované na tubulární epiteliální buňky

Výsledky imunofluorescence ukázaly, že transplantované buňky vykazovaly zelenou a červenou fluorescenci ve stejnou dobu, což indikovalo, že transplantované buňky byly diferencovány na tubulární epiteliální buňky (TEC) (obr. 4J).

11. Identifikované látky byly v modelové skupině zvýšeny a po léčbě sníženy

V režimu negativních iontů byly dvě látky, které vykazovaly významně zvýšené hladiny v modelové kontrolní skupině, 2'-deoxy-D-ribóza a N-acetylglukosamin 1-fosfát (obr. 5A). Hladiny obou těchto sloučenin byly po indukované buněčné terapii významně sníženy ve srovnání s hladinami zjištěnými v modelové kontrolní skupině (obr. 5A). V režimu pozitivních iontů byly hladiny tří látek (D-pinitol, lysyl-glycin a glutamyl -asparagin) byly významně zvýšeny v modelové kontrolní skupině (obr. 5B) a hladiny těchto tří látek byly významně sníženy po indukované buněčné terapii ve srovnání s hladinami nalezenými v modelové kontrolní skupině (obr. 5B)

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0244160.g005

V režimu negativních iontů byly hladiny dvou identifikovaných látek v modelové skupině zvýšeny a po léčbě sníženy, což indikovalo smysluplnou korelaci mezi hladinami těchto dvou látek.

V pozitivním iontovém módu byly hladiny tří identifikovaných látek zvýšeny v modelové kontrolní skupině a sníženy po léčbě, což naznačovalo významné korelace mezi hladinami těchto tří látek.

12. Byly pozorovány významné změny v metabolismu pyrimidinu a biosyntézy fenylalaninu, tyrosinu a tryptofanu

V režimu negativních iontů byla zjištěna významná změna v metabolické dráze pyrimidinu mezi modelovou kontrolní skupinou a normální kontrolní skupinou (Eig6A). navíc

významné změny v této dráze byly pozorovány ve skupině s indukovanými buňkami ve srovnání s modelovou kontrolní skupinou (obr. 6B), což ukazuje, že metabolická dráha pyrimidinu je významně změněnou dráhou. V analýze pozitivního iontového módu byly dráhy biosyntézy fenylalaninu, tyrosinu a tryptofanu významně změněny v modelové kontrolní skupině ve srovnání s normální kontrolní skupinou (obr. 6C) a tyto dráhy byly významně změněny ve skupině s indukovanými buňkami ve srovnání s modelová kontrolní skupina (Eig 6D), která ukázala, že cesty biosyntézy fenylalaninu, tyrosinu a tryptofanu jsou smysluplné cesty. Na obr. 6 tmavší barva bublin a větší objem naznačují významnější rozdíl. Jak ukazují šipky na obr. 6A a 6B, rozdíl v metabolické dráze pyrimidinu je významný, a jak je naznačeno šipkami na obr. 6C a 6D, rozdíly v biosyntéze fenylalaninu, tyrosinu a tryptofanu jsou významné.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0244160.g006

Diskuse

Akutníledvinaporanění způsobené ischemií-reperfuzí je běžné klinické onemocnění a úmrtnost pacientů s akutním poškozením ledvin je přibližně 30 až 50 procent v důsledku omezených léčebných opatření[14]. Během ischemie vyvolává aktivace enzymů destrukci cytoskeletu, poškození buněčné membrány a degradaci DNA, což nakonec vede k buněčné nekróze a apoptóze [15]. Ischemicko-reperfuze také mimo jiné aktivuje proteiny komplementu, cytokiny a chemokiny a zásadní význam mají mechanismy, které jsou základem ischemicko-reperfuzního poškození [16]. Transplantované kmenové buňky navíc podporují migraci a nábor reziduálních renálních kmenových buněk do místa poranění a indukují jejich diferenciaci na TEC, ale přesný mechanismus není jasný [17].

Mortalita pacientů s ischemicko-reperfuzním poškozením je vysoká kvůli nedostatku účinné klinické léčby [18]. Stav vyžaduje dlouhodobou nebo doživotní renální substituční terapii popřtransplantaci ledvin[19]. Patofyziologický mechanismus ischemicko-reperfuzního poškození je velmi komplikovaný a vyplývá z četných interakcí mezi zánětlivými buňkami, vaskulárními endoteliálními buňkami a cytokiny[20]. V posledních letech se mezenchymální kmenové buňky staly středem zájmu výzkumu ischemicko-reperfuzního poškození [21] a bylo prokázáno, že zlepšují ischemicko-reperfuzní poškozenípoškození ledvin. Jak ukazují studie využívající ischemicko-reperfuzní modely, mezenchymální kmenové buňky hrají důležitou roli v regulaci imunity, účastní se vaskulární rekonstrukce[22] a opravují renální mikroprostředí sekrecí parakrinních antiapoptotických faktorů, mitogenních faktorů a angiogenních faktorů. Nedávná studie využívající kmenové buňky různého původu odhalila, že indukovaly pluripotentní kmenové buňky jiné typy kmenových buněk [22]. Domníváme se, že indukované buňky jsou pravděpodobněji mezenchymálními kmenovými buňkami, protože jsou zralejší než indukované pluripotentní kmenové buňky.

Po indukované transplantaci pluripotentních kmenových buněk molekuly exprimované na povrchu indukovaných pluripotentních kmenových buněk interagují s T buňkami za účelem regulace jejich biologické aktivity. T buňky se mohou po poškození vyhýbat imunitnímu systému a snižovat intenzitu imunitní reakce v okolní tkáni, a tyto buňky tak do určité míry hrají roli v ochraně funkce poškozené tkáně [23]. Úspěšně jsme vytvořili králičí model renální intersticiální fibrózy a prokázali, že transplantace indukovaných autologních kmenových buněk může opravit poškození ledvin během 8 týdnů [24]. Kmenové buňky poskytují výhodné mikroprostředí pro opravu poškození renálního tubulárního epitelu [24]. V tomto experimentu byly po podání tří po sobě jdoucích týdenních terapií hladiny sérového kreatininu a dusíku močoviny ve skupině s indukovanými buňkami obnoveny na stejnou úroveň pozorovanou u normální kontrolní skupiny, zatímco hladiny v neindukované buněčné léčbě a modelové kontrole skupiny byly významně zvýšené.

Jak ukazuje Haynesworth et al. [25], mezenchymální kmenové buňky vylučují různé růstové faktory, faktory stimulující kolonie, adhezní molekuly a interleukiny (IL-6, IL-7, IL-8, I{{5 }}, IL-14 a IL-15), které podporují mitózu renálních TEC a opravu tkání, a tím inhibují zvýšení koncentrací kreatininu a dusíku močoviny.

V této studii byly hladiny exprese pluripotenčních faktorů SSEA-4, NANOG a OCT4 v indukovaných PBMC detekovány průtokovou cytometrií a výsledky ukázaly, že PBMC se dediferencovaly na multipotentní buňky. Kvantitativní PCR analýza prokázala, že telomery v indukovaných PBMC byly významně delší než telomery v neindukovaných PBMC. Na základě našich důkazů se PBMC získané z králičí periferní krve po ošetření extrakty z bílků kuřecích vajec dediferencují na multipotentní kmenové buňky a vykazují vlastnosti mezenchymálního kmene buněk [9], což umožňuje jejich případnou účast na reparaci renálního poranění. Studie ukázaly, že vaječné buňky savců a extrakty z vaječných buněk Xenopus mohou přeprogramovat somatické buňky [6,7]. Náš předchozí výzkum ukázal, že extrakt z kuřecích vajec může také přeprogramovat somatické buňky [5,9]. Slepičí vejce je největší vaječná buňka a jeho schopnost přeprogramovat somatické buňky tak posouvá buněčný biologický výzkum. Kroky přeprogramování vaječných buněk savců a Xenopusových vaječných buněk vyvolané přeprogramováním jsou těžkopádné a extrakty je obtížné získat; slepičí vejce jsou však největší vaječné buňky a lze tak získat velké množství extraktu z bílků slepičích vajec. Pokud je zákrok prováděn sterilním způsobem, není nutné získaný extrakt filtrovat a sterilizovat. Aktivita extraktu se dá dobře udržet. Opakovali jsme indukční experiment s použitím konečných koncentrací extraktu z kuřecího bílku 10 procent, 20 procent, 30 procent, 40 procent a 50 procent pro indukci PBMC (viz obr. SI až S3). Jak se koncentrace extraktu z kuřecího bílku zvyšovala, míra pozitivního faktoru pluripotence se postupně zvyšovala a nejvyšší pozitivní míra byla získána s konečnou koncentrací 50 procent. Koncentrace extraktu z kuřecího bílku vyšší než 50 procent však ovlivní růst buněk. Použili jsme proteázu, DNázu a RNázu k lýze proteinu, DNA a RNA v extraktu z vaječného bílku a poté provedli náš indukční experiment. Zjistili jsme, že extrakt z vaječného bílku získaný po lýze proteinu již nemá schopnost přeprogramovat buňky a kuřecí proteinový extrakt získaný po lýze DNA a RNA má stále schopnost přeprogramovat buňky. Proto tato zjištění potvrdila, že hlavní roli extraktu hraje proteinová složka (výsledky neuvedeny).

Také jsme analyzovali vzorky krve zvířat po jednom týdnu léčby. Rozdíl mezi těmito čtyřmi skupinami však nebyl významný; tedy ukazujeme pouze výsledky získané pro čtyři skupiny po třech ošetřeních. Distribuce fluorescenčně značených indukovaných PBMC ve zmrazených řezech ledvin naznačovala, že tyto buňky se podílely na opravě poškozené ledviny. Barvení HE ukázalo poškození struktury ledvin v modelové kontrolní skupině. Po ošetření indukovanými buňkami ledvina vykazovala normální strukturu, zatímco poškození struktury ledvin bylo pozorováno ve skupině s neindukovanými buňkami. Po třech ošetřeních odhalilo Massonovo trichromové barvení řezů ledvin ze čtyř skupin podstatné ukládání kolagenových vláken a závažnou fibrózu v modelové kontrolní skupině. Tato fibróza byla zlepšena nebo eliminována léčbou indukovanými buňkami, zatímco závažná fibróza byla stále pozorována ve skupině léčené neindukovanými buňkami. Analýza renální metabonomie čtyř skupin provedená v režimu negativních iontů odhalila významně zvýšené hladiny 2'- deoxy-D-ribóza a N-acetylglukosamin 1-fosfát v modelové kontrolní skupině ve srovnání s normální kontrolní skupinou a hladiny těchto látek byly významně sníženy ve skupině s indukovanými buňkami ve srovnání s modelovou kontrolní skupinou. V režimu pozitivních iontů byly hladiny pěti látek významně zvýšeny v modelové kontrolní skupině ve srovnání s normální kontrolní skupinou a hladiny tří z těchto pěti látek byly významně sníženy ve skupině s indukovanými buňkami ve srovnání s modelovou kontrolní skupinou .

Předpokládané hlavní mechanismy, které jsou základem pozorované opravy ledvin a doprovázející snížení zánětlivé odpovědi, jsou uvedeny níže. ① Indukované PBMC se diferencují na TEC nebo fúzují s přeživšími buňkami, aby přímo podpořily opravu renální tkáně. ②Synergické účinky různých cytokinů poskytují dobré mikroprostředí pro opravu renálních tkání [26]. Po třech transplantacích indukovaných PBMC se funkce ledvin a patologické indexy vrátily na normální hodnoty a tyto normální hladiny přetrvávaly až do konce experimentu, což naznačovalo, že transplantované multipotentní kmenové buňky účinně podporovaly opravu struktury a funkce ledvinové tkáně.

Ačkoli specifický mechanismus, kterým indukované PBMC podporují strukturální a funkční opravu ledviny, nebyl dosud plně objasněn, výsledky této studie naznačují, že intravenózní transplantace indukovaných PBMC podporuje opravu po akutním poškození ledvin. Tyto výsledky poskytují cennou referenci pro výzkumníky, kteří zkoumají funkci multipotentních kmenových buněk při regeneraci poškozených ledvin a pro klinickou léčbu akutních a chronických onemocnění ledvin.

Souhrnně řečeno, indukovaná multipotentní transplantace kmenových buněk má podstatný význam pro opravu parenchymálních buněk u zvířecích modelů selhání ledvin a jiných onemocnění ledvin.

Závěry

Ošetření PBMC extraktem z kuřecího vaječného bílku významně zvýšilo expresi genů a proteinů souvisejících s pluripotenci, což naznačuje, že buňky se dediferencovaly na multipotentní kmenové buňky. Indukované PBMC se tedy dediferencují na multipotentní kmenové buňky a mohou být potenciálně použity k léčběporanění ledvin. Budoucí výzkum je nutný k identifikaci klíčových molekul v extraktu z kuřecího bílku a tím k dalšímu zlepšení účinnosti indukce.

Reference

1. Yuan X, Li D, Chen X, Han C, Xu L, Huang T, a kol. Extracelulární vezikuly z mezenchymálních stromálních buněk pocházejících z pluripotentních kmenových buněk (hiPSC-MSC) chrání před renálním ischemickým/reperfuzním poškozením dodáním specifického proteinu (SP1) a transkripční aktivací sfingosinkinázy 1 a inhibicí nekroptózy. Cell Death Dis. 2017; 8(12):3200. Epub 2017/12/14. https://doi.org/10. 1038/s41419-017-0041-4 [pii]. PMID: 29233979; PubMed Central PMCID: PMC5870585.

2. Fahmy SR, Soliman AM, El Ansary M, Elhamid SA, Mohsen H. Terapeutická účinnost transplantace mezenchymálních kmenových buněk lidské pupeční šňůry proti renálnímu ischemickému/reperfuznímu poškození u potkanů. Tkáňová buňka. 2017; 49(3):369–75. Epub 2017/05/10. S0040-8166(16)30171-9 [pii] https://doi.org/10.1016/j.tice. 2017.04.006 PMID: 28476205.

3. Hu H, Zou C. Mezenchymální kmenové buňky u renálního ischemicko-reperfuzního poškození: biologické a terapeutické perspektivy. Curr Stem Cell Res Ther. 2017; 12(3):183–7. Epub 27. 10. 2016. https://doi.org/10. 2174/1574888X11666161024143640 [pii]. PMID: 27781940.

4. Zhou L, Song Q, Shen J, Xu L, Xu Z, Wu R a kol. Srovnání lidské adipózní stromální vaskulární frakce a mezenchymálních kmenových buněk odvozených z tukové tkáně pro zmírnění akutní renální ischemie/reperfuzního poškození. Sci Rep. 2017; 7:44058. Epub 2017/03/10. https://doi.org/10.1038/srep44058 [pii]. PMID: 28276451; PubMed Central PMCID: PMC5343423.

5. Ruan GP, ​​Wang JX, Pang RQ, Yao X, Cai XM, Wang Q a kol. Léčba výtažky z kuřecího bílku nebo celých vajec udržuje a zvyšuje přežití a diferenciaci buněk sleziny. Cytotechnologie. 2012; 64(5):541–51. Epub 22. 2. 2012. https://doi.org/10.1007/s10616-012-9431-8 PMID: 22350684; PubMed Central PMCID: PMC3432533.

6. Miyamoto K, Tsukiyama T, Yang Y, Li N, Minami N, Yamada M a kol. Bezbuněčné extrakty ze savčích oocytů částečně indukují přeprogramování jádra v somatických buňkách. Biol Reprod. 2009; 80(5):935–43. Epub 24. 1. 2009. https://doi.org/10.1095/biolreprod.108.073676 [pii]. PMID: 19164171.

7. Alberio R, Johnson AD, Stick R, Campbell KH. Diferenciální nukleární remodelace somatických buněk savců oocytem a vaječnou cytoplazmou Xenopus laevis. Exp Cell Res. 2005; 307(1):131–41. Epub 2005/06/ 01. S0014-4827(05)00088-1 [pii] https://doi.org/10.1016/j.yexcr.2005.02.028 PMID: 15922733.

8. Hansis C, Barreto G, Malory N, Niehrs C. Nukleární přeprogramování lidských somatických buněk extraktem z vajec Xenopus vyžaduje BRG1. Curr Biol. 2004; 14(16):1475–80. Epub 25. 8. 2004. https://doi.org/10. 1016/j.cub.2004.08.031 [pii]. PMID: 15324664.

9. Ruan GP, ​​Yao X, Shu J, Liu JF, Pang RQ, Pan XH. Extrakty z kuřecího bílku podporují expresi OCT4 a NANOG a růst telomer v buňkách 293T. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 2017; 63(7):59– 65. Epub 26. 8. 2017. https://doi.org/10.14715/cmb/2017.63.7.10 PMID: 28838341.

10. Alzahrani FA. Melatonin zlepšuje terapeutický potenciál exozomů odvozených z mezenchymálních kmenových buněk proti renálnímu ischemicko-reperfuznímu poškození u potkanů. Am J Transl Res. 2019; 11(5):2887-907. Epub 21. 6. 2019. PMID: 31217862; PubMed Central PMCID: PMC6556638.

11. Lee KW, Kim TM, Kim KS, Lee S, Cho J, Park JB a kol. Renální ischemicko-reperfuzní poškození v modelu diabetické opice a terapeutické testování mezenchymálních kmenových buněk pocházejících z lidské kostní dřeně. J Diabetes Res. 2018; 2018:5182606. Epub 30. 8. 2018. https://doi.org/10.1155/2018/5182606 PMID: 30155487; PubMed Central PMCID: PMC6092988.

12. Xie LB, Chen X, Chen B, Wang XD, Jiang R, Lu YP. Ochranný účinek mezenchymálních kmenových buněk kostní dřeně modifikovaných klotho na renální ischemicko-reperfuzní poškození. Ren Fail. 2019; 41(1):175–82. Epub 4. 4. 2019. https://doi.org/10.1080/0886022X.2019.1588131 PMID: 30942135; PubMed Central PMCID: PMC6450585.

13. Zhu G, Pei L, Lin F, Yin H, Li X, He W, et al. Exozomy z mezenchymálních kmenových buněk pocházejících z lidské kostní dřeně chrání před renálním ischemickým/reperfuzním poškozením přenosem miR-199a-3p. J Cell Physiol. 2019; 234(12):23736–49. Epub 2019/06/11. https://doi.org/10.1002/jcp.28941 PMID: 31180587.

14. Shen B, Liu J, Zhang F, Wang Y, Qin Y, Zhou Z a kol. CCR2 pozitivní exozom uvolněný mezenchymálními kmenovými buňkami potlačuje funkce makrofágů a zmírňuje ischemii/reperfuzi indukované poškození ledvin. Stem Cells Int. 2016; 2016:1240301. Epub 2016/11/16. https://doi.org/10.1155/2016/ 1240301 PMID: 27843457; PubMed Central PMCID: PMC5098097.

15. Ying MK, Chen ZM, Wang YC, Feng S, Lin C, Chen FF a kol. Vliv metanefrických mezenchymálních kmenových buněk po renálním ischemicko-reperfuzním poškození u myší. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2016; 96(20):1573– 7. Epub 2016/06/09. https://doi.org/10.3760/cma.j.issn.{12}}.2016.20.006 PMID: 27266685