Část 2: Identifikace dopaminergních neuronů, které mohou jak vytvořit asociativní paměť, tak akutně ukončit její behaviorální projev
Mar 19, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Dendrogramová analýza. Neuronové dendrogramy jsou 2D náčrty 3D rekonstrukcí neuronů od Eichlera et al. (2017). Jako "linearizované", zploštělé verze morfologicky komplexních neuronů jsou dendrogramy kompaktní vizualizace, které slouží k zobrazení prostorového rozložení synapsí. Podrobnosti algoritmu kreslení dendrogramu popsal Strauch et al. (2018). Stručně řečeno, dendrogramy jsou topologicky správné skici neuronů s dominantní primární větví nakreslenou jako přímka a kratšími bočními větvemi vychýlenými ve stereotypních úhlech a směřujícími střídavě nahoru a dolů, aby se zabránilo překrývání. Jsou nakresleny tak, aby délky kabelů a polohy synapse byly přibližně správné. Mírné úpravy pro zlepšení čitelnosti zahrnují automatické přeuspořádání symbolů synapse, aby se vyřešil nepořádek a překrývání (Strauch et al., 2018).
Pro analýzu synaptické organizace jsme vypočítali matici vzdálenosti (synapse) obsahující geodetické vzdálenosti (tj. vzdálenost jako "délku kabelu" podél neuronu) mezi umístěními všech synapsí na neuronu. Geodetické vzdálenosti byly vypočítány jako euklidovské vzdálenosti ve 3D souřadnicích rekonstruovaného neuronu procházením po větvích neuronu. Shlukovali jsme místa synapsí pomocí shlukování dělivé analýzy (DIANA) (Kaufman, 2005) fungující na matici geodetických vzdáleností. Na základě analýzy skóre siluety jsme nastavili počet shluků na neuron na 10. Shluky, které neobsahovaly všechny čtyři zájmové třídy synapsí (KC!DAN-i1, DAN-i1!KC, DAN-i1!MBON-i1 vlevo, DAN-i1!MBON-i1 vpravo) byly z analýzy odstraněny. Pro každý shluk byl centrální bod definován jako nejcentrálnější synapse shluku, jak bylo určeno rozdělením kolem shlukování medoidů (PAM s k=1 shlukem) (Kaufman, 2005) na základě vzdáleností geodetických synapsí v rámci shluku. Nakonec jsme určili geodetické vzdálenosti mezi všemi synapsemi a centrálním bodem shluku.
Experimentální design a statistická analýza. Byly použity dvoustranné neparametrické testy a statistické předpoklady pro tyto testy byly po celou dobu splněny. Když bylo provedeno více srovnání v rámci jedné analýzy, byla použita Bonferroni-Holmova korekce, aby se chybovost v celém experimentu udržela na 5 procentech (Holm, 1979). Všechny provedené statistické testy a jejich výsledky jsou uvedeny na Obr. Rozšířená data 1-1 spolu se zdrojovými daty.
U všech behaviorálních experimentů byly hodnoty porovnány napříč několika skupinami pomocí Kruskal-Wallisových testů. V případě významnosti použila následná párová srovnání Mann–Whitney U testy. Pro testování, zda se hodnoty dané skupiny liší od nuly, byly použity jednovýběrové znaménkové testy.
Experimenty na obrázcích 1, 6C–F a 8 se řídily dvouskupinovým designem a porovnávaly dvě testovací podmínky pro experimentální genotyp. Obě skupiny byly porovnány Mann–Whitney U testem a jejich významnost od nuly byla testována jednovýběrovými znaménkovými testy.
Experimenty na obrázcích 6A, B se řídily šestiskupinovým designem se třemi genotypy (experimentální genotyp exprimující ChR2-XXL, ovladač a efektorová kontrola) a dvěma testovacími podmínkami. Nejprve byl u všech skupin proveden Kruskal-Wallisův test. V případě významnosti jsme provedli párové Mann–Whitney U-testy mezi experimentálním genotypem a každou z genetických kontrol stejného testovacího stavu a také mezi testovacími podmínkami pro experimentální genotyp (celkem pět Mann–Whitney U testů) . Každá skupina byla testována na svou významnost od nuly jednovýběrovými znaménkovými testy.
Experimenty na obrázku 7 se řídily třískupinovým designem se zvířaty experimentálního genotypu exprimujícími ChR2-XXL. Po úvodním Kruskalově–Wallisově testu napříč všemi skupinami jsme provedli párové Mann– Whitney U testy pro skupinu bez expozice modrému světlu po tréninku a pro obě ostatní skupiny. Pro každou skupinu byla testována významnost od nuly (jednovzorkové znaménkové testy).
Experimenty na obrázcích 9 a 10 následovaly čtyřskupinový design se zvířaty experimentálního genotypu exprimujícími ChR2-XXL. Po úvodním Kruskalově–Wallisově testu napříč všemi skupinami jsme provedli párové Mann–Whitney U testy mezi skupinami, které absolvovaly párový a nepárový výcvik v rámci stejných testovacích podmínek, a mezi testovacími podmínkami pro daný druh výcviku (celkem čtyři Mann–Whitneyho U testy). Nebyly provedeny žádné jednovzorkové znaménkové testy.
Údaje o chování prezentujeme jako krabicové grafy s mediánem jako střední čárou a 25 procent / 75 procent a 10 procent / 90 procent jako hranice krabice a vousy. Odlehlé hodnoty se nezobrazují. Experimentátoři byli slepí vůči genotypu a ohledně nepřítomnosti nebo přítomnosti cukrové odměny během testu stažení, pokud to bylo vhodné. Velikosti vzorků (biologické replikace) byly vybrány na základě předchozích studií odhalujících střední až mírné velikosti účinku (Paisios et al., 2017; Saumweber et al., 2018) a jsou zobrazeny v legendách obrázků. Velikost vzorku n =1 zahrnovala; 20 zvířat obou pohlaví pro všechny experimenty s vrozenými preferencemi a 2 20 zvířat (20 pro každou recipročně trénovanou skupinu) obou pohlaví pro všechny experimenty s učením.
Abychom porovnali počty synapsí mezi ipsilaterálními a kontralaterálními stranami neuronů MBON-i1 (viz obr. 3A), testovali jsme jejich distribuci pomocí x2 testů, zvlášť pro synapse KC!MBON-i1 a synapse DAN-i1!MBON-i1. Abychom porovnali vzdálenosti synapsí ke středu jejich příslušné středo-kolové struktury na neuronu DAN-i1 (viz obr. 4C, D), provedli jsme Kruskal–Wallisův test napříč všemi typy synapsí, stejně jako párový Mann–Whitney U testy mezi všemi typy synapsí (celkem 6 Mann–Whitney U-testů), zvlášť pro levý a pravý neuron DAN-i1.
Výsledek
Prostorové uspořádání synapsí v matici DAN-KC-MBON
Nedávná rekonstrukce kompletního obvodu těla larvy houby pomocí elektronového mikroskopu poskytla konektom DAN, KC a MBON na základě počtu chemických synapsí mezi nimi (Eichler et al., 2017). Axonální větve
Obrázek 3. Organizace synaptických vstupů do neuronu MBON-i1. Počet KC!MBON-i1 a DAN-i1!MBON-i1 synapsí ke každému MBON-i1 neuronu, oddělených hemisférou. Oba neurony MBON-i1 mají více synapsí s těmito KC a že DAN-i1 se nachází v hemisféře kontralaterálně k jejich buněčnému tělu. *Významné testy x2 (p, 0.05, opraveno podle Bonferroni-Holma). Data jsou od Eichlera et al. (2017). B, Semischematický přehled distribuce synapsí z ipsilaterální a kontralaterální hemisféry do MBON-i1. KC a oba neurony DAN-i1 tvoří více synapsí s kontralaterální částí MBON-i1 než s jeho ipsilaterální částí. C, Distribuce počtu zralých KC tvořících uvedený počet synapsí s levým nebo pravým neuronem MBON-i1. KC z levé hemisféry tvoří méně synapsí s levým než pravým neuronem MBON-i1 (vlevo). KC z pravé hemisféry naopak tvoří více synapsí s levou než pravou MBON-i1 (vpravo). Vzhledem k tomu, že KC nepřekračují střední linii, všechny synapse, které např. pravý MBON-i1 tvoří s KC z levé hemisféry, jsou umístěny na části MBON-i1 kontralaterálně k tělu buňky. D, Navzdory skutečnosti, že neurony MBON-i1 dostávají méně vstupu z KC hemisféry ipsilaterálně k jejich buněčným tělům než z kontralaterální hemisféry, oba neurony MBON-i1 dostávají informace o celém prostoru vstupů KC v obou hemisféře. Abychom určili vztah mezi MBON-i1 a senzorickým vstupem promítaným do KC, celkový vstup, který MBON-i1 přijímá od KC, které zase přijímají vstup z uniglomerulárních čichových projekčních neuronů (PN) (bílé a tmavě šedé), multiglomerulárních čichových PN (světle šedé) a neolfaktorické PN (černé) byly vzaty v úvahu pro výpočet maticového součinu příslušných synapsí PN!KC a KC!MBON-i1. To bylo provedeno samostatně pro MBON-i1 vlevo a jeho připojení napravo (tj. kontralaterální) KC (vlevo nahoře) a ty nalevo (tj. ipsilaterální) KC (vpravo nahoře) a odpovídajícím způsobem pro MBON-i1 vpravo ( dno). Data jsou založena na Eichler et al. (2017). Všechny statistické testy a jejich výsledky jsou uvedeny spolu se zdrojovými daty na obrázku rozšířených dat 1-1.
jednotlivé DAN a dendritické větve jednotlivých MBON jsou každá omezena a překrývají se ve specifických kompartmentech spolu se svazky axonů KC (larvy: Pauls et al., 2010;
Eichler a kol., 2017; Saumweber a kol., 2018; Eschbach a kol., 2020; dospělí: Aso et al., 2014a; Takemura a kol., 2017). DAN-i1 inervuje i-kompartment mediálního laloku těla houby (někdy nazývaný horní prst mediálního laloku). Rekonstrukce odhalila, že nejen signalizuje KC, ale ve skutečnosti má dva hlavní cíle: KC a MBON-i1 (obr. 2A, B) (Eichler et al., 2017). V souladu s tím má MBON-i1 dva hlavní upstream partnery: KCs a DAN-i1. Podobná organizace DAN a MBON se nachází v tělních kompartmentech hub (larvy: Eichler et al., 2017; dospělí: Takemura et al., 2017). Konkrétně pro DAN-i1 je 75 procent a 21 procent jeho výstupních synapsí v těle houby připojeno ke KC a MBON-i1, v daném pořadí, a MBON-i1 přijímá; 74 procent a 14 procent svých vstupních synapsí v těle houby z KCs, respektive DAN-i1 (Eichler et al., 2017; Saumweber et al., 2018). I když jsou takové analýzy v mnoha ohledech informativní, neberou v úvahu prostorové uspořádání synapsí podél neuronů. Abychom osvětlili toto uspořádání v i-kompartmentu, používáme dendrogramy, které nám umožňují zobrazit komplexní 3D Gestalt neuronu jako 2D náčrt, který zachycuje jeho větvenou strukturu, zachovává délky větví a identifikuje umístění synapse podél větví ( Strauch a kol., 2018). Takové podrobné analýzy předčí rozlišení, kterým lze v současnosti manipulovat s neurony u volně se chovajícího zvířete (Aso a Rubin, 2020). Přesto nabízejí pohled na skutečnou složitost zkoumaných neuronů a na výpočetní implikace motivů obvodů, kterých jsou součástí (viz také Bilz et al., 2020). Z našich analýz zdůrazňujeme následující body (snímky neuronů DAN-i1 a MBON-i1 s vysokým rozlišením z obou hemisfér a všech zralých KCs jsou dostupné na obrázcích rozšířených dat 2-1, 2-2 a 2-3, v tomto pořadí):
• DAN-i1 i MBON-i1 mají masivní mezihemisférická spojení. To je pozoruhodné vzhledem k tomu, jak málo je jinak pozorováno interhemisférické přeslechy podél vzestupných cest, včetně KC (obr. 2A) (Berck et al., 2016; Eichler et al., 2017; Saumweber et al., 2018; Thum a Gerber, 2019 ). Konkrétně jsou oba neurony DAN-i1 recipročně spojeny s většinou zralých KC v obou hemisférách. Neurony DAN-i1 navíc poskytují výstup oběma neuronům MBON-i1, ipsilaterálně i kontralaterálně (obr. 2E; obrázky obou neuronů DAN-i1 s vysokým rozlišením viz rozšířená data obr. 2-1). To znamená, že každý neuron MBON-i1 zase přijímá vstup od obou neuronů DAN-i1, ipsilaterálně i kontralaterálně (obr. 2F; obrázky obou neuronů MBON-i1 s vysokým rozlišením viz rozšířená data obr. {{28} }}). Podobně neurony MBON-i1 přijímají vstup z většiny zralých KC v obou hemisférách (Eichler et al., 2017) a poskytují výstup mimo tělo houby, také v obou hemisférách. Dendrogramy konkrétněji ukazují, že výstupy z DAN-i1 na neuron MBON-i1 ipsilaterální a kontralaterální hemisféry jsou promíchány, stejně jako vstupy do MBON-i1 z neuronu DAN-i1 ipsilaterální a kontralaterální hemisféry (obr. 2E,F). Je pozoruhodné, že MBON-i1 není hemisféricky symetrický, pokud jde o počet synapsí, které přijímá v těle houby: oba neurony MBON-i1 přijímají více synapsí na hemisféře kontralaterálně k jejich buněčným tělům (obr. 2F, 3A, B); nicméně oba neurony MBON-i1 dostávají informace o kompletním senzorickém vstupním prostoru v každé hemisféře (obr. 3C,D).
cistanche pharma special
• Vzorce větvení DAN-i1 a MBON-i1 jsou strukturovány do několika hlavních oblastí. Pro DAN-i1 lze identifikovat tři takové hlavní oblasti. Počínaje buněčným tělem, v první oblasti, DAN-i1 přijímá vstup od svých partnerů zvenčí těla houby (označené 1 na obr. 2C–E) (Eschbach et al., 2020), zatímco druhá a třetí oblast se shodují s i-kompartmentem ipsilaterálního a kontralaterálního těla houby (označené 2 a 3 na obr. 2C–F). V těle houby je DAN-i1 recipročně připojen ke KC a poskytuje výstup směrem k MBON-i1. Primární neurit MBON-i1 protíná střední linii a neuron pak inervuje i-kompartment těla houby kontralaterálně k tělu jeho buňky (oblast označená 3 na obr. 2C–F); zde přijímá vstup především od KC a DAN-i1. Poté MBON-i1 přejde zpět přes střední čáru a podobně inervuje tělo houby ipsilaterálně k tělu buňky (oblast označená 2 na obr. 2C–F). Kromě toho má MBON-i1 několik malých větví v obou hemisférách, které se spojují s partnery v blízkosti těla houby, ale bezprostředně mimo něj.
• V těchto oblastech nelze identifikovat dělení podobná kompartmentům, která jsou rozpoznatelná v neuronech DAN-i1 a MBON-i1 obou hemisfér (obr. 2E,F; rozšířená data obr. 2-1, {{7 }}). Pro neurony DAN-i1 jsou však patrné mnohočetné laterálně „idiosynkratické“ struktury bohaté na synapse uprostřed a okolí (obr. 4). Směrem k jejich středu se nalézají všechny výše uvedené typy synapsí matice DAN-KC-MBON, přičemž v jejich okolí se vyskytují téměř výhradně synapse KC!DAN (obr. 4). Je pozoruhodné, že jakýkoli daný KC obvykle zakládá všechny své synapse pouze v jedné nebo dvou z těchto středově obklopujících struktur (rozšířená data obr. 1-1).
• Pokud jde o zralé KC, 86 procent a 88 procent z nich vytváří synapse s levým a pravým neuronem DAN-i1 a 78 procent a 74 procent s levým a pravým neuronem MBON-i1, v tomto pořadí. Jednotlivé KC mají mediány 4 KC!DAN-i1, 4 DAN-i1!KC a 5 KC!MBON-i1 synapsí (Eichler et al., 2017; více podrobností o DAN-i1 viz Saumweber et al., 2018 ). Podle dendrogramů všech jednotlivých KC jsou KC!DAN-i1, DAN-i1!KC a KC! Zdá se, že synapse MBON-i1 jsou promíchané bez zjevného dělení napříč polem KC, stejně jako synapse s levým a pravým neuronem DAN-i1 a levým a pravým neuronem MBON-i1 (ExtendedDataFig.2-3).
Společně tyto analýzy odhalují detailní prostorovou organizaci matice DAN-KC-MBON i-oddělení. Je třeba poznamenat, že synapse DAN-i1 s jeho dvěma hlavními cíli, KC a MBON-i1, jsou lokálně promíseny ve více strukturách bohatých na synapse podél axonálních větví DAN-i1, spíše než aby byly mezi nimi odděleny ( obr. 2E, 4; rozšířená data obr. 2-1). Taková architektura by mohla znamenat, že DAN-i1 dodává korelované, spíše než nezávisle modulované signály do KC a MBON-i1 v rámci těchto struktur bohatých na synapse.
Může dojít k aktivaci stejných neuronůPaměťa ukončit jeho odvolání
Zaujalo nás, že DAN-i1 má dva hlavní cíle, a to KCs a MBON-i1; že jeho synapse s těmito dvěma cíli jsou tak těsně promíchány; a že přirozené odměny mají dvě funkce, totiž zakládatPaměťv tréninku a akutně ukončit projev tohoto chováníPaměťpři vyvolávacím testu (obr. 1A) (Gerber and
Obrázek 4. Organizace synapsí na neuronu DAN-i1. Shluková analýza odhalila, že synapse z a do levého neuronu DAN-i1 v oblastech 2 a 3 (viz obr. 2) jsou uspořádány do šesti shluků (označených jako 29 299 atd.). Zdá se, že tyto shluky mají organizaci střed-okolí: směrem k jejich středu se nacházejí synapse DAN!KC, KC!DAN a DAN!MBON, zatímco jejich obklopující prvky jsou téměř výhradně synapse KC!DAN. B, Stejné jako v A, ale pro pravý neuron DAN-i1. Lze identifikovat sedm středově obklopujících struktur. C, Abychom kvantifikovali tuto organizaci synapsí, určili jsme vzdálenost (v délce kabelu podél neuronu) různých typů synapsí do středu jejich příslušného shluku a zjistili jsme, že synapse KC!DAN jsou dále od středu než všechny ostatní typy. synapsí. To potvrzuje organizaci klastrů jako středově obklopujících struktur. D, Stejné jako v C, ale pro pravý neuron DAN-i1. E, Schematický náčrt struktury střed-okolí (nahoře) a zvětšení spojů ve středu (dole). Různá písmena nad rámečkovými grafy označují párovou významnost (Mann–Whitney U test, p, 0.05, opraveno podle Bonferroni-Holma). Všechny statistické testy a jejich výsledky jsou uvedeny spolu se zdrojovými daty na obrázku rozšířených dat 1-1.
cistanche pharma special
Hendel, 2006; Schleyer a kol., 2011, 2013, 2015a,b, 2018; Paisios a kol., 2017). Zajímalo nás proto, zda optogenetická aktivace DAN v tréninku a během testu může poskytnout tyto dvě funkce. Začali jsme s použitím kmene ovladače 58E02- Gal4, který pokrývá DAN-i1 plus dva DAN inervující další kompartmenty mediálního laloku (obr. 5A, B) (Rohwedder et al., 2016) a UAS-ChR{ {14}}XXL jako efektorový kmen (Dawydow et al., 2014). 58E02-DAN byly aktivovány buď spárované, nebo nespárované se zápachem při tréninku a rozdíl v preferenci zápachu v následném testu vyvolání byl použit ke kvantifikaci asociativníPaměťpřes PI. Pozorovali jsme pozitivní PI skóre indikující apetitivní asociativníPaměťv experimentálním genotypu, zatímco genetické kontroly heterozygotní buď pouze pro transgenní efektor nebo konstruktor řidiče, neukázalyPaměť(Obr. 6A, horní, černě vyplněné krabicové grafy) (Rohwedder et al., 2016). Aktivace 58E02-DAN během tréninku tedy může poskytnout signál odměny pro asociativníPaměťformace.
Dále jsme experiment zopakovali, ale aktivovali jsme 58E02-DAN také během testu stažení. Tím se sníží hodnoty PI (tjPaměť-založené vyhledávání) na přibližně polovinu (obr. 6A, horní, modře vyplněné krabicové grafy; replikaci tohoto výsledku viz obr. 6C). Kriticky, stejně jako v případě přirozených odměn (obr. 1B) (Schleyer et al., 2011, 2015a,b), aktivace 58E02-DAN neovlivnila vrozené čichové chování (obr. 6A, dole). Aktivace 58E{11}} DAN tedy může také poskytnout signál ukončení akutního vyhledávání během testu odvolání.
Předchozí experimenty ukazují, že tři 58E02- DAN mohou poskytnout stejné dva signály jako přirozenou odměnu (tj.
Obrázek 5. Vzorec transgenní exprese kmenů ovladače 58E02-DAN a 864-DAN. A, B, Předchozí analýza kmene ovladače 58E02-DAN založená na vyklápění identifikovala neurony DAN-h1, DAN-i1 a DAN-j1 (také nazývané pPAM1, pPAM3 a pPAM4), jako stejně jako jeden další neuron mimo tělo houby (Rohwedder et al., 2016). Tento vzorec byl potvrzen: kmen ovladače byl zkřížený buď s (A1-A5) pJFRC-10xUAS-IVS-mCD8::GFP nebo (B1-B4) UAS-ChR{{ 27}}XXL. AI, B1, signál protilátky a-GFP nebo a-ChR, v daném pořadí. A2, B2, Signál barvení pozadí prostřednictvím protilátky a-FASII nebo a-HRP. A3, B3, Sloučení příslušných signálů. A4, B4, Částečná z projekce odhaluje silnou inervaci mediálního laloku těla houby. A5, Není detekována inervace laterálního apendixu (šipka). C, D, Bylo hlášeno, že 864-kmen ovladače DAN se silně projevuje v DAN-i1 (Saumweber et al., 2018). Zde jsme to přešli na (C1-C5) pJFRC-10xUAS-IVS-mCD8::GFP nebo (D1-D4) UAS-ChR2-XXL. Cl, D1, signál a-GFP nebo a-ChR protilátky, v daném pořadí. C2, D2, Signál barvení pozadí prostřednictvím protilátky a-FASII nebo a-HRP. C3, D3, Sloučení příslušných signálů. C4, D4, Částečná z projekce odhaluje silnou inervaci i-kompartmentu v obou hemisférách (šipky), což potvrzuje expresi v DAN-i1. C5, Jak již bylo uvedeno (Saumweber et al., 2018), kmen řidiče se občas exprimuje v dalších neuronech, ale pokud ano, typicky pouze v jedné mozkové hemisféře a v neuronech lišících se identitou mezi přípravky. Relativně nejčastěji jsme pozorovali neuron MBON-d1, inervující laterální apendix v jedné hemisféře (šipka). U více zvířat použitých pro náš skupinový test není pravděpodobné, že by taková stochastická další exprese způsobila systematické účinky.
signál odměny během tréninku a signál ukončení hledání během testu odvolání). Zůstává však nejasné, zda každý ze tří DAN poskytuje oba signály, nebo zda existuje dělba práce, přičemž za signál odměny a signál ukončení vyhledávání jsou zodpovědné různé DAN. Zvolili jsme proto split-Gal4 driver kmen 864, který podporuje silnou a spolehlivou expresi transgenu pouze v jedné z DAN pokrytých 58E02-DAN, neuronu DAN-i1, na obou hemisférách ( Obr. 5C, D) (Saumweber et al., 2018). Asociativní 864-aktivace DAN v tréninku stanovila pozitivní výkonnostní indexy (tj.Paměť-založené vyhledávání; Obr. 6B, horní, černě vyplněné krabicové grafy) (Saumweber et al., 2018). Aktivace 864-DAN také během testu odvolání to ukončilaPaměť-založené vyhledávání (obr. 6B, horní, modře vyplněné rámečky). Tři nezávislé soubory dat potvrzují pozorování ladění vyhledávání (obr. 6D–F). Vrozené čichové chování nebylo ovlivněno864-aktivací DAN (obr. 6B, dole).
Již dříve bylo zjištěno, že aktivita DAN mezi tréninkem a testem odvolání (tj. během retenčního období) podporuje zapomínání u dospělých D. melanogaster (Berry et al., 2012, 2015; Shuai et al., 2015; Aso a Rubin, 2016). Zajímalo nás proto, zda by v našem paradigmatu 864-aktivita DAN podporovala zapomínání, na rozdíl od akutního ukončení vyhledávání založeného na paměti a opuštěníPaměťneporušený. Pro testování této možnosti byly larvy vycvičeny jako dříve, ale před stažením
Obrázek 6. Aktivace stejných neuronů může nastatPaměťa ukončit jeho odvolání. A Top, Larvy byly trénovány s pachem, který byl buď spárovaný, nebo nepárový, s aktivací 58E02-DAN modrým světlem. V testu vyvolání pozitivní hodnoty PI v experimentálním genotypu, ale ne v genetických kontrolách, indikují naučené vyhledávací chování založené na asociativní paměti pro pach (krabicový graf zcela vlevo). Během tréninku tak může aktivace 58E02-DAN zprostředkovat signál odměny. ThePaměť- vyhledávání experimentálního genotypu bylo vyladěno, když byl 58E02-DAN aktivován také modrým světlem během testu vyvolání (boxový graf zcela vlevo). Aktivace 58E02 tedy může také poskytnout signál ukončení vyhledávání. Velikosti vzorků: 16, 15, 17, 18, 15, 18. Dole byly larvy testovány na vrozenou preferenci pachu, buď v nepřítomnosti nebo v přítomnosti modrého světla. Všechny genotypy preferovaly vůni stejně silně za obou podmínek, což naznačuje, že aktivace 58E02-DAN neměla žádný vliv na vrozenou preferenci pachu. Velikosti vzorků: 24 každý. B, Stejné jako v A, ale s 864-aktivací DAN modrým světlem. Nahoře, kladné PI, a tedyPaměť-založené vyhledávání, bylo pozorováno pouze u experimentálního genotypu a pouze tehdy, když byl test vyvolání proveden ve tmě. Velikosti vzorků: 19, 19, 19, 19, 19, 20. Dole, 864-Aktivace DAN neměla žádný vliv na vrozenou preferenci pachu. Velikosti vzorků: 16 každý. C, V replikaci experimentu zobrazeného v A (nahoře) pro experimentální genotyp, larvy ukázalyPaměť-založené hledání ve tmě. Když bylo 58E02-DAN aktivováno modrým světlem během zkušebního testu, toto vyhledávání bylo vyladěno. Velikosti vzorků: 15, 16. D, V replikaci experimentu ukázaného v B (nahoře) pro experimentální genotyp, larvy vykazovalyPaměť-založené hledání ve tmě. Když byl během testu vyvolání aktivován 864-DAN, toto vyhledávání bylo ukončeno. Velikosti vzorků: 28, 28. E, V další replikaci D byl test proveden na Petriho misce o vnitřním průměru 9 cm místo 15 cm.Paměťvyhledávání založené na vyhledávání během testu vyvolání bylo pozorováno ve tmě a v tomto případě bylo částečně vyladěno aktivací 864-DAN. Velikosti vzorků: 22, 22. F, Larvy byly trénovány v diferenciální, dvoupachové verzi experimentu s použitím n-amylacetátu zředěného 1:50 a neředěného 1-oktanolu. Vyvolávací test byl proveden na Petriho misce o vnitřním průměru 9 cm. ThePaměťvyhledávání založené na tmě bylo pozorováno ve tmě a bylo vyladěno prostřednictvím 864-aktivace DAN. Velikosti vzorků: 26, 26. Různá písmena nad krabicovými grafy označují párovou významnost (Mann–Whitney U test, p, 0.05, opraveno podle Bonferroni-Holma). *Významnost od nuly (jednovzorkový znaménkový test, p, 0.05, opraveno podle Bonferroni-Holma). ns: Nevýznamnost ve všech experimentálních podmínkách (Kruskal–Wallisův test, s. 0,05). Všechny statistické testy a jejich výsledky jsou uvedeny spolu se zdrojovými daty na obrázku rozšířených dat 1-1.
Obrázek 7. Aktivace 864-DAN mezi tréninkem a testem připomenutí nezlepšuje zapomenutí ani zánik. Skupina larev byla vycvičena jako na obrázku 6. Poté byly larvy drženy buď ve tmě nebo modrém světle po dobu 3 minut (Počkejte) a následně byly testovány. Když byl tento test vyvolání proveden ve tmě, aPaměťvyhledávání na základě bylo pozorováno nezávisle na světelných podmínkách, a tedy nezávislé na 864-aktivitě DAN, během fáze čekání (levý a prostřední rámeček grafu). Potvrdili jsme, že také po takové čekací době 864- skončí aktivace DAN během testu staženíPaměť-založené vyhledávání (pravý krabicový graf). Velikosti vzorků: 25, 24, 19. B, Stejné jako v A, ale tentokrát se zápachem přítomným během čekací doby. Velikosti vzorků: 28 každý. Různá písmena nad rámečkovými grafy označují párovou významnost (Mann–Whitney U test, p, 0.05, opraveno podle Bonferroni-Holma). *Významnost od nuly (jednovýběrový znaménkový test, p, 0,05, korigováno podle Bonferroni-Holma). Všechny statistické testy a jejich výsledky jsou uvedeny spolu se zdrojovými daty na obrázku rozšířených dat 1-1.
cistanche pharma special
