Část 2: Extrakty z Cistanche Deserticola mohou antagonizovat imunosenescenci a prodloužit životnost u myší s urychleným stárnutím 8 (SAM-P8) myší

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

3.5. Výtažky dfCistanche deserticola(ECD)Propagujte.

Apoptóza a inhibice nekrózy lymfocytů u myší SAM-P8. Hladiny nekrózy a apoptózy v populacích krevních lymfocytů byly analyzovány dvojitým barvením Annexinem V-FITC V/PI. To odhalilo, že podíl nekrotických lymfocytů u SAM-P8mic byl významně vyšší než u kontrolních zvířat SAM-R1, zatímco podíl apoptotických lymfocytů byl nižší (obrázek 7). Doplnění stravy myší SAM-P8 třemi různými dávkami ECD dokázalo inhibovat hladiny nekrózy pozorované v populacích periferních lymfocytů, zatímco pouze dvě vyšší hladiny suplementace ECD vyvolaly významnou změnu hladiny apoptotických lymfocytů (obrázek 7).

3.6.Výtažky zCistanche deserticola(ECD) Snižte prozánětlivý cytokin IL-6 u myší SAM-P8.

Dalším ukazatelem schopnosti ECD ovlivňovat změny imunitního systému související s věkem je účinek doplňování stravy ECD na hladinu řady cytokinů (IFN-, TNF-, IL-2.IL{{4 }}.IL-10, GM-CSF a IL-3) byly analyzovány pomocí cytometric bead array analysis (CBA), která zahrnuje barvení fluorescenčním barvivem značených protilátek spojených se zachytávacími cytometrickými kuličkami. Výsledky (obrázek 8) ukázaly, že zánětlivý cytokin IL-6 nebyl zvýšen u 8-měsíců starých myší SAM-P8 ve srovnání s kontrolními myšmi SAM-R1 stejného věku, ale byl významně zvýšen, když ve srovnání s6-měsíc starými myšmi SAM-R1 (výsledky nejsou zobrazeny). Doplnění stravy vysokými a středními dávkami ECD však dokázalo vyvolat statisticky významný pokles hladiny IL-6 v plazmě (obrázky 8(a) a 8(b),<>

(IFN-,TNF-,IL-2,IL-10, GM-CSF a IL-3) nevykazovaly žádné významné rozdíly mezi skupinami myší léčenými SAM-P8, SAM-R1 a ECD (data není zobrazeno).

4. Diskuze

Imunitní obrana proti nově invazivním mikroorganismům nebo endogenním nádorovým buňkám závisí na rozmanitosti repertoáru T lymfocytů, který zase závisí na tvorbě a udržování naivních T lymfocytů[19]. Ukázalo se, že během procesu stárnutí se rozmanitost repertoáru T-buněk dramaticky zmenšuje v důsledku progresivního vyčerpání naivních T-buněk v periferní rezervní zásobě. Právě tento nedostatek citlivých naivních T-buněk byl považován za odpovědný za náchylnost starších lidí k infekci, rakovině a špatným výsledkům po očkování [20]. Různé intervence, včetně kalorické restrikce [7], cvičení [21] a suplementace vitaminu E [8], byly všechny použity k úspěšnému doplnění naivních T-buněk, a tím k prodloužení délky života a snížení propuknutí infekce a rakoviny u starších osob. V této studii jsme prokázali, že ECD je schopen zvýšit hladinu naivních T buněk v periferním poolu a současně došlo k prodloužení délky života a snížení frekvence tvorby nádorů u myší s akcelerací stárnutí (ECDterapeutická skupina versus SAM-P8 0 oproti 1/6). Proto se zdá rozumné dojít k závěru, že schopnost ECD zvrátit věkově závislou depleci periferních naivních T-buněk může přispívat k jejím známým účinkům při snižování onemocnění souvisejících s věkem, které vyplývá z dlouhodobých klinických pozorování.

5. Materiály a metody

5.1.Materiály.

Při normální imunitní odpovědi po zadržení a eliminaci cizího antigenu většina klonálně expandovaných T-buněk podstoupí apoptózu, přičemž pouze malá část zůstane zachována jako paměťové T-buňky. V důsledku toho, jak imunitně kompetentní organismus stárne, se periferní paměťové T buňky hromadí jako výsledek celoživotního vystavení cizím antigenům, které přeměňují naivní T-buňky na paměťové buňky [22,23]. Řada studií naznačuje, že defekty apoptózy lymfocytů u starších zvířat a lidí také přispívají ke zvětšení kompartmentu paměťových T-buněk [24,25]. Nedávná studie navíc ukázala, že nadbytek periferních paměťových T-buněk může inhibovat homeostatickou proliferaci naivních T-buněk [26]. Tyto nedávné studie také naznačily, že paměťové T buňky mohou vylučovat vysoké hladiny prozánětlivých cytokinů, které mohou přispívat k přetrvávajícím zánětům v různých tkáních starších osob. V důsledku toho by snížení hladiny paměťových T-buněk mělo být prospěšné jak pro homeostatickou proliferaci naivních T-buněk, tak také pro zmírnění nadměrného zánětlivého stavu pozorovaného u starších organismů. V této studii bylo prokázáno, že suplementace stravy s ECD je schopna snížit hladinu periferních paměťových T buněk a zvýšit hladiny naivních T buněk. Kromě toho suplementace ECD zvýšila prostor pro apoptózu pro nové naivní lymfocyty. Inhibována byla také nekróza periferních lymfocytů, která je u senilních zvířat hlavně indukována oxidačním stresem.

Existují rozsáhlé důkazy, které naznačují, že stárnutí v organismu není charakterizováno pouze imunitní nedostatečností, ale také nárůstem chronického zánětu[27]. Prozánětlivý stav se nejzřetelněji projevuje zvýšením a IL-1 v oběhu ve spojení se zvýšenou frekvencí chronických zánětlivých onemocnění spojených se stárnutím, jako je Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba a ateroskleróza. Jednou z nejvýznamnějších zánětlivých cytokinezí je IL-6 a jeho plazmatická koncentrace se zvyšuje se stárnutím a nemocemi souvisejícími s věkem [18,28,29] a epidemiologické studie naznačují, že IL-6 je dobrým biomarkerem dlouhověkosti protože úzce souvisí s mortalitou u starších kohort pacientů [30,31]. V souladu s tím existuje řada terapeutických intervencí, které snižují koncentraci IL{10}}

Obrázek 6: Účinky doplňku stravy ECD na antigen kmenových buněk-1 (Sca{2}}) v lymfocytech periferní krve myší SAM-P8. Osmiměsíční samci myší SAM-P8 a kontrolní myši SAM-RI byli rozděleni do 5 skupin. 3 léčebné skupiny zvířat SAM-P8 byly krmeny po dobu čtyř týdnů dietami doplněnými o nízké (100 mg/kg), střední 500 mg/kg a vysoké 250 mg/kg) dávky ECD a dvě kontrolní skupiny zvířat byly krmeny stejná strava bez suplementace. Po 12hodinovém hladovění byla zvířatům v anestezii odebrána periferní krev a podrobena analýze FACS, vše jak je popsáno v části 5. (a) Reprezentativní FACS grafy různých skupin myší vytvořené vrátkováním antigenu kmenových buněk-1 (Sca{{{101} 20}})pozitivní buňky.(b) Histogram ukazující procento antigenu kmenových buněk-1 (Sca{22}})pozitivních buněk v periferní krvi různých skupin zvířat. Barvy představují SD masa (v každé skupině,{ {23}}).w*<0.01 sam-p8="" versus="" sam-r1;**=""><0.01 each="" treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Obrázek 7: Účinky doplňku stravy ECD na apoptózu a nekrózu lymfocytů u starých myší SAM-P8. Osmiměsíční samci myší SAM-P8 a kontrolní myši SAM-RI byli rozděleni do 5 skupin. 3 léčebné skupiny zvířat SAM-P8 byly krmeny po dobu čtyř týdnů dietami doplněnými o nízké (100 mg/kg), střední (500 mg/kg) a vysoké (2500 mg/kg) dávky ECD a dvě kontrolní skupiny zvířat byly krmeny stejná strava bez suplementace. Po 12hodinovém hladovění byla zvířatům v anestezii odebrána periferní krev a podrobena analýze FACS, vše jak je popsáno v části 5. (a) Reprezentativní FACS grafy různých skupin myší vytvořené gatingem na dvojitě obarvených krevních lymfocytech s Annexinem V-FITC /PI. (b) Histogram ukazující procento apoptotických lymfocytů (buňky pozitivní na Annexin V-FITC) v periferní krvi různých skupin zvířat. (c) Histogram ukazující procento nekrotických lymfocytů (PI-pozitivních buněk) v periferní krvi různých skupin zvířat. Sloupce představují průměrnou SD (v každé skupině,= 10)."<0.05 sam-p8=""><0.05each treated="" groupversussam-p8group(by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Obrázek 8: Účinky doplňku stravy ECD na hladinu prozánětlivého cytokinu L6 v séru u myší SAM-P8. Osmiměsíční samci myší SAM-P8 a kontrolní SAM-RI myši byli rozděleni do 5 skupin. Tyto 3 léčebné skupiny zvířat SAM-P8 byly krmeny po dobu čtyř týdnů dietou doplněnou o nízkou (100 mg/kg), střední (500 mg/ kg) a vysoké (2500 mg/kg) dávky ECD a dvě kontrolní skupiny zvířat byly krmeny stejnou stravou bez suplementace. Po 12hodinovém hladovění byly plazmy shromážděny a plazmatické cytokiny v různých zvířecích skupinách byly stanoveny imunotestem s cytometrickými kuličkami, vše jak je popsáno v části 5. (a) Reprezentativní EACS grafy různých skupin myší generované gatingonIL-6 pole cytometrických kuliček. (b) Histogram ukazující koncentrace cytokinu IL6 v plazmě různých skupin zvířat. Sloupky představují průměr ± SD (v každé skupině,=10).<0.001each treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

zmírňují nemoci související s věkem [18]. Na tomto pozadí bylo významné, že v této studii dietní suplementace ECD dokázala snížit periferní koncentrace IL-6, s tím, že tento účinek může přispívat k základním mechanismům snižování frekvence onemocnění souvisejících s věkem, které byly získány dlouhodobým používáním ECD v klinické praxi.

Vedle změn v adaptivní imunitní odpovědi, ke kterým dochází s věkem, dochází také k velkým změnám v přirozené imunitě, jak organismus stárne. Mezi nimi jsou rozsáhlé změny v přirozených zabíječských [18] buňkách, první linii buněčných složek zajišťujících přímou cytotoxickou lýzu nádorových buněk a buněk infikovaných virem, protože starší lidé vykazují zvýšenou náchylnost jak k rozvoji nádorů, tak k virovým infekcím [32]. ]. Tato studie ukázala, že CD3 plus Ly49 plus NK buňky byly přítomny ve významně nižších hladinách u senilních myší SAM-P8 ve srovnání s kontrolními zvířaty SAM-R1, což může být další základní faktor odpovědný za zvýšenou náchylnost starších myší k rakovině a virové infekci. Zvýšení hladiny NK buněk pozorované v této studii po doplnění stravy s ECD by proto mohlo být prospěšné pro starší organismy ve smyslu zvýšené odolnosti vůči rozvoji nádorů a virové infekci. K objasnění role účinku ECD na NK buňky ve stárnoucích organismech jsou však zapotřebí další studie.

Závěrem lze říci, že tato studie ukázala, že ošetření podkmene myší náchylných k senescenci, SAM-P8, pomocí ECD může vyvolat významné zvrácení změn imunosenescence souvisejících s věkem. Nedostatky v populacích periferních i slezinných buněk naivních T-buněk a NK buněk byly sníženy, zatímco hladiny nadbytečných paměťových buněk byly také sníženy. Navíc dietní suplementace ECD dokázala potlačit jak nekrózy v periferních lymfocytech, tak hladiny prozánětlivého cytokinu, IL-6. A konečně, kromě toho, že doplnění stravy ECD způsobilo změny v senilním imunitním systému, významně prodloužilo životnost senilního mikrofonu SAM-P8.

Reference

[1] Y.Jiang a PF.Tu, „Analýza chemických složekCistanchespecies, "Journal of Chromatography A, vol. 1216, no. 11, pp.{2}}, 2009.

[2] Q. Xiong K. Hase Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba a SKadota. „Hepatoprotektivní aktivita fenylethanoidů zCistanche deserticola," PlattaMedica, sv. 64, č. 2, str.{2}}, 1998.

[3]"Imunologie a stárnutí v Evropě. Sborník příspěvků z 2. konference o základní biologii a klinickém dopadu imunosenescence březen 22-26, 2001, Cordoba, Španělsko, "Experimentální gerontologie, sv. 37, č.{5} }, str.{6}}, 2002.

[4] G.-D. Xuan a C.-Q. Liu, „Výzkum naúčinek fenylethanoidových glykosidů (PEG) z Cistanche deserticolanaproti stárnutíu starých myší vyvolaných D-galaktózou,"Journal of Chinese Medicinal Materials, sv. 31, č. 9, str. 1385-1388,2008.

[5] D.Aw, ABSilva a DBPalmer, „Immunosenescence vznikající výzvy pro stárnoucí populaci“, Immwmology, sv. 120, č. 4, str.435-446, 2007.